神经肽Y对大鼠血管平滑肌细胞内钙离子浓度的影响

目的 应用激光共聚焦显微镜动态观察神经肽Y(NPY)受体激动剂[Leu31, Pro34]-NPY干预大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)产生的细胞内钙离子([Ca2 ]i)浓度变化,以确定NPY对大鼠VSMC[Ca2 ]i浓度的影响.方法 用分散细胞培养法培养VSMC.用10 μmol/L的Fluo-3孵育细胞.使其与细胞内的游离[Ca2 ]i相结合,从而能够在525 nm的激发光激发下产生荧光.分别用正常细胞外液、无钙细胞外液稀释的10-6 mol/L[Leu31, Pro34 ]-NPY、1 μmol/L硝苯地平、10-6 mol/L[Leu31, Pro34 ]-NPY 1 μmol/L硝苯地平灌流细胞,同时用激光共聚焦显微镜扫描、记录图像.用Leica图像分析系统分析图像,定量分析不同情况下的[Ca2 ]i荧光强度.结果 正常细胞外液灌流时[Ca2 ]i变化不明显,最高值为57.3±3.1,最低值为53.7±2.9,无明显差异(P＞0.05). [Leu31, Pro34]-NPY干预细胞时,[Ca2 ]i明显地升高,随后又开始下降.最高值为86.4±2.7,最低值为58.1±3.0,有非常显著差异(P＜0.01).无钙细胞外液 [Leu31, Pro34 ]-NPY灌流VSMC时[Ca2 ]i浓度变化不明显,最高值为52.5±3.5,最低值为48.0±1.2(P＞0.05);[Leu31, Pro34 ]-NPY 硝苯地平组[Ca2 ]i变化不明显,最高值为52.6±2.1,最低值为51.7±2.7,差异无统计学意义(P＞0.05).硝苯地平组[Ca2 ]i呈下降趋势,最高值为52.8±2.2,最低值为37.5±2.1,有非常显著差异(P＜0.01).结论 NPY能够通过NPY-Y1受体使细胞内的[Ca2 ]i浓度升高,这种升高是依赖于细胞外的[Ca2 ]i由L型[Ca2 ]i通道进入细胞的.     

神经肽Y对大鼠血管平滑肌细胞内钙离子浓度的影响

目的应用激光共聚焦显微镜动态观察神经肽Y(NPY)受体激动剂[Leu31,Pro34]-NPY干预大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)产生的细胞内钙离子([Ca2 ]i)浓度变化,以确定NPY对大鼠VSMC[Ca2 ]i浓度的影响。方法用分散细胞培养法培养VSMC。用10μmol/L的Fluo-3孵育细胞。使其与细胞内的游离[Ca2 ]i相结合,从而能够在525nm的激发光激发下产生荧光。分别用正常细胞外液、无钙细胞外液稀释的10-6mol/L[Leu31,Pro34]-NPY、1μmol/L硝苯地平、10-6mol/L[Leu31,Pro34]-NPY 1μmol/L硝苯地平灌流细胞,同时用激光共聚焦显微镜扫描、记录图像。用Leica图像分析系统分析图像,定量分析不同情况下的[Ca2 ]i荧光强度。结果正常细胞外液灌流时[Ca2 ]i变化不明显,最高值为57.3±3.1,最低值为53.7±2.9,无明显差异(P>0.05)。[Leu31,Pro34]-NPY干预细胞时,[Ca2 ]i明显地升高,随后又开始下降。最高值为86.4±2.7,最低值为58.1±3.0,有非常显著差异(P<0.01)。无钙细胞外液 [Leu31,Pro34]-NPY灌流VSMC时[Ca2 ]i浓度变化不明显,最高值为52.5±3.5,最低值为48.0±1.2(P>0.05);[Leu31,Pro34]-NPY 硝苯地平组[Ca2 ]i变化不明显,最高值为52.6±2.1,最低值为51.7±2.7,差异无统计学意义(P>0.05)。硝苯地平组[Ca2 ]i呈下降趋势,最高值为52.8±2.2,最低值为37.5±2.1,有非常显著差异(P<0.01)。结论NPY能够通过NPY-Y1受体使细胞内的[Ca2 ]i浓度升高,这种升高是依赖于细胞外的[Ca2 ]i由L型[Ca2 ]i通道进入细胞的。     

5种黄酮醇类化合物对大鼠心肌细胞内钙离子的影响

目的研究山萘酚（Kaempferol，KA）、杨梅素（Myricetin，MY）、二氢杨梅素（Dihydromyricetin，DMY）、槲皮素（Quercetin，Qu）、二氢槲皮素（Dihydroquercetin，DQU）5种黄酮醇类化合物对大鼠心肌细胞内游离钙离子（[Ca^2＋]i）的影响。方法采用Fluo-3／AM同时加入PluronicF-127作为细胞内游离钙离子的荧光探针，负载H9C2心肌细胞系，应用激光扫描共聚焦显微技术，测定5种黄酮醇类化合物（50μmol／L）在静息状态和加入60mmol／L氯化钾（KCl）时心肌细胞胞浆内游离钙离子的荧光强度（FI）。结果静息状态下，KA和Qu能够明显降低心肌细胞内[Ca^2＋]i（P〈0．05），MY能够短暂而明显升高[Ca^2＋]i（P〈0．05），而DMY和DQU对心肌细胞内[Ca2＋li无明显影响（P〉0．05）；KA、MY、DMY、Qu和DQU对KCl介导的高钙有抑制作用（P〈0．05）。结论5种黄酮醇类化合物对电压依赖性钙通道（VDC）有明显抑制作用，这可能是产生药理活性机制之一．有利于进一步研究其对心肌的保护作用和探讨其构效关系。     

硝酸甘油对人脐血管内皮细胞内钙离子浓度的影响

目的 探讨不同剂量硝酸甘油对体外培养人脐血管内皮细胞内钙离子浓度的影响。方法分离人脐静脉内皮细胞，体外原代培养，细胞经钙荧光探针Fluo-3-AM染色后，在激光共聚焦显微镜下观察培养液中分别加入三种浓度硝酸甘油后，细胞内游离钙离子浓度[Ca^2 ]i的动态变化情况。结果 低浓度和高浓度硝酸甘油作用后，[Ca^2 ]i呈现不同的变化曲线。10μg／ml NTG持续缓慢下降；30μg／mlNTG先明显下降，然后缓慢上升；1000／μg／mlNTC持续缓慢上升。结论 硝酸甘油的药理作用与内皮细胞有关，不同浓度的硝酸甘油可能通过不同的信号传导路径发挥不同的生理作用。     

槟榔碱促结肠平滑肌细胞收缩及对胞内钙离子浓度的影响

目的:观察氢溴酸槟榔碱(Ah)促进培养的结肠平滑肌细胞收缩作用及对胞内游离Ca2 浓度的影响．方法:培养大鼠结肠平滑肌细胞,分为4组:正常对照组、Ah刺激组、乙酰胆碱(Ach)刺激组、阿托品预处理组．应用特异性Ca2 荧光批示剂Fluo-3／AM负载细胞,激光共聚焦显微镜检测游离Ca2 浓度和细胞收缩率．结果:正常对照组细胞未发生自主性收缩,因指示剂的衰减,荧光强度(FI)有递减的趋势; Ah刺激组在加药后短时间内胞内钙离子浓度迅速升高,出现一个波峰,FI平均基础值与峰值有差异(P<0．05),而后胞内钙离子浓度再缓慢攀升,在484．0±47．6 s达到高峰,而后有一个较长时间的平台期,在1 400 s左右恢复至静息水平,FI基础值与峰值有显著差异 (P<0．01),细胞收缩百分数为20．70％±0．07％; Ach刺激组在加药后胞内钙离子浓度升高,形成一个小波峰,FI基础值和峰值差异有显著性(P<0．01)．随后胞内钙离子浓度缓慢攀升, 在600 s左右达到高峰,而后有一个较长时间的平台期．FI基础值与峰值差异有显著性 (P<0．001);经阿托品预孵育处理后的细胞,加入Ah后,其收缩效应被完全抑制．结论:Ah可引起结肠平滑肌细胞收缩,升高细胞内游离Ca2 浓度．其收缩效应可以被M受体阻断剂阿托品所抑制．     

硝酸甘油对人脐血管内皮细胞内钙离子浓度的影响

目的探讨不同剂量硝酸甘油对体外培养人脐血管内皮细胞内钙离子浓度的影响.方法分离人脐静脉内皮细胞,体外原代培养,细胞经钙荧光探针Fluo-3-AM染色后,在激光共聚焦显微镜下观察培养液中分别加入三种浓度硝酸甘油后,细胞内游离钙离子浓度[Ca2+]i的动态变化情况.结果低浓度和高浓度硝酸甘油作用后,[Ca2+]i呈现不同的变化曲线.10 μg/ml NTG持续缓慢下降;30 μg/ml NTG先明显下降,然后缓慢上升;1000 μg/ml NTG持续缓慢上升.结论硝酸甘油的药理作用与内皮细胞有关,不同浓度的硝酸甘油可能通过不同的信号传导路径发挥不同的生理作用.     

脂欣康胶囊对大鼠血管平滑肌细胞源性泡沫细胞钙离子浓度的影响

目的观察脂欣康及洛伐他汀干预大鼠血管平滑肌细胞（VSMC）源性泡沫细胞产生的细胞内钙离子（[Ca^2＋]i）浓度变化，以探讨脂欣康对动脉粥样硬化（AS）泡沫化细胞形成的可能调控机制。方法用组织块培养法培养VSMC，以氧化低密度脂蛋白使其泡沫化，并以脂欣康、洛伐他汀分别干预。以10μmol／L的Fluo-3孵育细胞后，用激光共聚焦显微镜扫描、记录图像，并作分析。结果脂欣康与洛伐他汀均能降低VSMC[Ca^2＋]i浓度，与生理盐水组、空白对照组相比，脂欣康组和洛伐他汀组均有统计学意义（P〈0．01），但两组之间差异无统计学意义（P〉0．05）。结论脂欣康具有与洛伐他汀相似的降低VSMC[Ca^2＋]i浓度的作用，这可能是其抑制VSMC增殖和泡沫化细胞形成的机制之一。     

砷、铝联合中毒对小鼠脑细胞Ca2＋浓度的影响

目的 探讨砷、铝中毒导致脑细胞损伤的机制.方法 建立砷、铝中毒动物模型,以Fluo-3/AM为荧光指示剂,用激光扫描共聚焦显微镜测定脑细胞内游离Ca2+含量的变化,同时检测脑组织砷、铝含量及超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的活性.结果 砷中毒组及铝中毒组小鼠脑细胞内Ca2+平均荧光强度明显高于对照组(P＜0.001);砷铝联合中毒组小鼠脑细胞内Ca2+平均荧光强度稍低于对照组,但无显著差异(P＞0.05); 砷铝联合中毒组小鼠脑组织中砷、铝含量、MDA活性明显高于对照组,而SOD活性则低于对照组,两组差异显著(均P＜0.05).结论 砷、铝均可增加小鼠脑细胞内的游离Ca2+浓度,提示脑细胞内钙超载可能是其致脑细胞损伤的分子机制之一.     

伽玛刀照射对正常老龄猫额叶皮质组织形态及超微结构的影响

目的研究不同伽玛刀照射剂量对正常猫额叶皮质组织形态及超微结构的影响方法。方法选用健康老龄猫18只,随机分为正常对照组、伽玛刀30 Gy照射组和伽玛刀100 Gy照射组,以猫右侧额叶为照射靶点,照射后14 d,核磁共振仪(MR I)观察靶区脑组织影像学变化,苏木素-伊红(HE)染色及透射电镜观察伽玛刀照射对靶区脑组织形态及超微结构的影响。结果 30 Gy和100 Gy照射组动物于照射后14 d时MR I扫描,均未发现明显的坏死病灶;HE染色显示,30 Gy照射组未见到神经元变性及坏死改变,100 Gy照射组观察到神经元变性,出现噬神经细胞现象;透射电镜显示,30 Gy照射组电镜下神经元细胞核形态正常,内质网及高尔基复合体轻度扩张;100 Gy照射组观察到神经元细胞核固缩,胞浆浓缩,胞质中内质网及高尔基复合体扩张,毛细血管周围胶质细胞终足水肿。结论高剂量照射主要是引起神经细胞核和细胞质损伤,低剂量主要引起胞浆内质网等膜性结构的损伤,伽玛刀照射后引起放射性脑损伤的机制可能与细胞凋亡密切相关。     

apoE4慢性作用对神经元细胞内静息[Ca^2＋]i的影响

目的 观察载脂蛋白E(apoE)对神经元细胞内游离[Ca2+]i的影响.方法 采用激光共聚焦显微镜(LSCM)和Fluo-3/AM荧光探针标记技术,从单个活细胞水平检测apoE不同亚型对原代培养皮层神经元细胞内钙信号的影响,通过使用NMDA受体阻断剂MK-801,观察NMDA受体是否介导了apoE可能导致的胞内钙变化.结果 ApoE4慢性作用可以浓度依赖性地升高神经元胞内静息[Ca2+]i,而apoE3则无影响;MK-801预处理可减弱apoE4引起的胞内静息[Ca2+]i升高,但不能完全阻断该效应.结论 ApoE慢性作用对神经元细胞内静息[Ca2+]的影响具有亚型特异性,表现为apoE4对胞内静息[Ca2+]i的破坏作用,且NMDA受体的激活可能参与了apoE4所致的胞内钙升高.     

氟中毒对大鼠骨自由基含量的影响

目的　探讨氟骨症病变骨自由基变化规律。方法　采用电子自旋共振（ESR）方法观察了不同钙营养条件下氟中毒大鼠骨自由基含量的变化。结果　低钙偏食组,低钙偏食加氟组骨自由基含量均高于正常对照组,P<0.01。常规饲料（富钙）单纯加氟组则较对照组偏低,P<0.05。结论　短期少剂量氟在富钙条件下并不引起自由基含量升高,而低钙加氟时自由基含量明显升高,说明自由基变化并非单纯过量氟引起。     

谷氨酸对原代培养的SD大鼠皮层神经元毒性作用量效关系研究

目的 探讨谷氨酸（Glu）对体外培养的大鼠皮层神经细胞作用的量效关系及其毒性损害作用。方法 原代培养新生SD大鼠（1d）大脑皮层神经细胞，分别加入不同浓度的Glu作用20min，24h后测定细胞存活率，比较不同浓度的Glu对细胞的毒性作用并对其进行形态学观察。结果 大鼠皮层神经细胞在20μmol／LGlu作用20min后，细胞存活率开始降低，胆碱乙酰转移酶（CHAT）活性降低。随着Glu浓度的增加，上述变化更明显。结论 体外Glu引起神经元损伤的亚毒性浓度为20μmol／L，随着Glu浓度的增加，神经细胞受损伤程度加重。     

纳洛酮对缺氧大鼠皮质神经元细胞线粒体膜电位的影响

目的观察缺氧对大鼠皮质神经元细胞线粒体膜电位的影响及纳洛酮的保护作用。方法取体外培养12天的Wistar大鼠皮质神经元细胞,随机分为正常对照组、缺氧组、缺氧加纳洛酮组,缺氧6 h后在常氧下继续培养24h。用流式细胞仪检测不同时间段培养的神经元细胞线粒体膜电位。结果缺氧能诱导神经元细胞线粒体膜电位明显降低。纳洛酮组皮质神经元细胞在缺氧6 h及再复氧24 h后细胞线粒体膜电位明显高于缺氧组(P<0.01)。结论纳洛酮可改善缺氧诱导的大鼠皮质神经元细胞线粒体膜电位降低,对神经元细胞具有保护作用。     

氟桂利嗪阻滞小鼠皮质神经元胞浆钙离子内流的实验研究

目的　研究缺血状态下神经元胞浆内游离钙离子的变化及氟桂利嗪阻滞钙离子内流的作用。方法　用Flu 3 AM作为细胞内钙离子的荧光探针负载培养的小鼠皮质神经元标记物 ,应用激光共聚焦技术检测缺血条件和加用氟桂利嗪后细胞内荧光强度 (△FI)的变化。结果　给予缺血处理 10min后 ,神经元胞浆内钙离子△FI明显升高(17.5 2± 3.16 ) ;经氟桂利嗪预处理后 ,可以明显抑制钙离子的△FI(9.5 5± 2 .10 ) ,差异具有显著性意义 (P <0 .0 1) ,氟桂利嗪对无钙培养液缺血神经元胞浆内的钙离子浓度亦有抑制作用。结论　缺血状态下 ,神经元内钙离子明显升高 ,氟桂利嗪抑制胞浆内钙离子的升高 ,除通过阻断胞膜的电压敏感性钙通道外 ,可能还影响细胞内钙池的钙释放功能。     

The effect of recombinant erythropoietin on intracellular free calcium in erythropoietin-responsive cells

We have investigated whether recombinant erythropoietin (r-Epo) elicits a change in intracellular free calcium (IFC) in purified Epo-responsive cells in spleens of mice treated with phenylhydrazine. Colony-forming units (CFU-E) were prepared by negative selection through immunologic panning. Anti-Forssman, Mac-1, Ia, and HSA antibodies were used to eliminate nonhematopoietic progenitors. After two pannings, 29 +/- 1.5% (mean +/- 1 SD) of the recovered cells were CFU-E. IFC was measured by labeling cells with the fluorescent dye Indo-1 and analyzing them on a flow cytometer from 15 seconds to 30 minutes after the addition of agonist. At each step of the panning procedure, there was no effect of r-Epo (0 to 10 U/mL) on IFC even in the larger cells that are predominantly CFU-E. As a positive control, calcium ionophore (A23187) significantly increased IFC in greater than 90% of the spleen cells enriched in CFU-E. During growth of CFU-E in methylcellulose, the calcium ionophore did not affect the r-Epo-dependent formation of erythroid colonies. EGTA inhibited the formation of erythroid colonies. This inhibition appeared to be the result of a toxic effect of the chelator because the colony growth could not be restored when Ca2+ was added to the cultures in the presence of the EGTA. We conclude that the biologic action of Epo on responsive erythroid cells does not depend on acute changes in IFC.     

Intracellular free calcium concentration, Ca++ channel and calmodulin level in experimental hypertension in rats

Using fluorescent calcium indicator quin2, we studied intracellular free calcium concentration in platelets that have a number of features similar to vascular smooth muscle cells. Intracellular free calcium concentration in platelets of male SHR was significantly higher at 4, 11 and 28 weeks old compared with age-matched male WKY. However, no significant difference was observed in platelets cytosolic free calcium level of DOCA-salt hypertensive and two-kidney, one clip hypertensive rats in the chronic stage. Cardiac Ca++ channels were estimated by means of radioligand binding method with [3H]-nimodipine. No significant changes were observed in the concentration and affinity of cardiac Ca++ channel in SHR, DOCA-salt hypertensive and two-kidney, one clip hypertensive rats. Calmodulin levels in mesenteric arteries of SHR were significantly decreased in comparison with those of WKY. However no significant differences were observed in DOCA-salt hypertensive rats in the chronic stage. These results indicate that the increase in intracellular free calcium concentration of SHR is not the secondary change caused by high blood pressure. It is impossible to detect the ratio of the three states (open, resting and inactivated) of Ca++ channel. Therefore, there remains a possibility of the changes in the ratio of the states of Ca++ channel. The observed abnormalities of Ca++ regulation may contribute to the pathogenesis of hypertension.     

钙离子与鼠脑出血继发性损伤的关系及尼莫地平的保护作用

目的 探讨Ca^2 与脑出血继发性损伤的关系及其尼莫地平的保护作用。方法 通过脑内注射胶原酶建立大鼠脑出血模型,采用草酸一焦锑酸钾电镜细胞化学技术,从形态学角度在观察脑出血后血肿周围脑组织超微病理变化的同时,直观地了解钙在缺血神经组织的分布,并观察Ca^2 拮抗剂的保护作用。结果 脑出血组神经细胞、胶质细胞及毛细血管的超微结构有肿胀表现,细胞内可见多量Ca^2 颗粒一钙拮抗剂治疗组细胞病理变化显减轻,钙分布明显减少,对照组偶见Ca^2 颗粒。结论 血肿周围组织存在水肿和继发性缺血,细胞内Ca^2 稳态失调在神经细胞损害中起重要作用。     

牛磺酸对大鼠心脏钙代谢的影响

目的：探讨牛磺酸（Tau)对异丙肾上腺素（LSP）引起的心肌损伤中钙代谢的影响。方法：取3月－5月龄龄健康Wistar大鼠56只，制作离体心脏标本，按随机原则分为对照组、Tau组、ISP组及不同浓度Tau＋ISP组。在Langendorff装置进行心肌^45Ca摄取与释放试验灌液，收集标本进行^45Ca放射性测定。结果：ISP促进心肌细胞^45Ca摄取，抑制心肌细胞^45Ca释放。Tau则可抑制ISP导致的心肌细胞^45Ca摄取，同时也能拮抗ISP抑制心肌细胞^45Ca释放。结论：牛磺酸具有抑制心肌^45Ca摄取和^45Ca释放的作用，从而抑制ISP导致的心肌细胞钙超载。