增生性瘢痕中血管内皮细胞生物学功能的研究

目的 探讨增生性瘢痕中血管内皮细胞的生物学功能及其与瘢痕形成的关系。方法 取人增生性瘢痕组织和正常皮肤组织，进行组织学观察。分离和纯化2种标本中的血管内皮细胞，应用酶联免疫吸附测定法分别检测单个血管内皮细胞中转化生长因子β1，（TGF-β1）、成纤维细胞生长因子2（FGF2）、血小板源性生长因子（PDGF）、内皮素1（ET-1）和血管内皮生长因子（VEGF）的水平。结果光学显微镜下可见正常皮肤微血管数目较少；增生性瘢痕微血管数目增多，血管狭长扭曲甚至闭塞。透射电镜可见增生性瘢痕中毛细血管管腔狭窄，有内皮细胞脱落。增生性瘢痕中血管内皮细胞分泌TGF-β1、PDGF、ET-1、VEGF、FGF2的水平分别为（60±8）、（30±4）、（0．12±0．03）、（52±5）、（18．1±1．2）μg／个细胞，明显低于正常皮肤（P〈0．05）。结论 增生性瘢痕中血管内皮细胞生物学功能减退，可能与瘢痕中胶原的大量产生和缺氧有关。     

PTEN和COX-2在病理性瘢痕中的表达及其相关性研究

目的研究抑癌基因PTEN和COX-2在病理性瘢痕中的表达及其相关性。方法应用免疫组化SP法检测正常皮肤24例、扁平瘢痕20例、增生性瘢痕32例和瘢痕疙瘩16例组织中PTEN、COX-2蛋白的表达。结果病理性瘢痕（瘢痕疙瘩、增生性瘢痕）组织中PTEN蛋白表达显著低于正常皮肤、扁平瘢痕（P〈0．05）,而COX-2蛋白表达显著高于正常皮肤、扁平瘢痕（P〈0．05）;4类组织中PTEN蛋白和COX-2蛋白呈负相关（P〈0．05）。结论COX-2及PTEN是病理性瘢痕发生发展中重要的调控因子,两者呈负相关。     

彩色多普勒超声在病理性瘢痕研究中的应用

目的应用彩色多普勒超声观察不同病程的病理性瘢痕在浅表组织的血流声像、血流阻力上的差异，并与正常皮肤比较，探讨病理性瘢痕形成的原因。方法选取45例增生性瘢痕和20例瘢痕疙瘩的患者。并将其按瘢痕形成的时间分组，用彩色多普勒血流显像系统测量瘢痕一定范围内血管数目、血管阻力指数，用SPSS 11．0软件进行对比分析。结果①增生性瘢痕、瘢痕疙瘩和正常皮肤的平均血管密度依次递减，平均动脉阻力指数依次递增。②随着病程的延长，增生性瘢痕的血管密度呈先增后减现象。动脉阻力指数逐渐增高，差异有显著意义（P〈0．05）；瘢痕疙瘩中各参数的变化，差异无显著意义（P〉0．05）。结论随着病程的延长，增生性瘢痕血流声像与血流动力学有向正常皮肤恢复的趋势，而瘢痕疙瘩却无此趋势。     

periostin在过度增生性瘢痕的表达及其与TGF-β1和受体的相关性

目的检测periostin在过度增生性瘢痕中的表达，研究其与TGF-β1和受体的相关性，探讨periostin与瘢痕过度增生的关系。方法采用RT-PCR法检测瘢痕疙瘩、增生性瘢痕、正常皮肤组织中periostin、TGF-β1，及其受体Ⅰ、Ⅱ的mRNA表达，Western blot法检测periostin的蛋白表达。结果在基因水平，periostin在瘢痕疙瘩的表达高于正常皮肤，TGF-β1在瘢痕疙瘩的表达高于增生性瘢痕和正常皮肤，TGF-βRⅠ在瘢痕疙瘩的表达高于增生性瘢痕和正常皮肤，上述差异有统计学意义（P〈0．01）；TGF-βRⅡ的表达在3组间差异无统计学意义。在蛋白水平，periostin在瘢痕疙瘩和增生性瘢痕的表达均高于正常皮肤（P〈0．05）。periostin和TGF-β1的表达呈正相关（P〈0．01）。结论periostin在瘢痕疙瘩组织中表达增高，是瘢痕相关基因；其在瘢痕疙瘩形成中可能发挥重要作用，该作用与TGF-β1密切相关。     

真核翻译起始因子4E在病理性瘢痕中的表达与作用

目的探讨真核翻译起始因子4E（eukaryotic translation initiation factor4E,eIF4E）在病理性瘢痕组织中的表达及其在病理性瘢痕形成中的作用及机制。方法（1）应用免疫组织化学SP法检测20例正常皮肤、20例成熟瘢痕、14例增生性瘢痕和25例瘢痕疙瘩组织中eIF4E蛋白的表达。（2）应用逆转录-聚合酶链式反应（RT—PCR）测定eIF4EmRNA在8例正常皮肤、8例成熟瘢痕、7例增生性瘢痕和8例瘢痕疙瘩组织中的半定量值。结果（1）病理性瘢痕组织中eIF4E蛋白表达增高,与正常皮肤、成熟瘢痕对照组比较,差异有统计学意义（P〈0．05）。（2）与正常对照组0．99±0．28比较,eIF4EmRNA在病理性瘢痕组织1．73±0．31中的表达显著增高,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论eIF4E在病理性瘢痕组织中表达增高,eIF4E与病理性瘢痕的形成密切相关,可能对病理性瘢痕的形成起着重要作用。     

Bid蛋白在瘢痕疙瘩中的高表达及其意义

目的 检测促凋亡分子Bid蛋白在瘢痕疙瘩中的表达,研究其与瘢痕疙瘩发生的关系. 方法 用免疫组织化学法和免疫印迹法（western blotting）分别检测12例瘢痕疙瘩与12例正常皮肤组织中Bid蛋白的表达,定量分析Bid蛋白在瘢痕疙瘩中的表达. 结果①Bid蛋白在瘢痕疙瘩和正常皮肤组织的角质细胞、成纤维细胞、炎症细胞以及血管内皮细胞、毛囊、汗腺、皮脂腺等细胞的胞质及部分胞核中表达.②表皮中Bid蛋白表达量两种组织差异无显著性（P＞0.05）;凋亡启动的细胞数量正常皮肤（1738.33±348.89/mm^2）高于瘢痕疙瘩（891.67±395.00/mm^2）（t＝-5.565,P=0.000）.在真皮中的Bid蛋白阳性成纤维细胞数,瘢痕疙瘩（911.67±323.61/mm^2）高于正常皮肤（220.00±80.00/mm^2）（t=7.188,P=0.000）.免疫印迹法实验结果进一步证实Bid蛋白含量瘢痕疙瘩（0.46±0.08）高于正常皮肤（0.02±0.01）（t=18.905,P=0.000）.结论①正常皮肤表皮凋亡启动的细胞多于瘢痕疙瘩;②Bid蛋白在瘢痕疙瘩真皮组织中表达增高.     

瘢痕疙瘩不同部位微淋巴管密度的研究

目的探讨瘢痕疙瘩微淋巴管密度与其呈侵袭性生长的相关性。方法手术切取瘢痕疙瘩10例，根据瘢痕疙瘩的特点将每例瘢痕疙瘩分为浸润部位、增生部位及边缘正常皮肤，非瘢痕疙瘩者的瘢痕疙瘩好发区域的正常皮肤作为对照，应用免疫组织化学染色，对瘢痕疙瘩增生部位、浸润部位、边缘正常皮肤及非瘢痕疙瘩者的正常皮肤微淋巴管密度进行检测分析。结果瘢痕疙瘩边缘正常皮肤微淋巴管密度（12．563±1．803）条／ram。，与非瘢痕疙瘩的正常皮肤微淋巴管密度（11．071土2．645）条／mm。差异无统计学意义（t=1．389，P〉O．05）；瘢痕疙瘩浸润部位微淋巴管密度（27．315士7．430）条／mm。，明显高于增生部（17．375±6．221）条／mm。及边缘正常皮肤（12．563±1．803）条／m㎡，差异有统计学意义（X^2=16．8，P〈O．05）；瘢痕疙瘩增生部与边缘正常皮肤微淋巴管密度的表达差异有统计学意义（t=2．276，P〈O．05）。结论瘢痕疙瘩浸润部的微淋巴管密度增高可能与瘢痕疙瘩坚侵袭性生长有一定关系。     

Skp2和p27kip1蛋白在病理性瘢痕组织中的表达和意义

目的研究Skp2（S期激酶相关蛋白2）在病理性瘢痕中的表达情况及其与p27^kip1之间的相互关系，探讨它们在瘢痕形成中的作用及机制。方法应用免疫组化SP法检测正常皮肤、成熟瘢痕、增生性瘢痕和瘢痕疙瘩组织中Skp2、p27^kip1蛋白的表达并进行统计学分析。结果病理性瘢痕组织中Skp2蛋白表达增高，与正常皮肤、成熟瘢痕对照组比较差异有统计学意义（P〈0．01）；病理性瘢痕组织中p27^kip1蛋白表达显著低于正常皮肤、成熟瘢痕（P〈0．05）；病理性瘢痕组织中Skp2蛋白和p27^kip1蛋白呈负相关（P〈0．01）。结论Skp2在病理性瘢痕组织中表达增高，可能通过调节p27^kip1等细胞周期调控因子的降解而促进瘢痕组织中细胞的增生，对病理性瘢痕的形成可能起着重要作用。     

CTGF在病理性瘢痕中的表达及意义

目的：了解细胞生长因子（connective tis sue growth factor，CTGF）在病理性瘢痕中的表达及意义，探讨它在病理性瘢痕发病机制中所起的作用.方法：对11例增生性瘢痕、10例瘢痕疙瘩及10例正常皮肤组织进行免疫组化（SP法）染色，观察CTGF在正常皮肤、增生性瘢痕、瘢痕疙瘩中的表达，以了解它们在不同组织中表达的差异性.结果：正常皮肤中CTGF的表达为阴性;增生性瘢痕、瘢痕疙瘩成纤维细胞中CTGF的表达与正常皮肤相比均有显著性差异（P＜0.01）;CTGF在瘢痕疙瘩成纤维细胞中的表达较增生性瘢痕为高，但两者之间没有统计学差异.结论：CTGF在增生性瘢痕的发病机制中发挥重要作用。     

热休克蛋白60诱导小鼠皮肤移植耐受的实验研究

目的探讨热休克蛋白60（heat shock protein60，HSP60）对小鼠移植皮片成活的影响及其机制。方法选用60只C57BL／6（H．2b）小鼠为受体，45只BALB／C（H．2d）小鼠、15只CBA／N（H-2^k）为供体，均为8～12周龄近交系雌性小鼠。受体小鼠剪下1cm×1cm全层皮肤，干纱布清创，即为植床：随机分为4组，每组15只。A组：无菌取供体BALB／C（H．2d）小鼠背部1cm×1cm全层皮片，刮去皮下组织后移植至受体小鼠背部；B组：受体小鼠背部皮下注射0．1mL不完全弗氏佐剂（imcompleted Freund’s adjuvant，IFA），2周后行BALB／C（H-2d）小鼠皮肤移植：C组：受体小鼠背部皮下注射经0．1mLIFA乳化后的50gtgHSP60，2周后行BALB／C（H-2^d）小鼠皮肤移植：D组：受体小鼠背部皮下注射经0．1mL IFA乳化后的50μg HSP60，2周后行CBA／N（H-2^k）小鼠皮肤移植。B、C、D组供体皮肤移植方法同A组。术后观察移植皮片成活时间；移植术后7、25d行单向混合淋巴细胞反应及混合淋巴细胞培养上清液细胞因子检测；术后7d行迟发型超敏反应测定。结果A、B、C、D组移植皮片成活时间分别为（12．4±0．5）、（11．6±0.8）、（29.3±2．6）及（27．6±2．1）d：A、B组与C、D组比较，差异有统计学意义（P〈0．05），A、B组间及C、D组间比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。皮肤移植术后7d，A、B、C、D组混合淋巴细胞反应每分钟放射脉冲数（counts of perminute impulse，cmp）值分别为12836±1357、11876±1265、6581±573及6843±612；A、B组与C、D组比较，差异有统计学意义（JP〈0．05）：A、B组间及C、D组间比较差异无统计学意义（JP〉0．05）；术后25d，各组cpm值分别为13286±1498、12960±1376、11936±1265及12374±1269，各组间差异无统计学意义（P〉0．05）。皮肤移植术后7d，C、D组混合淋巴细胞培养上清液IL-10高于A、B组，IL-2、干扰素γ（interferonl，，IFN-γ）低于A、B组（JP〈0．05），A、B组间及C、D组间差异均无统计学意义（JP〉0．05）：术后25d，各组IL-2、IL-10及IFN-γ差异无统计学意义（P〉0．05）。皮肤移植术后7d，A、B、C、D组受体小鼠对供体小鼠脾细胞的迟发型超敏反应为（0．84±0．09）、（0.81±0．07）、（0．43±0．05）及（0．46±0．03）mm：A、B组与C、D组比较，差异有统计学意义（P〈0．05），A、B组间及C、D组间差异无统计学意义（P〉0．05）。结论HSP60对免疫耐受的诱导和维持有一定作用。     

瘢痕中肌动蛋白及肌球蛋白的实验研究

目的　探讨增生性瘢痕、瘢痕疙瘩及正常皮肤成纤维细胞中肌动蛋白和肌球蛋白Ⅱ的不同表达情况及其与瘢痕挛缩的关系。方法　取增生性瘢痕15例,瘢痕疙瘩10例,正常皮肤15例,用免疫组织化学方法检测其中肌动蛋白和肌球蛋白Ⅱ的表达情况,同时做细胞培养,用流式细胞术检测成纤维细胞中肌动蛋白和肌球蛋白Ⅱ的表达情况。结果　增生性瘢痕肌球蛋白Ⅱ的免疫组织化学染色呈阳性,而瘢痕疙瘩及正常皮肤肌球蛋白Ⅱ的表达均为阴性。增生性瘢痕肌球蛋白Ⅱ的表达较其它两种组织有非常显著性差异(P<0.01),而瘢痕疙瘩和正常皮肤无显著性差异(P>0.05)。流式细胞术检测增生性瘢痕、瘢痕疙瘩及正常皮肤三种组织中肌球蛋白Ⅱ的阳性率分别为(95.11±2.78)%、(16.86±7.11)%及(5.31±1.79)%,增生性瘢痕肌球蛋白Ⅱ表达的阳性率较其它两种组织有非常显著性差异(P<0.01),而瘢痕疙瘩和正常皮肤无显著性差异(P>0.05)。三种组织中肌动蛋白的免疫组织化学染色均为阳性,无显著性差异(P>0.05)。流式细胞术检测三种组织中肌动蛋白的阳性率分别为(77.77±15.43)%、(88.89±10.29)%及(82.92±13.48)%,其表达的阳性率无显著性差异(P>0.05)。结论　瘢痕挛缩与肌球蛋白Ⅱ密切相关,而肌动蛋白在细胞中除作为细胞的收缩蛋白之一外,同时与细胞的活动及运动有关,是细胞生命活动中必不可少的蛋白之一。     

瘢痕疙瘩和增生性瘢痕表皮异常的实验研究

目的 探讨瘢痕疙瘩和增生性瘢痕的表皮异常。方法 采用免疫组织化学方法,检测腱糖蛋白C(Tn-C),角蛋白16(CK-16)和增殖相关核抗原Ki-67蛋白在瘢痕疙瘩、增生性瘢痕和正常成人表皮中的表达。取正常成人皮肤组织RNA,构建正义、反义Tn-C mRNA探针,运用原位杂交技术,观测瘢痕疙瘩、增生性瘢痕和正常皮肤表皮中Tn-C mRNA的表达。结果 瘢痕疙瘩、增生性瘢痕表皮角质形成细胞增生明显高于正常皮肤。Tn-C mRNA在瘢痕疙瘩表皮的表达明显高于其在增生性瘢痕及正常皮肤表皮中的表达。CK-16,Ki-67蛋白在瘢痕疙瘩和增生性瘢痕表皮中表达增加。结论 瘢痕疙瘩和增生性瘢痕的表皮存在增生分化异常,尤以瘢痕疙瘩更为明显。     

Fibrillin-1 and elastin are differentially expressed in hypertrophic scars and keloids.

Hypertrophic scars and keloids are two forms of excessive cutaneous scarring. Considering the importance of extracellular matrix elements in tissue repair, a morphological and quantitative analysis of the elastic system components (fibrillin-1 and elastin) was performed in normal skin, normal scars, hypertrophic scars, and keloids. In superficial and deep dermis, fibrillin-1 volume density was significantly higher in normal skin compared with normal scars, hypertrophic scars, and keloids. The fibrillin-1 volume density did not show differences between hypertrophic scars and keloids in superficial or deep dermis. In superficial dermis, elastin volume density was higher in normal skin compared with normal scars, hypertrophic scars, and keloids. In deep dermis, the elastin volume density was higher in keloids compared with normal skins, normal scars, and hypertrophic scars. We showed that the distribution of fibrillin-1 and elastin is disrupted in all kinds of scars analyzed, but there are two patterns: one for normal scars and another for excessive scars.     

瘢痕成纤维细胞中cyclin D1、p16的表达及关系研究

目的:了解细胞周期蛋白D1、p16在病理性瘢痕中的表达及它们之间的相互关系,以探讨他们在瘢痕形成过程中的作用。方法:采用免疫组化(SP法)对8例成熟瘢痕、11例增生性瘢痕、11例瘢痕疙瘩及8例正常皮肤组织进行染色,观察CyclinD1和p16在不同组织中的表达。结果:正常皮肤及普通瘢痕成纤维细胞中CyclinD1、p16均为阴性;增生性瘢痕与瘢痕疙瘩成纤维细胞中CyclinD1、p16与正常皮肤相比均有极显著性差异(P<0.05);瘢痕疙瘩成纤维细胞CyclinD1表达高于增生性瘢痕,且有显著性差异(P<0.05);p16在瘢痕疙瘩成纤维细胞的表达比增生性瘢痕为高,但两者之间没有统计学差异.结论:CyclinD1、p16在病理性瘢痕的发生及发展中起重要的作用。在瘢痕疙瘩里p16的细胞抑制作用可能无法与CyclinD1的促细胞增殖作用相拮抗,所以细胞呈现持续增殖状态;而在增生性瘢痕里CyclinD1与p16可能处于相对的平衡状态,所以其生长具有一定的自限性。     

病理性瘢痕中结缔组织生长因子基因的表达

目的　探讨结缔组织生长因子在增生性瘢痕和瘢痕疙瘩发病机制中的作用。　方法　分别留取正常皮肤 5例、增生性瘢痕 15例和瘢痕疙瘩 7例组织标本 ,测定组织中羟脯氨酸含量 ,通过逆转录 -聚合酶链反应 (RT- PCR)和图像定量分析 ,检测组织中结缔组织生长因子基因表达水平。　结果　正常皮肤、增生性瘢痕和瘢痕疙瘩组织中羟脯氨酸含量分别为 (2 6 .5 2± 4 .10 )、(84 .10± 1.76 )和 (92 .38± 2 .0 4 )μg/ mg,后两者与前者比较差异有统计学意义 (P<0 .0 1) ;正常皮肤、增生性瘢痕和瘢痕疙瘩组织中结缔组织生长因子 m RNA指数分别为 0 .0 9± 0 .2 5、0 .78± 0 .6 3和0 .84± 0 .0 4 ,后两者与前者比较差异有统计学意义 (P<0 .0 1)。　结论　结缔组织生长因子在增生性瘢痕和瘢痕疙瘩纤维化进程中可能起着促进作用。     

整合素α5β1在病理性瘢痕中的表达及意义

目的　研究整合素α5β1 在病理性瘢痕中的表达情况 ,探讨其在瘢痕发生、发展中的作用和意义。方法　运用SP免疫组化及SPA 胶体金免疫电镜技术对 15例增生性瘢痕、15例瘢痕疙瘩及 10例正常皮肤进行整合素α5β1 的检测 ,并对结果进行半定量及定量分析。结果　在瘢痕疙瘩和增生性瘢痕的成纤维细胞中整合素α5β1 呈阳性表达 ,较正常皮肤强 (P <0 0 1) ;在瘢痕疙瘩中的表达较增生性瘢痕强 (P <0 0 1)。结论　整合素α5β1 与病理性瘢痕发生、发展关系密切。设法减少整合素α5β1 在成纤维细胞的过度表达或许是抑制瘢痕增生、软化瘢痕的新途径     

增生性瘢痕中基质金属蛋白酶及其抑制因子基因的表达

目的 了解基质金属蛋白酶2(MMP-2,又称明胶酶A)、MMP-9(又称明胶酶B)及其金属蛋白酶1组织抑制因子(TIMP-1)在增生性瘢痕不同形成时期的基因表达.方法 提取16例人体不同时期增生性瘢痕样本和8例正常皮肤样本总RNA,分离mRNA,用反转录-聚合酶链反应法检测MMP-2、MMP-9和TIMP-1基因在不同样本中的表达.结果 在正常皮肤中MMP-2、MMP-9和TIMP-1基因转录产物的灰度比值分别为(3.8±0.7)%、(5.8±4.4)%、(30.3±3.0)%,在增殖期瘢痕中分别为(13.5±4.5)%、(18.4±4.7)%、(37.7±4.3)%,明显高于正常皮肤(P＜0.05).成熟期瘢痕MMP-2和MMP-9基因表达量已恢复至正常水平,但TIMP-1基因较正常皮肤仍持续高表达(P＜0.05).结论 MMP-2、MMP-9和TIMP-1基因表达增强可能是增生性瘢痕形成的机制之一,MMP-2和MMP-9基因表达降低可能与增生性瘢痕达到相对稳定的成熟状态有关.     

性激素受体在瘢痕中的表达及与细胞周期调控蛋白相互关系的研究

目的　了解雄激素受体 (AR)、雌激素受体 (ER)在病理性瘢痕中的表达及其与细胞周期调节蛋白D1(cyclinD1)、p16之间的相互关系 ,以探讨他们在瘢痕形成过程中的作用及机制。方法　采用免疫组化方法 (SP法 )对 30例瘢痕标本进行研究 ,以正常皮肤组织为对照 ,观察上述指标的表达。结果　正常皮肤及普通瘢痕成纤维细胞中所有指标均为阴性 ;增生性瘢痕与瘢痕疙瘩成纤维细胞中cyclinD1、p16、AR与正常皮肤相比差异均有显著性意义 (P <0 0 5 ) ;瘢痕疙瘩成纤维细胞cyclinD1和AR的表达高于增生性瘢痕 ,且有显著性意义 (P <0 0 5 ) ;p16在瘢痕疙瘩成纤维细胞的表达比增生性瘢痕为高 ,但两者之间差异无显著性意义。在病理性瘢痕中cyclinD1和AR的表达具有明显的相关性。结论　AR在病理性瘢痕的发生及发展中起一定的作用 ,它可能是通过与其配体结合后促使与cyclinD1有关的基因表达而发挥作用的。在瘢痕疙瘩里可能存在cyclinD1的促细胞增生作用超过P16细胞抑制 ,所以细胞呈现持续增殖状态 ;而在增生性瘢痕里cyclinD1与p16可能处于相对的平衡状态 ,细胞生长具有一定的自限性。