泛耐药鲍氏不动杆菌氨基糖苷类耐药相关基因研究

目的 了解泛耐药鲍氏不动杆菌(PDRAB) 16S rRNA甲基化酶、氨基糖苷类修饰酶基因及其耐药机制.方法 选择2009年1月-2010年3月ICU住院患者痰液标本,分离到20株PDRAB,采用纸片扩散法检测20种抗菌药物的敏感性;PCR法检测15种16S rRNA甲基化酶、氨基糖苷类修饰酶基因.结果 20株PDRAB 16S rRNA甲基化酶基因rmtA、rmtB、rmtC、rmtD和npmA均阴性;氨基糖苷类修饰酶aac(3)-Ⅰ基因阳性15株、aac (6′)-Ib基因阳性18株、ant(3″)-Ⅰ基因阳性19株、aph(3′)-Ⅰ基因阳性13株,armA基因阳性20株.结论 PDRAB对氨基糖苷类药物耐药的主要原因是携带aac(3)-Ⅱ、aac(6′)-Ib、ant(3″)-Ⅰ、aph(3′)-Ⅰ和ant(2″)-Ⅰ等5种氨基糖苷类修饰酶基因.     

大肠埃希菌中同时发现携带aac(6′)-Ⅰb及aac(6′)-Ⅰb-Cr氨基糖苷类修饰酶基因

目的了解大肠埃希菌(ECO)氨基糖苷类药物获得性耐药基因流行状况。方法收集2009年10月-2010年3月临床分离的MDR-ECO 20株,PCR法检测14种氨基糖苷类修饰酶基因[aac(3)-Ⅰ、aac(3)-Ⅱ、aac(3)-Ⅲ、aac(3)-Ⅳ、aac(6′)-Ⅰb、aac(6′)-Ⅱ、ant(2″)-Ⅰ、ant(3″)-Ⅰ、aadA4/5、aadA6/16、ant(4′)-Ⅰ、aph(3′)-Ⅰ、aph(3′)-Ⅱa、aph(3′)-Ⅱb]和6种16S rRNA甲基化酶基因(armA、rmtA、rmtB、rmtC、rmtD、npmA),部分PCR阳性产物进行测序,并经BLASTn比对确认。结果 14种氨基糖苷类修饰酶基因共检出aac(3)-Ⅱ、aac(6′)-Ⅰb、ant(3″)-Ⅰ、aadA5、aph(3′)-Ⅰ5种,阳性率分别为25.0%、25.0%、5.0%、65.0%和55.0%;其余9种氨基糖苷类修饰酶基因和6种16S rRNA甲基化酶基因均未检出;5株aac(6′)-Ⅰb PCR阳性产物均进行了测序,经BLASTn比对确认1株为aac(6′)-Ⅰb型,其余4株均为aac(6′)-Ⅰb-cr型。结论该组MDR-ECO氨基糖苷类药物获得性耐药与氨基糖苷类修饰酶基因密切相关,而与甲基化酶基因无关系。     

植生克雷伯菌与肺炎克雷伯菌氨基糖苷类修饰酶及16S rRNA甲基化酶基因研究

目的 分析医院克雷伯菌属的耐药性及对氨基糖苷类抗菌药物的耐药机制.方法 收集3所医院2009年10月-2011年3月分离出的20株克雷伯菌属,经鉴定确认2株为植生克雷伯菌,18株为肺炎克雷伯菌;采用K-B纸片扩散法进行药敏试验;PCR法检测8种氨基糖苷类修饰酶基因及6种16S rRNA甲基化酶基因,PCR阳性产物采用PCR直接全自动荧光法测序.结果 20株克雷伯菌属均表现对β-内酰胺类、氨基糖苷类、喹诺酮类抗菌药物的多药耐药性,耐药率均＞80.0％,植生克雷伯菌对亚胺培南和美罗培南敏感性相对良好;20株克雷伯菌属8种氨基糖苷类修饰酶基因检出aac(3)-Ⅱ、aac(6″)-Ⅰ b群、ant(3″)-Ⅰ和aph(3′)-Ⅰ等4种,阳性率分别为65.0％、70.0％、75.0％及45.0％;6种16S rRNA甲基化酶基因检测无阳性发现.结论 克雷伯菌属对氨基糖苷类耐药与产氨基糖苷类修饰酶相关.     

多药耐药鲍氏不动杆菌中氨基糖苷类修饰酶基因的分析研究

目的调查多药耐药鲍氏不动杆菌(MDRAB)中氨基糖苷类修饰酶基因和16SrRNA甲基化酶基因的存在情况。方法收集张家港市第一医院2008年3-11月住院患者标本中分离的多药耐药鲍氏不动杆菌共20株,采用聚合酶链反应(PCR)的方法分析9种氨基糖苷类修饰酶基因和2种16SrRNA甲基化酶基因。结果 20株多耐药鲍氏不动杆菌检出5种氨基糖苷类修饰酶基因:aac(3)-Ⅰ、aac(3)-Ⅱ、aac(6′)-Ⅰb、ant(3″)-Ⅰ、aph(3′-)Ⅰ,其余氨基糖苷类修饰酶基因和16SrRNA甲基化酶基因均未检出。结论多药耐药鲍氏不动杆菌氨基糖苷类耐药主要与产氨基糖苷类修饰酶相关,其中aac(3)-Ⅰ、aac(6′)-Ⅰb、ant(3″)-Ⅰ、aph(3′)-Ⅰ4种基因已在MDRAB中流行。     

铜绿假单胞菌临床分离株新型氨基糖苷类修饰酶基因分析

目的了解铜绿假单胞菌临床分离株对氨基糖苷类药物耐药的遗传学背景。方法收集2018年3月-2019年5月浙江省宁波与杭州两个地区6所医院的耐药铜绿假单胞菌98株(非重复株),采用琼脂稀释法测定其对13种抗菌药物的最低抑菌浓度(MIC);聚合酶链反应检测14种氨基糖苷类修饰酶基因和10种16S rRNA甲基化酶基因;比较宁波与杭州地区分离株耐药率和耐药基因携带率。结果 98株铜绿假单胞菌对阿米卡星、妥布霉素和庆大霉素3种氨基糖苷类药物耐药率均30%,对其余10种抗菌药物的耐药率高达60.20%～94.90%。宁波分离株对3种氨基糖苷类药物的耐药率均高于杭州分离株。98株菌共检出5种氨基糖苷类修饰酶基因:ant(3″)-Ⅰ(13/98,13.27%)、ant(2″)-Ⅰ(11/98,11.22%)、aac(6′)-Ⅰb (7/98,7.14%)、aph(3′)-ⅩⅤ(4/98,4.08%)、aac(6′)-Ⅱ(3/98,3.06%),和1种16S rRNA甲基化酶基因:rmtB(10/98,10.20%)。宁波分离株氨基糖苷类耐药基因ant(2″)-Ⅰ、ant(3″)-Ⅰ、aph(3′)-ⅩⅤ和rmtB检出率高于杭州分离株。25株菌检出氨基糖苷类耐药基因(25/98,25.51%),其中15株携带2种及以上耐药基因,10株携带1种耐药基因。10株检出16S rRNA甲基化酶基因rmtB的菌株对氨基糖苷类药物的MIC均≥256μg/ml。耐药基因携带模式共有6种,与氨基糖苷类药物耐药表型相符。结论携带ant(3″)-Ⅰ、ant(2″)-Ⅰ、aac(6′)-Ⅰb、aph(3′)-ⅩⅤ、aac(6′)-Ⅱ、rmtB基因是本组铜绿假单胞菌对氨基糖苷类药物耐药的主要原因。     

多药耐药肺炎克雷伯菌氨基糖苷类修饰酶与16S rRNA甲基化酶基因研究

目的 研究多药耐药肺炎克雷伯菌(MDRKP)氨基糖苷类药物耐药的遗传学背景.方法 收集2008年8月-2010年5月6所医院共47株肺炎克雷伯菌,采用聚合酶链反应(PCR)的方法分析15种氨基糖苷类修饰酶和6种16S rRNA甲基化酶基因.结果 该组肺炎克雷伯菌共检出4种氨基糖苷类修饰酶和1种16S rRNA甲基化酶基因,可分为16种阳性检出模式,并发现两株菌携带aac(6′)-Ⅰ b基因新亚型[aac(6′)-Ⅰ b-hz,美国GenBank登录号:JF901756];其他16种基因未检出.结论 携带氨基糖苷类修饰酶和16S rRNA甲基化酶基因,是该组肺炎克雷伯菌对氨基糖苷类药物耐药的主要原因,在多药耐药肺炎克雷伯菌中发现aac(6′)-Ⅰ b新亚型[aac(6′)-Ⅰ′ b-hz]为国内外首次报道.     

肺炎克雷伯菌氨基糖苷类药物耐药相关基因检测

目的:了解肺炎克雷伯菌氨基糖苷类修饰酶基因的存在状况。方法:自2006年1月-2006年10月住院病人标本中分离并筛选出20株多重耐药肺炎克雷伯菌,微量肉汤稀释法检测20种抗菌药物的敏感性;PCR法检测氨基糖苷类修饰酶基因。结果:20株多重耐药肺炎克雷伯菌1氨基糖苷类修饰酶aac(3)-Ⅱ基因阳性15株、aac(6)′-Ib基因阳性1株、ant(3)″-Ⅰ基因阳性16株、aph(3)′-Ⅰ基因阳性3株,ant(2)″-Ⅰ基因阳性1株。结论:肺炎克雷伯菌对氨基糖苷类药物耐药的主要原因是aac(3)-Ⅱ、aac(6)′-Ib、ant(3)″-Ⅰ、aph(3)′-Ⅰ和ant(2)″-Ⅰ5种氨基糖苷类修饰酶基因的存在。     

泛耐铜绿假单胞菌氨基糖苷类药物产酶耐药机制的研究

目的:了解我院临床分离泛耐铜绿假单胞菌(PDRPA)16S rRNA甲基化酶基因、氨基糖苷类药物修饰酶基因存在状况,探讨PDRPA氨基糖苷类耐药机制。方法:GNS-448药敏卡及K-B法测定抗菌药物的敏感性,聚合酶链反应(PCR)检测氨基糖苷类修饰酶基因、16S rRNA甲基化酶基因。结果:22株PDRPA对20种常用抗菌药物耐药,16S rRNA甲基化酶rmtB阳性1株(4.5%);氨基糖苷类修饰酶aac(6′)-Ⅰb阳性4株(18.2%),ant(3″)-Ⅰ阳性12株(54.5%),ant(2″)-Ⅰ阳性8株(36.4%),其他基因均阴性。共18株检出氨基糖苷类修饰酶基因。结论:PDRPA氨基糖苷类耐药为多重耐药机制,我院PDRPA氨基糖苷类耐药机制主要与氨基糖苷类修饰酶基因相关。     

多药耐药鲍氏不动杆菌氨基糖苷类耐药相关基因研究

目的 检测分析鲍氏不动杆菌的耐药性、全面了解多药耐药鲍氏不动杆菌氨基糖苷类耐药机制.方法 药敏试验为K-B法、基因检测采用PCR法对20株多药耐药鲍氏不动杆菌(MDRAB)进行了7种氨基糖苷类修饰酶和2种16S rRNA甲基化酶基因检测.结果 20株鲍氏不动杆菌耐药率除亚胺培南外,对其余药物的耐药率均＞95.0％,共有aac(3)-Ⅰ、aac(6′)-Ⅰ b、ant(3″)-Ⅰ、aph(3′)-Ⅰ 4种氨基糖苷类修饰酶基因阳性,阳性率分别为75.0％、90.0％、95.0％、65.0％,并检出armA 16S rRNA甲基化酶基因,阳性率为55.5％.结论 该组MDRAB多种氨基糖苷类药物耐药与同时存在产氨基糖苷类修饰酶、产16S rRNA甲基化酶有关.     

多药耐药铜绿假单胞菌氨基糖苷类耐药相关基因研究

目的研究临床分离的多药耐药铜绿假单胞菌(MDR-PEA)常见氨基糖苷类修饰酶及甲基化酶基因的存在状况。方法收集2009年2月-2010年4月从医院住院患者分离出来的MDR-PAE20株,采用聚合酶链反应(PCR)及序列分析的方法分析对6种甲基化酶及8种氨基糖苷类修饰酶基因进行检测及测序。结果 20株MDR-PAE中,甲基化酶基因rmtB阳性率为15.0%;氨基糖苷类修饰酶基因aac(3)-Ⅱ、aac(6′)-Ⅰb、aac(6′)-Ⅱ、ant(3″)-Ⅰ、ant(2″)-Ⅰ的阳性率分别为40.0%、10.0%、20.0%、15.0%、10.0%,未检出aac(3)-Ⅰ、ant(4′)-Ⅰ及aph(3′)-Ⅱb。结论产氨基糖苷类修饰酶是MDR-PAE对氨基糖苷类药物耐药的主要机制,非产氨基糖苷类修饰酶MDR-PAE株对氨基糖苷类药物耐药可能与其他机制有关。     

肺炎克雷伯菌16S rRNA甲基化酶耐药基因研究

目的了解肺炎克雷伯菌对氨基糖苷类抗生素的敏感性及16S rRNA甲基化酶检出情况。方法收集中南大学湘雅医院2009年1-7月非重复肺炎克雷伯菌96株,采用琼脂稀释法对庆大霉素、阿米卡星、妥布霉素的最低抑菌浓度（MIC）进行检测;聚合酶链反应（PCR）扩增16S rRNA甲基化酶基因armA、rmtA、rmtB、rmtC、rmtD和npmA。结果肺炎克雷伯菌对阿米卡星、庆大霉素及妥布霉素的MIC50分别为256 μg/mL、512 μg/mL和512 μg/mL;MIC90均为＞512 μg/mL;耐药率分别为21.88%、63.54%、41.67%。68株（70.83%）菌至少对1种药物耐药,21株（21.88%）菌对3种药物均耐药。22株（22.92%）菌armA基因扩增阳性,未扩增到rmtA、rmtB、rmtC、rmtD和npmA基因;22株armA阳性菌株中,17株（77.27%）对3种氨基糖苷类抗生素均耐药。armA阳性株与armA（FJ410928.1）基因序列同源性为100%。结论携带armA型16S rRNA甲基化酶基因是肺炎克雷伯菌对氨基糖苷类药物高水平耐药的主要机制之一。     

多药耐药铜绿假单胞菌16S rRNA甲基化酶、氨基糖苷类修饰酶基因研究

目的 研究铜绿假单胞菌连续分离株的16S rRNA甲基化酶及氨基糖苷类修饰基因的分布状况.方法 以K-B法检测铜绿假单胞菌对17种抗菌药物的耐药性;以PCR法检测20株铜绿假单胞菌16S rRNA甲基化酶及氨基糖苷类修饰酶基因;以PCR直接全自动荧光法进行阳性基因测序.结果 20株铜绿假单胞菌检出1种16S rRNA甲基化酶基因(rmtB);检出5种氨基糖苷类修饰酶基因,分别为:aac(3)-Ⅱ、aac(6')-Ⅰ b、aac(6')-Ⅱ、ant(3")-Ⅰ、ant(2")-Ⅰ;1号株和3号株进行甲基化rmtB基因测序,将测得序列翻译成氨基酸序列与美国核酸库已登录的rmtB氨基酸序列比较,均存在氨基酸序列差别,因此均可确认为新亚型.结论 医院铜绿假单胞菌氨基糖苷类抗菌药物耐药主要与16S rRNA甲基化酶编码基因rmtB及5种氨基糖苷类修饰基因有关,并发现两种铜绿假单胞菌16S rRNA甲基化酶编码基因rmtB新亚型.     

肺炎克雷伯菌临床分离株中出现16S rRNA甲基化酶基因rmtB

目的 了解临床分离肺炎克雷伯菌中16S rRNA甲基化酶基因、氨基糖苷类修饰酶(AMEs)基因存在状况及其遗传学背景.方法 在2005年9月至2006年4月间从住院患者中分离25株肺炎克雷伯菌,采用聚合酶链反应及序列分析的方法分析6种16S rRNA甲基化酶基因(armA、rmtA、rmtB、rmtC、rmtD和npmA)、6种AMEs基因[aac(3)-Ⅰ、aac(3)-Ⅱ、aac(6')-Ⅰ、aac(6')-Ⅱ、ant(3")-Ⅰ、ant(2")-Ⅰ]、3类整合子(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ类)遗传标记整合酶基因(intI1、intI2、intI3)、汞离子还原酶基因merA(为转座子Tn21和Tn501共同的遗传标记)、tnpA基凶(为转座子Tn1、Tn2、Tn3和Tn1000共同的遗传标记).结果 25株中,有5种基因rmtB、aac(3)-Ⅱ、aac(6')-Ⅰ、ant(3")-Ⅰ、intI1阳性,阳性株数(%)分别为15株(60.0%)、1株(4.0%)、12株(48.0%)、15株(60.0%)、24株(96.0%),其余12种基因均阴性;6种AMEs基因总阳性率为84.0%(21/25).结论临床分离的肺炎克雷伯菌中rmtB基因和AMEs基因阳性率均较高,在肺炎克雷伯菌中检出rmtB基因为中国大陆地区首次报道.     

多药耐药鲍氏不动杆菌氨基糖苷类耐药相关基因研究

目的调查多药耐药鲍氏不动杆菌氨基糖苷类修饰酶基因(AMEs)、16S rRNA甲基化酶基因和抗菌药物外排泵基因adeB的存在情况。方法收集2008年1-12月医院住院患者痰标本中分离的多药耐药鲍氏不动杆菌共20株,采用聚合酶链反应(PCR)及序列分析的方法分析9种AMEs基因、2种16S rRNA甲基化酶基因和抗菌药物外排泵基因adeB。结果 20株鲍氏不动杆菌共检出4种AMEs基因:aac(3)-Ⅰ11株为55.0%、aac(6′)-Ⅰb 12株为60.0%、ant(3″)-Ⅰ15株为75.0%、aph(3′)-Ⅰ15株为75.0%,抗菌药物外排泵基因adeB 17株为85.0%,其余7种基因未检出。结论 20株多药耐药鲍氏不动杆菌菌株检出的4种氨基糖苷类修饰酶基因阳性率较高,2种16S rRNA甲基化酶基因未检出,抗菌药物外排泵基因adeB阳性率高;在氨基糖苷类耐药株中抗菌药物外排泵基因adeB检出率高。     

泛耐药鲍氏不动杆菌中发现氨基糖苷类修饰酶aphA1基因新的变异型

目的调查泛耐药鲍氏不动杆菌(PDRAB)临床分离菌株中氨基糖苷类修饰酶基因和16SrRNA甲基化酶基因的存在情况。方法收集2010年3-5月临床标本中分离的PDRAB 20株,采用微量肉汤稀释法进行抗菌药物敏感性试验,聚合酶链反应(PCR)方法分析9种氨基糖苷类修饰酶基因和6种16SrRNA甲基化酶基因。结果 20株PDRAB均检出aac(6′)-Ⅰb、ant(2″)-Ⅰ、ant(3″)-Ⅰ和aphA1,其余5种氨基糖苷类修饰酶基因和6种16SrRNA甲基化酶基因均未检出;鲍氏不动杆菌WA2859磷酸转移酶aphA1基因经测序为新的变异型。结论 20株PDRAB耐多种氨基糖苷类药物与细菌产aac(6′)-Ⅰb、ant(2″)-Ⅰ、ant(3″)-Ⅰ和aphA1等4种氨基糖苷类修饰酶相关;发现磷酸转移酶aphA1新的变异型为国内首次报道。     

铜绿假单胞菌氨基糖苷类获得性耐药基因研究

目的 研究临床分离铜绿假单胞菌(PAE)氨基糖苷类修饰酶基因及16S rRNA甲基化酶基因的存在状况.方法 对分离自贵阳地区(A组)及江苏苏南地区(B组)的各20株PAE,用纸片扩散法测定其对19种抗菌药物的敏感性,采用聚合酶链反应法,检测9种氨基糖苷类修饰酶基因及6种16S rRNA甲基化酶基因;对阳性基因进行测序,测序结果进行Blast分析.结果 两组PAE均对β-内酰胺类、氨基糖苷类、喹诺酮类抗菌药物多药耐药,A组PAE检出aac(6′)-Ⅰb、aac(6′)-Ⅱ、ant(3″)-Ⅰ、rmtB等4种基因,阳性率分别为10.0％、10.0％、10.0％、5.0％;B组PAE检出aac(3)-Ⅱ、aac(6′)-Ⅰb、aac(6′)-Ⅱ、ant(3″)-Ⅰ、ant(2″)-Ⅰ、rmtB等6种基因,阳性率分别为60.0％、35.0％、60.0％、50.0％、45.0％、55.0％.结论 贵阳地区及江苏苏南地区PAE对氨基糖苷类药物的耐药性与携带氨基糖苷类修饰酶基因及16S rRNA甲基化酶基因相关.     

16S rRNA methylase-producing, gram-negative pathogens, Japan

To investigate the exact isolation frequency of 16S rRNA methylase-producing, gram-negative pathogenic bacteria, we tested 87,626 clinical isolates from 169 hospitals. Twenty-six strains from 16 hospitals harbored 16S rRNA methylase genes, which suggests sparse but diffuse spread of pan-aminoglycoside-resistant microbes in Japan.     

铜绿假单胞菌耐药性与16S rRNA甲基化酶表达分析

目的了解医院铜绿假单胞菌(PAE)中16S rRNA甲基化酶表达情况及与耐药关系。方法用K-B纸片法进行药敏试验,采用聚合酶链反应(PCR)扩增68株铜绿假单胞菌16S rRNA甲基化酶armA、rmtA、rmtB、rmtC、rmtD和npmA基因。结果 68株铜绿假单胞菌对阿米卡星、庆大霉素、头孢他啶及磺胺甲噁唑/甲氧苄啶的耐药率分别为51.5%、67.6%、63.2%和78.0%,呈高水平耐药,而对链霉素仍具有一定的敏感性,armA、rmtB和rmtC的检出率分别为5.9%、29.4%及2.9%,未检出rmtA、rmtD和npmA基因,其中16S rRNA甲基化酶阳性株对阿米卡星和庆大霉素的耐药达到100.0%。结论铜绿假单胞菌多药耐药可能与16S rRNA甲基化酶表达情况有关,在PAE 16S rRNA甲基化酶中检出rmtC基因,加强对耐药菌株的检测,严格按药敏结果用药及通过交替换药等方式有助于减少或延缓PAE耐药菌株的传播与流行。