蒜氨酸+蒜酶抗肿瘤及其机制的研究

大蒜制剂、大蒜提取物和大蒜提取成分的抗肿瘤作用已有广泛的研究[1 ] 。蒜氨酸 (Alliin ,2 烯丙基半胱氨酸亚砜 )为大蒜活性成分的主要前体物质 ,蒜氨酸在蒜氨酸酶 (Alli inase ,EC 4 .4.1 .4)的催化作用下产生大蒜辣素 (Allicin ,二烯丙基硫代亚磺酸酯 )。本课题组发现蒜氨酸 +蒜氨酸酶生成的大蒜辣素 1 3h内基本稳定。据此 ,本文采用MGC 80 3和HeLa肿瘤细胞株 ,利用蒜氨酸 +蒜氨酸酶生成的大蒜辣素研究其体外的抗肿瘤作用及其作用机制。1　材料和方法1 .1　细胞培养及药物　细胞培养的传代接种见文献[2 ] 。蒜氨酸及蒜氨酸酶由新疆…     

蒜氨酸、蒜酶及其混合物的体外抗氧化活性研究

研究蒜氨酸、蒜酶及其混合物的体外抗氧化活性.方法建立超氧阴离子自由基(·O2-)和羟基自由基(·OH)产生体系,应用Fe2+引发的卵磷脂过氧化体系,分别采用羟胺法、水杨酸法及硫代巴比妥酸法测定蒜氨酸、蒜酶及其混合物对·O2 -和·OH的清除能力及抗脂质过氧化能力.结果蒜氨酸,蒜酶及其混合物对·O2 -和·OH具有良好的...     

参菊洗剂体外抑菌作用

目的：研究参菊洗剂的体外抑菌作用。方法采用琼脂扩散纸片法测定抑菌圈直径,采用液体培养液连续稀释法测定最低抑菌浓度( MIC),采用琼脂培养液平板法测定最低杀菌浓度( MBC),并与市售某妇科洗液比较抑菌作用。结果参菊洗剂对5种病原菌株的抑菌作用明显优于相同浓度的市售某妇科洗液,差异有统计学意义(P<0.05);参菊洗剂对金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌、白念珠菌的MIC分别为33.75,67.5,67.5,67.5,33.75 mg·mL-1;参菊洗剂对金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌、白念珠菌的MBC分别为33.75,67.5,67.5,135,33.75 mg·mL-1。结论参菊洗剂具有较明显的抑菌和杀菌作用。     

利奈唑胺与万古霉素对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌体外抗菌活性

目的 评价利奈唑胺(嗯唑烷酮类抗菌药)、万古霉素(胺基糖苷类抗生素)2种抗菌药物对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的体外抗菌活性.方法 用琼脂二倍稀释法,测定抗菌药物的最低抑菌浓度(MIC);用肉汤稀释法,测定抗菌药物的最低杀菌浓度(MBC),绘制杀菌曲线(KCs).结果 利奈唑胺对临床分离的98株MRSA的MIC50为1 μg·mL-1,MIC90为2 μg·mL-1,MBC50为8 μg·mL-1,MBC90为32 μg·mL-1,敏感率为100%;万古霉素对临床分离的98株MRSA的MIC50为1 μg·mL-1,MIC90为1 μg·mL-1,MBC50为8 μg·mL-1,MBC90为32 μg·mL-1,敏感率为100%.随着抗菌药物浓度的升高,其杀菌时间缩短不甚明显,呈现非浓度依赖性的特点.结论 利奈唑胺对MRSA的体外抗菌活性与万古霉素相当,均显示非浓度依赖性的杀菌曲线.     

五倍子鞣质提取物对白假丝酵母的抗菌活性研究

目的 研究五倍子鞣质提取物对白假丝酵母的体外抗茵活性.方法 通过超声波提取五倍子有效成分鞣质,福林-酚比色法检测鞣质含量,采用微量稀释法检测五倍子鞣质提取物对白假丝酵母的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MFC),以最低抑茵浓度药物作用白假丝酵母6、12、24h,通过普通光学显微镜直接观察白假丝酵母形态结构的变化,并用吖啶橙/溴化乙锭染色,通过荧光显微镜观察白假丝酵母的死亡方式.结果 五倍子鞣质提取物对白假丝酵母的最低抑菌浓度为10.76 mg/mL,最低杀菌浓度为21.52mg/mL;五倍子鞣质提取物可导致白假丝酵母细胞变形,形态结构改变,最终导致其死亡;同时抑制细胞发芽和假菌丝的形成.结论 五倍子鞣质提取物对白假丝酵母有抑制和杀灭作用.     

苦参总碱对无乳链球菌、粪肠球菌和白假丝酵母菌增殖影响的体外观察研究

目的:研究苦参总碱对女性下生殖道几种常见致病菌(无乳链球菌、粪肠球菌和白假丝酵母菌)体外增殖的影响以及对白假丝酵母菌生物膜形成的影响。方法:体外培养无乳链球菌、粪肠球菌和白假丝酵母菌,通过琼脂板稀释法制备菌板,检测不同浓度苦参总碱对无乳链球菌、粪肠球菌和白假丝酵母菌的最小抑菌浓度(MIC);通过结晶紫染色法和共聚焦显微成像检测苦参总碱对白假丝酵母菌生物膜形成的影响;通过扫描电镜成像法观察苦参总碱对生物膜形成和菌落形态的影响。结果:苦参总碱对无乳链球菌、粪肠球菌和白假丝酵母菌的MIC分别为16,32,32 mg·mL^-1。苦参总碱质量浓度1 mg·mL^-1时对白假丝酵母菌生物膜的形成有明显的抑制作用(P<0.05),且抑制程度呈浓度依赖性,浓度越高,对生物膜的抑制作用越明显。同时,电镜下亦可见随着苦参总碱浓度的升高,白假丝酵母菌不仅生物膜形成受到抑制,且菌丝形成受到阻断,菌落中菌丝变短、菌丝间连接变疏松。结论:苦参总碱(16,32,32 mg·mL^-1)对无乳链球菌、粪肠球菌和白假丝酵母菌的增殖均有抑制作用,且能抑制...     

拮抗菌X23发酵液体外抗菌作用研究

目的研究拮抗菌X23发酵液的抗菌作用。方法运用琼脂扩散法、试管稀释法测定拮抗菌X23发酵液对金黄色葡萄球菌、白假丝酵母菌、青枯菌、大肠埃及菌、变形杆菌、伤寒沙门菌、绿脓假单胞菌的抑菌环直径、最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)。结果拮抗菌X23发酵液原液对金黄色葡萄球菌、大肠埃及菌抑菌环直径显著>1∶4稀释液的抑菌环直径(P<0.01);拮抗菌X23发酵液对金黄色葡萄球菌、白假丝酵母菌、青枯菌、大肠埃及菌、伤寒沙门菌MIC均为蛋白3.75μg/mL,对大肠埃及菌MIC为蛋白7.50μg/mL,对金黄色葡萄球菌、白假丝酵母菌、青枯菌、大肠埃及菌的MBC均为7.50μg/mL。在试验所检测的6个浓度点内未检出其对伤寒沙门菌的MBC以及对变形杆菌、绿脓假单胞菌的MIC和MBC。结论拮抗菌X23发酵液对金黄色葡萄球菌、白假丝酵母菌、青枯菌、大肠埃及菌有较明显的的抑制与杀伤作用。     

五倍子鞣酸的体外杀精和抑菌作用研究

目的:研究五倍子鞣酸的杀精和抑菌作用。方法:按照WHO标准方法,对20例人精液进行体外杀精试验,并观察了五倍子鞣酸对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC),并将其效果与壬苯醇醚-9(NR-9)作比较。结果:五倍子鞣酸与人精液作用20s最低有效杀精浓度为20mg.mL-1。鞣酸对大肠杆菌(3株)MIC为0.195～0.390mg.mL-1,MBC为0.390～0.780mg.mL-1;对金黄色葡萄球菌(2株)MIC为0.049～0.098mg.mL-1,MBC为0.195～0.390mg.mL-1。而在鞣酸MIC、MBL浓度范围内NP-9无抑菌杀菌作用。结论:五倍子鞣酸具有极强的精液蛋白凝固作用和很好的杀精抑菌效果,可望成为一种安全、有效的阴道杀精抑菌剂,值得进一步研究。     

消炎止痛栓体外抗菌活性研究

目的:研究消炎止痛栓(主要成分为盐酸小檗碱、冰片、土霉素、盐酸丁卡因)的体外抗菌活性。方法:运用试管稀释法测定并分析消炎止痛栓在体外对标准菌株金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)。结果:消炎止痛栓对上述3种标准菌株的MIC分别为0.195、0.0488、0.0975mg.mL-1,MBC分别为0.390、0.0975、0.390mg.mL-1。结论:消炎止痛栓在体外对上述3种标准菌株具有良好的抗菌活性。     

虎射利咽方体外抑菌作用的实验研究

目的：研究虎射利咽方的体外抑菌作用。方法：采用管碟法和标准试管二倍稀释法测定虎射利咽方对供试菌的抑菌活性、最低抑菌浓度（MIC）、最低杀菌浓度（MBC）。结果：虎射利咽方对金黄色葡萄球菌和乙型链球菌的最大抑菌圈直径分别为15、22mm;最低抑菌浓度（MIC）分别为200、25mg/ml;最低杀菌浓度（MBC）分别为500、50mg/ml,对大肠埃希菌和白色念珠菌抑菌效果不明显。结论：虎射利咽方有抑菌作用。     

Stabilization and pharmaceutical use of alliinase

In recent years, numerous clinical trials were undertaken in order to elucidate the active principle of garlic (Allium sativum L., Alliaceae). The most prominent effect of garlic preparations is a contribution to the prevention of stroke and arteriosclerosis. Allicin[(2-propenyl)-2-propenethiosulfinate] and other sulfur containing compounds were suggested as active compounds. The extremely unstable allicin itself is liberated from the more stable alliin [S-(+)-2-propenyl-L-cysteine sulfoxide] by the enzyme alliinase (EC 4.4.1.4) if fresh garlic is crunched or garlic powder is moistened. Therefore, an active enzyme is required in alliin containing remedies like those prepared from garlic powder. In order to investigate enzyme stability, alliinase was isolated from garlic powder. The partially purified enzyme could be stabilized over several months by addition of sodium chloride, sucrose, and pyridoxal-5'-phosphate. Alliinase may also be freeze-dried. This allows combinations of synthetic alliin and purified alliinase as components of an acid resistant tablet or capsule. In the intestine, the pro-drug alliin would be enzymatically converted to allicin. In clinical trials, highly dosed preparations of this kind should yield a precise information about the physiological effects of allicin. In addition, alliin-homologues substances which bear a modified alkyl side chain and do not occur in nature may be tested.     

蒜氨酸精制品的纯化与结构确证

目的:制备蒜氨酸精制品并确证其结构.方法:采用反相制备液相和减压干燥技术制备高纯度的蒜氨酸精制品,用紫外光谱(UV)、红外(IR)、质谱(MS)、一维及二维核磁共振谱(1HNMR,13CNMR,1H-1HCOSY,DEPT,HSQC,HSBC)等波谱技术确证其化学结构,用旋光技术确定其立体构型.结果:蒜氨酸精制品的纯度为99.5%,所有的NMR谱信号均能得到合理的归属,质谱的裂解途径和离子特征也与蒜氨酸的分子结构相符,红外、紫外特征吸收峰均有合理的解释,比旋度测定结果与文献报道的S型蒜氨酸一致.结论:该制备方法可以得到高纯度的蒜氨酸精制品,其结构为S-烯丙基-L-半胱氨酸亚砜.     

蒜氨酸原料药的质量控制标准研究

目的在临床前研究中,建立蒜氨酸原料药的质量控制方法.方法采用薄层色谱法对原料药中的蒜氨酸进行定性鉴别;采用高效液相色谱法,Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),检测波长220 nm,柱温25℃,以100%水为流动相,流速0.8 mL·min-1,进样量20μL,以利巴韦林为内标对原料药中的蒜氨酸进行了含量测定.结果蒜氨酸的薄层色谱鉴别专属性强;蒜氨酸在8～160μg·mL-1范围内线性关系良好.蒜氨酸的平均回收率为99.86%,RSD为1.3%.结论本方法定性、定量准确,可用于控制蒜氨酸原料药的质量.     

蒜氨酸光学纯度和立体构型的研究

目的:研究国产蒜氨酸的光学纯度及其立体构型。方法:采用邻苯二甲醛/N-异丁酰基-L-半胱氨酸(OPA/IBLC)为柱前手性衍生化试剂,建立了柱前衍生化 RP-HPLC 法测定蒜氨酸的光学纯度,色谱条件为:SHIM-PACK CLC-ODS 柱(5μm,4.6mm×150mm),流动相为甲醇-醋酸盐缓冲液(1000 mL 水,加醋酸铵1 g 和冰醋酸1 mL)(50:50),UV/MS 检测,UV检测波长230 nm,MS 采用 SIM[M H]~ m/z 467检测;流速1.0 mL·min~(-1),UV 检测限约为0.4μg·mL~(-1),MS 检测限约为0.04μg·mL~(-1),采用高效液相色谱制备蒜氨酸工作对照品,测定其比旋度,确定其立体构型。结果:手性衍生化柱前 RP-HPLC 测定结果表明国产蒜氨酸中无光学异构体存在,自制蒜氨酸对照品比旋度测定结果与文献报道值一致。结论:国产蒜氨酸中无手性对映体杂质,其立体构型为( )S-烯丙基-L-半胱氨酸亚砜。     

高效液相离子对色谱法测定蒜氨酸的含量及有关物质

目的:建立高效液相离子对色谱法测定蒜氨酸的含量。方法:采用 Lichrospher C_(18)色谱柱(4.6 mm×150mm,5μm),流动相为甲醇-磷酸盐缓冲液(0.28%磷酸二氢钾-0.2%庚烷磺酸钠溶液,用85%磷酸调节 pH 为2.1)(10:90),流速为1 mL·min~(-1),紫外214 nm 波长检测,柱温为30℃。结果:蒜氨酸及其有关物质色谱保留时间适宜,分离良好;蒜氨酸在1.0～250μg·mL~(-1)范围内,线性关系良好(r>0.999),日内、日间精密度良好(RSD<1.5%,n=5)。结论:本方法可准确、快速地测定蒜氨酸含量及有关物质检查。     

HPLC-MS/MS法研究精制蒜氨酸中有关物质

研究精制蒜氨酸样品中的有关物质。采用HPLC-MS/MS一级质谱扫描总离子流谱测定有关物质的准分子离子，并利用他们的色谱保留时间、二级质谱及/或对照品对照进行结构鉴定。全扫描总离子流谱结果表明，精制蒜氨酸中主要含7个有关物质成分，［M+H］⁺离子m/z分别为116，133，147，152，175及两个m/z同为178的蒜氨酸同分异构体。其中m/z为116，133，147，175的［M+H］⁺离子相应的物质分别鉴定为脯氨酸、门冬酰胺、谷氨酰胺、精氨酸，m/z为152的［M+H］⁺离子鉴定为甲基-L-半胱氨酸亚砜，m/z 178的两个蒜氨酸同分异构体分别经二级质谱鉴定为异蒜氨酸和环蒜氨酸。精制蒜氨酸中主要有关物质分别为氨基酸及蒜氨酸的同系物及同分异构体。     

大蒜中蒜氨酸的分离与鉴定

目的 蒜氨酸的分离与鉴定。方法 采用硅胶色谱柱分离，物理、化学和光谱学方法鉴定结构。结果 确定了蒜氨酸的结构。结论 第一次利用1D-NMR和2D-NMR技术完整地确定了蒜氨酸中所有碳氢的信号归属。     

HPLC内标法测定鲜蒜中蒜氨酸

目的:建立准确、方便的 HPLC 法测定鲜蒜中蒜氨酸。方法:采用微波灭酶,以利巴韦林为内标物,HPLC 紫外检测,测定鲜蒜中蒜氨酸含量。与美国药典蒜氨酸衍生化 HPLC 测定进行比较。结果:同一鲜蒜样品测定蒜氨酸含量,以微波法灭酶大蒜的含量最高,为1.291%(RSD=1.4%),回收率为98.80(±2.0)%;美国药典方法测定结果为1.287%(RSD=3.6%),回收率为96.03(±2.6)%。结论:HPLC 内标法与美国药典方法测定结果一致,操作步骤简化。     

A high-throughput method for the quantitative determination of alliin

The quality of most garlic (Allium sativum L., Alliaceae) preparations made from garlic powder or garlic dry extract is determined by their content of alliin. Therefore, a comprehensive documentation of alliin concentration beginning with the crude material up to the final remedy is required. The newly developed analytical method described in this paper was designed in order to fulfill these demands. In contrast to conventional HPLC methods, neither a pre-column derivatization nor a chromatographic separation are involved in this analytical procedure allowing a high throughput of samples. The currently investigated technique is based on immobilized alliinase (EC 4.4.1.4) which was combined with a two-channel flow injection analyser (FIA) coupled to an ammonia detecting device. A high specificity for alliin could be demonstrated and a variety of garlic samples including garlic powders, dry extracts, and garlic preparations was analysed. The results were in good correlation with those obtained by conventional HPLC methods.