肿瘤多药耐药与癌基因的关系

近年来肿瘤耐药的机制主要集中在以下几个方面 :多药耐药基因 (multidrugresistancegene,mdr 1 )及其表达的P 糖蛋白 (P glycoprotein ,P gp)增强 ;多药耐药相关蛋白 (multidrugresistance asssociatedprotein ,MRP)表达增强 ;谷胱甘肽 S转移酶 (glutathioneS transferase,GST)表达增强 ;DNA拓扑异构酶表达下降 ;某些癌基因的活化 ;抗凋亡能力增强等等     

人肝癌多药耐药细胞系BEL-7402/ADM的建立及耐药相关基因表达检测

目的：建立人肝癌多药耐药细胞系,研究其耐药特性及机制。 方法：应用人肝癌细胞株BEL-7402,采用阿霉素（ADM）大剂量间歇诱导法,建立多药耐药细胞系BEL-7402/ADM。相差显微镜观察细胞,用MTT法检测该耐药细胞株对多种化疗药物的多药耐药性,采用流式细胞术检测该耐药细胞表面多药耐药基因(MDR)的表达产物P糖蛋白(P-gp)、多药耐药相关蛋白(MRP)及谷胱甘肽硫转移系统(GSH／GST)的表达情况,应用RT-PCR检测MDR、MRP基因表达水平。 结果：BEL-7402/ADM对多种抗癌药物产生耐药,对ADM的耐药性(半数抑制浓度,IC₅₀)提高了17.31倍。流式细胞仪分析发现（65.5±5.8）%的BEL-7402/ADM细胞表面P-gp 表达阳性,而对照细胞BEL-7402表达仅为（31.3±4.3）%;（32.4±3.5）%的BEL-7402/ADM细胞表面MRP表达阳性,而对照细胞BEL-7402表达仅为（23.4±3.1）%,二者差异有显著性(P<0.01);BEL-7402/ADM和BEL-7402细胞的GSH／GST表达无明显变化（P>0.05）。RT-PCR检测发现BEL-7402/ADM中MDR及MRP mRNA高表达。 结论：BEL-7402/ADM具有明确的多药耐药性,其多药耐药相关基因MDR及MRP mRNA表达升高。     

人肝癌裸鼠移植模型阿霉素诱导法建立肝癌多药耐药细胞系

目的:建立人肝癌多药耐药细胞系研究其耐药特性及机制.方法:给予移植人肝癌细胞的裸小鼠腹腔注射阿霉素(ADM)长期诱导,获得多药耐药细胞系BEL-7402/ADM.相差显微镜和HE染色观察细胞,MTT法检测耐药细胞的多药耐药性,流式细胞术检测耐药细胞表面多药耐药基因(mdr)的表达产物P糖蛋白(P-gp)、多药耐药相关蛋白(MRP)及谷胱甘肽硫转移系统(GSH/GST)的表达.结果:BEL-7402/ADM对多种抗癌药物产生耐药,对阿霉素的耐药性提高了20.33倍.BEL-7402/ADM细胞表面P-gp和MRP表达阳性,与对照细胞BEL-7402表达比较,差异十分显著(P<0.01).GSH/GST表达无明显变化.结论:BEL-7402/ADM具有明确的多药耐药性,该模型的建立对研究肝癌多药耐药的产生及逆转具有重要价值.     

乳腺癌组织中耐药相关基因表达的研究

【目的】探讨乳腺癌组织中胎盘型谷胱甘肽转移酶(GST-π)、多药耐药相关蛋白(MRP)、肺耐药蛋白(LRP)及P-糖蛋白(P-gp)4种耐药相关基因的表达情况，分析它们之间及它们与雌激素(ER)、孕激素(PR)、原癌基因C-erbB2、P53蛋白、肿瘤转移之间的相关性。【方法】收集了103例临床病理确诊为乳腺癌的癌组织标本，患者术前均未经过化疗。采用免疫组织化学方法检测GST-π、MRP、LRP及P-gP的表达情况，与同时检测的ER、PR、c-erhB2、P53等与乳腺癌预后有关的因素进行相关性分析，并将病例按有无淋巴结转移分成2组，分别对2组的GST-π、MRP、LRP、P-gP的表达进行卡方检验。【结果】4种耐药相关基因在乳腺癌组织中均有表达，其阳性率分别为GST-π56．3％、MRP16．7％、LRP72．8％、P-gp57．1％，均以低量表达为主(阳性细胞数小于25％)，有、无淋巴结转移2组之间4种耐药相关基因的表达差异均无显著性。仅GST-π表达与C-erbB2、LRP之间及LRP表达与C-erbB2之间存在正相关关系，相关系数分别为r=0．323，r=0．244，r=0．231，其他指标相互间无相关性。【结论】乳腺癌组织的原发多药耐药主要与GST-π、LRP及P-gp的表达有关，化疗前这几种耐药相关基因表达的检测可为化疗药物的选择及预后判断提供参考依据。     

耐药相关基因在胃癌组织中的表达及其临床意义

目的 :探讨耐药相关基因P糖蛋白 (P gp)、拓扑异构酶Ⅱ (TOPOⅡ )、谷胱甘肽 S 转移酶 (GST π)在胃癌组织中的表达及其临床意义。方法 :应用免疫组化检测 90例术前未使用过化疗、放疗及免疫治疗的胃癌组织中的P gp、TOPOⅡ和GST π的表达。结果 :P gp、TOPOⅡ、GST π在胃癌组织中的表达分别为 82 .2 %(74/ 90 )、78.9% (71/ 90 )、87.8% (79/ 90 ) ;P gp和GST π的表达与胃癌的分化程度 ,浸润深度和淋巴结转移差异均无显著性 (P >0 .0 5 )。TOPOⅡ表达与胃癌的组织学类型差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ,与胃癌的浸润深度和淋巴结转移差异均无显著性 (P >0 .0 5 )。各耐药相关基因之间的共同表达无明显的相关性 (P >0 .0 5 )。结论 :P gp和GST π的阳性表达可否作为胃癌病人的预后判断指标尚不能明确 ,TOPOⅡ阳性表达的高低可以作为胃癌预后的一个指标。各耐药相关基因的检测有利于指导化疗用药。     

耐药人肝癌细胞模型-7721/Adm的建立

目的　培养建立耐药肝癌细胞模型 - 772 1/ Adm并研究其生物学特性 .方法　应用人肝癌细胞株 - 772 1(以下简称772 1细胞 ) ,采用阿霉素 (Adm )大剂量间歇诱导法 ,建立耐药人肝癌细胞模型 - 772 1/ Adm (以下简称 772 1/ Adm ) .观察该细胞的生长规律 ;用 MTT法鉴定该耐药细胞模型对多种抗癌药物的多药耐药性 ;以流式细胞技术检测该耐药细胞模型细胞周期分布、细胞表面多药耐药基因 (MDR)的表达产物 - P-蛋白 (P- gp)、多药耐药相关蛋白 MRP及谷胱甘肽硫转移系统(GSH/ GST)的表达等 .结果　 1经 MTT法鉴定 772 1/ Adm细胞较 HCC- 772 1细胞的阿霉素半数致死浓度 (IC5 0 )增大4.6 5倍 ,并对多种抗癌药物产生耐药性 ,其耐药性提高了 2～6倍不等 ;2耐药细胞倍增时间明显延长 ,S期细胞减少 ,而G2期细胞增多 ;3该耐药模型 P- gp,MRP表达有非常显著的升高 (P<0 .0 1) :P- gp表达为 94.6 % ,MRP表达为 6 9.4% ,而 GSH/ GST的表达无明显变化 (P<0 .0 5 ) .结论　 1HCC-772 1/ Adm是一个明确的多药耐药细胞模型 ;2 772 1/ Adm细胞具有耐药细胞的基本生物学特性     

siRNA逆转乳腺癌多药耐药的研究

目的研究siRNA(small interfering RNA)对乳腺癌多药耐药性的逆转作用。方法设计针对MRP基因的siRNA,转染乳腺癌MCF-7/adr细胞,用实时荧光定量PCR分析MRP mRNA的表达;流式细胞仪检测MRP蛋白表达和细胞内柔红霉素积累量。结果该siRNA能使耐药细胞株MCF-7/adr中MRP基因的mRNA及蛋白表达水平分别下调(58.16±1.36)%、(51.87±1.90)%(P<0.05),细胞内柔红霉素积累量显著增加(P<0.01)。结论siRNA可逆转乳腺癌的多药耐药。     

乳腺癌组织中多药耐药基因产物的表达及其相互关系

目的　探讨多药耐药 (MDR)基因产物在乳腺癌组织中的表达及其相互关系。方法　应用免疫组织化学方法 ,检测6 9例乳腺癌组织中MDR基因产物 (P gp、GST π、TOPOⅡ )。结果　乳腺癌组织中以P gp和GST π表达为主 ,其表达率分别为88 4 1%和 79 71% ,二者均明显高于TOPOⅡ表达率 5 7 97% (P <0 0 1) ;2种MDR基因产物共表达率为 33 33% ,3种MDR基因产物共表达率为 5 5 0 7% ,均明显高于单独表达率 11 5 9% (P <0 0 1) ;GST π和TOPOⅡ的表达均同时伴有P gp的表达 ,在P gp为阴性情况下 ,没有发现GST π和TOPOⅡ的单独表达和共表达现象。P gp和GST π的表达呈显著正相关 (P <0 0 1) ;P gp和TOPOⅡ的表达呈明显负相关 (P <0 0 5 ) ;GST π和TOPOⅡ的表达呈明显负相关 (P <0 0 5 )。结论　P gp、GST π、TOPOⅡ在乳腺癌组织中表达对肿瘤耐药起重要作用 ,单基因和多基因协同作用 ,以多基因共表达为主。     

TopoⅡ与膀胱癌多药耐药性关系的实验研究

目的 探讨DNA拓扑异构酶Ⅱ（Topo Ⅱ）与膀胱癌多药耐药性（MDR）的关系。方法 应用逆转录聚合酶链式反应（RT－PCR）和免疫细胞化学技术，分别对人膀胱癌耐药细胞株（BIU－87／ADM）及敏感细胞株（BIU－87）中TopoⅡ基因及其产物的表达进行研究。结果 BIU－87／ADM细胞中TopoⅡ基因表达呈弱阳性，BIU－87细胞中呈强阳性。结论 TopoⅡ基因在人膀光癌耐药细胞中表达的降低。与人膀胱癌多药耐药的产生有关。     

Stat3磷酸化与c-fos和c-jun蛋白表达在肝细胞癌发生中的作用

利用SP免疫组织化学技术检测 5 5例肝细胞癌 (HCC)及其癌旁组织中p Stat3(Tyr70 5 ) ,c fos和c jun蛋白的表达。结果显示 :HCC中p Stat3,c fos和c jun蛋白阳性率和阳性强度均高于癌旁组织 (P <0 .0 1) ,且p Stat3与c fos和c jun蛋白表达强度均呈明显正相关 ,而在癌旁组织中p Stat3仅与c jun蛋白表达相关 ,提示Stat3蛋白的磷酸化可能是HCC发生的早期事件 ,并通过激活c jun和c fos基因使肝细胞恶性转化 ;癌旁肝组织中 ,p Stat3,c jun或c fos呈阳性表达的肝细胞可能是一种具有恶性潜能的癌前细胞群。     

生存蛋白在胃癌中的表达及与p53、c-erbB2表达的关系

目的　研究人胃癌组织中凋亡抑制蛋白 (IAP)家族的生存蛋白 (survivin)的表达与临床病理及与 p5 3和c erbB2表达的关系。方法　采用免疫组化的方法检测 5 6例胃癌患者肿瘤组织及 2 0例慢性胃炎患者胃粘膜中survivin和 p5 3、c erbB2的表达。结果　 2 0例慢性胃炎患者胃粘膜中survivin的表达阳性 1例 ,阳性率为 5 % ;5 6例胃癌组织中survivin阳性 2 7例 ,阳性率 4 8.2 % ;5 6例胃癌患者c erbB2阳性率 35 .7% (2 0 / 5 6 ) ,p5 3阳性率39.3% (2 2 / 5 6 )。survivin表达与患者年龄、肿瘤浸润深度、淋巴结转移、临床分级等无明显相关性 ,而与肿瘤Lauren组织分型相关。survivin阳性率在肠型胃癌 (2 0 / 32 ,6 2 .5 % )中显著高于弥漫型 (7/ 2 4 ,2 9.2 % ,P <0 .0 5 )。survivin在c erbB2阳性和阴性患者中阳性率分别为 80 % (16 / 2 0 )和 30 .6 % (11/ 36 ) ,两者间有显著差异 (P <0 .0 1) ;survivin在 p5 3阳性和阴性患者中阳性率分别为 6 8.2 % (15 / 2 2 )和 35 .3% (12 / 34) ,两者比较也有显著差异 (P <0 .0 5 )。结论　胃癌患者survivin高表达导致的凋亡抑制在胃癌的发生发展中起了重要作用 ,survivin表达与胃癌中 p5 3和c erbB2异常表达相关。     

肥大细胞浸润及原癌基因c-fos在下肢静脉曲张中的意义

目的 :观测下肢静脉曲张与肥大细胞浸润及原癌基因c fos表达的关系 ,探索下肢静脉曲张的发病机理。方法 :采用甲苯胺蓝染色及免疫组织化学染色方法对下肢静脉曲张患者的曲张段静脉 2 0例及非曲张段静脉 2 0例标本中的肥大细胞 (MC)数及原癌基因c fos表达分别进行检测。结果 :曲张静脉组的肥大细胞数为(1 4 95± 6 0 8)个 /HP ,明显高于对照组的 (4 9± 2 0 2 )个 /HP ,P <0 0 1。曲张静脉组的c fos阳性血管平滑肌细胞(VSMC)百分率 (75 1± 7 98) %明显高于对照组的 (2 4 2 5± 9 6 1 ) % ,P <0 0 5。下肢静脉曲张静脉壁中的c fos阳性血管平滑肌细胞百分率与肥大细胞数呈直线正相关 ,相关系数r =0 895 7,P <0 0 1。结论 :肥大细胞的浸润及原癌基因c fos的表达在下肢静脉曲张的发生中起作用 ,可能是MC释放各种介质激活VSMC中c fos表达 ,进而促使VSMC表型转变、增殖和迁移 ,从而导致静脉壁发生改变而引起下肢静脉曲张     

癌基因c-fOS和c-jun在肝细胞型肝癌中的表达及临床意义

目的:研究癌基因c-fos和c-jun在肝细胞型肝癌中的表达及临床意义.方法:采用免疫组化技术检测10例正常肝组织、23例癌旁异型增生肝组织和31例肝细胞型肝癌组织的癌基因c-fos和c-jun表达,并对两者相关性进行分析.结果:在正常组织中c-fos和c-jun弱表达或不表达;在癌旁异型增生肝组织中c-fos和c-jun的阳性例数分别为15(65.2%)和14(60.9%),染色强度与正常肝组织相比差异有显著性(P＜0.05);在肝细胞型肝癌中c-fos和c-jun阳性例数分别为17(54.8%)和16(51.9%).c-fos和c-jun表达水平与癌组织分化程度有关(P＜0.05),而且二种癌基因在肝细胞型肝癌中表达的协同性较强.结论:c-fos和c-jun癌基因的异常表达可能在肝细胞型肝癌的发生发展中起重要作用;c-fos和c-jun表达水平与肝细胞型肝癌的分化程度有关,可作为判定肝细胞型肝癌恶性程度的重要指标之一.     

食管鳞癌癌变过程中c—myc蛋白表达的研究

目的探讨食管鳞癌癌变过程c-myc蛋白的表达情况。方法采用SABC免疫组化法,检测45例食管鳞癌组织、癌旁粘膜及切缘正常粘膜上皮的c-myc表达情况。结果不典型增生、原位癌、浸润癌c-myc蛋白表达水平较高,阳性率分别为62.1%,90.0%及82.2%。癌组织中c-myc表达与分化程度无关(P>0.05）,而与淋巴结转移有关(P>0.05）。结论c-myc高表达在食管鳞癌的发生及发展中起一定作用。     

肥厚性瘢痕组织中VEGF、ICAM-1、c-fos表达的变化

目的 检测与血管内皮细胞激活及增生相关的血管内皮生长因子（VEGF）、细胞间粘附分子－1（ICAM－1），以及c-fos原癌基因在肥厚性瘢痕组织中的表达。方法 采用免疫组化SP方法，比较VEGF、ICAM－1、c-fos在肥厚性瘢痕、正常瘢痕、正常皮肤组织中的表达。结果 VEGF、ICAM－1、c-fos在肥厚性瘢痕中表达皆增强。VEGF、c-fos主要表达在表皮、真皮血管、皮肤附属器；ICAM－1主要表达在真皮浅层血管、浸润的炎细胞、成纤维细胞。结论 肥厚性瘢痕组织中血管内皮细胞处于一种激活状态，肥厚性瘢痕组织内皮细胞和成纤维增殖异常。     

miR29c在鼻咽癌患者血清中的表达及临床意义

目的 探讨微小R29c(miR29c)在鼻咽癌患者和正常人血清中的表达及临床意义.方法 采用基于polyA加尾的荧光定量RT-PCR技术检测24例鼻咽癌患者和24例正常人血清中miR29c的表达.结果 鼻咽癌患者血清中miR29c的表达量明显低于正常人(P<0.05);有淋巴结转移的鼻咽癌患者血清中miR29c的表达量...     

氯化镉诱导细胞c-fos和c-jun原癌基因转录表达

目的 探讨镉化物的分子致癌机理。方法 应用差异RT－PCR技术对氯化镉（CdCl2)诱导BALB／c-3T3细胞原癌基因c-fos和c-jun进行研究。结果 氯化镉在5－40μmol/L浓度范围内可诱导细胞原癌基因c-fos转录表达，与对照组比较，其差异有高度显著性。经与β-actin标准化后，氯化镉染毒浓度与c-fos表达水平之间存在明显的剂量反应关系。同样，氯化镉在20－40μmol/ml浓度范围内可致另一种细胞原癌基因c-jun高表达。结论 本研究结果提示，原癌基因c-fos和c-jun的超额表达与氯化镉的分子毒作用密切相关。这些结果可部分解释镉化合物的细胞转化作用及其可能的致癌机理。     

胰岛素对血管平滑肌细胞增殖及原癌基因c－fos，c－myc异常表达的实验研究

我们观察了不同浓度的胰岛素对体外培养人血管平滑肌细胞增殖的影响，及其该过程中原癌基因ｃ－ｆｏｓ，ｃ－ｍｙｃ的表达。结果表明，胰岛素能促进血管平滑肌细胞（ＳＭＣ）增殖，即：ＳＭＣ数目的增多，ＳＭＣＤＮＡ的合成；胰岛素能促进原癌基因ｃ－ｆｏｓ和ｃ－ｍｙｃ的异常表达；且以上作用均存在着剂量－效应关系。这些结果提示，高胰岛素血症促进动脉粥样硬化（ＡＳ）发生、发展可能是通过促进某些原癌基因异常表达，进而促进ＳＭＣ增殖而实现的。这也许是某些基因治疗ＡＳ的基础。     

电针和福尔马林诱发大鼠脑c-fos基因表达研究

目的：从分子水平探讨电针镇痛的机理,方法：采用ＲＮＡ 斑点杂交技术比较电针与福尔马林刺激时大鼠脑内ｃ ｆｏｓ ｍＲＮＡ 表达的改变,并观察吗啡对ｃ ｆｏｓ ｍＲＮＡ 表达的影响。结果：电针刺激具有明显的镇痛作用。电针和福尔马林刺激后均可诱发ｃ ｆｏｓ ｍ ＲＮＡ表达增强。吗啡能明显抑制福尔马林诱导ｃ ｆｏｓ ｍＲＮＡ 表达,而对电针诱导的ｃ ｆｏｓ ｍ ＲＮＡ表达则无明显影响。结论：ｃ ｆｏｓ 基因可能参与痛觉调制,电针镇痛并不等同于伤害性刺激。     

卡托普利对肾性高血压心肌肥厚大鼠左心室肌原癌基因c-fos mRNA表达的影响

探讨卡托普利对肾性高血压心肌肥厚大鼠左室肥原癌基因ｃ－ｆｏｓ ｍＲＮＡ表达的影响。方法：采用原位杂交方法检测原癌基因ｃ－ｆｏｓ ｍＲＮＡ的表达。结果经过８周治疗后,卡托普利使高血压心肌肥厚大鼠左室肌原部癌基因ｃ－ｆｏｓ ｍＲＮＡ表达量显著减少。结论卡托普利减少高血压心肌肥厚大鼠左室肥原癌基因ｃ－ｆｏｓ ｍＲＮＡ的表达。