肾癌生物学行为与p16基因改变及蛋白表达的关系

目的：探讨p16基因改变在肾细胞癌发生发展中的作用及临床意义。方法：采用聚合酶链反应（PCR）加单链构象多态性分析（SSCP）、多重对照聚合酶链反应（multiplex-PCR)、双重对照PCR反应及链霉菌亲和物素蛋白－生物素酶标免疫组织化学（S－P法）检测42例肾细胞癌组织、18例远离肿瘤的正常肾脏及10例正常肾脏组织中p16基因异常及p16蛋白的表达情况。结果：p16基因改变在肾癌（30．95％）及正常肾脏组织（3．51％）差异有非常显著性（P＜0．01），其蛋白表达在肾癌（57．14％）及正常肾脏组织（89．29％）差异亦有显著性（P＜0．005），p16基因改变及蛋白表达与肾细胞癌组织学类型无关，p16蛋白表达与病理分级、临床分期相关。结论：p16基因失活在肾癌的发生发展中起着重要作用，其作用是通过不同的失活机制引起的p16蛋白表达缺如或功能丧失而实现；p16基因及蛋白的检测可作为肾癌的辅助诊断、判断恶性程度参考指标。     

VEGF和PCNA在肾细胞癌中的表达及意义

目的 研究肾细胞癌中血管内皮生长因子(VEGF)和增殖细胞核抗原(PCNA)表达与肾癌临床分期、病理分级、组织学类型、预后之间的关系. 方法 采用免疫组织化学技术检测40例肾细胞癌和10例正常肾组织标本中VEGF和PCNA的表达. 结果 正常肾组织与肾细胞癌组织中VEGF和PCNA阳性表达率比较差异均有统计学意义(P＜0.01,P＜0.05).在不同病理分级肾细胞癌中,高分化组、中分化组的VEGF和PCNA阳性表达率分别与低分化组比较差异有统计学意义(P＜0.01,P＜0.05).在不同临床分期肾细胞癌中,VEGF阳性表达率随临床分期的升高而逐渐升高;PCNA阳性表达率随临床分期的升高有升高的趋势.在不同组织类型肾细胞癌中,VEGF和PCNA阳性表达率差异均无统计学意义(P>0.05). 结论 VEGF在肾细胞癌组织中的表达与肾癌的病理分级及临床分期有相关性,其高表达与肾细胞癌的浸润转移密切相关.PCNA的表达与肾癌的病理分级具有相关性,能较为客观、准确地反映肾癌的恶性程度.     

肾透明细胞癌中VHL基因改变和趋化因子受体CXCR4的表达及相关性

目的研究肾透明细胞癌（CCRCC）组织中VonHippel-Lindau（VHL）基因改变和趋化因子受体CXCR4的表达及其相关性，探讨VHL基因在CCRCC中的作用。方法分别采用聚合酶链反应-单链构象多态性分析、微卫星法、DNA甲基化特异性PCR和半定量逆转录PCR检测35例CCRCC和20例正常肾组织中VHL基因突变、杂合性缺失（LOH）、异常甲基化及CXCR4mRNA的表达。站杲VHL基因在CCRCC和正常肾组织中的改变率分别为74．29％、5．0％，二者的差异有统计学意义（x^2=24．45，P〈0．01）；VHL基因改变与CCRCC的临床分期、淋巴转移等密切相关（x^2-4．05、5．18，P均〈0．05），而与患者性别、年龄、病理分级、肿瘤大小等均无相关性（P〉0．05）。CXCR4 mRNA在CCRCC中的表达率为77．14％，显著高于正常肾组织的5．0％；CXCR4的表达与CCRCC的病理分级、淋巴转移密切相关（x^2-7．35、4．24，P均〈0．05），而与其他临床病理特征等均无相关性。相关性检验表明CCRCC中VHL基因改变与CXCR4的表达密切相关（x^2-3．89，P〈0．05）。站论VHL基因突变和LOH导致其失活是CCRCC发生的重要分子机制，VHL基因和CXCR4可作为判断CCRCC预后的重要参考指标，并可负向调节CXCR4的表达。     

肾透明细胞癌中VHL基因失活的检测及意义

目的 探讨肾透明细胞癌中Von Hippel-Lindau(VHL)基因突变和超甲基化情况及其在肾癌发生发展中的作用及临床意义.方法 采用聚合酶链反应-单链构象多态性分析(PCRSSCP)银染法,甲基化特异性PCR(MSP)及测序等方法对33例肾透明细胞癌和相应远离肿瘤正常肾组织VHL基因突变和超甲基化情况进行检测.结果 19/33(57.6%)例肾透明细胞癌中出现VHL基因突变;6/33(18.2%)例肾透明细胞癌中出现VHL基因超甲基化;VHL基因突变和超甲基化与肾癌临床分期和淋巴结转移相关.结论 肾癌中存在VHL基因突变和超甲基化,且与临床分期、淋巴结转移相关;VHL基因失活的检测可作为肾透明细胞癌的诊断指标,VHL基因可望成为肾透明细胞癌基因治疗的重要目的 基因.     

肾细胞癌组织中干细胞关键转录因子Oct4的表达及意义

目的 探讨肾细胞癌中干细胞关键转录因子Oct4的表达情况及意义，并探讨Oct4的表达同肾细胞癌分型和分期的关系。方法 分别采用免疫组织化学对27例和逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）对10例肾细胞癌组织病理标本进行Oct4表达的检测。结果在绝大多数（25／27）的肾细胞癌标本中有4．6％～5．5％的Oct4阳性细胞，RT-PCR显示10例肾细胞癌组织在相应位置均出现目的基因Oct4的条带，正常肾皮质组织和癌旁组织并没有出现Oct4条带。Oct4表达的阳性率及强度与肾细胞癌分期和分型无明显相关。结论 肾细胞癌组织中有少量表达全能干细胞标志物Oct4的细胞，是否为肾癌干细胞有待进一步研究。     

bcl—２及ＭＤＲ—１基因产物在肾癌组织中的表达及其意义

目的：探讨基因 bcl-２和ＭＤＲ－１产物在肾癌组织中表达的意义及相关关系,了解肿增残与耐药的特点,方法：采用免疫组织化学ＳＡＢＣ法对４８例肾癌和１０例正常肾组织的石蜡包埋标本切片进行bcl-2和ＭＤＲ－１基因产物表达的统计研究,结果：bcl-2在肾癌组织中阳必表达率为７７．１％,与正常肾组织（４０．０％）相比,差异有显著性意义（Ｐ＜０．０５）,但其表达与肿瘤分级、分期及预后无关（P＞０．０５）,ＭＤＲ－１在肾癌组织和肿瘤病理分级及预后无关（Ｐ＞０．０５）。结论：bcl-2蛋白在大多数肾癌组织中呈高表达,其表达在肾肿瘤形成中可能起作用,进一步证实ＭＤＲ－１基因在肾细胞癌抵抗化疗中起作用,与bcl-2无显著相关性,肾癌化疗、放疗不敏感可能涉及ＭＤＲ－１和bcl-2的双重作用。     

肾细胞癌抗凋亡基因bcl—2的免疫组化研究

为探讨ｂｃｌ２基因产物表达与肾癌生物学行为及预后的关系，采用免疫组化ＬＳＡＢ法对６０例肾细胞癌和５例正常肾组织ｂｃｌ２表达产物进行检测。结果表明：６６．７％肾癌显示阳性，正常肾组织均为阴性反应。ｂｃｌ２表达与肾癌的分期分级有关，且随着肾癌分期、分级的上升而降低（Ｐ＜０．０１）；ｂｃｌ２表达与肾癌组织学类型无关；ｂｃｌ２阳性表达者预后较好。提示ｂｃｌ２可作为肾癌恶性程度及预后的估价性指标。     

EGFL7和VEGF在肾透明细胞癌血管生成及转移中的相关性研究及临床意义

目的：探讨表皮生长因子样结构域7（EGF_1ikedomain7,EGFL7）、血管表皮生长因子（vascularen—dothelialgrowthfactor,VEGF）在肾透明细胞癌中的表达及其与肾癌血管生成和转移的关系。方法：选取87例行根治性肾切除的肾透明细胞癌患者癌及癌旁组织标本,采用免疫化学SP法检测EGFL7、VEGF的表达,并计数血管内皮细胞表面抗原（CD34）标记的血管密度（MVD）;同时选取46例癌及癌旁组织标本,采用RT—PCR检测EGFL7mRNA的表达。结果：EGFL7和VEGF阳性表达率及MVD值在癌组明显高于癌旁组（P〈O．05）,且EGFL7、VEGF与MVD在肾透明细胞癌组织中的表达呈正相关,并与肿瘤分级、分期显著相关（P〈0．05）;EG—FL7mRNA阳性表达率明显高于癌旁组织（P〈O．05）,并与肿瘤分级、分期相关（P〈O．05）。结论：肾透明细胞癌组织中EGFL7、VEGF的表达与肾癌血管生成有关,两者可能协同肿瘤新生血管的生成。     

Fascin蛋白在肾细胞癌中的表达及临床意义

目的观察Fascin蛋白在肾细胞癌中的表达情况,并探讨其表达与肿瘤生物学行为及临床病理指标的关系。方法用免疫组织化学方法检测109例肾细胞癌组织、20例肾脏良性肿瘤和20例正常肾脏组织中Fascin蛋白和Ki-67的表达,分析Fascin蛋白表达与不同临床病理指标及Ki-67表达之间的关系。结果109例肾细胞癌中有58例（53．2％）Fascin蛋白呈阳性表达,20例肾脏良性肿瘤和20例正常肾脏组织中的阳性表达例数分别为2例（10．0%）和0例（0%）,肾细胞癌中Fascin蛋白表达与肾脏良性肿瘤和正常肾脏组织中Fascin蛋白表达比较差异均有统计学意义（均P〈0．01）。肾细胞癌组织中Fascin蛋白表达与肿瘤组织学分级、临床分期、淋巴结转移以及Ki-67表达均呈正相关（均P〈0．01）;与肿瘤组织学分类无相关性（P〉0．05）。结论Fascin蛋白在肾细胞癌中表达上调且和肿瘤的恶性程度及侵袭行为有关。Fascin蛋白表达与病理分级和临床分期结合能够更好地判断肾细胞癌的预后,且其有可能成为肾细胞癌治疗的一个新靶点。     

ＴＧＦβ及ＰＣＮＡ在肾细胞癌中的表达及其临床意义

目的：探讨肾细胞癌中转化生长因子β１（ＴＧＦβ１）及增残细胞核抗原（ＰＣＮＡ）的表达及其价值。方法：采用免疫组织化学技术（ＳＰ法）对４６例肾细胞癌和１１例正常肾组织标本中ＴＧＦβ１、PCNA,结合临床资料进行分析,结果：肾癌组ＴＧＦβ１表达量较正常组高（Ｐ＜０．０５）;PCNA在肾癌组高表达（Ｐ＜０．０１）,且在高分期、高分级肾细胞癌中表达量较低分期,低分级肾细胞癌高（Ｐ＜０．０５）,TGFβ１表达量与ＰＣＮＡ表呈负相关关系（Ｐ＜０．０１）,ＴＧＦβ１表达量低及ＰＣＮＡ表达量高的肾癌患者预后差（Ｐ＜０．０５）,结论：ＴＧＦβ１对处于增残太怕肾细胞癌是一种重要负性调节因子,可抑制肾癌发展,ＴＧＦβ１及ＰＣＮＡ表达可作为判断肾细胞癌预后的指标。     

肾透明细胞癌中VHL基因突变与缺氧诱导因子-1α表达的研究

目的　探讨肾透明细胞癌VHL基因突变与缺氧诱导因子 1α(HIF 1α)表达的关系及意义。方法　应用聚合酶链反应 (PCR)、变性高效液相色谱 (DHPLC)、基因测序及免疫组织化学方法检测 32例肾透明细胞癌患者手术切除癌组织及远离肿瘤的正常肾脏组织中VHL基因突变及HIF 1α的表达。结果　 32例患者中 17例 (5 3 1% )癌组织术前有VHL基因突变 ,32例远离肿瘤的正常肾脏组织均无HIF 1α表达 ;17例VHL突变的癌组织中 12例 (70 6 % )有HIF 1α表达 ,15例无VHL突变的癌组织中 4例 (2 6 7% )有HIF 1α表达 ,二者相比差异有显著意义 (P <0 0 5 )。结论　VHL基因在肾透明细胞癌中具有高频突变率 ,HIF 1α在癌组织中的表达与VHL基因突变相关     

肾细胞癌VEGF表达和MVD检测的临床意义

目的 探讨肾细胞癌（RCC）组织中血管内皮细胞生长因子（VEGF）的表达与肿瘤间质微血管密度（MVD）检测的临床意义。方法 采用免疫组化方法对65例肾细胞癌（RCC）及10例正常肾组织进行VEGF单克隆抗体及CD34单克隆抗体染色，观察RCC的VEGF表达与MVD之间的相关性。结果 VEGF的表达与肿瘤间质微血管密度之间存在正相关性，二者均与RCC的病理分级、临床分期及远处转移显著相关（P〈0.05，P〈O．001）。结论 VEGF与MVD可客观准确反映RCC的生物学行为，上述二项指标可作为评估RCC恶性程度、转移及预后的重要指标。     

肌动蛋白交联蛋白与血管内皮生长因子在肾细胞癌中的表达及其相关性

目的 探讨肌动蛋白交联蛋白(Fascin)与血管内皮生长因子(VEGF)在肾细胞癌组织的表达及与其生物学行为的关系.方法 采用免疫组织化学SP法检测Fascin与VEGF在92例肾细胞癌组织及20例正常肾脏组织中的表达.结果 Fascin及VEGF在肾细胞癌组织中的表达阳性率明显高于正常肾组织(P＜0.05);肾细胞癌组织中两种蛋白的表达与肿瘤组织学分级和临床分期均呈正相关(P＜0.05);与年龄、性别及肿瘤病理类型无明显相关(P＞0.05).且Fascin和VEGF的表达之间呈正相关(P＜0.05).结论 Fascin与VEGF可作为反映肾细胞癌生物学行为的参考指标.

Abstract：

Objective To investigate the expression of Fascin and vascular endothelial growth factor (VEGF) in renal cell carcinoma (RCC) and the correlation with the biological behaviors. Methods The immunohistochemistry staining method was used to detect the expression of Fascin and VEGF in 92 cases of RCC and 20 cases of normal renal tissues as controls. Results The expression of Fascin in carcinoma tissue was significantly higher than that in normal tissues ( P ＜ 0. 05 ). Positive expression of Fascin and VEGF in renal cell carcinoma tissue was correlated with tumor grade ( P ＜ 0. 05 ) and clinical stage (P ＜0. 05 ) , but not with age, gender and different histological categories (P ＞ 0. 05 ). There was also a positive correlation between Fascin and VEGF (P ＜ 0. 05 ). Conclusion Fascin and VEGF are objective markers to estimate the behaviors of renal cell carcinoma.     

肾细胞癌患者抑癌基因VHL双等位基因

目的探讨肾细胞癌患者中抑癌基因VHL的双等位基因失活发生情况.方法在41例肾细胞癌患者中提取肿瘤和正常组织DNA.采用单链聚合酶链反应(PCR)和测序法检测肿瘤组织中VHL基因的突变情况.采用PCR限制性片段长度多态性法检测VHL基因内部的2个单核苷酸多态性(SNP)位点,在2个位点的杂合子中通过对比肿瘤组织和正常肾组织分析VHL基因的杂合性丢失(LOH)情况.结果在肾细胞癌中51%(21/41)发生VHL基因突变,42%(8/19)发生VHL基因LOH,基因突变和LOH发生具有显著一致性(r=0.78),在37%(7/19)的肾细胞癌中发生VHL双等位基因失活.结论肾细胞癌中存在由VHL基因突变和LOH导致的VHL双等位基因失活现象,VHL双等位基因失活发生率为37%.     

Angiogenesis in renal cell carcinoma: The role of tumor-associated macrophages

Objective:   To explore vascularity and associated molecules in renal cell carcinoma (RCC) and to study their correlations to disease outcome.
Methods:   Tissue samples from 51 Japanese patients with renal cell carcinoma (RCC) were obtained between November 1997 and August 2000. Pyrimidine nucleoside phosphorylase and vascular endothelial growth factor (VEGF) levels of RCC and normal kidney tissue were determined by enzyme-linked immunosorbent assay. Microvessel density (MVD) was measured by immunohistochemistry using anti-factor-VIII-related antigen and CD34. The number of infiltrating tumor-associated macrophages (TAM) was measured by immunohistochemistry using anti-CD68 antibody.
Results:   Pyrimidine nucleoside phosphorylase and VEGF levels were significantly higher in RCC than in normal kidney tissue. The VEGF level was higher in more progressive (high grade, larger or symptomatic) RCC. Although MVD as determined by the factor VIII level was higher in larger tumors, MVD determined by CD34 was higher in low-grade and low-stage tumors. Patients with symptoms, large tumor or high stage showed higher numbers of TAM. VEGF level and TAM were significantly higher in patients with recurrence than in those without recurrence. In univariate analysis, VEGF, TAM and CD34 tumor grade and stage were identified as prognostic factors. Moreover, TAM was the only independent prognostic factor by multivariate analysis. Among these parameters, only TAM and MVD as determined by factor VIII showed significant correlations.
Conclusion:   TAM and VEGF are substantially involved in tumor progression of RCC. As the TAM count is well correlated to the MVD, the main mechanism of tumor progression by TAM might be angiogenesis.     

散发性肾透明细胞癌组织中希佩尔-林道基因突变与缺氧诱导因子1α、2α的测定

目的探讨散发性肾透明细胞癌(CCRCC)组织中希佩尔-林道(VHL)基因突变、缺氧诱导因子1α(HIF-1α)和HIF-2α的表达及其关系,对肿瘤分期、分级的影响.方法应用聚合酶链反应(PCR)、PCR产物直接测序和免疫组化等方法,分析77例散发性CCRCC患者癌组织中VHL基因突变、HIF-1α和HIF-2α的表达.其中T1期 55例(71%),T2期7例(9%),T3期14例(18%),T4期1例(1%);病理分级,G115例(19%),G256例(73%),G36例(8%).结果在正常肾组织中无VHL基因突变.散发性CCRCC中VHL基因突变率为52%(40/77),HIF-2α阳性率81% (62/77),高于HIF-1α阳性率66%(51/77)(χ2 =23.310, P<0.01);VHL基因突变者中HIF-1α和HIF-2α的阳性率(98%和93%)均高于无突变者的阳性率(32% 和68%,χ2值分别为36.386,7.617,P均<0.01);HIF-1α和HIF-2α的表达均与VHL基因突变相关(偏回归系数分别为4.481,2.027,P均<0.01);未发现VHL基因突变、HIF-1α和HIF-2α表达与肿瘤病理分级、分期有关(P均>0.05).结论在散发性CCRCC患者中VHL基因突变较广泛,在突变组织中HIF-1α和2α高表达,但VHL基因突变、HIF-1α和2α的表达与患者病理分级、分期不相关.     

Connexin32、VEGF在肾细胞癌中的表达及临床意义

目的 研究间隙连接蛋白32(connexin32,Cx32)及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)在肾细胞癌(renal cell cancer,RCC)组织中的表达及其与肾细胞癌的相关性,探讨其在RCC发生和发展中的作用.方法 运用免疫组织化学方法 (SP法)检测44例RCC和10例正常肾脏组织中Cx32及VEGF的蛋白表达,观察其表达的定位和表达量的差异并比较它们之间的差异性及相关性.方法 (1)Cx32蛋白主要在肾癌细胞胞质中表达,而在正常肾组织中,主要表达在细胞膜上.它在RCC组中的阳性表达率为27.3%,对照组中阳性表达率为90%,差异具有显著性(p<0.05).(2)VEGF蛋白主要表达在肿瘤细胞膜,在胞质中也有表达.它在RCC组中的阳性表达率为79.5%,对照组中阳性表达率为20%,差异具有极显著性(p<0.01).(3)在不同临床分期及病理分级的肾细胞癌组织中Cx32与VEGF的表达均呈负相关(p<0.01).结论 肾细胞癌组织中Cx32表达水平的明显下调以及VEGF表达水平的显著上调,可能与肾细胞癌的发生、发展、转移有关,检测二者的表达有助于综合判断RCC的生物学行为.     

上海仁济医院肾癌数据库资料分析

目的 探讨肾癌临床、病理、分期、分级与预后特征. 方法 分析2003年至2005年上海仁济医院泌尿科肾癌数据库435例患者临床和病理资料.采用WHO 1997年肾实质上皮性肿瘤组织学分类标准、2002年ATCC的TNM分期和临床分期、1982年Fuhrman病理分级.采用Kaplan-Meier法和Logrank检验对57例获随访的晚期患者行生存分析和预后因素判断. 结果 435例患者中,遗传性VHL病肾癌10例(2.4%)、散发性肾透明细胞癌372例(85.5%)、乳头状癌13例(3.0%)、嫌色细胞癌18例(4.1%)、集合管癌4例(0.9%)、嗜酸性细胞腺瘤4例(0.9 %)、未分类肾癌.14例(3.2%).行根治性肾切除术335例(77.0%),保留肾单位手术74例(17.0%),姑息性肾切除等手术26例(6.0%).遗传性VHL病肾癌均为双肾癌伴多发囊肿,临床分期Ⅰ期7例、Ⅱ期3例,病理分级Ⅰ级6例、Ⅱ级4例,基因测序均存在VHL基因突变,平均随访28.6个月,患者无肿瘤局部进展或转移,但4例患者出现同侧或双侧肿瘤再发.嫌色细胞癌临床分期均为Ⅰ期,病理分级Ⅰ级5例,Ⅱ级13例,平均随访19.8个月均存活,无肿瘤转移或复发.集合管癌临床分期均为Ⅰ期,病理分级均为Ⅲ级,平均生存时间11.3个月.肾透明细胞癌和乳头状癌临床分期Ⅰ期260例(67.6%)、Ⅱ期64例(16.6%)、Ⅲ期32例(8.3%)、Ⅳ期29例(7.5%),其中T1a 147例(38.2%)、T1b 113例(29.4 %);病理分级Ⅰ级124例(32.2%)、Ⅱ级219例(56.9%)、Ⅲ级40例(10.4%)、Ⅳ级2例(0.5%).57例晚期肾癌患者中位生存时间(16.0±1.3)个月,1年生存率55.0%,2年生存率31.0%.预后因素分析显示,临床分期、肿瘤大小、淋巴结转移、远处转移和病理分级是晚期肾癌解剖水平和组织学水平的预后影响因素. 结论 不同组织学亚型的肾癌生物学特征存在较大差异,遗传性VHL病肾癌存在基因突变,常为双侧、多中心、低Fuhrman分级透明细胞癌,易再发不易转移.肾嫌色细胞癌预后较好,而集合管癌预后差.在解剖水平和组织学水平,TNM分期、肿瘤大小、淋巴结转移、远处转移和肾癌病理分级是晚期肾癌的预后影响因素.