兔虹膜和视网膜色素上皮细胞的体外培养比较

目的 观察比较有色素兔虹膜色素上皮(IPE)及视网膜色素上皮(RPE)细胞的体外生长状况。方法 采用酶消化法及酶辅助机械分离法分别分离IPE和RPE细胞。观察培养的两种细胞的生长状况，并对其进行免疫组化鉴定。结果 原代IPE及RPE细胞大多呈圆形或六边形，细胞内充满了黑色素颗粒。随着传代的增加，呈梭形或纤维细胞样生长的细胞增多，细胞中的色素颗粒也逐渐减少。细胞角蛋白免疫组化染色显示IPE及RPE细胞绝大多数呈棕黄色阳性反应。Desmin兔疫组化染色显示IPE细胞中阳性细胞约占5％。结论 分离培养的IPE和RPE细胞纯度很高。IPE细胞中绝大多数为后层IPE细胞。IPE和RPE细胞的形态及体外生长特点类似。     

成人虹膜色素上皮细胞的体外培养与超微结构观察

目的建立成人虹膜色素上皮(iris pigment epithelium,IPE)细胞体外分离培养方法.方法利用酶辅助显微分离-酶消化法分离成人IPE细胞后体外培养,应用免疫学方法鉴定,电镜观察超微结构.结果体外培养出成人IPE细胞,其形态呈多角形或不规则圆形,色素含量随传代次数增加而减少,角蛋白抗体免疫学染色阳性,电镜显示其具有正常的细胞器结构以及色素颗粒.结论酶辅助显微分离-酶消化法是IPE细胞分离与培养的理想方法.     

体外分离培养猪虹膜色素上皮细胞的生物学评价

目的 :培养猪的虹膜色素上皮 (IPE)细胞并进行IPE的生物学评价 ,为IPE移植治疗视网膜色素变性 (RP)打下基础。方法 :采用酶辅助的显微分离法对 5 0只猪眼进行IPE的原代和传代培养 ,免疫组化方法鉴定细胞 ,并对其生物学性状进行评价。结果 :从IPE生长曲线上看 ,细胞于接种后 2天开始进入细胞对数生长期 ,经过 3～ 4天的对数期生长后进入生长缓慢的平台期。细胞培养成功率为 85 0 %。原代细胞的贴壁率为 31 8%± 3 7% ,细胞的活力为 82 5 %± 5 1% ,传代细胞的贴壁率为 86 4 %± 4 3% ,细胞的活力为 91 2 %± 3 7%。伸展率为 83 6 %± 5 3% ,分裂时间为 2～ 7天 ,平均 3 5± 0 96天 ,总分裂次数为 6～ 10代。免疫组织化学显示 ,培养获得的IPE细胞的细胞角蛋白 (AE1/AE3)和S 10 0抗原染色均为阳性。结论 :对IPE细胞的生物学评价 ,不仅证实了IPE细胞高效纯化培养的实现 ,而且系列完整的数据为IPE移植治疗RP的相关实验提供了必要的基础保证     

兔眼虹膜色素上皮细胞体外生物学特性研究

目的观察体外培养兔眼虹膜色素上皮(irispigmentepithelium,IPE)细胞的生物学特性,为IPE移植治疗老年性黄斑变性等疾病打下基础。方法应用扫描电镜、透射电镜对所培养IPE细胞的超微结构进行观察,并通过细胞的贴壁率、伸展率、倍增时间、总分裂次数的测定以及生长曲线的绘制对其在体外生长的生物学特性进行研究。结果体外培养的IPE细胞呈多角形,细胞内有色素颗粒和丰富的细胞器,细胞表面有长短粗细不等的微绒毛,生长成为具有尖基底极性的细胞单层。IPE细胞伸展率为81.5%±3.7%;原代IPE细胞的贴壁率为32.18%±3.18%;传代培养的IPE细胞的贴壁率为86.20%±2.84%;细胞倍增时间为2～7d,平均为(3.46±2.10)d;细胞总分裂次数为6～10代。结论体外培养IPE细胞与体内生长IPE细胞有着相似的生物学特性,通过对IPE细胞体外生物学特性的研究,为进一步探索其功能和自体移植提供了必要的实验基础。     

家兔自体虹膜色素上皮移植细胞制备的研究

目的探讨自体虹膜色素上皮（iris pigment epithelium，IPE ）细胞移植时虹膜取材的较佳方法。方法在20只黑兔眼上按人眼周边虹膜切除术的步骤，分别在左眼（ A法，在12点处切取底边为4～5 mm的三角形虹膜组织1块）、右眼（B法，在11点和1点 两处切取底边为2～2.5 mm的三角形虹膜组织块2块）取材，采用酶显微解剖酶分离法对IPE 细胞进行精细的分离和培养，并用光学显微镜、电子显微镜和免疫组织化学等方法对培养的细胞进行观察和鉴定。结果A法取材的IPE细胞培养成功率为65%，B法取材的成功率为95%，经 3～4代的传代即达到移植所需的细胞数。显微镜及免疫组织化学方法观察结果显示，培养的IPE细胞基本保持了原代细胞的特性，细胞活力为85%～93%。结论B法取材的 IPE细胞培养成功率高于A法，培养的IPE细胞在传代到第3代时即可进行移植。（中华眼底病杂志，2003，19：201-268）     

兔眼虹膜色素上皮细胞的培养与鉴定

目的:体外培养和观察兔眼虹膜色素上皮细胞(IPEC),为临床和实验研究IPE细胞提供基础。方法:采用酶消化加酶辅助机械分离法分离IPE细胞,观察培养细胞的生长情况,并采用免疫荧光法对其进行鉴定。结果:原代培养的IPE细胞多数呈圆形或六边形,细胞内充满黑色颗粒。传代培养的IPE细胞呈梭形或纤维细胞样生长,细胞中的色素颗粒也逐渐减少。免疫荧光法对培养细胞进行cytokeratin染色显示IPE细胞成阳性反应,阳性率达100%。结论:采用酶消化加酶辅助机械分离法可成功地分离培养出IPE细胞。     

虹膜色素上皮细胞自体移植的研究

虹膜色素上皮 (iris pigment epithelium ,IPE)与视网膜色素上皮 (retinal pigment epithelium,RPE)都来源于神经外胚层 ,二者可能具有许多相似的功能 [1 - 4 ] 。国外进行了 IPE细胞移植的研究 ,但主要是异种或同种异体间的移植。自体 IPE细胞移植已应用于临床 ,然而 ,自体 IPE细胞移植后移植结果的组织学研究报道甚少。我们将兔的自体 IPE细胞移植到视网膜下腔并对其进行了光镜和电镜观察 ,现将结果报告如下。1　材料和方法1.1　IPE细胞的准备12只健康有色兔 (青岛大学医学院动物中心提供 ) ,摘除右眼 ,分别取其 IPE细胞单独培…     

人眼虹膜色素上皮细胞体外培养及超微结构观察

应用体外培养传代对１０例人尸眼虹膜色素上皮细胞进行观察分析。结果表明：直接刮取的细胞进行培养较酶消化法更易存活传代。原代细胞在光镜下呈多角形单层生长，胞浆内有丰富的色素颗粒，核相对透明，有１～２个核仁。传代后的细胞色素颗粒减少；电镜下见胞浆富含色素，细胞膜有明显微绒毛；免疫组化检查角蛋白抗原呈阳性反应，符合虹膜色素上皮细胞的特点。虹膜含有某些生物活性物质，因此虹膜色素上皮细胞的体外培养可作为有关研究的基础。     

人眼虹膜色素上皮细胞体外培养、冻存与复苏

目的：建立人眼虹膜色素上皮细胞体外培养并对其进行冻存与复苏。方法：直接刮取虹膜色素上皮细胞组织碎屑进行培养,光镜观察生长特性及形态特点,透射电镜观察其超微结构。根据慢冻速融的细胞冻存原则,定期收集细胞进行液氮冻存,至少2个月后进行复苏。结果：人眼虹膜色素上皮细胞体外培养成功,原代细胞在光镜下呈多角形单层生长,胞浆内有丰富的色素颗粒;电镜下见胞浆富含色素、细胞器丰富、细胞膜有明显微绒毛、微丝、相监细胞之间可见桥粒连接。共冻存6批细胞,进行4次复苏实验均成功,每镒复苏细胞存活为90％。结论：人眼虹膜色素上皮细胞体外培养的建立及冻存、复苏的成功,为研究某些疾病提供有利的基础。     

虹膜色素上皮细胞培养及移植

视网膜色素上皮细胞移植在技术上已趋完善,但免疫排斥反应的发生大大限制了移植物的长期存活。自体ＲＰＥ移植虽可避免排斥反应,但操作困难,并发症多,难以广泛应用。虹膜色素上皮细胞与ＲＰＥ具有相同的胚胎发育来源,可望替代ＲＰＥ用于自体移植。     

兔眼虹膜和视网膜色素上皮细胞移植的形态学观察

目的 比较有色兔虹膜色素上皮及视网膜色素上皮细胞在白兔视网膜下腔的生长状况。 方法 分离培养有色兔的IPE及RPE细胞。采用内路法在8只白兔16眼中进行了IPE和RPE细胞悬液的移植,其中左眼移植IPE细胞,右眼移植来自同一供体兔的RPE细胞。8只兔分别在2周(n=3)、4周(n=3)和6周(n=2)时处死。对眼球壁做光镜和电镜检查。 结果 IPE和RPE细胞在异体视网膜下腔存活,绝大多数贴附在Bruch’s膜上,并具有极性,细胞基底部有大量的皱褶,细胞顶部有一些微绒毛。6周时未见移植细胞周围有炎性细胞浸润。 结论 移植的IPE和RPE细胞可以在视网膜下腔存活,它们的形态均和原先RPE细胞类似。IPE细胞有望替代RPE细胞用于移植。     

兔眼IPE与RPE细胞膜表面K-NPPase酶组织化学的电镜图像分析

目的:为了探讨自体虹膜色素上皮细胞(IPE)能否代替视网膜色素上皮细胞(RPE)移植到视网膜下腔执行物质转运功能,对兔眼IPE与RPE细胞膜表面的Na ,K -ATPase采用K-NPPase酶组织化学技术进行定位和分析比较。方法:家兔12只,取IPE和RPE组织固定,配制孵育液后进行K-NPPase酶组化孵育,制成电镜标本,采集图像,利用Metamorph/DP10/BX51系统进行分析。随机选取IPE细胞膜以及RPE细胞顶端相邻K-NPPase颗粒两点间的距离进行测量。计算每组样本的均值±标准差(x±s),进行成组设计材料的t检验。结果:有色素组与无色素组汇总后的IPE细胞膜上K-NPPase颗粒的距离平均值40.16±1.19nm,RPE顶端微绒毛细胞膜上K-NPPase颗粒的距离平均值为41.07±1.78nm,两者之间的差异无显著性意义(0.5>P>0.2)。结论:兔眼IPE细胞膜表面与RPE细胞顶端微绒毛膜表面均有Na ,K -ATPase分布,采用K-NPPas酶组化电镜观察到的兔眼IPE细胞与RPE细胞可能具有相似的物质转运功能。     

兔眼视网膜铁锈症的实验观察

在光镜和电镜下观察了25只兔眼植入铁异物1～30天的视网膜变化。结果表明,邻近铁异物的局部视网膜2天即发生变性坏死,7～30天坏死的部分由视网膜色素上皮细胞(RPE)和胶质细胞填充,形成视网膜重度萎缩。在间接铁锈症的轻度萎缩性视网膜病变中,导致感光细胞形态学改变的重要原因,可能是RPE吞噬功能异常增高。观察了RPE转变为吞噬细胞,向玻璃体侧移行的过程。     

酶-机械分离-酶消化法分离培养兔眼虹膜色素上皮细胞

目的　建立兔眼虹膜色素上皮细胞体外培养体系。方法　采用酶 机械分离 酶消化法分离兔眼IPE细胞 ,台盼蓝染色法测定细胞活力 ,在体外对其进行原代及传代培养扩增 ,倒置相差显微镜观察IPE细胞的生长情况。取第 2次传代的IPE细胞行AE1/AE3及S 10 0抗体细胞免疫组化染色对其进行鉴定。结果　酶 机械分离 酶消化法分离得到IPE细胞的活力为 70 %～ 85 % .原代细胞 16～ 4 8h贴壁 ,72h后开始生长 ,细胞大多呈多角形或方形 ,少数为梭形 ,12～ 16d生长融合为单层细胞。第 1次传代的IPE细胞 6～ 12h贴壁 ,5～ 7d生长融合为细胞单层。IPE细胞在体外培养可传 5～ 6代。免疫组化染色显示 ,几乎所有细胞胞浆呈现棕黄色阳性反应 ,对照组胞浆不染色。结论　酶 机械分离 酶消化法分离培养兔眼IPE细胞易于操作 ,联合应用细胞角蛋白、S 10 0蛋白单克隆抗体的免疫组化技术可用来鉴定IPE细胞。     

Cultivation and Ultrastructural Investigation of Human Iris Pigment Epithelial Cells

Purpose; To study the human iris pigment epithelial cells cultivation in vitro. Methods: The iris pigment epithelial cells were isolated by scraping directly or by enzyme digestion and cultured in vitro. The cells were observed under the transmission electron microscope and analized by means of immunohistochemical assay.Results: The cells obtained by scraping were easier to grow and to be passaged than those obtained by enzyme digestion. The primary cells appeared multigonal and arranged in mono-layer. Abundant pigment granules were in the cytoplasm and diminished in succeeding generations . The maculae occludentes and desmosomes and microvilli which were characteristics of epithelial cells could be found under the electronmicroscope. The immunohistochemical assay showed positive reaction of keratin antigen in cultured cells.Conclusion: The human iris pigment epithelial cells could be cultured in vitro and the cells in primary generation some characteristics be preserved. Eye Science 1997; 13: 137 - 140     

人眼虹膜色素上皮细胞的培养与鉴定

目的：观察体外培养的人眼虹膜色素上皮细胞（iris pigment epithelium,IPE)的生长情况，用透射电镜、细胞免疫化学实验鉴定其性质，为进一步研究IPE细胞生理，病理作用提供模型。方法：对来源于不同个体的健康人眼采用酶消化加显微分离法，分离IPE细胞，对其进行培养，传代，冻存和复苏。用透射电镜，细胞免疫化学法鉴定细胞性质。建立IPE细胞的有限细胞系，结果：原代培养的IPE呈棕黑色多角形或不规则形，24h内73％细胞贴壁，贴壁体积变大呈多边形或方形，胞核轮廓变清，胞浆内充满黑色素颗粒，分裂增殖生长的细胞色素颗粒逐渐减少，4－6代后细胞内色素随着不断分裂逐渐减少至消失，部分形态变为成纤维细胞状，电镜下可见细胞表面有丰富的微绒毛，胞浆内含少量色勾颗粒，细胞免疫化学抗角蛋白与抗S－100染色显示IPE细胞胞质呈鲜红色着色，结论：采用酶消化加显微分离法可以建立人IPE的有限细胞系。