阿糖胞苷上调白血病细胞CD86分子及细胞因子表达的研究

目的:观察阿糖胞苷(Ara-C)对急性白血病细胞CD86分子表达的影响,并探讨其作用机制.方法:流式细胞术(FCM)检测U937、HL60、NB4细胞经Ara-C处理前后CD86分子表达变化,RT-PCR检测Ara-C对各组细胞CD86mRNA、NF-кB以及细胞因子IFN-γ的表达变化.结果:经Ara-C处理的急性白血病细胞CD86分子表达与对照组相比均明显升高(P<0.05);CD86 mRNA表达水平也明显增强;Ara-C处理后细胞核内NF-кB表达明显上调;并且IFN-γ mRNA在T细胞活化72 h可检测到.结论:Ara-C能使U937、HL60、NB4急性白血病细胞CD86表达增加,有利于NF-кB等转录因子活化,促进CD86转录增强、表达增加并可有效地增强肿瘤细胞的免疫原性,激活T细胞,B7-2在T细胞活化中起着更重要的作用.     

丁酸钠通过NF-κB途径上调NB4细胞共刺激分子表达

目的　观察组蛋白去乙酰化酶抑制剂丁酸钠上调NB4 细胞共刺激分子表达的作用,并探讨其分子机制。方法　流式细胞术检测NB4 细胞经不同浓度丁酸钠处理不同时间后CD86、CD80分子表达变化,观察NF κB特异性抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷(Pyrrolidinedithiocarbamate ,PDTC)对丁酸钠上调CD86表达影响,NF κB试剂盒检测NB4 细胞核内NF κB含量。结果　经丁酸钠处理后,CD86和CD80分子比对照组出现不同程度上调,并具有时间剂量 效应依赖性。PDTC可部分抑制丁酸钠对CD86分子表达的上调作用。丁酸钠处理NB4 细胞后核内NF κB含量增多。结论　丁酸钠通过NF κB途径上调NB4 细胞共刺激分子表达。     

PMA对U937细胞CD18mRNA表达的诱导作用及其机制

目的:研究PMA对CD18mRNA表达的促进作用及机制。方法:选用PMA刺激下的U937细胞为实验模型,运用定量RT-PCR方法检测U937细胞CD18mRNA的表达水平。结果:PMA具有浓度和时间依赖性地诱导U937细胞CD18mRNA表达的作用,这种作用能分别被PKC、NF-κB抑制剂所抑制,但不能被转录因子AP-1抑制剂所抑制。结论:PMA能激活细胞的PKC,进而通过其后的信号转导通路促进CD18mRNA的表达,转录因子NF-κB为PMA刺激下的U937细胞CD18基因转录所必需,而AP-1则相反。     

野生型p53基因导入对U937细胞分化、凋亡和CD36受体表达的影响

目的： 研究野生型p53基因重组腺病毒载体（AdCMV-p53）导入对U937细胞分化、凋亡和清道夫受体CD36表达的影响。 方法： AdCMV-p53导入U937细胞后，用细胞计数、细胞周期分析、台盼蓝染色排除法计数细胞悬液中的活细胞数目和NBT还原反应观察其对U937细胞生长、分化的影响；RT-PCR、免疫荧光和流式细胞分析检测AdCMV-p53导入对CD36表达的影响。 结果： AdCMV-p53可以高效导入U937细胞，野生型p53基因导入促进U937细胞向巨噬细胞分化，台盼蓝染色发现实验组阳性细胞数（64.6±9.2）%较对照组（14.2±5.5）%明显增多，吞噬能力增强；NBT还原反应实验组（49.7±12.6）%较对照组（6.3±1.8）%升高。RT-PCR和流式细胞分析检测，野生型p53基因导入使得CD36 mRNA转录增强，CD36蛋白表达增加。 结论： 野生型p53基因能影响细胞分化和凋亡，并上调清道夫受体CD36的表达，对于动脉粥样硬化的预防和基因治疗具有潜在意义。     

维生素D3诱导的U937细胞中CD14表达的实验研究

目的: 探讨维生素D3诱导U937细胞上CD14蛋白的表达及其对内毒素 (LPS)刺激的反应性。方法: 用0. 1μmol/LVitD3与U937细胞共同培养 24h诱导CD14基因的表达, 并观察U937细胞对不同浓度的LPS刺激不同时间的反应性。结果: VitD3能稳定诱导U937细胞表达CD14mRNA和CD14蛋白。经VitD3诱导的U937细胞对LPS刺激的敏感性显著增强, 表现为低浓度LPS刺激即能诱导该细胞核中NF -κB激活, 促进TNF- αmRNA的转录和表达, 并将表达的TNF α释放入培养上清中。结论: VitD3能诱导U937细胞中CD14基因和蛋白的表达, 并增加其对LPS刺激的反应性。     

氧化砷和维甲酸对PLZF-RARa阳性U937细胞的作用

目的：研究氧化砷（As2O3）和全反式维甲酸（AT—RA）对PLZF-RARα阳性细胞的作用。方法：稳定转染PLZF-RARα基因的U937细胞（U937／PLZF）经As2O2、ATRA处理后，Wright—Giemsa染色观察细胞形态，MTr法检测细胞生长增殖状态，流式细胞术（FCM）检测细胞周期和细胞表面分化抗原CD11b、CD64、CD14等的表达变化，荧光免疫细胞化学染色检测融合蛋白表达，细胞化学染色和硝基蓝四氮唑（NBT）还原试验观察细胞功能分化情况。结果：U937／PLZF细胞在去除四环素条件培养后，PLZF—RARα表达明显增加。As2O3（0．51μmol／L）联合ATRA（1μmol／L）使U937／PLZF细胞核质比缩小，核仁减少但未消失；生长增殖受抑；S期细胞减少；CD11b表达增高；PLZF—RARα蛋白表达减弱，分布以胞核弥漫细小颗粒为主。细胞化学染色和NBT反应变化不明显。结论：0．5μmol／L As2O3联合1μmol／LATRA可使PLZF—RARα阳性U937细胞产生轻微的形态学分化趋势，尚不足以引起其发生功能分化。     

丙戊酸钠对AML1-ETO转染细胞中CEBPA基因表达及表观遗传修饰的影响

目的:探讨丙戊酸钠(VPA)对AML1-ETO转染细胞中CCAAT/增强子结合蛋白α(CEBPA)基因表达的影响及诱导沉默基因重新表达的机制。方法:不同浓度VPA处理AML1-ETO转染的急性髓系白血病细胞U937后,CCK-8法和台盼蓝染色活细胞计数检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞表面抗原,RT-qPCR检测CEBPA mRNA的表达,ChIP-qPCR检测组蛋白H3和H4的乙酰化状态。结果:VPA对U937及AML1-ETO转染细胞有明显的生长抑制作用,呈现浓度依赖性和时间依赖性,VPA诱导U937及AML1-ETO转染细胞CD11b和CD14表达升高,VPA明显上调CEBPA mRNA的表达水平,VPA处理组CEBPA基因启动子区核染色质的组蛋白H3和H4乙酰化水平升高(P0.05)。结论:VPA对U937及其AML1-ETO转染细胞均有生长抑制和促分化的作用。VPA可能通过特异性调节CEBPA基因组蛋白乙酰化水平,改变其表观遗传修饰特征,从而诱导CEBPA基因重新表达。     

白细胞介素-27对白血病细胞株U937细胞生物学行为的影响

目的: 探讨白细胞介素-27(IL-27)对人单核细胞白血病细胞株U937细胞的影响及其机制。方法: 用不同剂量的重组人IL-27和U937细胞分别共培养24h和48h,用荧光定量PCR测定细胞中促凋亡基因 p53、bax 及caspase-3、主要组织相容性复合物Ⅰ(MHCⅠ)类分子、协同刺激分子CD86和黏附分子CD54的表达,流式细胞仪检测U937细胞表面CD86和CD54的表达,并用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定IL-27对细胞增殖的影响。结果: PCR结果显示经过不同剂量IL-27刺激后,U937细胞中促凋亡基因 p53和bax表达增加,同时,U937细胞中凋亡相关蛋白caspase-3的表达及活性也有相应增加;MTT结果显示,IL-27可以抑制U937细胞增殖并和抗肿瘤药物阿糖胞苷产生协同作用;IL-27可以诱导U937细胞中的MHCⅠ类分子(HLA-A,B,C)、表面的协同刺激分子CD86和黏附分子CD54的表达增加。结论: IL-27可以诱导U937细胞中促凋亡基因的表达,直接抑制细胞增殖,对细胞中MHCⅠ、CD86和CD54的表达有诱导作用。这可能是IL-27抗肿瘤作用的重要机制。     

TM-TNF-α介导的反向信号下调sTNF-α激活后U937细胞因子mRNA的表达

目的：观测TM-TNF-α介导的反向信号对sTNF-α激活后U937细胞因子mRNA的影响，构建TM-TNF-α胞浆段缺失突变体，并进一步验证。方法：sTNF-α激活U937细胞后撤除，加入可溶性TNFR（sTNFRⅠ）激活TM-TNF-α介导的反向信号，用RT—PCR方法检测反向信号对活化后U937细胞因子IL-1β、IL-8 mRNA的影响；采用分子克隆技术构建TM-TNF-α胞浆段缺失突变重组体，采用电穿孔法转染U937，并用Western blot检测蛋白表达。结果：sTNF-α激活U937细胞后撤除，高表达的细胞因子IL-1β、IL-8 mRNA随着时间的延长而逐渐降低；sTNFRⅠ激活的TM-TNF-α介导的反向信号可加速细胞因子mRNA的降解，且使mRNA降解至50％的时间分别由约75、60分钟缩短至约45、35分钟。成功构建TM-TNF—α胞浆段缺失突变重组体pcDNA3．0-△csTM-TNF—α并瞬时转染U937细胞，Western blot结果显示U937细胞膜表面除表达26000的野生型TM-TNF-α蛋白外，还可表达约20000的突变体蛋白。这种缺失胞浆段的突变体蛋白可竞争性抑制反向信号对活化后U937细胞因子mRNA的下调作用。结论：TM-TNF-α介导的反向信号可下调sTNF-α激活后U937细胞因子mRNA的表达；且TM-TNF-α胞浆段为其介导的反向信号所必需。     

地塞米松对PMA诱导CD18表达的抑制作用

目的:研究GC抑制CD18表达的作用。方法:选用PMA刺激下的U937细胞为实验模型,运用定量RT-PCR、Northern杂交检测U937细胞CD18 mRNA的表达水平。结果:Dex能明显抑制PMA诱导CD18 mRNA的表达,这种抑制作用具有明显的剂量依赖性,GR的拮抗剂RU38486能够明显扭转Dex的抑制作用。结论:Dex通过GR介导能在转录水平上抑制PMA诱导的CD18 mRNA的表达,该作用可能与糖皮质激素受体(GR)在转录水平拮抗NF-κB有关。     

急性髓细胞性白血病患者外周血单个核细胞CD28 mRNA的表达

背景：大量研究显示,肿瘤患者外周血T细胞表面共刺激分子CD28蛋白表达存在差异,提示共刺激通路异常可能与恶性肿瘤的发生进展有关。 目的：观察急性髓细胞性白血病外周血单个核细胞共刺激信号分子CD28 mRNA在中的表达。 方法：急性髓细胞性白血病患者80例,其中M0型7例,M1型6例,M2型18例,M3型15例,M4型17例,M5型9例,M6型8例。并根据急性白血病疗效标准将80例患者分为完全治愈组、缓解组、未缓解组。采用Taqman探针实时荧光定量PCR检测80例患者及76名健康人群外周血单个核细胞CD28 mRNA的表达。 结果与结论：急性髓细胞性白血病外周血单个核细胞M1,M3和M4亚型中的CD28 mRNA表达量低于健康人群 (P< 0.05);急性髓细胞性白血病未缓解组中CD28 mRNA低于健康人群 (P < 0.05),完全治愈组和缓解组中CD28 mRNA表达与健康人群差异无显著性意义。说明急性髓细胞白血病患者外周血单个核细胞存在CD28 mRNA表达缺陷,并与临床分期、病情进展及预后有关。     

CD80，CD86和ICAM-1在急性白血病细胞上的表达及意义

目的通过流式细胞术检测初诊患者急性自血病细胞上共刺激分子CD80、CD86以及黏附分子ICAM．1的表达，以了解其表达规律。方法通过流式细胞仪检测60例初治急性白血患者白血病细胞上CD80、CD86和ICAM-1的表达率；男37例，女23例，年龄2～85岁，中位年龄28岁；其中ALL20例，AML40例（M16例、M27例、M37例、M415例、M55例）。结果ALL组中的CD86的表达为（32．880±6．665）％，显著高于正常对照（P〈0．01），而CD80与正常BM对照比较无统计学意义；CD80、CD86在AML（M1、M2和M3）细胞上的表达分别为（0．766±0．187）％、（27．210±7．581）％，均显著高于相应的正常骨髓对照（P〈0．01）；在AML（M4和M5）细胞上CD80、CD86的表达与正常对照比较均无统计学意义。ICAM-1在ALL组中的表达与正常BM对照比较无统计学意义；在AML（M1、M2和M3）细胞上（63．820±7．484）％，显著高于相应的正常骨髓对照（P〈0．01）：而AML（M4和M5）细胞上表达为（50．590±7．092）％，显著低于相应的正常骨髓对照（P〈0．01）。结论CD80、CD86和ICAM．1在初治ALL和AML白血病细胞上的表达呈一定变异性，CD86在ALL上呈高表达，CD80、CD86和ICAM-1在AML（M1、M2和M3）上均呈高表达，而ICAM-1在AML（M4和M5）上均呈低表达。     

急性髓系白血病细胞血管细胞黏附分子1、CD34和CD117的表达

背景：血管细胞黏附分子1与白血病浸润密切相关,白血病细胞本身是否表达血管细胞黏附分子1,以及与疾病难治是否相关尚无定论。 目的：分析血管细胞黏附分子1、CD34、CD117在急性髓系白血病细胞表面的表达,3者之间的相互关系及与难治性急性髓系白血病的相关性。 方法：采用流式细胞技术检测16例急性髓系白血病细胞中血管细胞黏附分子1、CD34、CD117的表达,其中难治组6例,非难治组10例;同时以正常骨髓单个核细胞标本作对照。 结果与结论：急性髓系白血病细胞CD34、CD117表达高于对照组(P < 0.05)。难治组急性髓系白血病细胞CD34表达明显高于非难治组(P < 0.05)。难治组与非难治组CD117表达差异无显著性意义(P > 0.05)。急性髓系白血病细胞血管细胞黏附分子1表达与对照组比较差异无显著性意义(P > 0.05)。难治组与非难治组血管细胞黏附分子1表达差异无显著性意义(P > 0.05)。表明急性髓系白血病细胞伴CD34表达,为不良预后指标之一,CD117、血管细胞黏附分子1表达与其是否难治无明显相关性。     

Down-regulation of CD44 contributes to the differentiation of HL-60 cells induced by ATRA or HMBA

CD44 is highly expressed in human acute myeloid leukemia （AML） cells. Some experiments had shown that it was possible to reverse differentiation blockage in AML cells by CD44 ligation with specific antibodies, indicating that CD44 was closely related to the differentiation of leukemia cells. The differentiation of acute promyelocytic leukemia cell line HL-60 cells could be induced by all trans-retinoic acid （ATRA） and hexamethylene bisacetamide （HMBA）, but so far the mechanism was not demonstrated clearly. In the present study, we investigated whether ATRA or HMBA induced the growth arrest of HL-60 cells by down-regulating the expression of CD44. The results indicated that the proliferation of HL-60 cells was obviously inhibited and the differentiation was induced by both ATRA and HMBA. The decreased expression of CD44 and cyclin E mRNA, and the increased expression of p27 and p21 at mRNA levels were observed. Furthermore, there was a negative correlation between the expression of CD44 and p27. It was concluded that ATRA and HMBA played a role in the differentiation induction of HL-60 cells, which was mediated by the down-regulation of CD44, accompanied by down-regulation of cyclin E, and up-regulation of p27 and p21 mRNA. Cellular ＆ Molecular Immunology. 2007;4（1）：59-63.     

乌苯美司下调c-myc表达与其增强全反式维甲酸诱导NB4细胞

目的： 了解氨肽酶抑制剂乌苯美司（bestatin）能否增强全反式维甲酸（ATRA）对NB4细胞的诱导分化作用，及此过程中NB4细胞c-myc mRNA表达水平的改变。 方法： MTT法检测药物抑制细胞生长的作用。流式细胞仪测细胞表面分化抗原CD11b及四氮唑蓝（NBT）还原实验检测NB4细胞的分化。RT-PCR检测细胞c-myc mRNA表达水平。 结果： 50 mg/L、75 mg/L、100 mg/L乌苯美司与10 nmoL/L ATRA联合处理72 h，均能明显增强NB4细胞的NBT还原能力，与10 nmoL/L ATRA组差异显著（P<0.05，P<0.01）。从48 h到96 h，100 mg/L乌苯美司时间依赖性地增强10 nmoL/L ATRA诱导NB4细胞的NBT还原能力，与相应时点10 nmoL/L ATRA组差异明显（P<0.01）。100 mg/L乌苯美司与10 nmoL/L ATRA联合应用72 h，NB4细胞CD11b表达率明显高于10 nmoL/L ATRA组（P<0.01）。50 mg/L、75 mg/L、100 mg/L乌苯美司与10 nmoL/L ATRA联合处理4 h，NB4细胞c-myc mRNA表达水平明显低于单用ATRA组（P<0.05，P<0.01）；药物联合应用各组NB4细胞的c-myc mRNA表达水平与NBT还原能力之间呈负相关（r=-0.917,P<0.05）。 结论： 乌苯美司可能通过下调NB4细胞c-myc mRNA的表达，从而增强ATRA诱导NB4细胞分化的作用。     

白藜芦醇增强TRAIL对人髓系白血病KG-1a细胞的细胞毒作用

目的:观察白藜芦醇作用前后TRAIL对人髓系白血病KG-1a细胞的细胞毒作用的变化。方法:流式细胞仪检测KG-1a细胞表面CD34和CD38的表达,二甲氧唑黄(XTT)细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒检测白藜芦醇作用前后TRAIL对KG-1a细胞增殖的影响,AnnexinV-FITC/PI染色流式细胞仪检测细胞凋亡变化。流式细胞仪检测白藜芦醇作用前后KG-1a细胞表面TRAIL死亡受体表达变化。结果:人髓系白血病KG-1a细胞CD34+CD38-占(58.67±2.87)%,10~1 000 ng/ml的TRAIL对KG-1a细胞增殖无明显影响,但对白藜芦醇作用后的KG-1a细胞的增殖有明显抑制作用,白藜芦醇能促进TRAIL诱导KG-1a细胞凋亡,并能上调KG-1a细胞表面TRAIL死亡受体DR5的表达。结论:白藜芦醇能增强TRAIL对人髓系白血病KG-1a细胞的细胞毒作用,其机制可能与白藜芦醇上调KG-1a细胞表面TRAIL死亡受体DR5的表达有关。     

抗P选择素功能域单抗对人树突状细胞表型及IL-12分泌的影响

观察抗P选择素Lectin EGF功能域单抗 (PsL EGFmAb )对体外培养人树突状细胞 (DC )表型以及促炎细胞因子IL 1 2分泌的影响 ,探讨PsL EGFmAb对DC炎性成熟过程中的调节作用。通过SCF、GM CSF、TGF β1 、Flt 3和TNF α体外培养体系 ,从脐血CD34+ 造血干细胞中诱导扩增获得DC ,并于成熟中用PsL EGFmAb进行干预。采用流式细胞仪分析细胞表型CD1a、CD1 1c、CD83、CD80、CD86和HLA DR ;采用RT PCR检测IL 1 2p35、p4 0mRNA表达 ;以及ELISA法测定IL 1 2p70分泌的含量。结果显示 ,PsL EGFmAb可下调成熟中DC表面CD1 1c、CD83、CD80、CD86和HLA DR的表达 ,同时能抑制DC内IL 1 2p35、p4 0mRNA的转录和IL 1 2p70的分泌。本研究提示 ,PsL EGFmAb对DC黏附共刺激分子表达和促炎细胞因子合成具有抑制作用 ,并可能影响和调抑DC成熟及其提呈抗原功能