单克隆抗体亲和层析法纯化HFRS病毒血凝素抗原的初步研究

用蔗糖-丙酮法从HFRS病毒陈栋感染的乳小白鼠鼠脑中提取粗制血凝素,将此粗制血凝素通过抗HFRS病毒血凝素McAb 3G_1与Sepharose 4B偶联的免疫吸附柱,获得初步纯化的HFRS病毒血凝素抗原,经鉴定具有较高的血凝滴度和较好的免疫原性。用SDS-PAGE和Wes-tern-blot技木分析该纯化的血凝素抗原,并与同法纯化的正常鼠脑抗原比较,证明该特异性血凝素抗原分子量为5×10~4道尔顿。用2株抗HFRS病毒以及10株抗HFRS病毒血凝素McAb,以ELISA阻断试验分析纯化50K血凝素,结果有10株McAb可阻断McAb3 G_1与其结合,其抗原决定簇之间有部分相同或重叠,提示这些具有不同特性的抗原决定簇确实位于同一结构蛋白上。以上结果表明,该50k血凝素蛋白特性及结构均较复杂,尚待进一步研究。     

单克隆抗体亲和层析法纯化HFRS病毒血凝素抗原的研究

用蔗糖-丙酮法从HFRS病毒陈株感染的乳小白鼠鼠脑中提取粗制血凝素,将此粗制血凝素通过抗HFRS病毒血凝素McAb 3G_1与Sepharosc 4B偶联的免疫吸附柱,获得纯化HFRS病毒血凝素抗原具有较高的血凝滴度和良好的免疫原性。用SDS-PAGE和Western-blot技术分析该纯化的血凝素抗原,并与同法纯化的正常鼠脑抗原比较,证明该特异性血凝素抗原分子量为5×10~4道尔顿。用2株抗HFRS病毒以及10株抗HFRS病毒血凝素McAb,以ELISA阻断试验分析纯化50K血凝素,结果有10株McAb可阻断McAb3G_1与其结合,其抗原决定簇之间有部分相同或童叠,提示这些具有不同特性的抗原决定簇确实位于同一蛋白上。以上结果表明,该50K血凝素蛋白特性及结构均较复杂,尚待进一步研究。     

肾综合征出血热病毒结构蛋白的纯化及免疫学特性分析

应用从肾综合征出血热（ＨＦＲＳ）患者血清中提取的ＩｇＧ与活化的Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ偶联，制备亲和层析柱，用此亲和层析柱从ＨＦＲＳＶ感染的小白鼠乳鼠鼠脑中提取出２种分子量为６７０００和５５０００的病毒结构蛋白。经ＥＬＩＳＡ证明，此病毒结构蛋白能与ＨＦＲＳ患者血清ＩｇＧ及抗ＨＦＲＳ病毒的ＭｃＡｂ反应，效价为１６０。与６株抗ＨＦＲＳＶＭｃＡｈ试验表明，此病毒结构蛋白能与Ｈ７株反应。血凝试验证明，此病毒蛋白不能凝集鹅红细胞、鸽血球和人＂Ｏ＂型血红细胞。将纯化的病毒结构蛋白免疫家兔，证明其有较强的免疫原性，可刺激家兔产生特异性抗体；微量中和试验及乳鼠中和试验证明，中和效价为２５６，说明纯化的病毒结构蛋白具有中和抗原位点；免疫血清对感染乳鼠有一定保护作用。     

肾综合征出血热病毒单克隆抗体的制备及其特性研究

用肾综合征出血热病毒(HFRSV)陈氏株免疫获得5株单克隆抗体(McAb).B_9株McAb具有血凝抑制和体内保护活性:F_-3、H_(11)株McAb具有较弱的中和活性及体内保护活性;B_9株McAb与重型HFRSV毒株的大部分发生反应.与轻型HFRSV毒株不反应;F_3、H_7株McAb与检测的24个HFRSV毒株均发生反应.B_(11)、F_3、H_7、H_(11)等4株McAb可用于酶联免疫吸附试验。     

汉滩病毒结构蛋白昆虫细胞融合表达产物的免疫原性评价

目的：研究汉滩病毒（HTNV）囊膜糖蛋白G1与核蛋白（NP）部分片段在昆虫细胞中融合表达产物的免疫学特性，为HTNV基因工程疫苗的研制提供依据。方法：构建含有HTNV G1S0.7嵌合基因的重组杆状病毒Bac-G1S0.7，用其感染的Sf9细胞免疫Balb/c小鼠。用间接免疫荧光法、ELISA法、微量细胞培养中和试验及T淋巴细胞增殖试验对被免疫小鼠的体液免疫及细胞免疫应答效果进行检测。结果：Bac-G1S0.7感染的昆虫细胞免疫小鼠后，测得免疫鼠血清抗HTNV抗体滴度最高达1：3200，含有特异性抗HTNV NP及抗HTNV糖蛋白G1的抗体，被免疫小鼠中有部分产生了较低滴度的中和抗体，免疫鼠脾细胞对HTNVNP或糖蛋白的增殖反应指数均高于阴性对照组。结论：G1S.07嵌合基因的昆虫细胞表达产物具有较好的免疫原性，可刺激机体同时产生针对HTNV NP与囊膜糖蛋白G1的细胞及体液免疫应答。     

亲和层析法纯化肾综合征出血热病毒大鼠单克隆抗体

应用小鼠抗大鼠Ｋａｐｐａ轻链单克隆抗体亲和层析系统，对抗肾综合征出血热病毒大鼠ＭｃＡｂ进行了纯化研究，使用该系统具有ＭｃＡｂ回收率好，纯度高，能较好地保持ＭｃＡｂ免疫学活性，操作，快速，可一步除去腹水中宿主杂蛋白，并能适应不同类别ＭｃＡｂ纯化的特点，此外还对自制盐析纯大鼠Ｋａｐｐａ轻链ＭｃＡｂ柱与进口亲和纯大鼠Ｋａｐｐａ轻链ＭｃＡｂ柱进行了比较和探讨。     

抗HFRS病毒McAb制剂对大白鼠呼吸和循环系统影响的初步观察

抗ＨＦＲＳ病毒ＭｃＡｂ制剂对大白鼠呼吸和循环系统影响的初步观察薛小平，徐志凯，王海涛，尹文，阎岩，吴兴安（西安第四军医大学微生物学教研室，西安７１００３２）鼠源性单克隆抗体（ＭｃＡｂ）应用于肿瘤等疾病的体内诊断和治疗国内外文献均有报道，但用于体内抗病...     

肾综合征出血热病毒蛋白与抗人红细胞单克隆抗体偶联的方法

近年来,澳大利亚学者使用抗人红细胞mAb F(ab＇)2片段与人免疫缺陷病毒(HⅣ)的合成多肽抗原的化学交联物,以患者本身红细胞作为指示物,建立了称为自身血凝试验的检测方法(Autologous erythrocyte agglutination, AGEN)用于检测人外周血抗HIV抗体,其敏感性和特异性类似于ELISA;且整个试验过程仅需2min,是一种简易的快速免疫测定技术[1,2].     

抗HFRS病毒McAb制剂对动物的致敏,毒性和血管刺激性实验

抗ＨＦＲＳ病毒ＭｃＡｂ制剂对动物的致敏、毒性和血管刺激性实验薛小平，徐志凯，王海涛，尹文，晏培松，阎岩，吴兴安（西安第四军医大学微生物学教研室，西安第四军医大学病理学教研室，西安７１００３２）肾综合征出血热（ＨＦＲＳ）是一种急性病毒性传染病，迄今尚无...     

单克隆抗体对HFRS病毒两种粗制抗原相对亲和力的测定

采用ELISA测定32株抗HFRS病毒McAb对该病毒两种粗制抗原的相对亲和力,发现每一株McAb对两种病毒抗原的亲和力相同或基本相同,而各株McAb对同一病毒抗原的亲和力则有所不同,有些差别很大。按50％最大结合浓度分析,可分为3组。1组13株McAb为0.003～0.8μg/ml,Ⅱ组9株McAb为0.1～8μg/ml,Ⅲ组10株McAb为50～300μg/ml。这一结果为选择应用这些McAb提供了依据。     

肾综合征出血热病毒单克隆抗体的研究进展

近年来,各种不同特性的抗HFRS病毒McAb不断产生。并得到广泛应用。在病原学方面,McAb不仅能区分HFRS病毒的型别,还可对其抗原性作进一步分析,并为深入研究HFRS病毒各种结构蛋白的抗原位点、特性及功能,病毒对机体的感染与免疫,以及疫苗(特别是亚单位疫苗)的研制等提供了有力的工具。在HFRS检验诊断和流行病学调查方面,采用McAb建立了一些新检测方法,敏感性和特异性得到提高。另外,通过McAb对HFRS病毒感染乳鼠保护作用的研究,为特异性治疗HFRS提供了实验依据。     

肾综合征出血热病毒单克隆抗体抗独特型抗体的分类鉴定

肾综合征出血热病毒单克隆抗体抗独特型抗体的分类鉴定娄元梅，朱德钟，刘启富（重庆第三军医大学微生物学教研室，６３００３８）抗独特型抗体（Ａｎｔｉ－Ｉｄ，Ａｂ２）在结合活性和功能特性方面具有高度特异性，对其分类甚为重要。Ｊｅｒｎｅ（１９８２）首先将Ａｂ２...     

HFRS患者汉滩病毒核蛋白特异性CTL克隆的建立及其初步研究

为探讨汉滩病毒核衣壳蛋白 (HTNV NP )诱生的特异性细胞免疫的分子基础 ,为阐明HFRS的发病机制和疫苗的设计提供资料 ,本文分离HFRS患者的PBMC ,建立HTNV NP特异性的CTL克隆 ,同时将克隆有HTNVS基因不同片段的真核表达载体转染患者自身的B淋巴母细胞系 (BLCL ) ,建立CTL靶细胞系 ,并进行细胞杀伤试验。建立的特异性CTL克隆对表达完整NP、NP羧基和氨基端肽段的靶细胞均有比较明显的杀伤效应 ,平均杀伤率分别为 5 0 2 %、 39 0 %和 2 5 8%。表明HTNV NP优势T细胞表位可能主要位于病毒核蛋白的羧基端     

肾综合征出血热病毒单克隆抗体的抗独特型抗体的制备与初步鉴定

本文用HFRS病毒McAbs免疫家兔,制备了抗Id抗体(Ab_2),用小鼠γ球蛋白-Sepharese AB免疫亲和层析柱纯化了Ah_2,并以ELISA试验对其特异性作了签定。结果表明,所制备的Ab_2具有良好的Id特异性,并能与所用的小鼠抗HFRS病毒单抗、兔抗HFRS病毒抗体和HFRS病人血清结合。同时提示,这种Ah_2可能具有替代抗原的免疫潜能。     

抗HFRS病毒鼠源性McAb在家兔体内的动态变化及抗鼠IgG…

本文观察了抗ＨＦＲＳ病毒鼠源性ＭｃＡｂ在家兔体内的动态变化及抗鼠ＩｇＧ抗体产生的情况，结果表明，ＭｃＡｂ经静脉注射后３０ｍｉｎ在血液循环中维持较高浓度１ｄ时已明显下降，３￣６ｄ多数已不能测出，兔抗鼠ＩｇＧ抗体的产生时间和滴度有较明显的个体差异性，多数家兔产生于注射ＭｄＡｂ后和第３￣６ｄ，第６￣１０ｄ达到高峰，３０￣５０ｄ内消失。     

综综合征出血热病毒血凝素纯化及免疫学性状分析

应用高压液相色谱法对粗制肾综合征出血热病毒血凝素分离化获得具有血凝活性的蛋白，效价１８０，分子量为５６６００。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和蔗糖密度梯度超速离心原决定簇，免疫小鼠可产生特异性抗－ＨＦＲＳＶ抗体，其中和效价４０，血凝抑制效价６４。