转化生长因子β1与体外血管外膜成纤维细胞的增殖和迁移

背景:近年来的研究表明,血管外膜成纤维细胞在血管损伤后新生内膜的增生中起重要作用。当血管损伤后,转化生长因子β1在局部水平上调激活下游多种信号途径,其对血管外膜成纤维细胞参与新生内膜增生过程中所起的作用尚不十分清楚。目的:观察转化生长因子β1对体外血管外膜成纤维细胞增殖和迁移的影响方法:体外培养大鼠胸主动脉成纤维细胞,分别以0,3,5,10,15μg/L的转化生长因子β1刺激成纤维细胞0,2,12,24,48,72h。以MTT法检测细胞增殖活性,Transwell Chamber测试细胞迁移。结果与结论:转化生长因子β1能诱导血管外膜成纤维细胞增殖,随着转化生长因子β1质量浓度、作用时间的增加,诱导血管外膜成纤维细胞增殖能力增强(P<0.05),其中10μg/L转化生长因子β1作用48h增殖较对照组增强最为明显(P<0.01)。不同剂量转化生长因子β1刺激后迁移的细胞数目随转化生长因子β1质量浓度增加而增加,促进作用逐渐增强,呈剂量依赖关系。     

过氧化物酶体增殖物激活受体γ激动剂对转化生长因子β1诱导体外血管外膜成纤维细胞表型的改变

背景:近年来的研究表明,血管外膜成纤维细胞在血管损伤后新生内膜的增生中起重要作用,但对于引起血管外膜成纤维细胞表型转化的机制尚不十分清楚.目的:观察过氧化物酶体增殖物激活受体(peroxisome proliferators-activated receptor,PPAR)γ激动剂对转化生长因子β1诱导体外血管外膜成纤维细胞表型改变,同时检测对Ⅰ胶原蛋白表达的作用.设计、时间及地点:随机分组设计,对比观察,于2007-07/2008-10在上海交通大学医学院附属第九人民医院组织工程实验室完成.材料;鼠龄2个月的健康雄性SD大鼠,体质量约120 g,用于体外培养大鼠胸主动脉外膜成纤维细胞;转化生长因子β1由美国GenWay Biotech公司提供;罗格列酮粉剂为北京高盟化工有限公司产品.方法:实验分为3组:转化生长因子β1诱导组:以不同质量浓度的转化生长因子β1(3,5,10,15 μg/L)诱导成纤维细胞48 h;罗格列酮干预组:用不同浓度的PPAR-γ激动剂罗格列酮(5,10,30,50 μmol/L)干预成纤维细胞45 min后,加入转化生长因子β1 10 μg/L共同培养48 h:对照组:不添加任何干预措施.主要观察指标:①免疫组织化学α-平滑肌肌动蛋白检测不同浓度转化生长因子β1、罗格列酮干预后成纤维细胞的表型改变.②蛋白免疫印迹检测成纤维细胞中平滑肌α2肌动蛋白及Ⅰ型胶原蛋白的表达.结果:不同质量浓度转化生长因子β1诱导成纤维细胞48 h后,与对照组相比,5μg/L转化生长因子β1可明显刺激成纤维细胞表型改变及细胞中平滑肌α2肌动蛋白和Ⅰ型胶原蛋白的表达,10μg/L转化生长因子β1刺激细胞表型改变及平滑肌α 2肌动蛋白和Ⅰ型胶原蛋白的表达最明显(P<0.05),随后转化生长因子β1再增加至15μg/L,与10μg/L转化生长因子β1浓度组相比,其刺激细胞表型改变及平滑肌α2肌动蛋白和Ⅰ型胶原蛋白的表达不再增加(P>0.05).不同浓度罗格列酮干预10 μg/L转化生长因子β1诱导的成纤维细胞48 h后,与对照组相比,30 μmol/L可明显抑制成纤维细胞表型改变及细胞中平滑肌α2肌动蛋白和Ⅰ型胶原蛋白的表达(P<0.05).结论:PPAR-γ激动剂罗格列酮能抑制转化生长因子β1诱导体外血管外膜成纤维细胞表型改变及平滑肌α2肌动蛋白和Ⅰ型胶原蛋白的表达.     

原代成纤维细胞和纤维肉瘤细胞自分泌转化生长因子β1浓度检测及对转化生长因子β1增殖的调节

背景：体外实验常采用外源性转化生长因子β1刺激来观察细胞增殖变化,易忽略细胞本身自分泌转化生长因子β1的影响。目的：检测原代成纤维细胞和纤维肉瘤细胞（L929）自分泌转化生长因子β1的浓度和细胞增殖的变化。方法：Elisa试剂盒检测原代成纤维细胞和纤维肉瘤细胞各时相点细胞内和培养上清中生长转化因子β1水平。结果与结论：纤维肉瘤细胞内转化生长因子β1浓度随培养时间延长而升高,原代成纤维细胞内转化生长因子β1浓度随培养时间延长而降低;两种细胞培养上清转化生长因子β1浓度均随时间而上升,但纤维肉瘤细胞显著高于原代成纤维细胞（P〈0.01）,峰值时达到原代成纤维细胞的20倍;两种细胞增殖曲线在72h内均随时间而显著增高（P〈0.01）,同一时间点比较,纤维肉瘤细胞明显高于原代成纤维细胞。提示自分泌转化生长因子β1具有促进细胞增殖的作用,不同的自分泌水平可能是影响原代成纤维细胞这种正常细胞和纤维肉瘤细胞肿瘤细胞对于外源转化生长因子β1反应不同的重要原因。     

原代成纤维细胞和纤维肉瘤细胞自分泌转化生长因子β1浓度检测及对转化生长因子β1增殖的调节

背景:体外实验常采用外源性转化生长因子β1刺激来观察细胞增殖变化,易忽略细胞本身自分泌转化生长因子β1的影响。目的:检测原代成纤维细胞和纤维肉瘤细胞(L929)自分泌转化生长因子β1的浓度和细胞增殖的变化。方法:Elisa试剂盒检测原代成纤维细胞和纤维肉瘤细胞各时相点细胞内和培养上清中生长转化因子β1水平。结果与结论:纤维肉瘤细胞内转化生长因子β1浓度随培养时间延长而升高,原代成纤维细胞内转化生长因子β1浓度随培养时间延长而降低;两种细胞培养上清转化生长因子β1浓度均随时间而上升,但纤维肉瘤细胞显著高于原代成纤维细胞(P<0.01),峰值时达到原代成纤维细胞的20倍;两种细胞增殖曲线在72h内均随时间而显著增高(P<0.01),同一时间点比较,纤维肉瘤细胞明显高于原代成纤维细胞。提示自分泌转化生长因子β1具有促进细胞增殖的作用,不同的自分泌水平可能是影响原代成纤维细胞这种正常细胞和纤维肉瘤细胞肿瘤细胞对于外源转化生长因子β1反应不同的重要原因。     

转化生长因子β1对培养的瘢痕成纤维细胞挛缩功能的作用

目的研究转化生长因子β1(TGF-β1)对瘢痕成纤维细胞诱导肌动蛋白(α-actin)和粘连蛋白(FN)表达的作用,探讨TGF-β1与烧伤瘢痕挛缩的关系.方法采用细胞培养、ELISA法、免疫组化、图像分析技术,观察在不同TGF-β1含量作用下,瘢痕成纤维细胞α-actin和FN表达的情况.结果不同含量TGF-β1诱导瘢痕成纤维细胞表达α-actin和FN的作用不同,以10～50 μg/L的TGF-β1作用最有效;与对照组相比,实验组的成纤维细胞表达更明显,差异均有显著性意义.结论TGF-β1诱导瘢痕成纤维细胞α-actin和FN的表达增加可能与烧伤瘢痕挛缩有关.     

外膜肌成纤维细胞介导的血管重塑研究进展

血管壁具有有序的层状结构,按其形态可分为内膜、中膜及外膜三层。外膜是位于血管最外层的组成结构,其结构非常复杂,含有许多细胞成分（如成纤维细胞、神经节细胞和肥大细胞等）及致密的细胞外基质成分（如胶原纤维和弹性纤维等）。长期以来人们对外膜认识仅停留在支撑血管,为神经纤维和滋养血管提供支架等。然而,近些年的一些研究证明,损伤外膜引起内膜和中膜的病理性改变与损伤内膜引起的改变相似,并且外膜在血管损伤早期也可引起内膜及中膜的重塑[1]。其中,成纤维细胞向肌成纤维细胞转化是血管重塑的一个重要标志,它不仅在损伤修复[2]和组织纤维化[3-4]的过程中起到极其关键的作用,更在血管重塑过程中发挥重要作用[5]。     

转化生长因子β 1对长波紫外线照射皮肤成纤维细胞胰岛素样生长因子1、角质形成细胞生长因子、血管内皮细胞生长因子表达的影响

背景:研究认为衰老和光老化状态下生长因子的表达不一定一致.生长因子与皮肤老化的关系越来越受到重视.目的:验证转化生长因子β 1对长波紫外线照射体外培养的皮肤成纤维细胞胰岛素样生长因子1、角质细胞生长因子、血管内皮细胞生长因子表达的影响.设计、时间及地点:以体外培养细胞为观察对象,随机重复实验,于2006-07/2008-03在解放军第四军医大学全军整形外科研究所进行.材料:成纤维细胞来自解放军第四军医大学整形外科门诊患者包皮,采用组织块法培养获得.方法:通过酶联免疫法(ELISA)使用不同剂量长波紫外线(0,5,10,20 J/cm2)照射体外培养的皮肤成纤维细胞,测定上清液中胰岛素样生长因了 1、角质形成细胞生长因子、血管内皮细胞生长因子的质量浓度;以长波紫外线15J/cm2为照射剂量,选择不同剂量转化生长因子β 1即小剂量组(0.1 μ g/L)、中剂量组(1 μ g/L)、大剂量组(10 μ g/L)对培养的皮肤成纤维细胞进行干预.主要观察指标:不同剂量长波紫外线照射、以及转化生长因子β 1处理后皮肤成纤维细胞胰岛素样生长因子1、血管内皮细胞生长因子、角质形成细胞生长因子的表达.结果:长波紫外线照射体外培养的皮肤成纤维细胞导致胰岛素样生长因子1、角质形成细胞生长因子分泌水平下降.血管内皮细胞生长因子分泌升高:转化生长因子β 1处理后,转化生长因子B 1剂量依赖性地提高长波紫外线照射体外培养的皮肤成纤维细胞分泌的3种细胞因子的水平.转化生长因子β 1大剂量组胰岛素样生长因子1、角质形成细胞生长因子、血管内皮细胞生长因子含量明显高于长波紫外线照射组(P< 0.01).结论:长波紫外线照射抑制体外培养成纤维细胞中胰岛素样生长因子1、角质形成细胞生长因子表达,促进血管内皮细胞生长因子表达.转化生长因β 1可提高长波紫外线照射体外培养的皮肤成纤维细胞分泌胰岛素样生长因子1、角质形成细胞生长因子、血管内皮细胞生长因子3种细胞因子的水平,有利于真皮内结构的恢复和重建.     

成纤维细胞生长因子对兔纤维环细胞转化生长因子β2的调节

目的:观察成纤维细胞生长因子对培养兔纤维环细胞转化生长因子β2表达的调节作用。方法:实验于2005-03/2006-04在华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科实验室完成。培养4月龄雌性日本大白兔的纤维环细胞,在每次换液时加入成纤维细胞生长因子100μg/L,铺满后收集细胞,作纤维环细胞转化生长因子β2常规免疫组织化学研究,细胞呈棕黄色染色为阳性表达信号,同时为进一步明确纤维环细胞转化生长因子β2的定位进行免疫胶体金标记电镜观察。结果:光镜下细胞明显呈棕色,电镜下细胞膜表面有明显的胶金颗粒粘附。结论:成纤维细胞生长因子能促进纤维环细胞转化生长因子β2的表达。     

转化生长因子β1对小鼠巩膜成纤维细胞DNA和胶原合成的影响及其在近视形成中的作用

目的：巩膜成纤维细胞和胶原合成参与巩膜重塑和近视发生中的巩膜变薄，观察转化生长因子β1对其的干预作用。方法：实验于2004—05／10在中山大学中山眼科中心和基础医学院完成。采用^3H-胸腺嘧啶核苷掺入试验测定细胞DNA合成，采用^3H-脯氨酸掺入法测定细胞胶原合成，观察转化生长因子β1对巩膜成纤维细胞DNA及胶原合成的影响。并通过电镜观察巩膜成纤维细胞的细胞超微结构改变。结果：①除0．1μg／L组外，转化生长因子β1各浓度组均能明显促进巩膜成纤维细胞^3H-胸腺嘧啶摄入(P&;lt;0．05)，呈一定范围内的剂量依赖性，浓度为100μg／L时达到最大效应。除0．1μg／L浓度组外，其他各组均能明显促进巩膜成纤维细胞^3H-脯氨酸摄入(P&;lt;0．05)，并呈剂量依赖性，在浓度为100μg/L时达到最大效应。②电镜下显示巩膜成结维细胞核仁明显，边移，内质网增多，轻度扩张。结论：转化生长因子β1可以在一定范围内呈剂量依赖性地促进体外培养的巩膜成纤维细胞DVA合成和胶原合成，当转化生长因子β1表达下调进可使巩膜成纤维细胞成分减不胶原含量下降，形成了巩膜变薄的组织学基础。     

转化生长因子β1对培养的瘢痕成纤维细胞挛缩功能的作用

目的：研究转化生长因子β1(TGF-β1)对瘢痕成纤维细胞诱导肌动蛋白(α-actin)和粘连蛋白(FN)表达的作用，探讨TGF-β1与烧伤瘢痕挛缩的关系。方法：采用细胞培养、ELISA法、免疫组化、图像分析技术，观察在不同TGF-β1含量作用下，瘢痕成纤维细胞α-actin和FN表达的情况。结果：不同含量TGF-β1诱导瘢痕成纤维细胞表达α-actin和FN的作用不同，以10～50M／L的TGF-β1作用最有效；与对照组相比，实验组的成纤维细胞表达更明显，差异均有显著性意义。结论：TGF-β1诱导瘢痕成纤维细胞α-actin和FN的表达增加可能与烧伤瘢痕挛缩有关。     

转化生长因子β1抑制人肾小管上皮细胞的增殖

背景：慢性肾衰竭进展过程中的一个重要病理改变是炎症和纤维化,主要包括肾小球和肾小管的炎症和纤维化。目前大多数研究主要集中于肾小球,对于肾小管病变的研究相对较少。但实际上部分疾病的肾小管病变出现在肾小球病变之前,其对于疾病预后更具有指导意义。目的：观察转化生长因子β1对人类肾小管上皮细胞HK-2增殖的影响,探索转化生长因子β1在肾小管炎症和纤维化方面的作用。方法：将传代培养的HK-2细胞分成空白对照组和转化生长因子β1作用组,分别使用DMEM／F12培养液,以及含转化生长因子β1（2,5,10#g／L）的DMEM／F12培养液培养,在倒置显微镜下观察各组细胞形态的改变,并使用MTT法检测细胞增殖情况。结果与结论：转化生长因子β1能显著抑制人。肾小管上皮细胞的增殖,并促使细胞向纤维样改变,与空白对照组相比差异有显著性意义（P〈0．05）,其抑制增殖作用并不随转化生长因子β1质量浓度的增大而显著增强,作用时间可持续至72h。结果可见转化生长因子β1能够抑制人肾小管上皮细胞的增殖,并具有促进肾间质纤维化的作用。     

转化生长因子β1促进骨髓间充质干细胞迁移与上调Snail表达有关(英文)

背景:转化生长因子β1可促进骨髓间充质干细胞迁移及增殖,但机制尚不清楚。目的:观察转化生长因子β1对体外培养的骨髓间充质干细胞侵袭力的影响,以及对Snail、基质金属蛋白酶2表达的调节作用。方法:采用密度梯度离心结合贴壁法分离、培养大鼠骨髓间充质干细胞。用改良的Transwell小室检测0,0.5,1,2,5,10μg/L的转化生长因子β1对细胞迁移的影响。用脂质体转染针对Snail基因的特异性小分子干扰RNA至骨髓间充质干细胞,观察转染前后Snail和基质金属蛋白酶2的表达。结果与结论:外源性转化生长因子β1对骨髓间充质干细胞迁移的促进作用具有剂量依赖性,在2μg/L时达到最高。在此浓度下,Snail、基质金属蛋白酶2mRNA表达明显增高。Snail基因沉默可以明显抑制转化生长因子β1对基质金属蛋白酶2表达的促进作用。提示转化生长因子β1可通过促进骨髓间充质干细胞基质金属蛋白酶2的表达提高其迁移能力,此作用与上调Snail表达有关。     

Stimulation of the chemotactic migration of human fibroblasts by transforming growth factor beta

Transforming growth factor beta (TGF-beta) is a potent chemoattractant in vitro for human dermal fibroblasts. Intact disulfide and perhaps the dimeric structure of TGF-beta is essential for its ability to stimulate chemotactic migration of fibroblasts, since reduction with 2-ME results in a marked loss of its potency as a chemoattractant. Although epidermal growth factor (EGF) appears to be capable of modulating some effects of TGF-beta, it does not alter the chemotactic response of fibroblasts to TGF-beta. Specific polyvalent rabbit antibodies to homogeneously pure TGF-beta block its chemotactic activity but has no effect on the other chemoattractants tested (platelet-derived growth factor, fibronectin, and denatured type I collagen). Since TGF-beta is secreted by a variety of neoplastic and normal cells including platelets, monocytes/macrophages, and lymphocytes, it may play a critical role in vivo in embryogenesis, host response to tumors, and the repair response that follows damage to tissues by immune and nonimmune reactions.     

Transforming growth factor beta 1 is an inducer of erythroid differentiation

Normal human bone marrow cells, highly enriched for burst-forming units- erythroid (BFU-E), were cultured in serum-free medium, in the presence and absence of various factors, to investigate the mechanisms involved in regulating erythroid differentiation. In cultures containing interleukin 3 (IL-3), Steel factor (SF), and erythropoietin (Ep), benzidine-positive erythroblasts first became detectable on day 6. Their numbers then rapidly increased until, by day 16, > 99% of the cells, which were 20,000-fold amplified over input numbers, were benzidine-positive. It is interesting to note that omission of either SF or Ep from this assay markedly enhanced the rate of differentiation and reduced total cell numbers, whereas omission of IL-3 had no effect on the rate of differentiation and only slightly reduced cell numbers. Of various agents tested, the most potent erythroid differentiation inducer (and inhibitor of cell proliferation) was found to be transforming growth factor beta 1 (TGF-beta 1). This cytokine stimulated both the rapid appearance of hemoglobin-positive cells and an early cessation of cell proliferation. Using fluorescently tagged antibodies to glycophorin A and fluorescence-activated cell sorter (FACS) analysis, this phenomenon was shown to be due to an early induction of erythroid differentiation rather than an aberrant production of hemoglobin. Methylcellulose assays indicated that the well-documented reduction of BFU-E colony numbers observed with TGF- beta 1 may actually be due to a TGF-beta 1-induced "conversion" of BFU- E into colony-forming units-erythroid (CFU-E). Thus, in vivo, TGF-beta 1 might serve, in part, to decrease the number of mature erythrocytes by stimulating BFU-E to skip a number of cell divisions and differentiate early.     

大鼠皮肤创伤修复过程中转化生长因子β1和β3的表达

背景：转化生长因子β在组织创伤修复中发挥核心和关键作用.目的：观察转化生长因子β1和转化生长因子β3在大鼠皮肤瘢痕性创伤愈合过程中表达量及表达部位的变化.方法：制备大鼠皮肤全层切伤模型,长度1.5-2.0 cm,深及筋膜层.于伤后0 h,12 h,1 d,2 d,3 d,4 d,5 d,6 d,7 d处死大鼠,取损伤部位皮肤,采用免疫组织化学染色检测各时间点转化生长因子β1和转化生长因子β3的表达,并进行定量分析.结果与结论：免疫组织化学染色显示,在创伤愈合的早期阶段（伤后1-5 d）,转化生长因子β1和转化生长因子β3免疫阳性颗粒主要出现在上皮细胞、上皮基底层细胞胞浆、巨噬细胞等免疫细胞胞浆及肉芽组织中;随着创伤修复时间的持续,免疫阳性颗粒主要出现在真皮层的成纤维细胞及细胞外基质中.其中转化生长因子β1的表达在创伤后1-5 d最强,而转化生长因子β3在创伤后六七天时开始明显表达.可见在大鼠皮肤瘢痕性创伤愈合过程中,转化生长因子β1的表达先于转化生长因子β3,提示转化生长因子β1与胶原形成及创伤修复关系密切,而转化生长因子β3在愈合后期表达量有升高趋势,其可能与创伤后期的组织改建密切相关.     

转化生长因子β1诱导骨髓间充质干细胞体外构建纤维蛋白胶软骨模块

目的：观察体外构建骨髓间充质千细胞、改良纤维蛋白胶及生长因子的组织工程软骨模块的可行性。方法：实验于2004-07／12在南方医科大学附属珠江医院中心实验室进行。选取新西兰兔10只，密度梯度法分离培养兔骨髓间充质干细胞，在培养系统中加入生长因子（含10μg/L转化生长因子β1，100mol／L地塞米松，50mg／L维生素C，以及1％ITS-A。培养第2,4，6，8天采用四甲基偶氮噻唑法在酶标仪上检测吸光度值表示细胞增殖。于培养7，14d行细胞爬片甲苯胺蓝染色及Ⅱ胶原免疫组化。诱导后骨髓间充质干细胞种植于改良纤维蛋白胶支架上，加入生长因子诱导培养，于培养7，14，21d行形态组织学及透射电镜检查。结果：实验兔10只均进入实验结果分析。①四甲基偶氮噻唑法测定培养第6和8天后，实验组骨髓间充质干细胞增殖的吸收度值高于对照组（实验组：0．4554&;#177;0．0206，0．5348&;#177;0．0169；对照组：0．4270&;#177;0．0255，0．5057&;#177;0．0368，P〈0．05）。②细胞爬片甲苯胺蓝染色细胞周围有蓝色基质。Ⅱ型胶原免疫组化染色阳性。③诱导后骨髓间充质干细胞在改良纤维蛋白胶支架中培养，Masson染色可见胞浆及细胞周围有胶原的形成；Ⅱ型胶原免疫组化染色阳性。透射电镜可见细胞代谢旺盛。结论：骨髓间充质干细胞、改良纤维蛋白胶及生长因子的组织工程模块体外培养系统中，改良纤维蛋白胶支架相容性好，转化生长因子β等生长因子促进骨髓间充质干细胞在改良纤维蛋白胶支架增殖，诱导分化成软骨细胞表型。     

转化生长因子β1诱导骨髓间充质干细胞体外构建纤维蛋白胶软骨模块

目的:观察体外构建骨髓间充质干细胞、改良纤维蛋白胶及生长因子的组织工程软骨模块的可行性。方法:实验于2004-07/12在南方医科大学附属珠江医院中心实验室进行。选取新西兰兔10只,密度梯度法分离培养兔骨髓间充质干细胞,在培养系统中加入生长因子(含10μg/L转化生长因子β1,100mol/L地塞米松,50mg/L维生素C,以及1%ITS-A。培养第2,4,6,8天采用四甲基偶氮噻唑法在酶标仪上检测吸光度值表示细胞增殖。于培养7,14d行细胞爬片甲苯胺蓝染色及Ⅱ胶原免疫组化。诱导后骨髓间充质干细胞种植于改良纤维蛋白胶支架上,加入生长因子诱导培养,于培养7,14,21d行形态组织学及透射电镜检查。结果:实验兔10只均进入实验结果分析。①四甲基偶氮噻唑法测定培养第6和8天后,实验组骨髓间充质干细胞增殖的吸收度值高于对照组(实验组:0.4554±0.0206,0.5348±0.0169;对照组:0.4270±0.0255,0.5057±0.0368,P<0.05)。②细胞爬片甲苯胺蓝染色细胞周围有蓝色基质。Ⅱ型胶原免疫组化染色阳性。③诱导后骨髓间充质干细胞在改良纤维蛋白胶支架中培养,Masson染色可见胞浆及细胞周围有胶原的形成;Ⅱ型胶原免疫组化染色阳性。透射电镜可见细胞代谢旺盛。结论:骨髓间充质干细胞、改良纤维蛋白胶及生长因子的组织工程模块体外培养系统中,改良纤维蛋白胶支架相容性好,转化生长因子β等生长因子促进骨髓间充质干细胞在改良纤维蛋白胶支架增殖,诱导分化成软骨细胞表型。