PELGE空白纳米粒的体外免疫学评价

目的 评价mPEG-PLGA-mPEG(PELGE)空白纳米粒的体外免疫性.方法 采用定量酶联检测与PELGE纳米粒共同培养后的THP-1源巨噬细胞细胞因子IL-6、IL-1β和TNF-α的释放量.结果 9种PELGE材料所制备的纳米粒中,9号材料(PEG 2000、5%、LA/GA=5:5)可以导致THP-1源巨噬细胞IL-6分泌量显著高于阴性对照组和PLGA纳米粒组.结论 9号材料可能有潜在的免疫毒性,而其余8种材料具有较好的免疫相容性.     

mPEG-PLGA-mPEG系列纳米粒的毒性与其结构的关系

目的 研究丙交酯/乙交酯/聚乙二醇(LA/GA/PEG)共聚物(mPEG-PLGA-mPEG)系列材料所制备的空白纳米粒的细胞毒性,并考察毒性与材料结构的关系.方法 采用MTT法测定与空白纳米粒培养48 h后的正常人肝细胞Chang的细胞存活率,采用Origin软件分析mPEG-PLGA-mPEG材料中的PEG分子量,并考察PEG的含量和LA/GA比例对毒性的交互作用.结果 PEG的分子量和含量对纳米粒的毒性影响较明显,LA/GA比例对其影响较小.结论 控制合成mPEG-PLGA-mPEG的材料中所使用PEG的分子量和含量,可降低mPEG-PLGA-mPEG所制备纳米粒的毒性.     

基因壳聚糖纳米粒表面修饰和转染研究

目的:研究递送基因纳米粒表面修饰对体外基因转染的影响.方法:利用末端活化的聚乙二醇(PEG)制备PEG化基因壳聚糖纳米粒;通过两端活化的PEG将糖蛋白配基连接到纳米粒表面,完成肝靶向纳米粒的制备;用透射电镜观察表面修饰对纳米粒粒径大小、粒子形态的影响;使用蛋白质测定试剂盒测算纳米粒表面蛋白连接量;利用体外转染实验考察表面修饰对纳米粒转染活性的影响;用倒置荧光显微镜观察并用流式细胞仪测定转染结果.结果:纳米粒PEG化使转染效率大幅度升高,半乳糖基牛血清白蛋白(Galn-BSA)使体系的转染效率比PEG化纳米粒略有下降,但比不经修饰的纳米粒转染活性高.壳聚糖纳米粒的表面PEG化能提高纳米粒的体外稳定性,从而提高体外转染效率,并适合于进行冷冻干燥.结论:长循环壳聚糖基因递送纳米粒在基因治疗研究中可能会发挥重要作用.     

载阿霉素介孔二氧化硅纳米粒的细胞毒性及细胞摄取

目的制备载阿霉素的介孔二氧化硅纳米粒(mesoporous silica nanoparticles,MSN),对其理化性质及细胞摄取行为进行初步研究。方法通过聚合法制备MSN,透射电镜表征纳米粒的形态,动态光散射粒径测定仪测定粒子的平均粒径及分布。紫外分光光度计测定阿霉素的负载行为,MTT比色分析法研究粒子的细胞毒性,激光共聚焦显微镜观察其人乳腺癌MCF-7细胞对载药粒子的摄取。结果纳米粒分布均一,平均粒径约70 nm(PDI<0.1),载药量质量分数达到20%。MCF-7细胞对载药粒子的摄取较快,空白纳米粒具有较低的细胞毒性。结论介孔二氧化硅纳米粒具有较高的药物载药量和良好的生物相容性,能较快地被对人乳腺癌MCF-7细胞摄取,有望成为一种新型的药物化疗载体。     

甘草次酸纳米粒的制备、表征及其抗肿瘤活性研究

目的:制备和表征甘草次酸(GA)纳米粒,并评价其体外抗肿瘤活性。方法:以聚乙烯吡咯烷酮K30为载体,使用反溶剂沉淀-冷冻干燥法制备GA纳米粒。采用X射线衍射分析、红外光谱分析、差示扫描量热分析、粒度分析等方法对所制纳米粒进行表征;采用高效液相色谱法测定纳米粒中GA的溶解度和载药量;采用MTT法考察GA原料药及纳米粒(GA剂量均为12.5、25、50、100、200μmol/L)对人肝癌细胞HepG2的体外抑制活性并计算半数抑制浓度(IC50)。结果:所制纳米粒中GA的X射线衍射特征峰和红外特征吸收峰均消失,吸热峰发生改变。纳米粒的粒径为(194.88±23.52)nm,低于原料药的(2 592.33±207.51)nm;分散指数为0.24±0.04,高于原料药的0.15±0.03;纳米粒的平均载药量为15.99%;溶解度由原料药的(1.05±0.01)μg/mL升至(250.00±0.15)μg/mL。体外抗肿瘤试验结果显示,GA原料药200μmol/L组和纳米粒各剂量组的细胞存活率均较空白对照组显著降低,且GA纳米粒各剂量组(除12.5μmol/L组外)的细胞存活率均显著低于同剂量原...     

载血管紧张素转换酶短发卡RNA-聚乙二醇-壳聚糖纳米粒制备以及生物学特性

目的制备载血管紧张素转换酶(ACE)短发卡RNA(sh RNA)壳聚糖纳米粒,并且给予聚乙二醇(PEG)表面修饰,分析其相关物理学、生物学特性,以期获得一种缓释的非病毒载体介导系统。方法应用本实验室前期实验中筛选出的能显著下调ACE基因的靶序列,采用菌液用碱裂解法大量抽提和纯化重组质粒,随机酶切测序,并检测质粒浓度与纯度,采用离子交联法制备壳聚糖纳米粒,PEG修饰壳聚糖纳米粒,复凝聚法制备不同p H值、体积比以及PEG化的载ACEsh RNA壳聚糖纳米。喷金电镜下对各种壳聚糖纳米粒悬液扫描并照相,观察纳米粒与形态。应用凝胶阻滞分析验证载ACEsh RNA壳聚糖纳米多聚复合物的形成及电荷性质。结果1壳聚糖纳米粒的粒径随着溶液p H值的升高而增大,当p H值为5.5时的PEG壳聚糖纳米粒平均粒径(125.8±5.6)nm左右,大小均匀,多分散度最小,分布比较集中,zeta电位为正,有利于与带负电荷的质粒结合;PEG化后也对粒径以及zeta电位无明显影响,但是与壳聚糖相同条件相比,分散度均明显减小,可见更适合制备均匀的纳米粒,利于和质粒结合;壳聚糖与质粒体积比(质量比)为1∶1制备的壳聚糖纳米粒平均粒径较小,故通过细胞膜的通透性较好,多分散度较小,分布比较集中,zeta电位也为正值,有利于与带负电荷的质粒结合。2壳聚糖纳米以及PEG化壳聚糖纳米质粒复合物均有效结合质粒,由于中和了质粒所带的负电荷,凝胶电泳时,质粒不出孔,而裸质粒则出孔;p H<7时壳聚糖分子中大部分的氨基带正电荷能与质粒DNA有效地结合,质粒不出孔;在体积比为1∶1、1∶2、1∶3时,壳聚糖纳米粒能有效地结合质粒。结论所制备的载ACE sh RNA-PEG壳聚糖纳米粒大小均匀,粒径分布范围较窄,并且筛选出在p H=5.5时,与质粒体积比为1∶1时,以PEG壳聚糖纳米粒作为载体有良好的结合力,为后期体外转染培养细胞以及体内转染提供了实验基础。     

杯状细胞靶向壳聚糖纳米粒的制备及吸收

目的将多肽CSKSSDYQC(CSK)化学结合到三甲基壳聚糖(trimethyl chitosan chloride,TMC)上,构建杯状细胞靶向口服给药系统,以期获得口服生物利用度较高的给药系统。方法通过化学合成的方法将CSK连接到TMC上,并用异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)进行荧光标记。以粒径和成球率为指标,采用单因素实验得到纳米粒的制备处方。用乳酸脱氢酶细胞毒性测试(lactate dehydrogenase,LDH)法分别考察载体材料和纳米粒对Caco-2和HT29-MTX细胞存活率的影响。建立Caco-2/HT29-MTX共培养细胞单分子层,进行纳米粒的跨膜转运实验。利用免疫荧光法考察纳米粒在体内吸收情况。结果按照最优处方制得的FITC-TMC纳米粒和FITC-TMC-CSK纳米粒的粒径分别为214.5 nm和234.3 nm;电位分别为15.81 mV和8.96 mV;成球率分别为98.14%和91.58%。FITC-TMC-CSK的细胞毒性低于FITC-TMC,纳米粒的细胞毒性低于载体材料。FITC-TMC-CSK纳米粒的累积透过量高于FITC-TMC纳米粒,其表观渗透系数(P_(app))值是后者的2.17倍。FITC-TMC-CSK纳米粒在正常大鼠不同肠段吸收顺序为回肠>空肠>十二指肠。结论将CSK键合到TMC上构建杯状细胞靶向纳米粒,能有效提高纳米粒的吸收,在药物口服吸收的研究中具有广阔的应用前景。     

芹菜素丝素蛋白纳米粒的制备及其安全性、抗肿瘤活性研究

目的制备芹菜素丝素蛋白(API@SF)纳米粒,并评价其安全性和抗肿瘤活性。方法采用纳米沉淀法制备API@SF纳米粒,并对其形态、粒径、Zeta电位、载药量、体外释放等进行表征;采用溶血实验和HE染色法评价该纳米粒的安全性;采用MTT法评价该纳米粒对小鼠乳腺癌4T1细胞的抑制作用。结果本研究所制得的API@SF纳米粒呈类球形,粒径分布均匀,平均粒径为406.61 nm,多分散性指数为0.154,Zeta电位为-18.4 mV,平均载药量为5.20%。体外释放结果显示,该纳米粒在pH 5.0的释放介质中释放速率相对较快,在pH 7.4的释放介质中释放速率相对较慢。溶血实验和HE染色结果显示,该纳米粒具有良好的生物相容性。MTT实验结果显示,API@SF纳米粒对4T1细胞的抑制作用显著高于API原料药(P<0.05),其作用机制可能与提高细胞中活性氧水平有关。结论本研究成功制备了API@SF纳米粒,该纳米粒具有良好的安全性和抗肿瘤活性。     

壳寡糖-水杨酸接枝物纳米粒用于释放阿霉素的研究

目的 考察壳寡糖/水杨酸纳米粒负载碱化阿霉素的可能性,评价制备而得的微粒给药系统理化性质及其体外释放行为。方法 以碳二亚胺为交联偶合剂合成壳寡糖/水杨酸接枝共聚物,三硝基苯磺酸法测定水杨酸接枝率。运用超声分散法制备壳寡糖/水杨酸空白纳米粒,芘荧光法测定纳米粒临界聚集浓度,动态光散射法测定微粒粒径和表面电位,MTT法考察空白纳米粒的细胞毒性。以碱化阿霉素为模型药物,透析法制备壳寡糖/水杨酸载药纳米粒,经透射电镜考察载药纳米粒的形态,对其体外释放行为进行了研究。结果 合成得到的壳寡糖分子量=9000/水杨酸理论投料量=50%的实际接枝率为16.92%,空白纳米粒的临界聚集浓度为867.0 μg/mL,空白纳米粒的粒径和表面Zeta电位分别为434.0 nm和48.6 mV,对人肝癌细胞Hep-G2的半数抑制浓度为1745μg/mL。在碱化阿霉素理论投药量为10%时壳寡糖/水杨酸载药纳米粒的实际载药量为8.52%,包封率为93.15%。;载药纳米粒的粒径和表面电位分别为214.2 nm和33.6 mV。体外释放结果表明药物的释放呈现pH敏感性;并主要以溶蚀的方式从载体内部释放出来。结论 壳寡糖/水杨酸接枝物可以有效包裹碱化阿霉素并成为粒径均一的纳米粒给药系统。载药纳米粒具有pH敏感和缓释作用。壳寡糖/水杨酸接枝物有望成为潜在的难溶性药物的载体材料。     

丝素蛋白自组装纳米粒的制备、理化表征及细胞相容性研究

本研究旨在制备丝素蛋白纳米粒(SF-NPs),并对制备得到的纳米粒的理化性质及细胞相容性进行评价。采用优化简易的去溶剂化法制备SF-NPs。通过单因素的处方筛选,如丝素蛋白(SF)溶液的浓度、SF溶液和有机溶剂的比例、超声功率及时间、不同有机相的种类,优化了制剂处方,并对最优处方的粒径分布、多分散性指数(PDI)、zeta电位、形态及稳定性进行了表征。通过CCK-8及细胞活/死染色Calcein-AM/PI评估了SF-NPs的体外细胞相容性。实验结果表明,当SF浓度为20 mg·mL^-1、水相和丙酮的体积比为1∶6、超声功率为80 W、超声时间为3 min时,制备得到的SF-NPs最优。本研究制备得到的SF-NPs为类球形,粒径分布狭窄,平均粒径为144.8 nm, PDI为0.174,zeta电位为-27.35 mV。细胞相容性实验结果表明, SF-NPs具有优异的细胞相容性,可促进细胞的增殖。综上表明,通过去溶剂法制备得到SF-NPs具有均一的粒径及良好的生物相容性,在药物递送领域具有较大的应用前景。     

The life of Andrew Boorde,c1490-1549

Physician, traveller, writer and spy, Andrew Boorde was born c1490 and became a Carthusian monk after abandoning his medical studies at Oxford. Temperamentally unsuited to the life of a religious, after 20 years at the London Charterhouse he obtained a dispensation to travel to Europe to continue his medical studies. Returning to England he began to practise medicine, treating members of the nobility and, through a meeting with Thomas Cromwell which was to influence the rest of his life, he attended the King, Henry VIII. In 1534, after a second, more extensive, tour of Europe in which he visited many medical schools and universities seeking yet more medical knowledge, he returned to the London Charterhouse which was undergoing a brutal dissolution at the hands of Thomas Cromwell. Boorde reluctantly signed the Oath of Supremacy, an act which was to haunt him for the rest of his life. He was then used by Cromwell to travel abroad again but this time as a spy to gather intelligence for the King while continuing to study medicine. Boorde finally took his MD at the University of Montpellier and was incorporated in the same degree a year later at Oxford. He then gave expression to all he had learnt by writing his legacy, four books which were published in 1547. 'A Compendyous Regyment or a Dyetary of Health' was one of the earliest treatises on the cultivation of health composed in England and stressed the importance of sanitation together with a detailed examination of diet. The 'Brevyary of Health' listed diseases alphabetically together with remedies and treatment, blending sound medical advice with religion and superstition: its companion volume was 'The Principles of Astronomy'. But Boorde's 'Fyrst Boke of the Introduction of Knowledge' was his tour-de-force; it was a comprehensive encyclopaedia of all the European countries he had visited, illustrated by woodcuts. By 1547 Boorde was settled in England, probably Master of the Hospital of St Giles-in-the-Fields in London but by 1549 he was living the life of a recluse in Winchester. Tortured by guilt at his perceived lack of religious integrity and persecuted by his enemies he died in the Fleet prison amid rumors that he had poisoned himself.     

新蒽环类抗生素G0041-3c的理化性质及结构分析

从链霉索G0041-3菌株的发酵液中提取、分离得到5个具有抗肿瘤活性成分．对G0041-3c进行了理化性质测定和各种光谱分析,将其确定为具有蒽环类紫红霉素型结构的新成员。     

23种国产柴胡属植物中柴胡皂苷a、c、d含量的RP-HPLC测定

目的:建立RP-HPLC法,分离和测定中国23种61个产地的柴胡属植物样品中柴胡皂苷a、c、d的含量。方法:采用C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),以乙腈-水为流动相进行梯度洗脱,流速1 mL·min～1,检测波长210 nm。结果:不同品种柴胡以及相同品种、不同产地柴胡中的柴胡皂苷a、c、d含量差异悬殊。结论:本研究所建立的HPLC方法适用于柴胡属植物中柴胡皂苷a、c、d定量分析,结果准确可靠。     

8-Br-cAMP对膀胱癌细胞中c-erbB-2 c-myc表达的影响

目的探讨环腺苷酸(cAMP)类似物8-溴-环腺苷酸(8-Br-cAMP)对人原代培养的膀胱癌细胞中c-erbB-2、c-myc蛋白及mRNA表达的影响.方法原代培养膀胱癌细胞,采用完整细胞免疫组化、原位杂交方法检测膀胱癌细胞中c-erbB-2、c-myc蛋白及mRNA的表达.结果8-Br-cAMP处理后的膀胱癌细胞中c-erbB-2、c-myc蛋白及mRNA表达水平明显低于未处理组,两组相比差异均有统计学意义(P＜0.05).结论8-Br-cAMP可抑制膀胱癌细胞中c-erbB-2、c-myc蛋白及mRNA表达,进而抑制肿瘤细胞的分裂和增殖.     

紫杉烷类衍生物Lx2-32c对人卵巢癌A2780细胞的抑制作用

目的:研究新型紫杉烷类衍生物Lx2-32c体内外对人卵巢癌A2780细胞的生长抑制作用并探讨其机制.方法:体外实验采用培养的人卵巢癌A2780细胞株,利用集落形成法测定Lx2-32c对A2780细胞克隆原细胞的影响,流式细胞术(FCM)测定细胞周期的变化,间接免疫荧光方法观察细胞内微管动力学的改变.体内实验采用人癌细胞裸鼠移植瘤模型观察Lx2-32c对卵巢癌的生长抑制作用.结果:Lx2-32c能够显著抑制A2780细胞的克隆原形成,IC50值为0.13 nmol·L-1;Lx2-32c诱导A2780细胞出现G2/M期阻滞;影响细胞内微管的动力学功能,抑制微管解聚,形成稳定的微管束.体内抗肿瘤实验中,Lx2-32c显示出较强的抗肿瘤活性.结论:新型紫杉烷类衍生物Lx2-32c具有较强的细胞毒性和抗肿瘤作用.