妊娠期接触糖皮质激素对子代大鼠心肌血清和糖皮质激素调节的蛋白激酶1表达和心脏功能的印迹效应

目的 揭示妊娠期暴露于糖皮质激素(glucocorticoids,GCs)对子代大鼠心脏功能的印迹效应,探索GCs对子代心肌保护性因子的调节作用及其可能机制.方法 构建妊娠后期GCs暴露大鼠模型,通过2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色观察子代心肌缺血再灌注损伤后的梗死程度;实时定量PCR检测心肌保护因子血清和糖皮质激素调节的蛋白激酶1(Sgk1)、促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)受体2(Crhr2)、CRH家族肽urocortin (Ucn)和Ucn2等基因的表达;蛋白质印迹分析检测SGK1蛋白的表达;亚硫酸氢盐处理后测序确定Sgk1基因启动子的甲基化水平.结果 妊娠期GCs暴露大鼠子代出生时和成年后体质量减轻(P＜0.01),子代雄性大鼠心肌对缺血再灌注损伤的耐受性下降(P＜0.01);SGK1的mRNA和蛋白在子代雄性大鼠心肌中的表达降低(P＜0.01或P＜0.05);Ucn和Ucn2在子代雌性大鼠心肌中的表达下降(P＜0.05);Sgk1基因启动子区域存在多个CpG岛,且近端CpG岛的甲基化水平在妊娠期GCs暴露的子代雄性大鼠心肌中升高(P＜0.01).结论 妊娠期GCs暴露可能通过下调心肌保护因子SGK1的表达对子代雄性大鼠心肌功能产生印迹效应,而Sgk1基因启动子区域CpG岛的高甲基化改变可能是介导GCs对Sgk1的印迹效应的重要机制.     

妊娠期过多接触糖皮质激素对子代大鼠肝脏11β-HSD1表达的印迹效应

目的:探讨妊娠期过多接触糖皮质激素对子代大鼠肝脏再生糖皮质激素代谢酶11β羟基类固醇脱氢酶Ⅰ型(11β-HSD1)表达的印迹效应.方法:根据大鼠发情周期进行合笼,次晨阴道涂片发现精子作为受孕0.5 d.孕鼠共8只,随机分为地塞米松(DEX)组和生理盐水(NS)组,每组4只.DEX组孕鼠整个妊娠期注射DEX 0.05 mg/(kg·d),NS组孕鼠同等条件注射NS.取DEX和NS组出生后120 d子代大鼠肝脏组织, 采用Western印迹法检测11β-HSD1蛋白,RT-PCR方法检测11β-HSD1 mRNA、磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶 (PEPCK) mRNA,葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度.结果:DEX组大鼠子代出生时的体质量比NS组明显降低, 但生后120 d子代大鼠的体质量与NS组无显著性差异.生后120 d子代大鼠中DEX组雌性子代肝脏组织内11β-HSD1蛋白和mRNA表达、PEPCK mRNA表达以及血糖浓度均显著高于NS组雌性子代(P<0.05), 但雄性子代大鼠没有显著差异.结论:妊娠期过多接触糖皮质激素可以印迹雌性子代大鼠肝脏11β-HSD1的表达增加,从而可能进一步导致PEPCK表达的增加和血糖浓度升高.这可能是妊娠期过多接触糖皮质激素印迹糖尿病发生的重要机制之一.     

胚胎期地塞米松暴露对子代大鼠脾脏糖皮质激素受体亚型生成的影响

目的探讨胚胎期地塞米松(DEX)暴露对子代大鼠脾脏组织糖皮质激素受体(GR)亚型(α和β)m RNA生成的影响及可能的机制。方法地塞米松组母鼠孕期第3周DEX[0.2 mg/(kg·d)]干预,生理盐水组给予生理盐水,QRT-PCR检测两组成年子代鼠脾脏GR基因不同启动子的调用和GRα、GRβmRNA的表达水平。RT-PCR分析GR基因不同启动子exon1s与GRα、GRβmRNA之间的关联;QRT-PCR对exon1s-GRmRNA与GRα、GRβmRNA表达水平定量,并分析它们间的关联强度。结果地塞米松组子代鼠出生体重明显低于生理盐水组(P<0.05)。与生理盐水组比较,地塞米松组脾脏exon1.1-GRmRNA、exon1.6-GRmRNA、exon1.10-GRmRNA和exon1.11-GRmRNA表达水平显著降低(P<0.05),exon1.7-GRmRNA表达显著升高(P<0.05);GRαmRNA亚型表达水平显著降低(P<0.05),GRβmRNA亚型表达无显著改变。PCR电泳结果显示,exon1.1-GRαmRNA、exon1.4-GRαmRNA、exon1.5-GRαmRNA、exon1.6-GRαmRNA、exon1.6-GRβmRNA、exon1.7-GRβmRNA、exon1.10-GRαmRNA、exon1.10-GRβmRNA、exon1.11-GRαmRNA和exon1.11-GRβmRNA有扩增。exon1.1-GRmRNA、exon1.6-GRmRNA、exon1.10-GRmRNA和exon1.11-GRmRNA表达量分别与GRαmRNA成正相关(r分别为0.639、0.768、0.804、0.647,P<0.05);exon1.6-GRmRNA、exon1.10-GRmRNA和exon1.11-GRmRNA分别与GRβmRNA表达量成正相关(r分别为0.656、0.534、0.569,P<0.05)。结论胚胎期暴露于地塞米松,导致子代鼠脾脏GRmRNA亚型生成的改变,这种改变可能来源于GR基因不同启动子的差异化调用。     

慢性不可预见性应激模型大鼠海马形态及其 糖皮质激素受体表达的动态观察

［摘要］目的: 观察慢性不可预见性刺激（chronic unpredictable mild stress,CUMS）所致抑郁症模型大鼠海马形态和神经元糖皮质激素受体（glucocorticoid receptor,GR）的表达变化。方法: 用CUMS法刺激大鼠建立抑郁模型。取CUMS后2周,4周,6周大鼠海马组织,以未经刺激的大鼠海马组织为对照组,利用免疫荧光技术以及RT PCR方法分别检测各组大鼠海马神经元GR表达的分布和GR mRNA的表达;采用MRI和HE染色观察海马形态结构。结果： 激光共聚焦显微镜下,对照组可见海马CA1区、CA3区及齿状回区细胞GR表达丰富,荧光强度较高,表达GR的细胞排列紧密有序,形态饱满。与对照组比较,随着应激时间的增加,模型组大鼠海马各区GR的荧光表达强度依次减弱,GR阳性细胞数量减少,形态趋向紊乱。GR免疫反应细胞计数显示模型组海马GR阳性细胞数量明显低于对照组(P<0.01)。RT PCR显示模型组海马组织GR mRNA表达较对照组明显降低(P<0.01)。与对照组比较,模型组大鼠海马形态发生显著变化,随着刺激时间的延长,2周,4周,6周模型组大鼠海马细胞排列逐渐紊乱,细胞数量逐渐减少,形态不规则。结论： CUMS抑郁模型大鼠海马神经元内GR表达明显减少,此可能为大鼠海马神经元受损的机制之一。     

子痫前期宫内环境导致子代大鼠海马HPA轴相关基因表达改变

 目的 研究子痫前期宫内环境对子代SD大鼠海马下丘脑-垂体-肾上腺(hypothalamic-pituitary-adrenal, HPA)轴相关基因表达的影响。方法 通过给妊娠第14天SD大鼠连续皮下注射亚硝基左旋精氨酸甲酯(L-NAME)至分娩的方法建立子痫前期大鼠动物模型,对照组予生理盐水1 mL皮下注射。用酶联免疫检测(ELISA)方法检测新生子代大鼠血皮质酮(corticosterone, CORT)浓度。用Real-time PCR方法和Western bolt分别检测8周龄子代大鼠海马组织糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor, GR)、促肾上腺皮质激素释放激素(corticotropin releasing hormone, CRH)、CRH受体1 (CRH receptor 1, CRHR1)和IL-6的mRNA水平及其蛋白质水平。结果 与正常子代新生鼠相比,子痫前期子代新生鼠血CORT浓度升高(P＜0.05)。与正常子代鼠相比,子痫前期青少年子代鼠海马GR、CRH 和CRHR1 mRNA和蛋白质水平均增加(P＜0.05),炎性因子IL-6 mRNA和蛋白质水平均增加(P＜0.05)。结论 子痫前期宫内环境影响子代大鼠海马HPA轴相关基因的表达,在子代学习记忆能力受损中起作用。     

注意缺陷多动障碍模型大鼠HPA轴功能的变化研究

目的:观察注意缺陷多动障碍(ADHD)模型动物自发性高血压大鼠(SHR)血清皮质酮(CORT)、促肾上腺皮质激素(ACTH)、促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)水平及下丘脑糖皮质激素受体(GR)、糖皮质激素受体(MR)、CRH及海马GR、MR mRNA的表达情况,探讨SHR大鼠下丘脑-垂体-肾上腺轴(HPA)功能及相关影响因素。方法:以幼年SHR大鼠为ADHD模型组、Wistar京都大鼠(WKY)为对照组,采用ELISA法检测血清CORT、ACTH、CRH水平,RT-PCR法检测大鼠下丘脑GR、MR、CRH及海马GR、MR mRNA的表达水平。结果:SHR大鼠血清CORT、ACTH水平明显低于WKY大鼠(P<0.01),血清CRH水平明显高于WKY大鼠(P<0.01),下丘脑及海马GR、MR mRNA的表达水平明显高于WKY大鼠(P<0.01),而下丘脑CRH mRNA表达则低于WKY大鼠(P<0.01)。结论:SHR大鼠HPA轴呈低反应性,可能与CRH启动障碍及下丘脑和海马GR、MR mRNA高表达相关。     

妊娠大鼠吸入异氟烷、七氟烷对子代海马MAPK信号传导的影响

目的 观察大鼠妊娠前后暴露于最低肺泡有效浓度(1MAC)的异氟烷或七氟烷是否会引起子代海马中与MAPK信号转导通路相关的指标的变化.方法 大鼠妊娠前后吸入麻醉药模型的建立,Western方法检测子代大鼠海马中p-ERK1/2及PKCα蛋白的表达.结果 子代海马p-ERK1/2及PKCα蛋白的表达与对照组相比无明显差异,而母体于妊娠6、10、14和18d暴露于1MAC值的异氟烷或七氟烷,可使子代大鼠0、7、14d海马p-ERK1/2蛋白的表达显著减少(t=2.63,P＜ 0.01),PI组较PS组表达减少(t=2.13,P＜ 0.05),而这种变化于出生后28d消失.结论 大鼠妊娠前后暴露于1MAC的异氟烷或七氟烷引起的子代大鼠海马中MAPK信号转导通路相关的指标发生变化.     

孕期氯氮平暴露对子代大鼠生长发育和脑MAPK44/42表达的影响

目的 建立孕期氯氮平暴露子代大鼠模型,观察孕期给药对子代造成的影响.方法 8周龄wistar雌鼠,分为对照组(n=17只)和用药组(n=25只),在大鼠孕6～15d,对照组腹腔注射生理盐水,用药组注射氯氮平针剂.观察子代大鼠体格发育、神经反射、神经行为以及脑MAPK表达.结果 氯氮平孕期暴露组导敛子代大鼠早期生长延迟,出生后第4天和第7天(F=12.56/7.51,P＜0.01)体质量增长低于对照组;神经发育指标显示悬崖回避反射在出生后第3天和第9天(F=4.969/4.348;P＜0.05)与对照组相比回避反应时间延长;空中翻正反射达标数目较对照组明显减少(F=7.959/6.457,P＜0.01/0.05);旷场行为试验未显示差异性;对出生后15d龄的子代大鼠海马及其前额叶皮质MAPK44/42表达检测显示:海马部位Pho-MAPK44/42表达显著低于对照组(F=18.729/23.824,P＜0.01),MAPK44/42表达2组差异无显著性;前额叶皮质Pho-MAPK44/42和MAPK44/42表达2组差异无显著性.结论 孕期氯氮平暴露可导致子代大鼠生长发育和脑发育异常.     

糖皮质激素对其受体、热休克蛋白90和组蛋白去乙酰化酶6的影响及中药干预研究

目的 检测应用肾上腺糖皮质激素后激素受体(GR)、热休克蛋白90(HSP90)和组蛋白去乙酰化酶6(HDAC6)的变化及应用中药后对其干预情况.方法 采用实时定量PCR方法检测正常对照组、地塞米松组及地塞米松加中药组的GR、HSP90和HDAC6的mRNA表达情况.结果 与正常对照组相比,地塞米松组和地塞米松加中药组GR的表达水平均明显降低,差异有统计学意义.地塞米松组HSP90β mRNA表达水平与正常对照组相比明显降低,地塞米松加中药组HSP90β mRNA表达水平比地塞米松组升高,而比正常对照组低.地塞米松加中药组HDAC6 mRNA明显高于正常对照组和地塞米松组,差异有统计学意义.结论 应用糖皮质激素后GR减少;应用糖皮质激素后HSP90β减少,右归丸对其略有改善;应用糖皮质激素后再应用右归丸HDAC6升高.     

丰富环境对孕期应激大鼠子代海马糖皮质激素的影响

目的：检测丰富环境对孕期应激大鼠子代海马糖皮质激素受体（GlucocorticoidReceptor,GR）的影响。方法：SD孕鼠随机分为2组,正常组和实验组。正常组动物不做任何处理,其子代断乳后在标准环境下喂养;实验组动物在孕第13～19天接受限制性应激,其子代断乳后一半在标准环境下喂养（构成应激组）,另一半子代在丰富的环境下喂养（构成应激＋丰富环境组）。所有子代出生后第35天被处死。用ABC免疫组织化学和Westernblot方法分别检测海马GR的表达。结果：GR阳性产物广泛分布于海马各区神经元,应激组GR表达明显少于正常组;应激＋丰富环境组海马GR的表达明显多于应激组,与正常组相比差别无统计学意义。结论：丰富环境能有效逆转孕期应激造成的子代海马GR的表达降低。