腹泻大鼠结肠水通道蛋白4表达与分布的研究

目的检测水通道蛋白4(AQP4)在腹泻大鼠结肠的表达和分布,探讨AQP4与肠道水代谢紊乱性疾病的关系。方法用20%的甘露醇灌胃制备大鼠渗透性腹泻模型,采用免疫组织化学方法对各组大鼠升、降结肠黏膜细胞AQP4进行定位、定量分析。结果①腹泻组和对照组大鼠升、降结肠黏膜都有AQP4表达,且升结肠表达量高于降结肠;②腹泻组大鼠升、降结肠黏膜AQP4表达均较对照组减少(P<0.01),9h时腹泻最严重,AQP4蛋白减少亦最显著(P<0.01);③AQP4主要表达于细胞膜,胞质仅有少量表达。结论①AQP4在升结肠表达高于降结肠,这与肠腔内水分主要是在近段吸收相一致;②腹泻状态下大鼠结肠黏膜AQP4表达下调,导致结肠对肠腔内水分的吸收减少,引起大便稀薄,含水量增加形成腹泻;③AQP4主要表达于细胞膜上,这与其功能密切相关。     

水通道蛋白3和水通道蛋白9在结肠黏膜的表达及意义

目的 探讨结肠黏膜水通道蛋白3(aquaporin,AQP3)和水通道蛋白9(aquaporin,AQP9)的表达与分布情况,并探讨其与便秘的关系.方法 先用免疫组织化学技术检测45例功能性便秘(functional constipation,FC)患者(试验组)和32例非便秘患者(对照组)结肠黏膜AQP3和AQP9的分布情况;然后用Western bloting半定量检测AQP3和AQP9,以β-actin作内参蛋白,两者与相应β-actin灰度值之比即为AQP3和AQP9的相对含量,将灰度比值作统计学分析.结果 AQP3主要分布在肠黏膜上皮细胞的基底膜,AQP9主要分布在黏膜腔面杯状细胞.右半结肠试验组AQP3含量高于对照组(P＜0.05),AQP9差异无统计学意义(P＞0.05),而左半结肠试验组AQP9低于对照组(P＜0.05),AQP3差异无统计学意义(P＞0.05).结论 AQP3在右半结肠高表达,而AQP9在左半结肠高表达;功能性便秘患者右半结肠AQP3增加,而左半结肠AQP9降低;AQP3和AQP9含量的增加或减少可能与便秘的发生发展有一定关系.     

猪苓对大鼠肾脏水通道蛋白-2基因表达的影响

目的观察猪苓的利尿作用和对大鼠肾脏水通道蛋白-2(aquaporin-2,AQP2)基因表达的影响,探讨猪苓利尿作用机制。方法代谢笼法观察不同时间、不同剂量的猪苓对大鼠尿量的影响;RT-PCR方法检测猪苓对大鼠肾脏水通道蛋白-2基因表达的影响。结果猪苓1g/kg组可引起大鼠尿量明显增加,与对照组比较差异有显著性(P<0.01)。0.5g/kg组较对照组尿量有所增加,但差异无显著性(P>0.05)。猪苓的利尿作用于药后1h起效,2~4h作用最显著,维持时间>6h。大鼠肾脏AQP2mRNA表达猪苓高剂量组明显低于对照组(P<0.05)。结论猪苓利尿作用强,起效快,维持时间较长;大鼠肾脏AQP2mRNA表达减少可能与猪苓的利尿作用机制有关。     

基于水通道蛋白的知母利水功效研究

目的 通过建立水负荷模型,观察不同剂量知母水提物对大鼠尿量及水通道蛋白（AQP）相关指标的影响,探究其利水功效。方法 将实验动物分为对照组、模型组和知母水提物高、中、低剂量（4.56、3.04、1.52 mg/kg）组,置于代谢笼中,每天9：00时ig给药,对照组和模型组给予等体积蒸馏水,连续3 d,记录每日饮水量、日间8 h尿量、夜间12 h尿量。第4天除对照组外其余各组大鼠ip生理盐水5 mL,同时ig生理盐水5 mL,连续收集6 h尿量,分别记录0~2、2~4、4~6 h尿量。水负荷实验结束后,取各组大鼠的气管、肝脏、肾脏、大肠、小肠、胰腺、心脏、肺脏、唾腺。酶联免疫法检测气管中AQP3、AQP4,肝脏中AQP9,肾脏中AQP2,小肠中AQP4,大肠中AQP2,胰腺中AQP3,心脏中AQP1,肺脏中AQP3、AQP4,唾腺中AQP5蛋白表达。结果 高剂量知母水提物的利水作用起效较慢,与对照组比较,正常大鼠第2、3天夜间12 h尿量显著增加（P<0.05、0.01）;与模型组比较,高剂量组水负荷大鼠2~4、4~6 h尿量及总尿量均显著增加（P<0.05）,气管AQP4、肝脏AQP9、肾脏AQP2、胰腺AQP3、心脏AQP1蛋白表达均显著下降（P<0.05、0.01）;中剂量利水作用起效较快,与对照组比较,正常大鼠第1天日间8 h尿量、夜间12 h尿量显著增加（P<0.05、0.01）;与模型组比较,中剂量组水负荷大鼠0~2、2~4 h尿量及总尿量均显著增加（P<0.05）,小肠AQP4,肺脏、气管AQP3,心脏AQP1蛋白含量显著降低（P<0.05、0.01）;与模型组比较,知母水提物低剂量组的水负荷大鼠肺、小肠AQP4,大肠、气管AQP3和肝脏AQP9的蛋白表达显著降低（P<0.05、0.01）。结论 知母水提物通过抑制AQP的表达,抑制机体对水的重吸收,起到利水作用。     

大鼠颅脑损伤急性期水通道蛋白4表达变化的研究

目的探讨水通道蛋白4(AQP4)在大鼠重型颅脑损伤时的表达变化及其与脑水肿间的关系。方法98只成年雄性Wistar大鼠,随机分为对照组及实验组(伤后0.5、2、6、12、24、48、72 h共7组,对照组不打击)。制作大鼠液压冲击颅脑损伤模型,分别于伤后0.5、2、6、12、24、48、72 h采用干湿比重法测脑组织含水量,半定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测脑组织AQP4 mRNA表达及其变化。结果脑组织AQP4 mRNA在伤后0.5 h开始表达上调,2、6、12 h依次增高,24 h达到峰值(P<0.05),72 h时仍维持较高水平。脑组织含水量与AQP4 mRNA表达变化一致。经相关性分析,AQP4 mRNA的表达与脑组织含水量呈正相关(r=0.095,P<0.05)。结论重型脑损伤急性期,AQP4 mRNA表达变化与颅脑损伤后脑水肿的形成和发展密切相关。AQP4可能参与重型脑损伤后脑水肿的形成并起重要作用。     

依达拉奉对大鼠星形胶质细胞水通透性的影响

目的 探讨依达拉奉对缺氧复氧大鼠星形胶质细胞模型水通透性和水通道蛋白4（AQP4）的影响.方法 原代培养大鼠星形胶质细胞,通过95％（体积分数）N2培养8h和95％（体积分数）的空气复氧培养6h,构建缺氧复氧水肿模型.设置空白组（正常细胞）、对照组（水肿细胞未经受药物刺激）和刺激组（接受0.1、1、10或100μg/mL的依达拉奉溶液刺激）.采用细胞水通透性系数（Pd）检测、荧光定量PCR和Western Blot定量空白组、对照组和刺激组细胞水肿、AQP4 mRNA AQP4蛋白表达.结果 缺氧8h和复氧6h后细胞水肿,且AQP4表达量上升.0.1μg/mL依达拉奉刺激后,模型细胞水通量、AQP4 mRNA水平和蛋白表达量与未刺激过的水肿星形胶质细胞比较,差异无统计学意义（P均＞0.05）,1、10或100μg/mL依达拉奉刺激后,水肿星形胶质细胞水通量、AQP4 mRNA水平和蛋白表达量显著低于未刺激过的水肿星形胶质细胞（P均＜0.05）,与正常的星形胶质细胞比较,差异无统计学意义（P均＞0.05）.结论 1、10或100 μg/mL依达拉奉可通过抑制AQP4 mRNA水平和蛋白表达,从而抑制细胞水肿.     

雷公藤多苷对溃疡性结肠炎大鼠炎症因子及结肠组织丝裂原p38活化蛋白激酶和核因子-κBp65蛋白表达的影响北大核心CSCD

目的研究雷公藤多苷对溃疡性结肠炎大鼠炎性因子及结肠组织丝裂原p38活化蛋白激酶(p38MAPK)和核因子-κBp65(NF-κBp65)蛋白表达的影响。方法从32只Wistar大鼠中随机选取8只为正常组不做任何处理,24只构建溃疡性结肠炎大鼠模型,死亡2只,将剩余22只模型大鼠随机分为模型组(n=7)、实验组(n=8)和阳性对照组(n=7)。正常组和模型组均灌胃生理盐水10 m L·kg^(-1),试验组灌胃雷公藤多苷20 mg·kg-1,阳性对照组灌胃柳氮磺砒啶片0.5 mg·kg^(-1),连续灌服14 d。用酶联免疫吸附实验测定各组大鼠血清炎症因子水平,用苏木精-伊红染色法观察各组大鼠结肠组织病理变化,用蛋白质免疫印迹法检测结肠组织p38MAPK、NF-κBp65蛋白的表达。结果模型组大鼠血清IL-4水平低于正常组,实验组和阳性对照组IL-4水平高于模型组(P<0.01);模型组大鼠血清IL-6水平高于正常组、实验组和阳性对照组(P<0.01);模型组、实验组和阳性对照组大鼠血清IL-1β水平高于正常对照组,实验组和阳性对照组IL-1β水平低于模型组(P<0.01)。模型组、实验组和阳性对照组结肠组织损伤评分分别为(4.56±0.88),(1.65±0.53),(1.50±0.54)分,明显高于对照组的(0.23±0.32)分(P<0.01);与模型组比较,实验组和阳性对照组结肠组织损伤评分均降低(均P<0.01)。模型组p38MAPK和NF-κBp65蛋白相对表达量分别为1.62±2.39,1.53±3.21,明显高于正常对照组的0.74±0.11,0.63±0.09;实验组和阳性对照组p38MAPK蛋白相对表达量分别为0.93±0.16,0.78±0.19,NF-κBp65蛋白相对表达量分别为0.81±0.23,0.72±0.16,均显著低于模型组(均P<0.01)。结论雷公藤多苷可有效降低溃疡性结肠炎大鼠血清炎症因子水平,改善结肠黏膜组织形态,其分子实质可能与降低p38MAPK及NF-κBp65蛋白表达量,调控其所介导的炎症反应通路有关。     

肾气丸对结肠癌LoVo细胞水通道蛋白2表达的调节作用

目的:探讨肾气丸对结肠癌LoVo细胞中水通道蛋白2(Aquaporin2,AQP2)表达的调节作用.方法:将30只正常成年雄性SD大鼠随机分为正常对照组、肾气丸低剂量组(1.5 g/kg)、肾气丸高剂量组(3.0 g/kg),连续给药7d后,心脏取血分离制备含药血清.体外培养LoVo细胞,给予不同浓度肾气丸含药血清作用24 h,采用MTT法检测细胞存活率,间接免疫荧光法结合荧光显微镜观察AQP2在LoVo细胞上的分布,运用Western blot法检测细胞中AQP2的蛋白表达,并通过RT-PCR技术检测AQP2的mRNA水平.结果:与正常大鼠血清相比,50％浓度的肾气丸低剂量含药血清、25％浓度的肾气丸高剂量含药血清均能明显增加AQP2蛋白的表达(P＜0.01),其中后者的作用更为显著(P＜0.05);此外,二者均能上调LoVo细胞中AQP2 mRNA水平(P＜0.05).结论:肾气丸含药血清通过影响LoVo细胞AQP2的基因转录与翻译过程,提高AQP2基因mRNA与蛋白表达水平,提示肾气丸可能作用于水通道蛋白2的调控通路从而起到调节体内的水液代谢的作用.     

腹泻大鼠结肠水通道蛋白8表达的研究

<正>水通道蛋白(aquaporins,AQPs)是广泛存在于动植物细胞膜上转运水的特异性孔道,属膜蛋白大家族。到目前为止在哺乳动物中已发现了该家族的13个成员(AQP0～AQP12)。AQP8是该家族的成员之一,已有研究表明其在结肠有大量的表达,但是腹泻时结肠AQP8表达情况的研究目前少见文献报道。本实验通过免疫组织化学对腹泻时结肠AQP8的表达进行定量定位研究,以明确AQP8在结肠水代谢中的作用,并进一步为腹泻相关性疾病的发病机制提供实验依据。     

复方儿茶止泻霜对腹泻大鼠结肠AQP3表达的影响

【摘要】 目的 观察复方儿茶止泻霜对腹泻大鼠模型结肠组织水通道蛋白3（AQP3）表达的影响,初步探讨其治疗腹泻的机制。方法将40只SD大鼠随机分为空白对照组、模型对照组、阳性对照组和复方儿茶止泻霜组4组,各10只。模型对照组涂6 g空白基质霜剂,阳性对照组灌胃2 mL小檗碱悬浊液,复方儿茶止泻霜组涂6 g复方儿茶止泻霜,2次/d,给药7 d。采用番泻叶灌胃的方法建立大鼠腹泻模型,对除空白对照组以外的3组大鼠按20 mL/kg灌服20%番泻叶提取液。用智能水分测定仪测定粪便含水率,免疫组化法检测各组结肠组织AQP3的表达。结果模型对照组粪便含水率（64.09±0.41）%明显高于其他3组（F=53.879,P＜0.05）;复方儿茶止泻霜组（48.83±1.08）%与阳性对照组（46.87±2.19）%间差异无统计学意义。AQP3阳性细胞主要表达于结肠黏膜层,模型对照组染色指数（0.85±0.18）低于其他3组（F=14.971,P＜0.05）;复方儿茶止泻霜组（1.30±0.18）与阳性对照组（1.37±0.14）间差异无统计学意义。结论复方儿茶止泻霜可显著减少腹泻大鼠粪便含水率,其机制可能与上调结肠组织AQP3的表达有关。      

儿童抗生素相关腹泻纤维结肠镜检查结果及其意义

目的明确儿童抗生素相关腹泻患儿下消化道病变,诊断和鉴别诊断儿童抗生素相关腹泻。方法对2013年6∽9月18例经该院确诊为抗生素相关腹泻患儿进行纤维结肠镜检查。结果 18例抗生素相关腹泻患儿中结肠镜检查表现为结肠黏膜弥漫性充血、水肿、血管分支模糊不清或消失14例,散在阿弗他溃疡、周围绕以红晕3例,散在糜烂溃疡及出血1例,未见假膜性肠炎表现。病变部位：乙状结肠及直肠9例,结肠脾曲及降结肠2例,横结肠3例,结肠肝曲及升结肠4例。18例患儿均行结肠黏膜活检术,镜下检查为非特异性炎性变化。结论儿童抗生素相关腹泻结肠镜检查表现均为非特异性炎性变化。儿童结肠镜检查安全、快速,在儿童抗生素相关腹泻的诊断及鉴别诊断中具有十分重要的作用,值得推广应用。     

Inhibition of aquaporin-3 water channel in the colon induces diarrhea

Aquaporin (AQP) 3, which is predominantly expressed in the colon, is considered to play an important role in regulating the fecal water content in the colon. In this study, the role of AQP3 in the colon was examined using HgCl(2) and CuSO(4), which are known to inhibit AQP3 function. The fecal water content was measured up to 1 h after the rectal administration of HgCl(2) or CuSO(4) to rats. The results showed that the fecal water content in the HgCl(2) administration group increased significantly to approximately 4 times that in the control group, and severe diarrhea was observed. However, no changes were observed in the mRNA expression level of the osmoregulatory genes (sodium myo-inositol transporter and taurine transporter) and the level and distribution of AQP3 protein expression, as determined 1 h after the administration of HgCl(2). Comparable results were observed in the CuSO(4) administration group. The results of this study indicated that the inhibition of AQP3 function in the colon caused diarrhea. Therefore, it has been revealed that the fecal water content in the colon is controlled by the transport of water from the luminal side to the vascular side, which is mediated by AQP3. Our findings suggest that a drug that modulates the function or expression of AQP3 in the colon may represent a new target for the development of laxatives.     

水通道蛋白5在变应性鼻炎鼻黏膜的表达及意义

目的 证实水通道蛋白5(aquaporin5,AQP5)在人变应性鼻炎鼻黏膜与正常鼻黏膜中的表达及分布,进一步探讨AQP5与变应性鼻炎的关系.方法 应用免疫组化技术对30例变应性鼻炎患者下鼻甲黏膜(变应性鼻炎组)和10例正常人鼻中隔前下部黏膜(对照组)标本中AQP5的表达进行检测,并进行统计学分析.结果 AQP5的表达在变应性鼻炎组和正常对照组鼻黏膜中的分布部位基本一致,均表达于鼻黏膜表面柱状上皮细胞及黏膜下腺的腺上皮细胞;统计学分析显示,AQP5在变应性鼻炎组鼻黏膜中的表达明显高于正常对照组,两组间差异有统计学意义(P＜0.01).结论 在变应性鼻炎中,AQP5的高表达与腺体过度分泌密切相关.     

Impaired aquaporins expression in the gastrointestinal tract of rat after mercury exposure

The main route of exposure to mercury in humans is through the diet. Consequently, the gastrointestinal mucosa is exposed to the mercurial forms, where they cause intestinal fluid accumulation, mucosal injuries and diarrhea. The relationship between inorganic mercury (HgCl₂) and methylmercury (CH₃HgCl) exposure and water movement in the gastrointestinal tract is still unexplored. The leading role of aquaporins (AQPs) in the rapid bidirectional movement of fluid in the gastrointestinal tract of mammals is well established. The present study evaluates the effect of HgCl₂ and CH₃HgCl exposure on AQP expression in different portions of the gastrointestinal tract of rats treated by gavage (5 mg kg^–1 of mercury species, single dose, 4 days). The results show that mercury species reduce mRNA and protein levels of AQPs in different parts of the gastrointestinal tract. In the stomach, treated rats show a significant reduction of expression of AQP3 (80–90% for mRNA and 50% for protein) and AQP4 (95–99% for mRNA and 20–40% for protein). In the small and large intestine, treated rats experience a significant reduction of AQP3 and AQP7 expression. Protein contents of both AQPs are reduced in similar proportions in jejunum (AQP3: 40–50%; AQP7: 45–50%) and colon (AQP3: 35–40%; AQP7: 45–60%), regardless of the treatment. Our results indicate that some AQPs are downregulated in the rat gastrointestinal tract by mercury exposure, suggesting a possible role of AQPs in the development of mercury gastrointestinal symptoms. Copyright © 2015 John Wiley & Sons, Ltd.     

氧化苦参碱对结肠炎模型大鼠结肠黏膜NOD2与TNF-α的影响

目的研究NOD2在实验性大鼠结肠炎发病机制中的作用,探讨氧化苦参碱对实验性大鼠结肠炎的治疗作用及其机制。方法将32只SD大鼠随机分为4组：对照组、模型组、美沙拉嗪组和氧化苦参碱组,每组8只。除对照组外,其余均采用三硝基苯磺酸造模。氧化苦参碱组给予苦参素注射液肌内注射,美沙拉嗪组给予美沙拉嗪纯化水溶液灌胃,模型组肌内注射等体积0.9%氯化钠注射液,共15 d。观察大鼠结肠黏膜大体形态及组织病理评分,并用免疫组织化学法检测大鼠结肠黏膜NOD2蛋白表达,酶联免疫吸附法检测实验大鼠结肠黏膜α肿瘤坏死因子（TNF α）表达。结果与对照组比较,模型组大鼠结肠黏膜NOD2蛋白、TNF α表达均显著升高（P＜0.01）;与模型组比较,美沙拉嗪组、氧化苦参碱组大鼠结肠黏膜NOD2蛋白、TNF α表达均显著降低（P＜0.01,P＜0.05）。结论结肠黏膜NOD2蛋白过度表达、TNF α分泌增多参与了溃疡性结肠炎的发生发展过程,而氧化苦参碱可以通过抑制NOD2蛋白过度表达、降低TNF α分泌起到减轻结肠黏膜炎症和保护结肠黏膜的作用。     

TLR9和NF-κBp65在大鼠溃疡性结肠炎模型结肠组织中的表达

目的观察TLR9(Toll样受体9)、NF-κBp65(核因子-κBp65)在大鼠溃疡性结肠炎(UC)模型结肠组织中的表达。方法应用复合法(2,4-二硝基氯苯+乙酸)制备大鼠UC模型,观察和评估结肠黏膜的大体形态和组织学变化。以免疫组化Elivision法检测TLR9、NF-κBp65的表达。结果造模后可见大鼠肠黏膜有大量炎性细胞浸润,累及黏膜下层和固有层。与正常对照组相比,模型组结肠组织TLR9、NF-κBp65表达显著升高(P0.01)。结论 TLR9、NF-κBp65在UC发病机制中具有重要作用。     

结肠癌中干细胞标记物的表达情况与病理特征和预后的关系研究

目的探讨干细胞标记物富含亮氨酸重复序列的G蛋白偶联受体5（Leucine-rich repeat-containing G-protein-coupled receptor 5,LGR5）也称为G蛋白偶联受体49（G-protein coupled receptor49,GPR49）蛋白在人结直肠癌组织中的表达水平及其与临床病理特征、结直肠癌演进过程的关系和意义。方法收集我院普通外科手术切除或肠镜活检的正常结肠黏膜30例、结肠腺瘤177例和结肠癌210例临床组织标本,所有病例均经病理确诊,术前未行放、化疗;标本以石蜡包埋保存。采用免疫组化血法（Immunohistochemistry,IHC）检测组织标本中CD133、LGR5的表达,并分析其与临床病理指标的关系。结果CD133在对照组结肠黏膜组织、结肠腺瘤和结肠癌中的阳性表达率分别为13.33%（4/30）、42.94%（76/177）和73.33%（154/210）,在结肠癌和腺瘤中的表达均显著高于正常结肠黏膜（χ2=42.0130,χ2=9.4817,P<0.05）,但在结肠癌组的表达高于腺瘤组（χ2=36.8039,P<0.05）。 Lgr5在对照组结肠组织中、结肠腺瘤组和结肠癌组的阳性表达率分别为0、23.73%（42/177）和57.14%（120/210）,在结肠癌和腺瘤中的表达均显著高于正常结肠黏膜（χ2=34.2857,χ2=8.9306,P<0.05）,但在结肠癌组的表达高于腺瘤组（χ2=44.0620,P<0.05）,结直肠癌组织中Lgr5蛋白表达水平与患者性别、年龄、肿瘤生长部位、大体形态、组织类型无相关性（P>0.05）,CD133分子的表达与患者的生存期具有相关性。结论 CD133、Lgr5在结肠癌组织中的表达均增高,说明结肠癌的形成与干细胞相关,CD133、Lgr5在肿瘤发生过程中可能起一定作用,且与肿瘤的进展相关,可以作为早期诊断的分子标记物。