GPER抑制剂PTX对雌激素作用下子宫内膜癌细胞增殖、凋亡的影响

目的:探讨G蛋白偶联雌激素受体(GPER)抑制剂百日咳毒素(PTX)对17β-雌二醇(E2)作用下子宫内膜癌系ER阳性的Ishikawa及ER低表达的HEC-1A的细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响,初步探讨阻断GPER介导的信号传导通路治疗子宫内膜癌的可行性。方法:选取对数生长的细胞随机分为空白对照组(不加任何试剂)、阴性对照组(加10-6mol/L E2)和实验组(10-6mol/L E2+PTX)。应用四甲基亚唑蓝(MTT)法、流式细胞术观察PTX对E2作用下的子宫内膜癌的细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响。结果:(1)随着E2浓度的增加和作用时间的延长,子宫内膜癌Ishikawa细胞在490nm处光密度值增大。E2对Ishikawa细胞具有促增殖作用,且呈时间和浓度依赖性(P均<0.001),而对HEC-1A的细胞增殖作用不显著(P=0.393),各浓度之间差异均无统计学意义(P=0.137)。不同浓度E2作用48h后,Ishikawa细胞G0～G1期比例减少(P=0.001),S期比例增多(P=0.002),HEC-1A变化不显著。(2)随着PTX浓度增加及时间延长,两种细胞增殖能力逐渐下降并呈时间和浓度依赖性(P均<0.001);不同浓度PTX作用48h后,两种细胞的凋亡率、G0～G1比例均升高(P<0.001,P<0.05),S期比例在Ishikawa细胞无显著变化,在HEC-1A细胞降低,G2～M期比例在Ishikawa细胞降低,在HEC-1A细胞无显著变化。结论:PTX可以抑制E2对子宫内膜癌细胞的促增殖作用,促使其发生凋亡,抑制细胞周期进展。GPER介导的信号传导通路可能成为治疗子宫内膜癌的新靶点。     

NK-1受体拮抗剂对Ishikawa细胞抑制作用的研究

目的:探讨NK-1受体拮抗剂对子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖、凋亡、细胞周期及侵袭影响。方法:体外培养子宫内膜腺癌Ishikawa细胞,将不同浓度NK-1受体拮抗剂与其共培养48h后,采用MTT法检测Ishikawa细胞增殖情况;采用流式细胞术检测细胞凋亡率及细胞周期分布;利用Transwell实验检测细胞侵袭能力。结果:NK-1受体拮抗剂可明显抑制Ishikawa细胞增殖(P0.05);促进细胞凋亡,使细胞周期中G0/G1期比例增加,S期及G2/M期比例降低(P均0.05);抑制细胞侵袭,并且其对Ishikawa细胞的这些作用均呈剂量依赖性。结论:NK-1受体拮抗剂可明显抑制子宫内膜癌细胞增殖、阻滞细胞周期、诱导凋亡及抑制侵袭,有望成为子宫内膜细胞治疗的新途径。     

氧化苦参碱抑制子宫内膜癌细胞株Ishikawa的实验研究

目的:观察不同浓度氧化苦参碱(oxymatrine,Oxy)对人子宫内膜癌细胞株Ishikawa增殖抑制及诱导凋亡作用。方法:培养人子宫内膜癌细胞株Ishikawa,通过细胞形态学观察、CCK-8比色法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期人工重组基底膜侵袭小室(transwell)观察细胞的侵袭力。结果:Oxy明显抑制Ishikawa增殖,并呈时效和量效关系,24h、48h、72h的IC50分别为8.07,4.62,3.22mg/ml;细胞周期发生明显改变。随着药物浓度增高,G1期细胞比例增加,S期细胞减少;流式细胞仪可检测到细胞凋亡现象,当Oxy浓度为10mg/ml时,细胞凋亡率65.4%;荧光显微镜可见细胞凋亡形态学变化;Ishikawa细胞侵袭基底膜的能力明显被抑制。结论:Oxy可抑制Ishikawa增殖,诱导Ishikawa细胞凋亡,有可能成为治疗子宫内膜癌的有效药物。     

雌、孕激素对子宫内膜癌细胞株Ishikawa体外生长的影响

目的探讨雌激素(17β-雌二醇,E2)、孕激素(P)及其不同配伍对子宫内膜癌Ishikawa细胞体外生长的影响,为临床子宫内膜癌患者术后激素补充治疗(HRT)提供理论依据。方法体外培养人子宫内膜癌Ishikawa细胞株。实验组分别加入不同浓度E2(E2组)、P(P组)及二者不同浓度配伍(E2+P组);对照组加入0.01%乙醇。观察细胞形态变化;测定细胞的增殖、凋亡和细胞周期变化。结果 Ishikawa细胞吸光度(A值)及增殖促进率均随E2浓度的增加呈逐渐上升趋势。E2浓度增至10-8～10-6mol/L,差异有统计学意义(P0.05,P0.01)。相反,P和E2+P两组均随P浓度的增加,对Ishikawa细胞增殖抑制率逐渐升高(P0.05,P0.01)。E2终浓度增至10-6mol/L,P终浓度10-5及0.5×10-4mol/L时,差异有统计学意义(P0.05)。对照组Ishikawa细胞大多处于G0/G1期。经E2、P作用后,细胞周期发生改变,E2组S期细胞比例上升,凋亡率下降(P0.01);P组和E2+P组G0/G1期细胞比例上升,S期比例下降,凋亡率上升。E2组Ishikawa细胞数量增多,核分裂相多见。P组和E2+P组则见Ishikawa细胞数目减少,细胞明显皱缩,体积变小,凋亡小体多见。结论 E2对Ishikawa细胞有促增殖、抗凋亡作用;P则抑制Ishikawa细胞增殖,并诱导其凋亡;E2+P是否具有抑制细胞增殖并诱导凋亡的作用与E2和P具体配伍浓度有关;合理的E2+P配伍不促进Ishikawa细胞的增殖。     

过表达MicroRNA-195抑制子宫内膜癌细胞系Ishikawa的增殖、迁移与侵袭能力

目的:观察MicroRNA-195对子宫内膜癌细胞增殖、迁移与侵袭能力的影响。方法:取对数生长期人子宫内膜癌细胞系Ishikawa,分别转染MicroRNA-195模拟物(MicroRNA-195过表达组)、MicroRNA-195抑制物(MicroRNA-195低表达组)及阴性对照质粒MicroRNA-NC(空白质粒组)。转染48h后,qRT-PCR法检测细胞中MicroRNA-195表达,CCK-8法检测细胞增殖,Transwell小室实验检测细胞迁移与侵袭能力,Western blot法检测Akt、p-Akt蛋白表达。将转染MicroRNA-195模拟物、MicroRNA-195抑制物及阴性对照质粒MicroRNA-NC的人子宫内膜癌细胞系Ishikawa分别注射至裸鼠皮下,每天检测肿瘤体积,实验周期为3周。结果:MicroRNA-195过表达可抑制人子宫内膜癌细胞系Ishikawa的增殖、迁移与侵袭能力(P<0.05),提高p-Akt蛋白表达(P<0.05);MicroRNA-195低表达可促进人子宫内膜癌细胞Ishikawa的增殖、迁移与侵袭能力(P<0.05),降低p-Akt蛋白表达(P<0.05)。MicroRNA-195过表达可抑制裸鼠体内人子宫内膜癌细胞Ishikawa的增殖(P<0.05),MicroRNA-195低表达可促进裸鼠体内人子宫内膜癌细胞Ishikawa的增殖(P<0.05)。结论:MicroRNA-195可抑制子宫内膜癌细胞Ishikawa的增殖、迁移与侵袭能力,其作用机制可能与激活PI3K/Akt信号通路有关。     

三苯氧胺对人子宫内膜癌细胞系Ishikawa细胞增殖的影响

目的:探讨三苯氧胺(TAM)在体外对Ishikawa人子宫内膜癌细胞株增殖的影响及其作用机制。方法:采用MTT法观察不同浓度TAM作用不同时间对Ishikawa细胞增殖的影响,另应用MTT法、流式细胞术、免疫细胞化学方法观察比较TAM、17β-雌二醇(17β-E2)及两者联合作用不同时间后对Ishikawa细胞增殖率,细胞周期时相分布以及C-myc、bcl-2、Bax 3种蛋白表达的影响。结果:TAM对Ishikawa细胞的促增殖作用在一定剂量范围内有浓度依赖性,可使G0/G1期细胞比例下降,S期细胞比例升高;C-myc、bcl-2蛋白表达增加,Bax蛋白表达下降。结论:体外TAM可能通过调节细胞周期时相分布及上调C-myc蛋白、bcl-2蛋白,下调Bax蛋白表达,促进Ishikawa人子宫内膜癌细胞增殖。     

胰岛素对子宫内膜癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨胰岛素对子宫内膜癌细胞系Ishikawa3-H-12细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响。方法 应用免疫细胞化学方法和RT-PCR技术检测Ishikawa3-H-12细胞胰岛素受体（INSR）蛋白和mRNA的表达。以不同浓度胰岛素作用Ishikawa3-H-12细胞不同时间,采用四甲基偶氮唑蓝比色法、流式细胞仪检测细胞增殖、凋亡和细胞周期。结果 （1）Ishikawa3-H-12细胞INSR蛋白呈棕黄色阳性表达,并可见INSR基因的表达。（2）胰岛素以浓度和时间依赖的方式促进子宫内膜癌细胞增殖,1×10^-4mol／L胰岛素作用48h时促增殖作用最显著,增殖率为（340．2±15．9）％,与对照细胞（以胰岛素浓度为0作为对照,为100％）比较,差异有统计学意义（P〈0．05）。（3）胰岛素以浓度和时间依赖的方式使Ishikawa3-H-12细胞中G0／G1期细胞比例减少,S期细胞比例增加,1×10^-4mol／L胰岛素作用72h时最显著,G0／G1期细胞比例为（27．7±2．5）％,S期细胞为（55．2±1．4）％,分别与对照细胞[分别为（67．6±1．5）％、（15．7±1．0）％]比较,差异均有统计学意义（P〈0．05）;胰岛素对G2／M期细胞无影响（P〉0．05）。（4）随着胰岛素浓度的增加,Ishikawa3-H-12细胞凋亡率逐渐下降。1×10^-4mol／L胰岛素作用最显著,作用24、48、72、96h时的细胞凋亡率分别为（1．76±0．16）％、（1．70±0．15）％、（1．56±0．20）％、（1．31±0．24）％,分别与对照细[分别为（9．81±0．61）％、（9．93±1．44）％、（9．10±0．66）％、（10．30±1．20）％]比较,差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论 胰岛素对子宫内膜癌Ishikawa3-H-12细胞具有促进增殖、抑制凋亡的作用。     

低糖高乳酸环境下吉非替尼诱导HeLa细胞EGFR-TKI耐药的研究

目的探讨低糖高乳酸微环境对表皮生长因子酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI)抑制He La细胞的影响和可能机制。方法 He La细胞在常糖(葡萄糖10 mmol/L)和低糖高乳酸(葡萄糖3 mmol/L+乳酸2.5 mmol/L)环境下培养,并分别给予2.67μmol/L吉非替尼干预。采用CCK-8法测定He La细胞生长抑制率,流式细胞术检测细胞周期,荧光定量RT-PCR检测EGFR和m TOR m RNA水平的表达。结果与常糖组比较,低糖乳酸组24 h和72 h细胞抑制率均显著升高(P0.01),48 h细胞抑制率略高于常糖组。与吉非替尼阴性组比较,常糖+吉非替尼组和低糖乳酸+吉非替尼组在24、48、72 h三个时点细胞抑制率均显著上升(P0.01)。与常糖组相比,低糖乳酸组48 h细胞诱导凋亡率显著上升(P0.01),低糖乳酸+吉非替尼组细胞诱导凋亡率较低糖乳酸组显著降低(P0.01)。与常糖组比较,低糖乳酸组存活细胞的EGFR和m TOR m RNA表达水平上调(P0.05)。常糖+吉非替尼组的EGFR和m TOR m RNA水平均上调(P0.05)。与低糖乳酸组比较,低糖乳酸+吉非替尼组的EGFR和m TOR m RNA上调水平有显著差异(P0.01)。结论高乳酸低糖环境下吉非替尼可大幅度上调存活He La细胞EGFR和m TOR表达水平,可能是诱导He La细胞抵抗EGFR-TKI的机制。     

脂联素对子宫内膜癌细胞增殖凋亡的影响

目的:研究脂联素对子宫内膜癌细胞增殖凋亡的影响及其信号的传导。方法:免疫细胞化学方法及RT-PCR法检测子宫内膜癌Ishikawa3-H-12细胞AdipoR1/R2蛋白及mRNA的表达,不同浓度脂联素(2.5,5,10,20μg/ml)作用子宫内膜癌细胞30min,Western blot检测AMPK磷酸化程度,不同浓度脂联素作用细胞48h及AMPK抑制剂(复合物C)预处理后脂联素再作用48h后,MTT试验及流式细胞仪检测不同处理组细胞的增殖及凋亡。结果:子宫内膜癌Ishikawa3-H-12细胞AdipoR1/R2蛋白呈棕黄色颗粒状表达,并可见AdipoR1/R2基因表达。除2.5μg/ml浓度外,其余浓度组脂联素均显著诱导AMPK磷酸化,不同浓度组AMPK活化差异有统计学意义(F=27.985,P0.01),脂联素以浓度依赖模式诱导子宫内膜癌细胞AMPK活化。脂联素以浓度依赖模式显著抑制子宫内膜癌细胞增殖(F=13.322,P0.01),诱导子宫内膜癌细胞凋亡(F=46.826,P0.01),复合物C可以阻断脂联素诱导的细胞增殖抑制及凋亡。结论:脂联素可能通过影响AMPK信号通路抑制子宫内膜癌细胞增殖,促进凋亡。     

阿司匹林作用下子宫内膜腺癌细胞凋亡与Bcl-xl蛋白表达的关系

目的:探讨阿司匹林作用下人子宫内膜腺癌Ishikawa细胞凋亡率与凋亡抑制蛋白Bcl-xl表达变化的关系。方法:应用流式细胞仪(FCM)检测不同浓度阿司匹林对子宫内膜腺癌Ishikawa细胞周期和凋亡率的影响;Westernblotting法检测阿司匹林对Bcl-xl蛋白表达的影响。结果:①阿司匹林引起细胞阻滞在G1期,细胞凋亡率增加,与药物作用浓度相关(P<0.05);②阿司匹林降低Bcl-xl蛋白的表达,与药物作用浓度相关(P<0.05);③Ishikawa细胞凋亡率与Bcl-xl蛋白的表达水平存在负相关关系(r=-0.873,P<0.05)。结论:Bcl-xl蛋白在阿司匹林促进子宫内膜腺癌细胞凋亡的调控中起到重要的作用。     

17β-雌二醇对人子宫内膜癌细胞的增殖及P21ras和p-Erk表达的研究

目的:探讨17β-雌二醇(E2)对人子宫内膜腺癌雌激素受体(ER)阳性的Ishikawa和ER阴性的HEC-1A细胞增殖,细胞周期及其对丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路相关蛋白P21ras和p-Erk表达的影响及意义。方法:用MTT法,流式细胞技术检测不同浓度E2作用Ishikawa和HEC-1A细胞不同时间的细胞吸光度值及细胞周期,用免疫细胞化学法检测上述细胞中P21ras和p-Erk的表达。结果:随E2浓度增加,Ishikawa细胞吸光度值上升并呈时间依赖性(P<0.01),G0～G1期比例下降(P<0.01),S期比例升高(P<0.01);HEC-1A细胞吸光度值及细胞周期无明显变化(P>0.05);10-6mol/LE2作用于Ishikawa细胞30min时,P21ras和p-Erk活化表达最强,作用于HEC-1A细胞15min时,P21ras和p-Erk即有明显表达而且达高峰,随着E2浓度增加两种细胞中P21ras和p-Erk表达均逐渐增加,呈浓度依赖性。结论:E2可促进子宫内膜癌Ishikawa细胞的增殖和周期进展,而且可以促进Ishikawa和HEC-1A中P21ras和p-Erk表达增加。     

信号通路抑制剂对PTEN基因不同表达状态子宫内膜癌细胞的作用

目的 比较相关信号通路抑制剂诱导PTEN基因不同表达状态子宫内膜癌细胞的增殖和凋亡情况.方法 以PTEN反义寡核昔酸及PTEN真核表达载体转染子宫内膜癌细胞(HEC-1A、Ishikawa)后,激光共聚焦显微镜观察PTEN蛋白的表达.表皮生长因子受体、丝裂原活化蛋白激酶及雷帕霉素靶蛋白信号通路抑制剂--RG-14620、SB203580(SB)及西罗莫司分别处理HEC-1A、HEC-1A-PTEN-null、Ishikawa、Ishikawa-PTEN细胞,荧光染色法、流式细胞仪、四甲基偶氮唑蓝比色法分别检测细胞凋亡时的形态学改变、细胞凋亡率、细胞周期分布、细胞存活率.结果 转染后,Ishikawa-PTEN细胞内PTEN蛋白表达增加,HEC-1A-FFEN-null细胞内PTEN蛋白表达受到抑制.RG-14620、SB及西罗莫司处理后,Ishikawa和HEC-1A-PTEN-null细胞荧光染色见核呈浓集周缩改变;细胞发生明显凋亡及G1期阻滞,尤以SB作用最为显著,Ishikawa+SB、HEC-1A-PTEN-null+SB的细胞凋亡率分别为(37.8±0.8)%、(31.6±0.8)%,G_1期细胞比例增加[分别为(87.5±1.9)%、(84.1±3.2)%];细胞增殖受到抑制,尤以SB处理后作用为显著,Ishikawa+SB、HEC-1A-PTEN-null+SB的细胞存活率仅为(49.0±1.7)%、(54.0±2.1)%.结论 PTEN基因缺失使相应信号通路抑制剂作用的子宫内膜癌细胞增殖明显受抑,细胞阻滞于G1期,细胞凋亡增加,对相关信号通路抑制剂的敏感性增加.     

信号传导通路抑制剂PD98059和LY294002对子宫内膜癌细胞和裸鼠移植瘤的抑制作用

目的 观察有丝分裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号传导通路抑制剂PD98059和磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)信号传导通路抑制剂LY294002对子宫内膜癌细胞株Ishikawa细胞和子宫内膜癌裸鼠移植瘤的抑制作用.方法 (1)体外实验:实验分为4组,即PD组(加入浓度分别为0、1、50、100 μmol/L的PD98059)、LY组(加入浓度分别为0、1、50、100 μmol/L的LY294002)、PD+LY组(加入浓度均为50 μmol/L的PD98059和LY294002)、对照组[仅加入二甲基亚砜(DMSO)],分别培养24、48和72 h.应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测各组Ishikawa细胞的增殖情况,流式细胞仪检测各组Ishikawa细胞的细胞周期比例和细胞凋亡率.(2)体内实验:建立子宫内膜癌裸鼠移植瘤模型,随机分为4组(每组6只):PD组(注射PD98059 50 mg/kg)、LY组(注射LY294002 50 mg/kg)、PD+LY组(注射PD98059 50 mg/kg和LY294002 50 mg/kg)、对照组(注射等量的生理盐水),每周2次,共3周;观察移植瘤的生长情况,并计算抑瘤率;用末端脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧尿苷三磷酸标记(TUNEL)法检测移植瘤组织的细胞凋亡情况,以细胞凋亡指数表示;免疫组化法检测移植瘤组织内磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)和磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)蛋白的表达.结果 (1)PD98059和(或)LY294002处理后,PD组、LY组Ishikawa细胞增殖的抑制作用均呈明显的时间和浓度依赖性(P＜0.05),且PD+LY组细胞增殖的这种抑制作用明显高于PD组、LY组(P＜0.05).LY组细胞S期、G0/G1期比例的变化呈明显的时间和浓度依赖性(P＜0.05);PD组细胞各期比例的变化均无时间依赖性(P＞0.05),但G0/G1期、S期比例的变化呈明显的浓度依赖性(P＜0.05);PD+LY组与PD组、LY组比较,G0/G1期比例明显增加、S期比例明显减少(P＜0.05).PD+LY组细胞凋亡率为(63.3±0.5)%,明显高于PD组、LY组[分别为(30.7±20.1)%和(40.8±1.3)%,P＜0.01].(2)注射PD98059和(或)LY294002后,随着时间的延长,PD组、LY组、PD+LY组裸鼠移植瘤体积增长相对缓慢,对照组移植瘤体积增长明显,PD组、LY组、PD+LY组分别与对照组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);PD+LY组分别与PD组、LY组比较,差异也均有统计学意义(P＜0.05),而PD组与LY组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).LY组、PD组、PD+LY组抑瘤率分别为(32±16)%、(38±17)%、(68±9)%,PD+LY组明显高于LY组、PD组(P＜0.05).LY组、PD组、PD+LY组细胞凋亡指数分别为(13.7±1.5)%、(14.1±1.2)%、(29.0±1.8)%,PD+LY组明显高于LY组、PD组(P＜0.01).LY组、PD组、LY+PD组裸鼠移植瘤组织中p-ERK和p-Akt蛋白的表达强度均明显弱于对照组.结论 信号传导通路抑制剂PD98059、LY294002能够抑制体外及体内子宫内膜癌细胞的生长,并促进其凋亡.

Abstract：

Objective To investigate the effects of signal pathway inhibitors PD98059 and LY294002 on cell proliferation, apoptosis, expressions of phosphorylated extracellular signal-regulared kinase (p-ERK) and phosphorylated protein kinase B ( p-Akt) in endometrial carcinoma xenografts. Methods Human endometrial carcinoma Ishikawa cells were cultured in vitro. The effects of PD98059 and LY294002 on proliferation, apoptosis, and cell cycle distribution of endometrial cancer cells were detected by monotetrazolium ( MTT) assay and fluorescence-activated cell sorting technique. The models of xenografted tumor were established by the subcutaneous inoculation in 24 nude mice, and then they were randomly divided into 4 groups ( n = 6) , normal saline group, PD98059 group (PD group) , LY294002 group ( LY group) or PD98059 + LY294002 group ( PD + LY group) by intraperitoneal injections, respectively. The anti-tumor efficacy was evaluated by measuring tumor volume and tumor growth status. The histopathological change of tumor specimens was observed using HE staining and terminal deoxynucleotidyl transferasemediated dUTP-digoxigen in nick and labeling method (TUNEL) testing and the expression levels of p-ERK and p-Akt were detected by immunohistochemistry method. Results ( 1) The proliferation of Ishikawa cells were suppressed after treated by PD98059 and ( or) Y294002, in which A570 values of cells decreased showing both time-dependent and concentration-dependent manner ( LY294002: Fgroup = 9. 801, P = 0. 002; Ftime = 10. 398, P = 0. 001. PD98059: Fgroup= 8. 213, P = 0. 015; Ftime = 6. 839, P = 0. 036). Cell cycle distribution analysis revealed that percentage of Ishikawa cells at G0/G1 phase(Ftime =35.049, P= 0.004; Fgroup = 32. 024, P ＜0. 01) increased and percentage of S phase cells (Ftime = 7. 789, P = 0. 049; Fgroup = 30. 132, P ＜0. 01) decreased significantly. The percentage of apoptotic cells increased significantly among PD group, LY group and PD + LY group, in which there were significant difference [(63. 3 ±0.5)% vs (30. 7 ± 20. 1) % vs(40. 8 ± 1. 3) % ; F = 621. 059, P ＜ 0. 01]. (2) Compared with the control group, the increasing of transplanting tumor volume in the treated groups were obviously ( F = 23. 545 , P ＜ 0. 01) , and the inhibited rate of the tumor was higher in PD + LY group than that in PD group or LY group [(68 ± 9 ) % vs ( 32 ± 16 ) % or ( 38 ± 17 ) % ; F = 10. 283 , P ＜ 0. 05]. ( 3 ) HE staining shown that there were different degrees of necrosis for endometrial carcinoma cell in different groups. The apoptosis of tumor cells were significantly increased in treated groups by TUNEL testing [(13. 7 ± 1. 5)% , ( 14. 1 ± 1. 2)% , (29. 0 ± 1. 8 ) % ; F = 320. 344, P ＜ 0. 01]. Immunohistochemistry results demonstrated that the expressions of p-ERK and p-Akt in treated groups were lower than that in control group, of which LY + PD group was the lowest one. Conclusion The signal pathway inhibitors PD98059 and LY294002 could inhibit the growth of human endometrial carcinoma in vivo and in vitro, in which may induce cell apoptosis.     

二甲双胍对人子宫内膜癌细胞迁徙能力的影响

目的：体外检测二甲双胍对人子宫内膜癌（Ec）细胞迁徙能力的影响,并探讨其可能的作用机制。方法：培养Ishikawa和HEC-1A人子宫内膜癌细胞系,用不同浓度的二甲双胍干预EC细胞。采用划痕试验检测细胞迁徙能力;流式细胞术检测细胞周期和凋亡;Western blot法检测Akt、p-Akt及PTEN的表达。结果：二甲双胍显著抑制Ishika—wa和HEC-1A细胞的迁徙能力（P均〈0．05）。流式细胞术检测显示,二甲双胍使G0／G1期细胞比例显著升高,同时有凋亡诱导作用;Westernblot法检测显示,二甲双胍能下调P—Akt的表达（P均〈0．05）。结论：二甲双胍显著抑制EC细胞的迁徙能力,其作用机制可能与下调p-Akt的表达有关。     

促性腺激素释放激素Ⅰ型激动剂和Ⅱ型对不同PTEN基因表达状态子宫内膜癌细胞的作用

目的 探讨促性腺激素释放激素Ⅰ型(GnRH-Ⅰ)激动剂--曲普瑞林和GnRH-Ⅱ对不同PTEN基因表达状态的子宫内膜癌细胞的作用.方法 不同浓度(10-11、10-9、10-7、10-5mol/L)的曲普瑞林和GnRH-Ⅱ分别作用于不同PTEN基因表达状态的3种子宫内膜癌细胞细胞系Ishikawa [PTEN基因表达阴性(-)]、Ishikawa-PTEN[PTEN基因表达阳性(+)]、Ishikawa-neo[PTEN(-)]细胞后,应用四甲基偶氮唑蓝比色法、碘化丙啶染色流式细胞计数法、膜联蛋白染色流式细胞术检测内膜癌细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡的变化;蛋白印迹法检测内膜癌细胞中蛋白激酶B(Akt)及细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)的活化情况.在曲普瑞林和GnRH-Ⅱ作用的基础上,使用17β雌二醇(17β-E2,10-8mol/L)和雌激素受体拮抗剂--ICI182780(10-6mol/L)分别进行干预,再次检测上述指标的变化.结果 不同浓度(10-11、10-9、10-7、10-5mol/L)的曲普瑞林及GnRH-Ⅱ作用后,3种细胞的增殖明显受到抑制(P<0.01);细胞凋亡率明显增加(P<0.01或P<0.05);细胞生长减慢,G0/G1期细胞比例增多,G2/M期和S期细胞比例减少;上述作用均呈明显浓度依赖关系(P<0.01或P<0.05).曲普瑞林及GnRH-Ⅱ均可明显抑制Ishikawa、Ishikawa-neo细胞中Akt和ERK1/2的活化(P<0.01);而对Ishikawa-PTEN细胞中Akt和ERK1/2的活化无明显抑制作用(P<0.05).17β-E2可明显拮抗曲普瑞林和GnRH-Ⅱ的上述作用(P<0.01或P<0.05).结论 曲普瑞林和GnRH-Ⅱ可通过抑制Akt和ERK1/2的活化,促进子宫内膜癌细胞凋亡,并抑制细胞增殖,此作用呈明显浓度依赖关系,并与PTEN基因表达状态有关,且可被17β-E2拮抗.提示GnRH-Ⅰ激动剂可用于低雌激素表达子宫内膜癌患者的个体化内分泌治疗.