化学发光法检测梅毒螺旋体特异性抗体的方法学评价

目的 评价化学发光法检测梅毒螺旋体特异性抗体的效果.方法 5家实验室分别用酶联免疫吸附试验(ELISA)、化学发光检测法(CLIA)和梅毒螺旋体明胶颗粒凝胶试验(TPPA)进行临床标本的双盲检测.以TPPA结果为标准,分析其敏感性和特异性.结果 共计检测1 525例血清样品,其中TPPA确证阳性308例,阳性率为20.2%.以TPPA作参照,发光法敏感性为100%(308/308),特异性为99.3%(1 208/1 217),阳性结果预测值(PPV)为97.2%(308/317),阴性结果预测值(NPV)为100%(1 208/1 208);5种ELISA试剂总体敏感性为98.1%(302/308),特异性为97.9%(1 192/1 217),PPV为92.4%(302/327),NPV为99.5%(1 192/1 198).结论 CLIA法具有敏感性高和特异性强的特点,适合于临床实验室进行梅毒的筛查.     

两种梅毒血清学检测方法的联合运用分析

目的进一步提高酶联免疫吸附试验(ELISA)对梅毒的筛查率,确保梅毒血清学的检测效果。方法采用ELISA联合甲苯胺红不加热血清试验(TRUST),对2011年上海浦东新区2 686例监测人群的血清样本进行梅毒血清学筛查,联合检测的血清学阳性样本用梅毒螺旋体明胶凝集试验(TPPA)甄别其生物学假阳性;再从2 397份两种方法均为阴性的样本中,随机抽取1 000份进行TPPA检测,甄别其生物学假阴性。结果 ELISA法相对于TPPA法的敏感性为98.9%,特异性为98.4%,两法间差异无统计学意义(P>0.05);ELISA与TRUST法联合应用后的敏感性接近100%,特异性为98.3%。结论 ELISA与TRUST方法的联合应用,其敏感性接近100%,表明其可用于梅毒筛查;另一方面,两者联合运用的特异性为98.3%,具有一定的假阳性率,表明其阳性样本(两法均为阳性的样本除外)还需应用TPPA方法进行最终确认。     

酶联免疫吸附试验检测梅毒患者血清中抗苍白螺旋体IgM抗体

目的评价抗苍白螺旋体IgM抗体检测对梅毒的临床意义.方法用酶联免疫吸附试验(ELISA)对72例梅毒患者检测了特异性IgM抗体,并与快速血浆反应素环状卡片试验(RPR)、梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验(TPPA)的检测结果进行比较分析.结果血清抗苍白螺旋体IgM抗体在一期梅毒的阳性率为73.3%(11/15),在二期梅毒的阳性率为88.9%(16/18),二者差异无显著的统计学意义(χ2＝1.6363,P＞0.10).在潜伏梅毒,IgM抗体阳性率为26.1%(6/23),非常显著地低于早期显性梅毒(χ2＝17.6189,P＜0.005).在一期、二期和潜伏梅毒,RPR和TPPA的阳性率均为100%.入组前2～24个月已经正规抗梅治疗的梅毒16例,其中IgM抗体阳性2例.结论 ELISA法检测特异性IgM抗体诊断一期梅毒并不优于RPR和TPPA.IgM抗体在潜伏梅毒敏感性低,其诊断应依靠RPR和TPPA.目前不推荐单独检测抗梅毒IgM抗体来监测病情和判断疗效.抗苍白螺旋体IgM抗体的临床意义有待更深入的研究.     

不同梅毒血清学检测方法的临床价值

目的:评价常用的4种梅毒血清学试验检测方法在临床诊断中的价值。方法:分别用快速血浆反应素试验(RPR)、胶体金免疫层析法(GICA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)和微粒子化学发光法(CMIA)对264例标本进行梅毒血清学试验检测,同时与明胶颗粒凝集法(TPPA)的检测结果进行比较,得出不同检测方法的敏感度和特异性。结果:RPR、GICA、ELISA、CMIA的敏感度分别为67.5%、92.1%、96.0%和98.4%,特异性分别为89.1%、100%、100%和100%。结论:RPR可结合其他方法对梅毒进行联合诊断和对已诊断的患者进行疗效观察;GICA适合快速初筛,检测结果需结合其他方法进一步确认;ELISA和CMIA均可替代TPPA法作为临床诊断试验选用。     

三种梅毒血清学检测策略在临床梅毒诊断中的应用研究

目的探讨不同梅毒血清学检测策略在梅毒诊断中的应用。方法按照正向策略、反向策略和欧洲疾病控制与预防中心(ECDC)反向策略三种流程,采用甲苯胺红不加热血清学实验(TRUST),梅毒螺旋体抗体明胶颗粒凝集试验(TPPA)和梅毒螺旋体抗体化学发光试验(CLIA)检测所有血清标本,比较3种检测策略对梅毒的检出价值。结果选择865例梅毒患者作为梅毒组,再选择同期排除梅毒的患者100例作为对照组,3种方法对不同分组的梅毒检出率差异均有统计学意义(P均0.05);TRUST、CLIA和TPPA的检出敏感性分别为87.28%,99.88%,99.54%,特异性分别为98.00%,97.00%,100.00%,准确度分别为88.39%,99.59%,99.59%;正向策略、反向策略和ECDC反向策略的敏感性分别为85.20%、99.42%、99.54%,特异性分别为98.00%、97.00%、100.00%,准确度分别为86.53%、99.17%、99.59%。结论不同梅毒血清学检测方法检测性能不一致,反向策略或ECDC反向策略具有更好的敏感性、特异性和准确度,适用于临床筛查和诊断。     

甲苯胺红不加热血清试验和胶体金法联合检测梅毒螺旋体的临床应用

目的：探讨甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）和胶体金法（SYP）联合检测在梅毒筛查和诊断方面的应用价值。方法：用TRUST法检测梅毒非特异性抗体，胶体金法、梅毒螺旋体明胶凝集试验（TPPA）检测梅毒特异性抗体。结果：TRUST对2期梅毒的阳性率较高，为100％，而对1、3期梅毒的阳性率较低，平均为83．96％，胶体金法对各期梅毒的检出率均较高，平均为99．06％，与TPPA差异无统计学意义。结论：胶体金法其特异性和灵敏度与TPPA相比差异无统计学意义，但比TPPA更方便快捷。根据胶体金和TRUST的实验结果，结合症状和病史可初步对梅毒进行诊断分期。     

四种试验方法检测早期梅毒患者的结果分析

目的了解镀银染色法、聚合酶链式反应(PCR)、梅毒甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)和梅毒明胶颗粒凝集试验(TPPA)等4种方法,对检测早期梅毒患者的临床价值。方法 2012年1月至2016年7月,在广西部分地区的性病门诊收集疑似早期梅毒患者300例,分别采集组织液与血清标本。组织液标本采用镀银染色法检测梅毒螺旋体,PCR方法检测TP polA基因;血清标本用于TRUST检测非梅毒螺旋体抗体,TPPA检测梅毒螺旋体抗体。统计学资料采用SPSS 13.0软件进行分析。结果在215例确诊的早期梅毒患者中,梅毒PCR检测阳性标本210例,敏感性为97.7%;镀银染色法检测出105例,敏感性为48.8%;TRUST检测出196例,敏感性为91.2%;TPPA检测出208例,敏感性为96.7%。结论不同试验检测方法对早期梅毒患者的诊断有不同的临床应用价值,一期梅毒应当做病原学检查及梅毒血清学试验,二期梅毒应当以梅毒血清学试验为主,当出现结果异常时,应要求患者进行随访再检测以明确诊断。     

梅毒螺旋体Tp0971重组蛋白的表达及其在梅毒血清学诊断中的初步评价

目的表达梅毒螺旋体(Tp)重组蛋白Tp0971(rTp0971),评价其作为候选抗原在梅毒血清学诊断中的意义。方法 PCR扩增Tp0971基因,构建原核重组体pET-28a/Tp0971并诱导表达蛋白,Western blot检测表达产物的抗原性;建立rTp0971-ELISA,检测238份TPPA阳性和120份TPPA阴性血清的Tp特异性IgG,并与TPPA法比较。结果成功高效表达了rTp971;Western blot显示纯化的rTp0971能被梅毒患者血清识别。用rTp0971-ELISA检测临床血清标本的特异性为100%,敏感性为89.1%,总符合率为92.7%。结论 rTp0971有较好的抗原性,可望作为梅毒血清学检测的候选诊断抗原。     

HIV TP同步金标法快速检测结果的比较分析

目的为了对目标人群及临床疑似病人进行艾滋病毒(HIV)、梅毒螺旋体(TP)血清快速筛查诊断,并确保HIV、TP快速诊断试剂血清学的检测效果。方法采用Bioline同步HIV、TP胶体金快速检测试剂对浦东新区6个社区的≥60岁的老年人血清共10 000份进行TP、HIV血清学筛查,TP检测阳性者再用梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验(TPPA)试剂进行验证,阴性者随机抽取1 000例;HIV快速检测阳性者用Determine胶体硒免疫层析试剂进行比对,阴性者随机抽取1 000例分别TPPA试剂进行验证、用Determine胶体硒免疫层析试剂进行比对;另抽取2016-2019年确证实验室HIV筛查阳性待确证样本同时Determine胶体硒免疫层析方法阳性并蛋白印迹试验(WB)确证为阳性样本1 000例,对Bioline同步快速检测试剂进行验证。结果 1)Bioline同步HIV、TP金标快速诊断法相对于TPPA法的敏感性为98.94%,特异性为100%,其检测结果与TPPA一样包含了既往和现症感染;2)Bioline同步HIV、TP同步金标快速诊断法相对于WB确证实验敏感性100%,特异性99.84%,与Determine胶体硒快速法相比较(两种快诊试剂均以WB为"金标准"),差异均无统计学意义(P 0.01)。结论 Bioline同步HIV、TP金标快速诊断法可以取代Determine胶体硒免疫层析快速诊断用于门诊基层等医疗机构及个人自测,同时可以取代TPPA法用于梅毒筛查。     

梅毒抗原血清学试验筛查在实验室诊断中的应用

目的探讨梅毒逆向筛查程序方案,分析其在实验室诊断及梅毒筛查防治中的应用价值。方法应用梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验(TPPA)、梅毒螺旋体抗体酶联免疫吸附试验(TP-ELISA)、甲苯胺红不加热血清学试验(TRUST),同时对2015年1至6月杭州师范大学附属医院各门诊及病房梅毒筛查者23 389份标本进行检测。以TPPA为标准,方法间一致性比较采用Kappa检验,通过各方法的灵敏度、特异性、总符合率的比较,分析TP-ELISA作为初筛方法的梅毒逆向筛查程序的可行性,并进一步统计TP-ELISA的S/CO值与TPPA阳性结果的相关性,简化逆向筛查程序。结果 23 389份标本中,TPPA筛查阳性率为3.38%(790份),TP-ELISA、TRUST筛查阳性率分别为3.63%(849份)、1.89%(443份)。TP-ELISA与TPPA在梅毒筛查时具有非常好的一致性(K=0.954),TRUST与TPPA一致性一般(K=0.693),TP-ELISA的灵敏度为99.1%,大于TRUST的灵敏度54.7%,差异有统计学意义(P0.01)。统计发现,当TP-ELISA的S/CO值≥5.0时,其结果与TPPA结果完全一致;当TP-ELISA的S/CO值分布在1.0~4.99之间时,有66例假阳性;当TP-ELISA的S/CO值≤1.0时,所有样本中存在7例假阴性(6例样本TRUST阳性)。结论 TRUST敏感度较低,单独作为梅毒筛查不利于大量隐性梅毒患者的发现;TP-ELISA灵敏度和特异性较高,与TPPA一致,其操作简单,可以自动化批量检测,成本低,适用于临床大样本筛查。     

布鲁氏菌抗体胶体金免疫层析法快速检测技术的建立

目的建立一种快速检测布鲁氏菌抗体的新方法。方法利用胶体金免疫层析技术,以大肠埃希菌表达、纯化的OMP31与BP26重组蛋白作为检测抗原,以金黄葡萄球菌A蛋白(SPA)作为胶体金标记物,制备胶体金免疫层析试纸条,用于检测布鲁氏菌抗体,并分析方法的敏感性和特异性。结果以粒径为40nm胶体金制备的试纸条检测布鲁氏菌抗体的敏感性最高,胶体金最佳标记pH为6.2,SPA蛋白最适标记量为6μg/ml。交叉试验证明试纸条不与其他非相关疾病感染血清反应,特异性高。试纸条检测结果与琥红平板试验方法的符合率为92%。结论制备的布鲁氏菌抗体胶体金免疫层析试纸条具有敏感、特异、简便、快速的特点,可用于鉴别布鲁氏菌自然感染和人工免疫,并可区分牛、羊种布鲁氏菌感染,可在基层推广使用。     

狂犬病毒胶体金检测试纸的制备及初步应用

目的利用胶体金免疫层析技术建立一种快速、简便、特异的狂犬病毒检测方法。方法采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金标记鼠抗狂犬病毒单克隆抗体,包被于结合释放垫处,分别利用纯化的兔抗狂犬病毒多克隆抗体和羊抗鼠IgG包被检测线及质控线,组装胶体金检测试纸。结果制备的狂犬病毒胶体金试纸对15个接种狂犬病毒乳鼠脑组织的检测均为阳性,与FAT结果一致;对犬瘟热病毒、犬细小病毒及犬冠状病毒细胞培养液及9个狂犬病毒阴性乳鼠脑处理液的检测均为阴性。结论用制备的狂犬病毒胶体金试纸检测狂犬病毒快速、简便、特异,具有良好的临床应用前景。     

HIV抗体WB确证实验的替代策略研究

目的利用艾滋病病毒（HIV）抗体筛查实验的酶联免疫吸附试验（ELISA）和快诊检测结果与蛋白免疫印迹试验（WB）的组合,对HIV感染与否进行确证,避免单一WB确证实验的＂不确定＂结果,区别WB实验中＂已感染-不确定＂和＂未感染-不确定＂结果,及时精确判定阳性与阴性结果。方法以2007-2013年筛查为＂阳性＂结果的1190例需进一步进行确证实验的所有血清样本为研究对象,包括确证结果为＂阳性＂、＂不确定＂及＂阴性＂者。三种确证结果及实验条带结果均与两种ELISA（高敏感性和高特异性）和两种快诊（胶体硒和胶体金）的联合检测进行比对分析。结果 1190例HIV抗体待复查标本中,确证试验为阳性的930例样本,两种ELISA和两种快诊试验均为阳性;144例确证试验为阴性的血清样本,两种ELISA和两种快诊试验至少有一种为阴性,其中快诊无一例为强阳性;116例确证试验为＂不确定＂者,其中＂不确定-阳性＂样本两种ELISA和两种快诊试验均为阳性（包括强阳性、阳性与弱阳性）,＂不确定-阴性＂样本两种ELISA和两种快诊试验至少有一种为阴性,其中快诊无一例为强阳性。结论两种ELISA与两种快诊的联合运用敏感性、特异性均达到100%（除窗口期）,可以有效区分WB结果的＂感染-不确定＂与＂未感染-不确定＂,建议国家调整艾滋病确证策略,利用HIV抗体筛查试验的联合运用来替代WB的确证试验,既排除了＂不确定＂结果,又节约了大量资源及减少不必要的伤害还可以满足及时精确判定结果。     

胶体金与蛋白芯片结核抗体检测方法在结核病辅助诊断中的临床价值

目的探讨胶体金与蛋白芯片二种结核抗体检测方法在结核病辅助诊断中的价值。方法收集2010年2月1日至4月30日新人陕西省结核病防治院并同时进行胶体金法及蛋白芯片法检测结核抗体的已确诊或疑诊结核病333例患者的资料,统计二种方法结核抗体检测结果、患者痰菌检测结果以及最后诊断结果,并进行分析。结果二种检测方法结果差异显著,胶体金法敏感性显著高于蛋白芯片法。胶体金法假阳性率为7．21％（24／333）,蛋白芯片法38KDa、LAM以及16KDa三种不同抗原检测结果差异较大,以16KDa抗原检出阳性率最低,仅为12．61％（42／333）,38KDa、LAM二种抗原检测统计学差异无显著性,但总体敏感性显著低于胶体金法。结论胶体金法检测结核抗体在结核病辅助诊断中的临床价值优于蛋白芯片法。     

结缔组织病患者快速血浆反应素环状卡片试验阳性的临床价值

目的 探讨快速血浆反应素环状卡片试验（RPR）阳性对结缔组织病（CTD）患者的临床诊断和治疗的指导价值。方法 回顾性分析2004年12月-2007年2月在北京协和医院诊断明确、资料完整的15例RPR阳性CTD住院病例，所有患者均进行了梅毒确证试验；从流行病学资料、临床表现、实验室检查和治疗方案上进行分析。结果（1）15例CTD患者，梅毒确证试验阳性7例（阳性率46．7％），RPR假阳性8例（假阳性率53．3％）。（2）RPR假阳性患者中6例为系统性红斑狼疮（SLE），其中3例合并抗磷脂综合征（APS）。（3）7例CTD并发梅毒的患者中，有典型临床表现者4例，有典型流行病学史者2例，5例予以抗梅毒螺旋体治疗。结论 C139患者存在RPR假阳性并不少见，但仍有相当大比例的患者合并梅毒螺旋体感染。对所有RPR阳性患者，应行梅毒确证试验，对疑似梅毒临床表现和有流行病学史的患者．应予抗梅毒治疗。     

三种实验室检测方法对梅毒诊断的临床意义分析

目的检验三种梅毒实验室检测方法的梅毒阳性检出率,分析各检测指标间的相互关系,探讨其临床意义。方法抽取性病门诊就诊者的静脉血,用梅毒酶联免疫吸附试验(ELISA)检测梅毒抗体,同时用梅毒螺旋体明胶凝集试验(TPPA)检测同一份血清,二种方法均为阳性者用荧光梅毒螺旋体抗体吸收法(FTA-ABS)检测及免疫印迹法(WB)确认,对试验数据进行统计分析和检查。结果在所有784名性病门诊就诊者中,ELISA检测梅毒抗体阳性者306人,阳性率39.03%;TPPA法检测梅毒抗体阳性为297人,阳性率为37.88%;经FTA-ABS检测确证阳性299人,阳性率为38.14%;最终WB结果与FTA-ABS检测一致。结论为了提高梅毒的检出率及正确性,对高度疑似梅毒的患者,应同时进行两种抗体的检查。     

诊断家畜日本血吸虫感染胶体金免疫层析试纸条的研制

目的 目的 研制一种可用于疫区现场快速诊断家畜日本血吸虫感染的胶体金免疫层析试纸条。方法 方法 设计重组蛋 白G并在大肠杆菌中表达, 得到重组蛋白。对重组蛋白G进行胶体金标记并制备金标垫, 分别用可溶性虫卵抗原 （SEA） 和重组蛋白G划线, 作为检测线和质控线。采用组装的试纸条检测标准阴、 阳性BALB/c鼠与新西兰大白兔血清, 以及粪 检阴、 阳性的绵羊与水牛血清, 评估其灵敏度和特异度; 利用组装的试纸条检测前后盘吸虫病病牛血清, 评价其交叉反应 性。结果 结果 成功构建了重组蛋白G的原核表达质粒并在大肠杆菌中表达。以重组蛋白G制备的试纸条可用于检测日本 血吸虫感染BALB/c鼠、 新西兰大白兔、 水牛、 绵羊血清抗体。该试纸条检测日本血吸虫感染小鼠与兔血清的灵敏度、 特 异度均为100%; 检测绵羊血清的灵敏度为100%, 特异度为88.46%; 检测水牛血清的灵敏度为94.44%, 特异度为100%; 其与前后盘吸虫交叉反应率为5.88%。结论 结论 成功研制能检测多种家畜血吸虫病的胶体金免疫层析试纸条, 其检测家 畜血吸虫感染的灵敏度和特异度均较高。     

受血者输血前不同人群梅毒抗体流行情况调查

目的：检测受血者梅毒感染率流行情况及其危险因素,为安全输血提供保障,减少因输血引起的医疗纠纷。方法：选择2005—2007年34209例需输血及术前备血的患者,进行梅毒螺旋体血凝实验（TPPA）已确诊。结果：梅毒抗体阳性率0．57％（196／34209）,其中女性梅毒抗体阳性率0．48％（94／19527）,男性梅毒抗体阳性率0．69％（102／14682）,差异有统计学意义（P〈0．05）;各年阳性率分别为0．46％、0．51％、0．73％,采用2005年与2006年比较,（P〉0．05）差异无统计学意义;2006年与2007年比较（P〈0．05）,差异有统计学意义。小于20岁、20～50岁、50岁以上不同年龄段阳性率构成比分别为2．04％、70．92％、27．04％。结论：受血者梅毒感染率逐年升高,男性患者明显高于女性,通过对受血者梅毒抗体检测,可明确患者健康状况,杜绝医源性经血液传播疾病而引起的医疗纠纷,保护医患双方的的利益。