江西省1株汉滩型汉坦病毒的分离与鉴定

目的 了解江西省啮齿动物携带的肾综合征出血热汉坦病毒的基因型别。方法 采用Vero-E6细胞对8份免疫荧光汉坦病毒抗原阳性鼠肺标本进行病毒分离,采用直接免疫荧光法和RT-PCR方法对培养物进行鉴定,对分离株部分M基因进行序列测定和分析。结果 1份标本培养后经直接免疫荧光试验检测到汉坦病毒特异性免疫荧光颗粒,培养物能在Vero-E6细胞中稳定传代,毒株命名为AYW89-15。毒株核酸经汉坦病毒M基因特异性分型引物进行RT-PCR检测,获得汉滩型汉坦病毒(Hantaan virus, HTNV)预期大小的目的片段;通过序列分析发现,分离株与HTNV参考株核苷酸同源性为83.1%～94.7%,氨基酸同源性为95.0%～99.0%,与汉城型等其他型别汉坦病毒核苷酸和氨基酸同源性均低于75%。进化树分析表明AYW89-15位于HTNV所在的枝系。 结论 新分离株AYW89-15为HTNV。     

一株自褐家鼠分离的汉坦病毒SD10株分子生物学特征研究

[目的]测定从山东省滕州市褐家鼠分离的1株汉坦病毒SD10株的分子生物学特征,以了解山东省肾综合征出血热疫区的汉坦病毒型别。[方法]用RT－PCR扩增技术及核苷酸序列测定方法进行分子生物学分型,并与其他相关毒株比较。[结果]经M片段部分序列分析表明,该毒株为汉坦病毒汉城型（SEO）第3亚型（S3）。与已知不同年代分离的SEO型毒株有较高同源性。[结论]山东省家鼠型疫区毒株稳定。     

安徽省汉坦病毒的基因序列分析

目的了解安徽省汉坦病毒(HV)型别及分子特征,为防治提供科学依据。方法将汉坦病毒抗原阳性的鼠肺及急性期病人血清标本接种Vero细胞,分离汉坦病毒。阳性培养物提取病毒总RNA,应用RT-PCR扩增病毒S片段,产物经测序拼接获得S片段全基因序列,用DNAStar、MEGA 4.1等生物软件进行核苷酸序列分析,构建基因序列系统进化树,确定病毒型别。结果免疫荧光检测,513鼠肺标本21份阳性,分离6株病毒;4份急性期病人血清分离1株病毒。选择3株病毒进行S片段基因测序,测定序列与汉坦病毒HTN、SEO、SNV型毒株比较,表明两株为HTN型,一株为SEO型,序列相似性达98.4%以上。结论安徽省流行的HV为HTN型和SEO型,以HTN型为主,未发生较大变异。     

湖南省2006年肾综合征出血热病原学监测研究

目的 了解湖南省啮齿动物中汉坦病毒带病毒率、基因型别和分布.方法 采用直接免疫荧光(DFA)法检测鼠肺汉坦病毒抗原,从汉坦病毒阳性鼠肺标本中提取病毒RNA,应用汉坦病毒型特异性引物进行逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增、核苷酸序列测定以及基因分型和同源性分析.结果 总鼠密度为3.15%,鼠带病毒率为1.31%,在室内捕获的7只褐家鼠、黑线姬鼠、小家鼠、黄胸鼠鼠肺标本中均发现携带SEO型病毒,在室外捕获的1只黑线姬鼠鼠肺标本则携带HTN型病毒.成功对6份阳性PCR产物进行了序列分析,浏阳市1、2、4、6号标本同源性较高为100%,邵东市的7、8号标本同源性也较高为100%,但两地区间的同源性差异为89.3%,L99株与浏阳分离株的同源性为94.4%,与邵东分离株的同源性为88.3%.结论 湖南省汉坦病毒存在HTN和SEO型,以SEO型为主.     

宝鸡地区汉坦病毒基因分型及序列特征研究

目的分析宝鸡地区的汉坦病毒基因序列特征。方法收集肾综合征出血热患者血清及汉坦病毒宿主动物鼠肺标本,通过荧光PCR方法进行基因分型,采用RT-PCR对目的基因进行扩增并测序,与汉坦病毒分型菌株进行序列比对及种系发生树分析。结果宝鸡地区汉坦病毒分型检测结果均为汉滩型(HTN),未检测到汉城型(SEO);序列分析显示,获得的11株序列与宁夏分离株Niongxia-A及陕西分离株A16同源性为94.3%~97.0%,同属于汉滩型H9亚型;1株序列与其他11株序列同源性仅为76.5%~77.4%,进一步序列比对显示与Nc167毒株同源性较高。结论宝鸡地区汉坦病毒基因型为汉滩型H9亚型;检测到1株与大别山病毒(DBSV)高度同源,不排除存在其他汉坦病毒型别的可能。     

应用逆转录聚合酶链反应和序列分析对褐家鼠肺汉坦病毒进行分型研究

对来自北京西客站附近一集装箱仓库的2份汉坦病毒免疫荧光抗原阳性褐家鼠肺组织进行分型研究。方法；采用逆转录聚合酶链反应（RT．PCR）和序列分析。结果：这两份褐家鼠肺标本均携带汉城型（SEO）汉坦病毒（HV）。RT－PCR扩增其中1份标本所携带病毒的M基因330bp片段，通过pGEM－T载体克隆进入大肠杆菌JM109，并进行核着酸序列测定，经与其它HV核着酸序列的同源性比较，其与SEO型毒株相应片段核着酸序列的同源性在93.9％～96.4％之间，而与其它血清型毒株的同源性在61.5％～75.8％之间。结论：首次证实北京地区宿主动物携带SEO型HV.     

一株自褐家鼠分离的汉坦病毒SD10株分子生物学特征研究

[目的]测定从山东省滕州市褐家鼠分离的1株汉坦病毒SD10株的分子生物学特征,以了解山东省肾综合征出血热疫区的汉坦病毒型别.[方法]用R-PCR扩增技术及核苷酸序列测定方法进行分子生物学分型,并与其他相关毒株比较.[结果]经M片段部分序列分析表明,该毒株为汉坦病毒汉城型(SEO)第3亚型(S).与已知不同年代分离的SEO型毒株有较高同源性.[结论]山东省家鼠型疫区毒株稳定.     

北京地区1996至2000年肾综合征出血热流行状况研究

目的：搞清北京地区鼠间汉坦病毒（HIV）感染分布状况、HV基因型、病例血清型,为确定疫源地性质和制定防制策略提供依据。方法：分别应用间接免疫荧光（IFAT）、逆转录多降酶链反应（RT－PCR）和微量细胞中和试验方法,对北京地区捕获鼠的标本进行带病毒情况、毒株的型和病人血清型别检测。结果：北京地区鼠间广泛存在着HV感染,鼠的年度带病毒率为1.89%-6.17％。不同区（县）21份免疫荧光阳性鼠肺RT－PCR基因护增分型,均能以SEO型特异性引物扩增出300bp的DNA基因片段,而不能被HNT型特异性引物所扩增。9株核苷酸序列测定结果与SEO型HV代表株L99、SEO核苷酸同源性达94.3%－100％,与HNT型HV代表株A9同源性＜71％。9株SEO型HV核苷酸序列存在一定差异,所构建的地至少存在4个不同分支。BF10与L99株核苷酸同源性100％,BF7与G199同源性99.3%,是否为远程传播而来也应深入研究。55例肾综合征出血热（HFRS）病例血清型,53例为SEO型病例,2例Ⅰ、Ⅱ型中和抗体滴度等同病例未能定型。结论：证实SEO型HV淡近年北京地区主要流行株,并构成了众多SEO型HV疫源地,此为近年发病迅速增多的根本原因。     

一株自褐家鼠分离的汉坦病毒SD_(10)株分子生物学特征研究

[目的 ]测定从山东省滕州市褐家鼠分离的 1株汉坦病毒SD10 株的分子生物学特征 ,以了解山东省肾综合征出血热疫区的汉坦病毒型别。 [方法 ]用RT PCR扩增技术及核苷酸序列测定方法进行分子生物学分型 ,并与其他相关毒株比较。 [结果 ]经M片段部分序列分析表明 ,该毒株为汉坦病毒汉城型 (SEO)第 3亚型 (S3)。与已知不同年代分离的SEO型毒株有较高同源性。 [结论 ]山东省家鼠型疫区毒株稳定。     

山东省汉坦病毒分子流行病学研究

目的探讨山东省汉坦病毒（HV）的分子流行病学特点。方法用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）及核苷酸序列测定技术,对肾综合征出血热（HFRs）监测点的阳性鼠肺标本进行目的基因扩增并测序,与国内外的HV毒株进行同源性分析及系统发生树分析。结果有15份标本扩增出汉城（SEO）型S、M片段,对其中10份扩增片段进行序列分析认为均为SEO型HV,S片段之间的同源性≥96.3％,其推导的氨基酸序列同源性（JN5-153S和DY1S除外）≥96．8％;M片段之间及与山东省以往分离的ZB8同源性≥97．5％,其推导的氨基酸序列同源性为98．6％～100％。结论近年来山东省流行的HV仍以SEO型S3亚型为主。同一地区或地理位置相邻的地区病毒基因组同源性较高,具有明显的地区聚集性,基因型别较为稳定。     

大林姬鼠中汉坦病毒的分离及其S片段的序列分析

目的 分析吉林省大林姬鼠携带的汉坦病毒(HV)在进化过程中的系统发生关系。方法采用病毒分离技术、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、克隆以及测序技术对中国大林姬鼠携带的HV进行研究。结果从4只大林姬鼠Hv抗原阳性的肺组织标本中分离到2株HV(CJ189和CJ193)，对其中CJ193病毒株的S片段进行克隆、测序以及分析，基因分型结果为汉滩型(HTN)汉坦病毒。根据S片段的核苷酸序列同源性分析，CJ193与Aa2499核苷酸序列的同源性最高(94．3％)，而与Ap61、Ap63的同源性最小(83．3％，82．9％)。由全S片段构建的HTN型汉坦病毒的系统发生树表明CJ193与Aa2499等俄罗斯黑线姬鼠携带的HV的亲缘关系最近，其次为中国的HTN型病毒，然后才是Ap61、Ap63等俄罗斯大林姬鼠携带的HV。结论从我国吉林省大林姬鼠分离到的CJ193株是HTN型汉坦病毒的新亚型。     

3株肾综合征出血热病毒的分离和鉴定

目的了解浙江省肾综合征出血热（HFRS）流行特点及汉坦病毒（HV）型别，为防治提供科学依据。方法鼠肺HV抗原检测采用直接免疫荧光法（DFA），病毒分离采用阳性鼠肺研磨液接种幼龄长爪沙鼠，再经vero-E6细胞传代，用单克隆抗体DFA定毒株及分型。结果从捕自浙江省龙泉地区的8份阳性鼠肺中分离到3株HV，经DFA鉴定均为汉滩型（Ⅰ型）病毒，3株病毒在Vero-E6细胞中的感染滴度为10^4.75～10^5.25CCID50／ml。结论从鼠类肺组织中分离到3株汉滩型HV，毒株均能在Vero-E6细胞中较好增殖，有可能成为HFRS疫苗后备毒株。     

吉林省珲春市3株肾综合征出血热汉城型病毒的分离与鉴定

目的对2006年吉林省珲春市采集的鼠肺标本进行病毒分离与鉴定。方法采集鼠肺组织活体标本132份，用免疫荧光法筛检出阳性标本20份，用VeroE6细胞培养分离病毒，对病毒分离株进行血清学（EUSA和IFA方法）、分子生物学（RT-PCR）鉴定。结果本实验共筛检出阳性标本20份，分离到3株病毒，分离率为15％，分别命名为H156、H158、H162。结论在珲春市采集的褐家鼠标本中分离到3株病毒，经血清学和分子生物学鉴定为汉坦病毒汉城型，这是在珲春市首次分离到汉城型病毒。     

深圳市啮齿动物感染汉坦病毒的基因特征研究

目的 研究深圳市啮齿动物所携带的汉坦病毒分子流行病学特征,分析汉坦病毒基因型别。方法 采用笼日法布点捕鼠,收集鼠肺标本后研磨提取RNA。运用实时荧光PCR方法进行分型检测,进一步采用反转录-巢式PCR扩增部分M片段G2区和S片段核苷酸序列,并进行同源性和系统进化树分析。结果 共捕获200只鼠类动物,包含褐家鼠189只、黄胸鼠9只和小家鼠2只。汉坦病毒检出率为21.0%（42/200）,均为汉城病毒,其中宝安区鼠肺检出率最高,达45.7%（χ²=25.60,P<0.05）。从阳性鼠肺标本中分别扩增出25条汉坦病毒M片段G2区和S片段序列,核苷酸同源性分别为95.3%~100.0%和97.6%~100.0%,与来自广州市的参考序列核苷酸相似性较高。系统进化树显示此次研究深圳市鼠类动物所携带的汉坦病毒均为汉城病毒的S2亚型。氨基酸突变位点分析发现,在S基因编码的核衣壳蛋白中存在1个位点突变,为BA-111第973位由丙氨酸（Ala）变为苏氨酸（Thr）。结论 深圳市鼠类动物所携带的汉坦病毒为汉城病毒的S2亚型,与深圳市历年以及周边省市汉坦病毒代表病毒毒株相比变异不大。     

Evidence of hantavirus in wild rodents in Northern Ireland.

A survey of evidence of rodent hantavirus infection in County Down, Northern Ireland was carried out by using immunofluorescence to detect virus antigen and antibody. Antibodies to hantavirus (R22 strain of Seoul virus and Hantaan 76-118) were found in 11/51 (21.6%) brown rats (Rattus norvegicus), 1/31 (3.2%) field mice (Apodemus sylvaticus) and 17/59 (28.8%) house mice (Mus domesticus). Seven rodents had evidence of hantavirus antigen in lung tissues. Antibody positive animals were significantly more likely to be adults than juveniles (P = 0.04) but and there was no sex difference between antibody positive and negative animals. House mice were more likely to be antibody positive if captured inside farm outbuildings (P = 0.08). Attempts to culture virus from the rodent material were unsuccessful. This work demonstrates a substantial rodent reservoir for hantavirus in Northern Ireland.     

抚松地区汉坦病毒的分离与鉴定

目的 2008年对由于吉林省抚松县采集到的汉坦病毒阳性鼠肺组织进行病毒分离与基因鉴定。方法采集到鼠肺组织209份,使用直接免疫荧光法检测出汉坦病毒抗原阳性组织4份,对阳性组织采用Vero E6细胞进行病毒分离,对毒株进行血清学(酶联免疫吸附法和直接免疫荧光法)、分子生物学(聚合酶链式反应方法)检验,对基因序列使用MEGA 4.0分子生物学分析软件进行分析。结果实验检出汉坦病毒抗原阳性鼠肺4份,分离到汉城型病毒2株,命名为F1373和F1443。结论在抚松县采集的大林姬鼠标本中分离到2株病毒,经实验鉴定为汉坦病毒汉滩型。     

Hantavirus pulmonary syndrome in a Chilean patient with recent travel in Bolivia.

A case of hantavirus pulmonary syndrome (HPS) was serologically confirmed in a critically ill patient in Santiago, Chile. The patient''s clinical course had many similarities to that of other HPS patients in North and South America but was complicated by acute severe renal failure. The patient''s history included self-reported urban and probable rural rodent exposure during travel in Bolivia. Comparison of a viral sequence from an acute-phase serum sample with other known hantaviruses showed that the hantavirus nucleic acid sequence from the patient was very similar to a virus recently isolated from rodents associated with HPS cases in Paraguay.