参慈胶囊联合顺铂对A549/DDP肺癌组织Wnt/β-catenin信号通路DKK-3、β-catenin、Cyclin-D1 mRNA表达的影响

目的:探讨参慈胶囊通过Wnt/β-catenin信号通路对人肺腺癌A549/DDP裸鼠体内顺铂耐药的影响。方法:将50只BALB/c裸鼠接种人肺腺癌细胞A549/DDP细胞悬液建立荷瘤模型,随机分为模型组、参慈胶囊组、顺铂组、参慈胶囊+顺铂组。模型组予等量生理盐水,其余各组荷瘤裸鼠均用药21 d,脱颈椎处死取肿瘤组织,采用FQ-PCR技术检测肿瘤组织DKK-3、β-catenin、Cyclin-D1 mRNA的表达。结果:参慈胶囊能升高A549/DDP荷瘤裸鼠肿瘤组织DKK-3 mRNA的表达,降低肿瘤组织β-catenin、Cyclin-D1 mRNA的表达。结论:通过影响Wnt/β-catenin信号通路相关基因的表达,可能是参慈胶囊逆转人肺腺癌A549/DDP裸鼠体内顺铂耐药的作用机制之一。     

参慈胶囊联合顺铂对A549/DDP肺癌组织Wnt/β-catenin信号通路DKK-3、β-catenin、Cyclin-D1 mRNA表达的影响北大核心CSCD

目的:探讨参慈胶囊通过Wnt/β-catenin信号通路对人肺腺癌A549/DDP裸鼠体内顺铂耐药的影响。方法:将50只BALB/c裸鼠接种人肺腺癌细胞A549/DDP细胞悬液建立荷瘤模型,随机分为模型组、参慈胶囊组、顺铂组、参慈胶囊+顺铂组。模型组予等量生理盐水,其余各组荷瘤裸鼠均用药21 d,脱颈椎处死取肿瘤组织,采用FQ-PCR技术检测肿瘤组织DKK-3、β-catenin、Cyclin-D1 mRNA的表达。结果:参慈胶囊能升高A549/DDP荷瘤裸鼠肿瘤组织DKK-3 mRNA的表达,降低肿瘤组织β-catenin、Cyclin-D1 mRNA的表达。结论:通过影响Wnt/β-catenin信号通路相关基因的表达,可能是参慈胶囊逆转人肺腺癌A549/DDP裸鼠体内顺铂耐药的作用机制之一。     

浙贝母碱对A549/顺铂耐药肺癌细胞株核苷酸ERCC1基因及LRP表达的影响

目的观察浙贝母碱对肺癌A549/顺铂(DDP)耐药细胞切除修复互补基因1(excision repair cross-complementation 1,ERCC1)及肺耐药蛋白(lung resistant protein,LRP)表达的影响。方法体外培养肺癌A549/DDP细胞,将对数生长期的细胞分为空白对照组、DDP组、川芎嗪组(DDP加川芎嗪)及浙贝母碱组(DDP加浙贝母碱)。药物作用48 h后,采用RT-PCR法检测ERCC1 mRNA表达,细胞免疫荧光法检测细胞LRP表达水平。结果 DDP组与空白对照组ERCC-1 mRNA及LRP蛋白表达水平比较,差异无统计学意义(P0.05)。与DDP组比较,川芎嗪及浙贝母碱组ERCC1 mRNA及LRP蛋白表达水平明显降低(P0.05);浙贝母碱组ERCC1 mRNA及LRP蛋白表达水平明显低于川芎嗪组(P0.05)。结论浙贝母碱可逆转肺癌A549/DDP细胞株的多药耐药,其作用机制可能与抑制ERCC1 mRNA表达及LRP表达有关。     

鸦胆子油乳对人卵巢癌耐药细胞A2780／DDP的耐药逆转作用

目的 研究鸦胆子油乳对人卵巢癌耐药细胞A2780/DDP的耐药逆转作用.方法 四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察顺铂及鸦胆子油乳对A2780/DDP细胞的生长抑制作用.结果 卵巢癌耐药细胞株A2780/DDP对顺铂产牛耐药性,顺铂对A2780/DDP的耐药倍数为5.6倍.经鸦胆子油乳预处理24h后,顺铂对A2780/DDP的耐药倍数显著下降.结论 鸦胆子油乳可逆转卵巢癌耐药细胞A2780/DDP的耐药性.     

补中益气汤含药血清逆转A549/DDP的顺铂耐药及对mTOR表达的影响

目的:研究补中益气汤含药血清对肺腺癌顺铂耐药细胞株(A549/DDP)顺铂耐药的逆转作用及对哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)表达的影响.方法:动物随机分组,制备补中益气汤高、中、低剂量血清(给药剂量分别为11.34,5.67,2.83 g·kg-1 ·d-1),将A549,A549/DDP细胞体外分为顺铂(DDP)组,空白血清+DDP组,含药血清高剂量+DDP组,含药血清中剂量+DDP组,含药血清低剂量+DDP组,细胞对照组,经过15％各组血清联合DDP不同浓度(10,20,40,80,100,200μmol·L-1)作用48 h,采用MTT法检测补中益气汤不同浓度含药血清对A549/DDP顺铂耐药的逆转作用;采用免疫荧光,免疫细胞化学,Western-blot方法检测mTOR的表达.结果:与DDP组比较,补中益气汤不同浓度含药血清作用于A549/DDP后IC50和耐药倍数均有显著降低(P＜0.05),以补中益气汤中剂量组(等临床剂量组)作用最为显著(P＜0.01),A549/DDP中mTOR的染色吸光度及荧光强度均明显减弱(P＜0.01),蛋白表达水平明显降低(P＜0.01).结论:补中益气汤能增强A549/DDP对顺铂的敏感性,并能通过降低细胞生存通路中mTOR的表达而有效逆转肺腺癌细胞的顺铂耐药.     

消岩汤对A549/DDP细胞自噬及耐药蛋白的影响研究

[目的]通过消岩汤对耐顺铂人肺腺癌细胞A549/DDP多药耐药及自噬蛋白的影响,探究消岩汤对耐顺铂人肺腺癌A549/DDP的耐药逆转作用及探讨相关分子通路。[方法]建立稳定细胞耐药模型,连续灌胃不同浓度消岩汤10 d后,通过血清药理学的实验方法,提取药物血清,用含药血清作用于肺腺癌细胞耐药细胞A549/DDP,通过实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(QPT-PCR)和蛋白免疫印迹法(Werstern Blot)检测A549/DDP耐药、自噬相关基因的表达及相关通路蛋白的变化。[结果]高剂量消岩汤,低剂量消岩汤和生理盐水作用于肺腺癌耐药细胞A549/DDP,检测A549/DDP细胞中耐药相关蛋白P-糖蛋白(P-gp)、肺抗药性相关蛋白(LRP)及自噬相关蛋白Beclin1,HMGB1m RNA和蛋白表达变化,发现高剂量组消岩汤处理细胞株后P-gp、LRP及自噬相关蛋白Beclin1,HMGB1 m RNA和蛋白均发生降低(P0.05),进一步发现消岩汤可影响AKT1-m TOR相关基因,消岩汤明显降低AKT1,m TOR蛋白的表达。[结论]消岩汤通过影响AKT1-m TOR分子通路进而影响耐药相关蛋白P-gp、LRP及自噬相关蛋白Beclin1,HMGB1基因的变化。     

槐耳清膏对人肺腺癌A549/DDP细胞增殖的影响及顺铂耐药逆转作用

目的:探讨槐耳清膏对人肺腺癌A549细胞和A549/DDP细胞增殖的抑制影响及其顺铂耐药细胞A549/DDP的逆转作用。方法:以体外培养的人肺腺癌A549及A549/DDP细胞为实验模型,采用MTT法测定不同浓度槐耳清膏对A549细胞及A549/DDP细胞的增殖抑制率,并运用流式细胞术检测顺铂联合槐耳清膏对A549/DDP细胞的变化,以及增敏作用效应。结果:槐耳清膏对A549细胞及A549/DDP细胞的增殖有明显抑制作用,随着药物浓度的增加,其抑制率逐渐增加,具有明显的量-效关系(P0.05)。顺铂40μmol/L作用于A549及A549/DDP细胞48 h后,其凋亡率分别为(27.61±3.45)%和(17.93±1.73)%,两组间有统计学差异(P0.01)。槐耳清膏1 mg/m L作用于人肺腺癌A549和A549/DDP细胞40 h后,再以相同浓度顺铂诱导,A549细胞凋亡率为(32.35±2.68)%,A549/DDP细胞凋亡率为(30.01±3.65)%,两组间无统计学意义,但与单独DDP作用相比,差异具有显著意义(P0.01)。结论:槐耳清膏能显著抑制人肺腺癌A549及A549/DDP细胞的增殖,诱导细胞凋亡,还可以增加A549/DDP细胞对顺铂的敏感性。     

参芪扶正注射液对非小细胞肺癌细胞顺铂耐药性的逆转作用研究

目的:探讨参芪扶正注射液对非小细胞肺癌细胞顺铂耐药性的逆转作用以及机制。方法:将A549/DDP细胞随机分组,采用MTT法测算细胞增殖抑制率,计算顺铂对非小细胞肺癌细胞的IC_(50)以及参芪扶正注射液对A549/DDP的逆转倍数。采用流式细胞术测算细胞凋亡率,采用Western blot法检测A549/DDP细胞中LRP蛋白表达。结果:采用MTT法测算A549/DDP细胞增殖抑制率,顺铂+参芪扶正注射液组顺铂对A549/DDP的IC_(50)为(19.840±1.337)μmol/L,顺铂为(43.517±3.842)μmol/L,参芪扶正注射液的逆转耐药倍数为2.19,流式细胞术测得参芪扶正注射液联合顺铂组A549/DDP细胞细胞凋亡显著高于空白对照组及顺铂组(P0.05),参芪扶正注射液联合顺铂对LRP蛋白抑制程度显著高于空白对照组及顺铂组(P0.05)。结论:参芪扶正注射液可在一定程度上逆转肺癌A549/DDP细胞株对顺铂的耐药性,作用机制与加速A549/DDP细胞凋亡、下调LRP蛋白的表达有关。     

补中益气汤含药血清对A549/DDP中p-Akt和P-gp表达的影响

目的:研究补中益气汤含药血清逆转人肺腺癌顺铂耐药细胞株(A549/DDP)耐顺铂(DDP)作用及其对磷酸化丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(p-Akt)和P-糖蛋白(P-gp)表达的影响.方法:采用血清药理学方法制备含药血清,随机对照法将24只SD大鼠分为空白对照组(给生理盐水10 mL·kg-1),补中益气汤高、中、低剂量组(11.34,5.67,2.84 g·kg-1,10 mL·kg-1),每日ig给药1次,连续7d后提取血清.将A549/DDP分为空白血清组,补中益气汤高、中、低剂量含药血清组,阻滞剂组,高剂量含药血清联合阻滞剂(LY294002)组,MTT法检测各组细胞对DDP的IC50,并计算耐药逆转倍数.免疫细胞化学法检测各组细胞中p-Akt和P-gp蛋白的表达;逆转录-多聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测各组细胞中Akt和P-gp的mRNA表达.结果:与空白血清组比较,补中益气汤中剂量以上的含药血清可明显降低A549/DDP对DDP的IC50(P＜0.05),并呈浓度依赖效应,与阻滞剂联合效果最佳(P＜0.05);与A549/DDP空白血清组相比,补中益气汤中、高剂量含药血清组,阻滞剂组和高剂量联合阻滞剂组的p-Akt和P-gp的表达显著下降(P ＜0.01,P＜0.05),其中以高剂量联合阻滞剂组下降最多(P＜0.01);与A549/DDP空白血清组相比,中、高剂量含药血清组,阻滞剂组和高剂量联合阻滞剂组的P-gp的mRNA表达量都显著减少(P＜0.01,P＜0.05),中、高剂量含药血清组,高剂量联合阻滞剂组的p-Akt的mRNA表达量也显著减少(P＜0.05).结论:补中益气汤含药血清可逆转A549/DDP细胞的顺铂耐药,与LY294002联合应用效果更佳,其逆转机制可能与减少细胞内p-Akt和P-gp的表达,增强A549/DDP对DDP的敏感性有关.     

中药标准品对人肺癌耐药细胞A549/DDP的逆转效果研究

目的：研究中药标准品对人肺腺癌耐顺铂细胞株A549/DDP的逆转效果。方法：通过细胞增殖实验研究耐药细胞株（A549/DDP）的耐药倍数和对所选中药标准品的耐受情况。回归分析计算中药标准品对A549/DDP的IC5作为其逆转耐药的工作浓度。研究中药标准品在工作浓度下对A549/DDP耐顺铂的逆转效果。结果：A549/DDP的耐药指数为31.79。A549/DDP对川芎嗪、苦参碱耐受良好。盐酸小檗碱、北豆根碱（蝙蝠葛碱）和冬凌草甲素对A549/DDP细胞增殖均有一定的抑制作用,且存在明显的量效关系,工作浓度时,均能逆转A549/DDP对顺铂的耐受性（P<0.01）。结论：所选的中药标准品能有效逆转A549/DDP对顺铂的耐药性。     

鸦胆子油自微乳的制备及溶出度考察

目的:制备鸦胆子油自微乳,并考察其溶出度.方法:通过溶解度试验、气相色谱法筛选辅料,伪三元相图优化自微乳处方,并进行药物溶出度试验.结果:鸦胆子油自微乳最优处方为鸦胆子油-辛酸癸酸三甘油酯-聚氧乙烯氢化蓖麻油-聚乙二醇400 12∶ 12∶65∶11,乳滴粒径＜50 nm,15～20 min可基本完全溶出.结论:鸦胆子油自微乳稳定性良好,提高了用药的顺应性,且制备工艺简单.     

鸦胆子油乳注射液联合化疗治疗晚期胃癌的疗效及安全性Meta分析

通过计算机检索Cochrane library,Pub Med,Medline,中国知网数据库、中国生物医学文献数据库、中文科技期刊全文数据库,检索时间从数据库建库至2014年6月,纳入鸦胆子油乳注射液联合化疗治疗晚期胃癌的随机对照试验(randomized controlled trials,RCTs)7项。评价纳入研究的质量并提取资料,由2名研究员分别独立提取数据和进行文献质量评价,并用Rev Man 5.2软件进行统计分析。系统评价鸦胆子油乳联合化疗治疗晚期胃癌的临床疗效和安全性。Meta分析结果显示,与单纯化疗方案相比,鸦胆子油乳注射液联合化疗方案可以提高晚期胃癌患者的客观反应率(RR=1.43,P0.001)、降低中性粒细胞减少(RR=0.56,P0.001)、血小板减少(RR=0.64,P=0.02)及恶心、呕吐发生率(RR=0.66,P=0.002),但未能明显改善生活质量(RR=1.36,P=0.07)。该研究提示鸦胆子注射液联合化疗治疗晚期胃癌具有增效、减毒作用,具有一定的应用前景。     

芦荟大黄素脂质体逆转人肺腺癌细胞A549/DDP对顺铂多药耐药的作用研究

目的：研究芦荟大黄素脂质体(aloe emodin liposomes，AE-L)在体外对耐药人肺腺癌细胞系A549/DDP对顺铂(DDP)的耐药性。方法：采用MTT检测方法得出AE-L的无毒细胞浓度、低毒细胞浓度以及空脂质体(empty liposomes,E-L)的无毒浓度；再以E-L无毒浓度做对照组，分别测出AE-L无毒细胞浓度组、低毒细胞浓度组耐药细胞逆转倍数；电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)法测定各组细胞内顺铂浓度。结果：AE-L无细胞毒浓度组(2.0 mg·L^-1)使A549/DDP细胞对DDP的IC₅₀由16.81 mg·L^-1降至5.86 mg·L^-1；低细胞毒浓度(7.0 mg·L^-1)组的IC₅₀降至4.34 mg·L^-1；2组均明显提高DDP在A549/DDP细胞内的浓度。结论：AE-L能部分逆转A549/DDP细胞的多药耐药(MDR)，其机制与增加细胞内药物浓度有关。     

消岩汤对耐顺铂人肺腺癌A549/DDP细胞多药耐药相关蛋白的调控作用

目的探讨消岩汤含药血清对耐顺铂人肺腺癌A545659/DDP细胞多药耐药相关蛋白1(MRP1)、肺耐药蛋白(LRP)及其m RNA表达水平的影响,发现消岩汤对化疗耐药的作用靶点,为肺癌化疗耐药的临床治疗提供理论基础。方法 A549裸鼠皮下移植瘤模型ip给予等量生理盐水,2 mg/kg顺铂,消岩汤低、高剂量(20、40 g/kg)获得含药血清,选择耐顺铂人肺腺癌A549/DDP细胞系作为获得性耐药模型,采用Western blotting免疫印迹法及RT-PCR技术,检测各组含药血清作用下A549/DDP细胞多药耐药基因MRP1、LRP及其产物MRP1、LRP蛋白的表达水平。结果与对照组相比,随着血清中药物浓度的增加,消岩汤低、高剂量组LRP与MRP1蛋白表达逐渐减弱(P0.05)。LRP及MRP1 m RNA水平也有所下降(P0.05),且随着药物浓度的增加,基因表达抑制越明显。结论不同浓度的消岩汤含药血清对MRP1、LRP及其m RNA表达均具有不同程度的抑制作用,且浓度越高,抑制作用越明显,即与剂量呈正相关,揭示消岩汤逆转肺癌耐药可能与抑制MRP1和LRP蛋白功能有关。     

消岩汤逆转肺癌顺铂耐药的机制研究

目的探讨消岩汤逆转肺癌顺铂(DDP)耐药的可能机制。方法 MTT检测细胞增殖情况,划痕实验检测细胞侵袭能力;si RNA转染细胞获取稳定低表达基因的细胞株;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Werstern blotting检测m RNA和蛋白表达水平的变化。结果 MTT检测A549/DDP,在72、96 h,消岩汤能够明显抑制细胞增殖,而在48、72、96 h,DDP联合消岩汤能够明显抑制细胞增殖。划痕实验显示与A549/DDP/si RNA-NC比较,A549/DDP/siRNA-Beclin1细胞株迁移距离明显缩短。MTT显示与A549/DDP/si RNA-NC比较,A549/DDP/si RNA-Beclin1细胞株增殖能力减低,Westernblotting显示与A549/DDP/siRNA-NC比较,A549/DDP/siRNA-Beclin1细胞P-糖蛋白(P-gp)和肺耐药相关蛋白(LRP)蛋白表达降低,MTT检测A549/DDP/siRNA-Beclin1细胞,在72、96 h,DDP和消岩汤能明显抑制细胞增殖;而在24、48、72、96 h,DDP联合消岩汤明显抑制细胞增殖。结果显示DDP联合消岩汤使A549/DDP/siRNA-Beclin1细胞株中YES关联蛋白1(YAP1)、P-gp和LRP蛋白表达明显降低。结论消岩汤可能通过影响Beclin 1-YAP1分子通路进而改变肺癌细胞对DDP的敏感性。     

苦参碱通过抑制microRNA-192调控顺铂耐受肺腺癌A549细胞对顺铂的敏感性

目的探讨苦参碱通过调控microRNA影响顺铂耐受A549(A549/DDP)细胞对顺铂的敏感性。方法采用生物信息学手段对GEO数据库中的相关microRNA芯片数据(访问编号GSE43249)进行数据挖掘,筛选出与A549细胞顺铂敏感性相关的microRNA。体外培养对顺铂敏感的A549细胞及A549/DDP,使用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法在体外培养的细胞中验证生物信息学的结果,并考察苦参碱对A549/DDP细胞中microRNA水平的影响。通过转染micro RNA-192(mi R-192)模拟序列上调A549/DDP细胞的mi R-192水平。CCK-8细胞活力实验考察苦参碱处理及(或)mi R-192上调对A549/DDP细胞顺铂敏感性的影响。结果芯片数据挖掘显示与顺铂敏感的A549细胞相比,A549/DDP细胞中共有11个microRNA存在显著变化(P0.05),其中mi R-192及mi R-194变化在体外培养的细胞中得到了验证。与未经处理的A549/DDP细胞相比,苦参碱处理后的A549/DDP细胞中mi R-192水平显著降低(P0.05)。苦参碱处理可以增加A549/DDP细胞对顺铂的敏感性,miR-192的上调可以消除这种效果。上调miR-192水平可诱导A549细胞的顺铂耐受。结论苦参碱可能通过抑制mi R-192调控A549对顺铂的敏感性。     

虫草素通过抑制NF-κB途径增强A549细胞对顺铂的敏感性

 目的 通过研究虫草素和顺铂单用或联用对肺癌细胞A549的抗肿瘤效应,探讨其可能的作用机制,为临床肿瘤治疗提供新思路。方法 四甲基偶氮唑盐法检测不同浓度的虫草素与顺铂单用或虫草素与顺铂(3 μg·mL^-1)联用对A549的增殖抑制作用,并计算IC₅₀;采用Hoechst 33258染色法及流式细胞术检测虫草素与顺铂单用或联用诱导A549细胞凋亡情况;Western blot法检测不同处理组的细胞核内NF-κBp65及凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2表达水平。结果 虫草素与顺铂联用对A549细胞的抑制作用显著增加,增强了顺铂对A549的敏感性; Hoechst 33258染色及流式细胞术显示,与虫草素和顺铂单独用药相比,联合用药能够明显增加顺铂诱导的细胞凋亡;Western blot结果显示,与对照组相比顺铂能够增加细胞核内NF-κBp65的活性,然而虫草素却能抑制NF-κBp65的活性,联合用药后NF-κBp65的活性明显下调;与顺铂单独用药相比,联合用药组能够使促凋亡蛋白Bax表达显著增高,而抗凋亡蛋白Bcl-2的表达则降低。结论 虫草素能够增强顺铂对肺癌细胞A549的敏感性,其作用机制是通过抑制NF-κB途径,调节下游信号分子 Bax和Bcl-2的表达而实现。     

消岩汤药物血清对A549/DDP多药耐药逆转作用的研究

[目的]探讨消岩汤药物血清对接种S180昆明小鼠肿瘤的抑制作用,及对耐顺铂人肺腺癌细胞系A549/耐顺铂(DDP)的耐药逆转作用。[方法]通过建立小鼠肿瘤模型,观察消岩汤对小鼠S180移植肿瘤生长的影响;以人肺腺癌敏感细胞A549和耐药细胞A549/DDP为研究对象,采用细胞毒实验(MTT)方法,探讨消岩汤对肺癌耐药细胞的多药耐药逆转作用。[结果]消岩汤高、低剂量组的抑瘤率分别是48.36%和27.87%;消岩汤荷瘤动物含药血清高、低剂量组分别与DDP合用时,对耐药细胞A549/DDP的杀伤作用分别是DDP组的1.78倍和1.57倍。[结论]消岩汤可改善小鼠生活质量,拮抗恶病质,并能够抑制肿瘤生长;消岩汤含药血清对A549及A549/DDP均有生长抑制作用,且能增强DDP对肺癌敏感细胞和耐药细胞的杀伤作用,具有耐药逆转作用。