双抗原夹心法ELISA在肾综合征出血热诊断中的应用

目的建立一种敏感、特异的检测肾综合征出血热(HFRS)血清总抗体的双抗原夹心法ELISA。方法应用重组汉坦病毒(HV)NP抗原e1.3S作为包被抗原和e6-119-HRP作为酶标抗原建立双抗原夹心法ELISA,检测血清总抗体,并与间接免疫荧光法(IFA)相比较。结果共检测188份人血清和378份鼠血清标本,2种方法的总符合率为97.70%。以IFA为参照标准,双抗原夹心法ELISA的敏感性为97.54%,特异性为97.87%。结论双抗原夹心法ELISA检测HFRS血清总抗体具有很高的敏感性和特异性,适用于大规模的流行病学调查。     

酶联免疫双抗体夹心法检测牛初乳素中免疫球蛋白IgG

〔目的〕建立检测牛初乳素为原料的保健食品中免疫球蛋白IgG的常用酶联免疫双抗体夹心法。〔方法〕分离纯化小牛血清中IgG,以牛IgG免疫新西兰兔,获得抗牛IgG的血清,分离纯化,制备兔抗牛IgG。〔结果〕1000ng/孔兔抗牛IgG饮被酶联板,3倍比稀释牛IgG,夹心法检测。〔结果〕在牛IgG0.031mg/ml-2.50mg/ml范围,浓度与吸光度值线性相关,方程为:y=0.358 0.767x,相关系数为r=0.995,当添加50mmIgG时,回收率为88.4％,变异系数为6.1％。〔结论〕该方法具有特异性强、快速、灵敏和分析成本低等特点。     

以生物素—亲和素系统检测布鲁氏菌抗体的初步应用

目前所采用的血清学检测布病的几种方法,其敏感性、特异性都有不足之处,容易漏诊和误诊,尤其对慢性布病,至今仍缺乏理想的诊断方法。     

逆转录-聚合酶链反应用于肾综合征出血热病毒的分型

为建立一种适用基层单位快速进行肾综合征出血热(HFRS)病毒分型的方法,在聚合酶链反应(PCR)检测病毒DNA的基础上,建立检测病毒RNA逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和套式-PCR方法,以采集的鼠肺和血清标本进行HFRS病毒分型,结果对筛出的3份HFRS病毒阳性鼠肺标本和5份血清均作出准确分型,HFRS病毒均为汉城型.     

应用单克隆抗体阐明肾综合征出血热病毒的糖蛋白特征

肾综合征出血热(HFRS)的病原体在形态学上和布尼雅病毒科病毒类似,拥有3个病毒 RNA 片段,核酸编码产生的4个分子量分别为200000、45000～55000、50000以及72000道尔顿的结构蛋白,而后两种为糖蛋白 G_1 和G_2。作者既往应用针对出     

肾综合征出血热患者的下丘脑-垂体-肾上腺系统的状态

作者研究了肾综合征出血热(HFRS)患者在不同病期的下丘脑-垂体-肾上腺系统的功能。共观察95例患者,年龄15～60岁,主要为24岁以下的患者,其中男性80例,女性15例。重型26例,中型36例,轻型33例。根据分类将 HFRS 分为4期:少尿前期,少尿期,多尿期(尿量增加阶段与明显     

差分脉冲和方波伏安法研究亲和素-生物素固载ssDNA的生物传感器

目的:建立一种新型的DNA检测技术,能快速、灵敏的识别目的DNA。方法:生物素标记的ssDNA通过生物素-亲和素体系固载到Pt电极上,制作了DNA传感器,[Co(phen)3]3+作指示剂,用差分脉冲伏安法(DPV)和方波伏安法(SWV)对此传感器进行研究。结果:在pH 6.8~7.0,[Co(phen)3]3+浓度80μmol/L条件下,杂交前后指示剂峰电流的差值与溶液中互补DNA的浓度有良好的线性关系,DPV法测量起始子的线性范围是8.0×10-9~2.8×10-8mol/L,终止子的线性范围是7.2×10-9~7.2×10-8mol/L;SWV法测量起始子的线性范围是8.5×10-9~3.5×10-8mol/L,终止子的线性范围是7.2×10-9~9.0×10-8mol/L。两种检测方法均能很好的识别样品中的DNA片断。结论:该方法测量灵敏度高,能很好地识别转基因食品中的特异DNA序列。     

酶标葡萄球菌A蛋白组化法用于肾综合征出血热诊断的研究

本文报告应用HRP-SPA组化法检测用4株不同来源的HFRS病毒抗原免疫的家兔血清和10例HFRS病人双份血清的抗体滴度，结果与IFA法基本一致，证明了HRP-SPA组化法的特异性。用HRP-SPA组化法和IFA法检测了不同疫区30例病人的恢复期血清，来源于黑线姬鼠和褐家鼠的Vero-E6细胞HFRS病毒抗原和7只HFRS抗原阳性黑线姬鼠肺洗液中的抗体，两法结果相同，证明了HRP-SPA组化法与IFA法一样，具有较高的灵敏性。此外，HRP-抗人IgG组化法用于HFRS的诊断也是可行的。     

应用组织培养制备的病毒抗原检测肾综合征出血热血凝抑制抗体

多年来肾综合征出血热的血清学诊断主要依靠间接免疫荧光试验,但此技术需要荧光显微镜和种特异性的荧光素结合物,而且判断结果时存在着一定的主观性。1984年中美协作成功的血凝抑制试验虽具有应用简便和准确可靠的特点,但其血凝素来源系小白鼠乳鼠脑,操作过程中有较大的感染危险性,且所获得的血凝素效价不高。本文报道     

应用混合血清法筛检肾综合征出血热特异性抗体IgG的可行性研究

应用混合血清法筛检肾综合征出血热特异性抗体ＩｇＧ的可行性研究刘洁，孙辉目前国内外对肾综合征出血热（ＨＦＲＳ）进行的大量血清流行病学调查，多采用ＩＦＡＴ或ＲＰＨＩ技术。由于受设备条件限制，加之标本处理复杂，ＨＦＲＳ人群感染率较低等因素，故在方法学及经济...     

在肾综合征出血热病人血清中应用PCR法直接检测HFRS病毒的临床价值探讨

在肾综合征出血热病人血清中应用ＰＣＲ法直接检测ＨＦＲＳ病毒的临床价值探讨上海市南汇县传染病医院２０１３００储峰，季青，严润民，王霞明应用聚合酶链反应技术对肾综合征出血热（ＨＦＲＳ）的病原体－病毒进行基因分型。国内外实验室已开展了这项研究，但尚未有人以...     

套式反转录-聚合酶链反应检测革螨体内肾综合征出血热病毒的初步研究

用HTN病毒姬鼠型M基因型特异性引物,异硫氰酸胍一步法提取RNA,nested RT-PCR检测鼠肺和厩真厉螨体内76-118株病毒RNA,扩增产物经琼脂糖凝胶电泳和点印迹杂交证实.结果表明,姬鼠型76-118株病毒液和叮刺感染病毒乳鼠后第10天厩真厉螨组织悬液接种乳鼠第9天鼠肺、叮剌后第10天和30天螨,均检出病毒RNA.30只螨样本提取RNA也能扩增出病毒RNA.家鼠型UR株感染样本不能被扩增.该方法具有较高特异性和敏感性,操作简单,结合原位分子杂交,可用于螨媒传播HFRSV的研究.     

犬粪便棘球绦虫抗原的双抗体夹心酶联免疫吸附试验检测法建立与应用

目的 研究双抗体夹心酶联免疫吸附检测犬粪便棘球绦虫虫体抗原的方法并评价其在实际工作中的应用价值.方法 实验犬12只,分实验组和对照组,实验组用活化绵羊源原头蚴(G1型)作人工感染;感染后08周内收集粪便,56 d宰杀实验犬,收集成虫;制备成虫抗原和虫体代谢/分泌抗原,蛋白酶K处理抗原并分别免疫成年绵羊和新西兰白兔;绵羊抗血清用80%饱和硫酸铵沉淀、透析,兔抗血清过IgG亲和层析柱,分别获得纯化抗体;观察犬粪便在PBS液中-80 ℃冷冻3 d或在含1% Formalin 的PBS液中70 ℃80 ℃加热8 h的处理方法对检出结果的影响.运用该方法对四川省甘孜县达通玛区4个乡的580只家犬吡喹酮每6月一次驱虫前后的粪抗原进行监测.结果 试验系统的敏感性为92.3%,特异性为80%;粪抗原从感染后的第23周可检出;两种样品处理方法都可以灭活虫卵但不影响检出效果;检测方法可同时用于对细粒棘球绦虫和多房棘球绦虫感染的诊断;达通玛区家犬粪抗原阳性率从2000年的50%下降到2005年的17%.结论 检测方法具有较高的特异性和敏感性;推荐粪便用加热的方法处理可以灭活虫卵以防止生物污染;该方法可以在基层推广应用.     

肾综合征出血热（HFRS）不同血清型病毒株免疫小鼠母鼠对其所生乳鼠致死感染保护作用的影响

研究发现对肾综合征出血热（HFRS）病毒A16株（Hantaan型）感染小鼠母鼠的保护作用与免疫母鼠所用病毒株的血清型和乳鼠的感染途径有关,病毒A_16株免疫的小鼠母鼠对腹腔和脑内感染的其所生乳鼠的保护率均为100%。病毒76－118株（Hantaan型）免疫的小鼠母鼠对腹腔感染的其所生乳鼠的保护率为100%（感染剂量为10^5.2和10^6.2LD₅₀）至91%（感染剂量为10^7.2LD₅₀）,而对脑内感染的。乳鼠依感染剂量（10^5.2﹑10^6.2和10^7.2LD₅₀）不同保护率分别为60%?50%和20%。用病毒R22株（Seoul型）免疫的小鼠母鼠对腹腔感染的其所生乳鼠保护率均为100%。而对脑内感染的乳鼠依感染剂量（10^3.2或10^4.2～10^7.2LD₅₀）不同保护率为40%或0。     

汉坦病毒核蛋白的重组表达及其免疫印迹法在肾综合征出血热血清抗体检测中的应用

目的 应用基因工程技术,在昆虫细胞中表达汉坦病毒（HV）S基因,表达产物作为诊断抗原,用于检测血清中抗HV特异性抗体IgG。方法 PCR扩增HV-Z10株N蛋白（NP）编码基因,基因工程方法构建NP编码基因昆虫表达系统 rBAC-Z10S-TN。间接荧光法了解重组NP（rNP）表达及与特异性免疫反应情况,SDS-PAGE观察重组蛋白表达情况。建立免疫印迹法检测肾综合征出血热（HFRS）患者血清样品,并与常规间接免疫荧光法进行比较。结果 rBAC-Z10S-TN高效表达rNP,SDS-PAGE显示rNP的蛋白表达带,此抗原仅与HFRS患者血清起反应。经双盲试验,两法检测血清143份,HFRS阳性符合率为97.67%。结论 成功构建了HV-Z10株NP编码基因高效真核表达系统。所建立的免疫印迹法可作为HFRS简便、安全、敏感、特异的血清学诊断新方法。     

酶联免疫吸附试验间接法检测水痘带状疱疹病毒IgG抗体方法的建立及应用

以１号水痘带状疱疹病毒（ＶＺＶ１）为毒种,制备酶联免疫吸附试验特异抗原,并以Ｖｅｒｏ－Ｅ６基质细胞抗原作对照,用ＥＬＩＳＡ间接法测定ＶＺＶ ＩｇＧ抗体。方法特异性经中和试验、封闭性阻断试验,检测事实状疱疹病人双份血清抗体滴度比较证实;其敏感性比间接免疫荧光法（ＩＦＡ）高数十倍;重现性经４８份血清３次重复测定平均ＯＤ值无显著差异。与Ｂｉｏｓｅｅｄ抗ＶＺＶ抗体ＩｇＧ ＥＬＩＳＡ试剂盒测定结果比较阳性符     

联合应用即刻法-质控图法进行抗-HIV酶联免疫法检测的室内质控

随着艾滋病流行形势的日趋严峻,感染者的数量不断增加,规范的艾滋病检测也显得愈来愈重要。目前国内检测抗-HIV主要应用酶联免疫法(ELISA),室内质控主要应用质控图法来控制日常工作的精密度,判断实验的有效性。但由于ELISA检测试剂有效期较短(一般为6个月),这样对于检测样品数量较少的实验室,用同一批号试剂盒连续常规检测20次难度大,因而用单一质控图法进行ELISA室内质控有一定的局限性。我们结合质控图和“即刻性”质控的优点,建立了抗-HIV的即刻法-质控图法的质控方法,现介绍如下:1 材料与方法1.1 材料 质控血清,为自己制备。制备方法:收集HIV抗体阳性和阴性血清,56℃30min灭活,用HIV抗体阴性血清梯     

复方孕二烯酮与二甲双胍联合应用对PCOS患者IGF-1、IGFBP-1、 肾素-血管紧张素系统及促排卵结局的影响

目的:研究二甲双胍与复方孕二烯酮(复方GES)对多囊卵巢综合征(PCOS)患者卵巢肾素-血管紧张素系统(RAS)、血清胰岛素样生长因子-1(IGF-1)、胰岛素样生长因子结合蛋白-1(IGFBP-1)、性激素水平及促排卵结局的影响并探讨其可能的作用机制。方法:选择PCOS患者40例,随机分为两组,实验组接受二甲双胍及复方GES治疗,连续3个月。治疗前后分别测定血浆肾素原(PRA)、血管紧张素Ⅱ(ATⅡ)及血清IGF-1、IGFBP-1、空腹胰岛素(INS)、空腹血糖(GLU)、黄体生成素(LH)、促卵泡素(FSH)、雄烯二酮(A2)、雌二醇(E2)、睾酮(T),测量每侧卵巢内卵泡数目、卵巢体积并观察临床症状的改善及服药期间的副反应。停药后开始促排卵治疗。对照组直接进行促排卵治疗。结果:实验组服药3个周期后,FSH(P<0.05)、LH、A2、E2、T水平及LH/FSH比值(P<0.01)均显著下降,血浆PRA、ATⅡ与空腹INS、BMI、INS/GLU比值显著降低(P<0.01)。IGFBP-1水平明显上升(P<0.05)。超声监测双侧卵巢体积显著缩小,卵泡数目明显减少(P<0.01)。促排卵治疗过程中,实验组HMG(或FSH)用量显著低于对照组(P<0.01),单卵泡生长率和HCG日A型内膜出现率均高于对照组(P<0.01),周期排卵率显著高于对照组(P<0.05)。结论:二甲双胍与复方GES合并用于PCOS患者,能改善PCOS患者内分泌水平,调节PCOS患者IR状态,显著提高PCOS患者CC+HMG方案促排卵治疗的效果,并减少促排卵并发症的发生。