冻融抗原冲击致敏的树突状细胞抗肿瘤作用的研究

目的研究MC-38肿瘤冻融抗原致敏的树突状细胞(DC)对荷瘤小鼠是否有抗肿瘤作用。方法用MC-38肿瘤冻融抗原体外冲击致敏小鼠骨髓来源的DC,观察其诱导的CTL对MC-38肿瘤细胞的杀伤活性;体内以1×106DC/只多次接种于已荷瘤小鼠同侧腹股沟皮下,观察抗原冲击的DC对肿瘤生长的抑制作用以及对荷瘤小鼠生存期的影响。结果体外抗原冲击致敏的DC诱导的CTL对MC-38肿瘤细胞具有显著的杀伤作用,在效靶比为50∶1,25∶1,12.5∶1,6.25∶1时其杀伤率分别为68.84%,58.36%,41.56%,24.96%,;抗原冲击致敏的DC体内多次皮下免疫后对肿瘤的生长具有显著的抑制作用,能显著延长荷瘤小鼠的生存期。结论肿瘤冻融抗原致敏DC多次皮下免疫对荷瘤小鼠具有显著的抗肿瘤作用。     

脐血来源树突状细胞的培养与鉴定

目的建立并鉴定脐血来源树突状细胞(DC)培养体系，在体外诱导脐血干细胞生成成熟DC。探讨其在抗肿瘤免疫中的作用。方法脐血CD34 来源的DC以两步法，即0天开始使用GM-CSF、TNF-α、SCF、TPO、FL20，8～14天用GM—CSF、TNF—α和IL-4诱导生成。并分别在形态(光学显微镜 电镜)、表面标记(流式细胞仪)和功能(同种混合淋巴细胞反应)上加以鉴定。结果在合适的细胞因子组合下，能够经过脐血干细胞培养得到成熟的DC，具备典型的DC形态并在体外有效刺激同种淋巴细胞增殖。结论通过合适的培养可以获得大量成熟D(：。     

热休克蛋白70抗原肽提取及活性测定

热休克蛋白（HSP）是一类应激性蛋白，具有分子伴侣的作用，通常以热休克蛋白-抗原肽的形式存在，能诱导针对该肿瘤细胞的特异性免疫反应。在HSP家族中，HCA70肿瘤免疫原性最强，但其纯化过程需要快速蛋白液相层析系统（FPLC）。这对缺乏FPLC设备的实验室来说，要分离纯化HSP是极其困难的。故探讨一条简便、实用的HCA的提取方法，以便用于临床对热休克蛋白的应用。     

脐血树突状细胞提呈抗原对特异性CTL诱导杀伤的探讨

利用pH3．3柠檬酸．磷酸盐缓冲液（0．131M柠檬酸／0．066M Na2HPO4）提取的QGY-7703细胞膜外抗原多肽（50μg／m1），经过细胞因子GM-CSF（100ng／m1）、TNF-a（1000U／m1）以及IL-4（50ng／m1）诱导脐血造血干细胞分化的脐血树突状细胞（DC）进行抗原加工和提呈后，可以有效地激活外周血淋巴细胞（PBLC），形成特异性细胞毒性T淋巴细胞（CTL）．使其对QGY-7703细胞具有明显的杀伤活性，且这种杀伤活性在50：1以后随效：靶比例的增加而更加明显，在对QGY-7703、SPGA-1、HL-60以及K562细胞的杀伤比较时，更加明显地表现出杀伤细胞的特异性，而且研究还表明，这种选择性杀伤作用是通过诱导肿瘤细胞凋亡途径杀死肿瘤细胞，本研究进一步表明应用脐血来源的脐血树突状细胞可以作为肿瘤免疫中的抗原提呈细胞（APC），并执行其抗原提呈作用，激活特异性细胞毒性T淋巴细胞执行其细胞免疫功能。     

脐血来源树突状细胞增强CIK细胞对肺癌细胞株的杀伤作用

目的探讨肺癌细胞株A549肿瘤冻融抗原负荷脐血来源树突状细胞(DCs)与CIK细胞混合培养后对A549细胞杀伤活性的影响作用。方法取对数生长期的A549细胞制备肿瘤抗原(Ag),用脐血单个核细胞(CBMC)分别制备DCs和CIK细胞;用负荷Ag的DCs和CIK细胞共培养,诱导Ag-DC-CIK细胞。用流式细胞术检测DC免疫表型,MTT法检测CBMC、CIK、Ag-CIK和Ag-DC-CIK对A549肿瘤细胞株的杀伤活性。结果脐血DCs高表达CD86、CD40,中度表达CD83和CD80,低表达CD11c。实验组细胞(Ag-DC-CIK)对A549细胞的杀伤能力(62%)明显高于对照组(P<0.01),结论肿瘤抗原负荷的DCs能增强CIK细胞对靶细胞的杀伤活性,为DCs的免疫治疗提供了新的思路。     

人脑胶质瘤树突状细胞疫苗的临床应用

目的探讨人脑胶质瘤树突状细胞(DC)疫苗的临床疗效。方法采集患者胶质母细胞瘤手术标本,用热休克诱导肿瘤细胞凋亡,制备符合临床应用的人脑胶质瘤DC疫苗。25例脑胶质瘤患者分为C组(12例)和DC组(13例):C组采用传统的手术及术后放化疗治疗;DC组加用DC疫苗。比较两组肿瘤局部控制率(LCR)、生存时间和生活质量的Karnofsky评级,记录并发症。结果随访2年。治疗结束后9个月时,DC组肿瘤LCR明显高于C组(69.2%vs.25.0%)(P<0.05)。DC组治疗结束后6个月及9个月的Karnofsky评级优于C组。DC组1、2年生存率明显高于C组(69.2%、7.7%vs.41.7%、0)(P<0.05)。DC组的肿瘤复发时间为(11.92±25.31)个月,明显晚于C组的(7.75±4.16)个月(P<0.05)。疫苗接种期间,患者均未出现恶心、呕吐、头痛症状,未观察到关节炎、支气管炎等自身免疫性疾病的发生。结论脑胶质瘤DC疫苗联合术后放化疗,为脑胶质母细胞瘤提供一种更有效的治疗方法。     

非小细胞肺癌患者热休克蛋白90β表达水平及其与病理学关系研究

目的 探讨非小细胞肺癌（NSCLC）患者血浆热休克蛋白90β(Hsp90β)表达水平及其与病理学关系。方法 选择2020年7月至2021年7月入住解放军海军陆战队医院的120例NSCLC患者作为患者组,另外选择同期80名在我院参与健康体检的健康者作为对照组。经标本收集、准备、样本制备、加样、温育、洗板、显色、终止、检测及计算等过程,采用上海信裕生物科技有限公司生产的酶联免疫分析仪对Hsp90β水平进行检测分析。另外给予患者组4个周期以上的顺铂+吉西他滨、顺铂进行化疗。比较患者组与对照组Hsp90β的阳性表达率;分析Hsp90β阳性表达率与病理学之间的关系;比较化疗治疗前后Hsp90β表达水平。结果 (1)患者组Hsp90β阳性表达率为63.33%(76/120),显著高于对照组的18.75%(15/80),差异有统计学意义（P<0.05）;(2)有淋巴结转移患者的Hsp90β阳性表达率显著高于无淋巴结转移患者（P <0.05）,Ⅲ期患者的Hsp90β阳性表达率显著高于Ⅰ～Ⅱ期患者,差异有统计学意义（P <0.05）;组织分化程度越高,患者Hsp90β阳性表达率越低,差...     

MAGE-A3抗原肽负载树突状细胞治疗小鼠乳腺癌移植瘤

目的研究黑色素瘤相关抗原基因A3（MAGE～A3）抗原肽负载树突状细胞（D（X）,在乳腺癌动物模型免疫治疗中的作用。方法采用MAGE-A3抗原肽负载树突状细胞,过继免疫治疗乳腺癌的小鼠模型,观察其治疗效果。结果抗原负载的DCs治疗组的生存率（100％）、抑瘤率（76．3％）明显高于对照组（P〈0．05）;肿瘤转移率（22．2％）低于对照组（P〈0．05）。同时,治疗组的小鼠生存质量高于对照组。结论MAGE-A3抗原肽负载IX2s疫苗是一种比较安全有效的治疗方法。     

树突状细胞以两种不同方式负载大肠癌细胞株体外刺激淋巴细胞抗肿瘤活性的比较

目的 比较树突状细胞(DC)以两种不同方式负载大肠癌细胞株体外刺激淋巴细胞的抗瘤活性.方法 分离正常人外周血单核细胞体外诱导DC,分别负载热休克诱导凋亡的大肠癌细胞株和肿瘤细胞裂解物,以此刺激淋巴细胞作为效应细胞,大肠癌细胞株为靶细胞.MTT法测定效应细胞对靶细胞的杀伤作用.结果 负载热休克大肠癌细胞的DC 与负载肿瘤细胞裂解物的DC都显示对靶细胞的杀伤活性,但前者的杀伤率明显高于后者(P＜0.05).结论 负载热休克肿瘤细胞的DC是一更为有效的负载方式.     

脑缺血缺氧后大鼠外周血淋巴细胞热休克蛋白70的表达

目的 研究大鼠缺氧缺血性脑损伤后海马区脑组织病理学损伤变化和外周血单个核细胞的热休克蛋白(HSP)70的表达.方法 建立大鼠脑缺氧缺血模型,苏木素-伊红(HE)染色,光镜下观察脑组织病理学损伤的变化,采用流式细胞术(FCM)检测外周血淋巴细胞HSP70.结果 在缺氧缺性脑损伤后, 外周血淋巴细胞的HSP70水平迅速升高,24 h达到高峰51.05±2.27,其后逐渐降低14.13±1.04至正常水平(P＜0.01),与脑组织病理损伤的时序变化相一致.结论 运用FCM检测外周血淋巴细胞HSP70水平可以作为反映缺氧缺血后脑损伤的辅助指标.     

冠心病患者外周血热休克蛋白70表达的临床意义

目的探讨冠心病患者外周血单核细胞热休克蛋白70（HSP70）阳性表达率和血清高敏C反应蛋白（hsCRP）浓度的变化与冠状动脉病变稳定性及病变程度的关系。方法选择冠状动脉造影（CAG）确诊并分层冠心病60例[急性冠脉综合征（ACS）38例,稳定性心绞痛（SAP）22例]和非冠心病患者（对照组）20例,以流式细胞术测定单核细胞HSP70阳性表达率,同期ELISA法测定血清hsCRP浓度。结果ACS组HSP70阳性表达率及血清hsCRP浓度明显高于SAP组及对照组（P〈0．05）;冠脉多支血管病变（MV）组HSP70表达水平及血清hsCRP浓度高于双支病变（DV）及单支病变（SV）组（P〈0．05）;而两项指标与患者冠脉病变形态类型无关（P〉0．05）;外周血单核细胞HSP70阳性表达率与血清hsCRP浓度呈显著正相关（P〈0．01）。结论HSP70和hsCRP两项指标与冠脉病变程度及发病性质有关,而与病变形态无关。     

热休克蛋白70对人肺腺癌细胞顺铂耐药性的影响

目的 探讨用替普瑞酮诱导人肺腺癌细胞SPCA-1中热休克蛋白70(HSP70)的表达,并观察其对顺铂耐药的作用与联系.方法 1×106株人肺腺癌SPCA-1细胞完全随机分为5个不同剂量的替普瑞酮处理组和对照组,各5 ×105株,对照组加入磷酸盐缓冲溶液处理,替普瑞酮各组分别加入10、50、100、500、1000μmol/L的替普瑞酮处理.采用免疫荧光、逆转录聚合酶链反应方法检测各组细胞中HSP70mRNA和蛋白的表达;流式细胞仪法测定在顺铂作用下的细胞凋亡率,分析其在SPCA-1细胞对顺铂耐约的作用.结果 与对照组相比,细胞中HSP70、蛋白水平的表达均明显升高.流式细胞仪结果显示:在顺铂作用下,对照组细胞凋亡率为(9.70±0.63),替普瑞酮为10、50、100、500、1000 μmol/L时的细胞凋亡率分别为(7.97±0.14)%、(7.78±0.69)%、(6.37±0.15)%、(6.63±0.93)%、(4.22±0.06)%;替普瑞酮处理的各组细胞凋亡率均明显低于对照组(均P＜0.05),且呈浓度依赖性.结论 替普瑞酮可上调SPCA-l细胞中HSP70表达,HSP70的高表达可增加SPCA-1细胞对顺铂的耐药性.     

盐酸吉西他滨联合顺铂对非小细胞肺癌外周血调节性T细胞水平影响的研究

目的探讨盐酸吉西他滨联合顺铂对非小细胞肺癌外周血调节性T细胞水平的影响,从而为相关临床研究提供依据和参考。方法本次研究人选的病例均为本院2009年1月～2012年12月收治的非小细胞肺癌患者50例（非小细胞癌组）,同期健康体检者34例（健康对照组）,观察记录全部研究对象以及患者实施治疗前后CD4^＋CD25^＋Foxp3^＋／CD4^＋水平,并对相关数据进行统计学分析。结果健康对照组的CD4^＋CD25^＋Foxp3^＋／CD4^＋显著低于非小细胞癌组,且组间比较差异有统计学意义;不同类型的非小细胞癌患者实施治疗后,较治疗前该项指标水平得到显著降低,且治疗前后比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论盐酸吉西他滨联合顺铂的治疗方案可以显著调节非小细胞肺癌患者的外周血调节性T细胞水平,可有效调节患者的肿瘤免疫耐受,从而显著改善患者的免疫功能,是临床治疗非小细胞肺癌的理想选择。     

康艾注射液联合吉西他滨治疗非小细胞肺癌的临床研究

目的探讨康艾注射液联合注射用盐酸吉西他滨治疗非小细胞肺癌的临床疗效。方法选取西安交通大学医学院第一附属医院2013年1月—2015年1月就诊的非小细胞肺癌患者100例,将患者随机分为对照组和治疗组,每组各50例。对照组给予注射用盐酸吉西他滨1 200 mg/m~2,加入100 m L生理盐水中,第1、8天静脉滴注。治疗组在对照组基础上静脉滴注康艾注射液50 m L/m~2,加入250 m L生理盐水中,连续使用14 d。两组均连续治疗21 d。观察两组的临床疗效,同时比较治疗前后两组患者的免疫功能指标、蛋白表达和毒副反应。结果治疗后,对照组、治疗组的客观有效率分别为48.0%、66.0%,两组比较差异有统计学意义(P0.05)。两组疾病控制率比较差异无显著性。治疗后,两组CD~(4+)、CD~(4+)/CD~(8+)明显上升,同组治疗前后比较差异具有统计学意义(P0.05);且治疗组CD~(3+)、CD~(4+)、CD~(4+)/CD~(8+)明显上升CD~(8+)明显下降,其改善程度优于对照组,两组比较差异具有统计学意义(P0.05)。治疗后,治疗组Ki67蛋白、bcl-2蛋白表达水平明显降低,bax蛋白表达水平明显升高,两组比较差异有统计学意义(P0.05)。治疗后,治疗组血小板减少、白细胞下降、红细胞减少发生率明显低于对照组,两组比较差异有统计学意义(P0.05)。但两组ALT异常升高、恶心呕吐的发生率比较差异无统计学意义。结论康艾注射液联合注射用盐酸吉西他滨治疗非小细胞肺癌具有较好的临床疗效,能够增强患者免疫功能,改善蛋白表达,降低毒副反应,具有一定的临床推广应用价值。     

纳武利尤单抗联合安罗替尼治疗晚期非小细胞肺癌的临床研究

目的 探究纳武利尤单抗注射液联合盐酸安罗替尼胶囊治疗晚期非小细胞肺癌的临床疗效。方法 选取2019年1月—2020年1月临汾市中心医院收治的60例晚期非小细胞肺癌患者为研究对象,根据患者治疗方法不同分为对照组（29例）和治疗组（31例）。对照组患者早餐前口服盐酸安罗替尼胶囊,12 mg/次,1次/d,连续服药2周,停药1周。治疗组患者在对照组治疗的基础上静脉输注纳武利尤单抗注射液,3 mg/kg,1次/2周,评估患者耐受性和疗效。两组患者均持续治疗9周。观察两组近期临床疗效,比较治疗前后两组生活质量、T淋巴细胞亚群、血管内皮细胞生长因子（VEGF）水平变化和生存情况。结果 治疗后,治疗组客观缓解率（ORR）、疾病控制率（DCR）均较高于对照组,组间比较差异具有显著差异（P<0.05）。治疗后,两组患者CD3⁺、CD4⁺、CD4⁺/CD8⁺均明显升高,CD8⁺、VEGF均明显降低（P<0.05）;治疗组CD3⁺、CD4⁺、CD4⁺/CD8⁺均明显高于对照组,CD8⁺、VEGF均明显低于对照组（P<0.05）。治疗后2、4、6个月,两组EORTC QLQ-C30总评分均明显降低（P<0.05）,且治疗组EORTC QLQ-C30总评分明显低于同期对照组（P<0.05）。治疗后,治疗组中位无进展生存期（PFS）、总生存期（OS）较对照组明显增长（P<0.05）。结论 纳武利尤单抗注射液联合盐酸安罗替尼胶囊治疗晚期非小细胞肺癌具有较好的临床疗效,可改善患者的生活质量,调节患者免疫功能,降低VEGF水平,且不增加不良反应。     

复方斑蝥胶囊联合GP方案治疗中晚期非小细胞肺癌的临床研究

目的观察复方斑蝥胶囊联合GP方案治疗中晚期非小细胞肺癌患者的临床疗效。方法选取2015年11月—2017年4月空军军医大学唐都医院收治的90例中晚期非小细胞癌患者作为研究对象,所有患者随机分为对照组和治疗组,每组各45例。对照组患者采用GP方案治疗,第1、8天静脉滴注注射用盐酸吉西他滨1 000 mg/m~2,第1～3天静脉滴注顺铂氯化钠注射液80～100 mg/m~2。治疗组在对照组治疗的基础上口服复方斑蝥胶囊,3粒/次,2次/d。以21 d为1个化疗周期,2个化疗周期为1个疗程,两组患者均治疗2个疗程。观察两组患者的临床疗效,比较两组患者的无进展生存时间(PFS)、总生存时间(OS)、生活质量评分、蛋白表达和毒副反应发生情况。结果治疗后,对照组客观缓解率(ORR)和疾病控制率(DCR)分别为68.9%和84.4%,均分别明显低于治疗组的84.4%和95.6%,两组比较差异具有统计学意义(P0.05)。治疗后,治疗组患者的PFS、OS均显著高于对照组,两组比较差异具有统计学意义(P0.05)。治疗后,两组患者躯体功能、认知功能、社会功能、情绪功能评分及总分均明显升高,同组治疗前后比较差异具有统计学意义(P0.05);治疗后,治疗组的上述评分和总分均明显高于较对照组,两组比较差异具有统计学意义(P0.05)。治疗后,两组Ki67蛋白、bcl-2蛋白低表达,Bax蛋白高表达,同组治疗前后比较差异具有统计学意义(P0.05);治疗后,治疗组蛋白表达水平显著优于对照组,两组比较差异具有统计学意义(P0.05)。治疗后,治疗组血液系统毒性、脱发、肝脏功能异常、肾脏功能异常、胃肠道反应、皮肤毒性发生率和总发生频次均显著低于对照组,两组比较差异具有统计学意义(P0.05)。结论复方斑蝥胶囊联合GP方案治疗非小细胞肺癌临床疗效确切,可有效延长患者的生存时间,提高生活质量,改善蛋白表达,降低毒副反应,具有一定的临床推广应用价值。     

The association between p53 protein phosphorylation at serine 15, serine 20 and sensitivity of cells isolated from patients with ovarian cancer and cell lines to chemotherapy in in vitro study

Background

The association between p53 protein phosphorylated at serine 15 (Ser15), serine 20 (Ser20) and ovarian tumor cell sensitivity after chemotherapy was analyzed in order to define the influence of p53 activation on tumor cell sensitivity to chemotherapy.

Differential effect of simvastatin on activation of Rac(1) vs. activation of the heat shock protein 27-mediated pathway upon oxidative stress,in human smooth muscle cells

In the present study, we have analyzed the response of human smooth muscle cell (SMC)s to oxidative stress, in terms of recruitment of key elements of the stress-activated protein kinase (SAPK) pathway, such as Rac(1), p38, and the small heat shock protein (HSP)27. The level of expression of three small HSPs, alphaB-crystallin, HSP20, HSP27, as well as the phosphorylation levels of HSP27 and p38, were higher in cultured, asynchronously growing SMCs originating from left interior mammary artery (LIMA) than those originating from aorta, saphenous vein, and umbilical vein, validating the choice of SMCs from LIMA as a model system in our study. In synchronized, quiescent SMCs from LIMA, oxidative stress (H(2)O(2) stimulation)-induced membrane translocation of Rac(1), p38 phosphorylation, membrane translocation, and phosphorylation of HSP27. In these cells, simvastatin (S), an HMG-CoA reductase inhibitor, blocked, in a mevalonate-dependent way, oxidative stress-induced membrane translocation of Rac(1). However, S pretreatment prior to oxidative stress increased the levels of p38 phosphorylation, HSP27 membrane translocation/phosphorylation, actin polymerization, and apoptosis in these cells, in a mevalonate-dependent way. These results establish that S pretreatment has a stimulatory effect on the stress-activated p38/HSP27 pathway, despite its blocking effect on Rac(1) activation.