应力导致关节软骨退变机制的实验研究

目的　本实验的目的是探讨应力导致关节软骨退变的病理过程与生物力学机制。方法　以 32只中国白兔为实验对象 ,在关节面施以持续高 低压应力 ,观察 4、12周 ,用组织学、组织化学、免疫组化及透射电镜为方法 ,分析退变软骨。结果　低压应力引起的退变首先表现为早期软骨细胞功能减退 ,软骨细胞代偿增生反应轻 ,然后基质破坏 ,最终导致整个软骨退变。高压应力引起的退变首先是早期基质破坏 ,软骨细胞代偿增生同时发生 ,继而软骨细胞退变 ,最终整个关节软骨退变。细胞因子主要在退变软骨的浅、移行层软骨细胞胞浆内阳性染色 ,偶可在浅层细胞近周及裂隙处见基质阳性染色。结论　高、低压应力均可导致关节软骨退变 ,低压应力首先引起软骨细胞退变 ;高压应力首先引起基质破坏。退变软骨的软骨细胞可异常合成、分泌细胞因子 ,细胞因子在软骨退变中发挥作用。     

炎症因子与椎间盘退变

椎间盘退变是导致腰背痛的主要原因之一.研究证明,肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-1β、前列腺素E2、环氧化酶-2、一氧化氮等炎症因子在椎间盘退变进程中起重要作用.它们主要通过引起炎症反应、诱导细胞凋亡等途径促进椎间盘退变,同时各种炎症因子之间还可相互影响.针对性地阻断退变椎间盘中炎症因子的作用途径,抑制其引起的炎症反应,减少椎间盘细胞凋亡,对于延缓椎间盘退变进程,减轻患者临床症状具有重要意义.     

兔骨关节炎中基质金属蛋白酶-1、3与白细胞介素-1β表达及关节软骨细胞凋亡的研究

目的 观察骨关节炎(OA)中基质金属蛋白酶(MMP)-1、3与白细胞介素-1β(IL-1β)的表达及关节软骨细胞凋亡,探讨其在OA发病机制中的作用.方法 将20只中国大白兔随机分成正常组(A组)、实验组(B组),每组10只,A组未造模,B组采用Hulth法制成OA模型,4周后取胫骨平台关节软骨进行组织病理学检查,采用免疫组织化学和原位末端标记细胞凋亡检测法分别检测关节软骨和滑膜中的MMP-1、3、IL-1β及软骨细胞凋亡指数(AI)的水平.结果 组织病理学检查可见,B组关节软骨退变程度明显重于A组,符合OA关节软骨退变特征;通过检测MMP-1、3,IL-1β和AI,A组的结果分别是21.005±9.406、18.697±8.225、0.100±0.040和14.900±3.400,B组的结果分别是56.147±22.340、46.182±20.561、0.180±0.060和25.400 ±5.200;B组MMP-1、3和AI的水平均明显高于A组(P＜0.01),B组IL-1β水平高于A组(P＜0.05).结论 MMP-1、MMP-3、IL-1β的表达及关节软骨细胞凋亡在OA发病机制中作用重要,其异常升高与OA关节软骨退变和炎症反应密切相关.     

乌头汤调控lncRNA GAS5抑制骨关节炎软骨细胞炎症反应的研究

目的：探讨乌头汤调控lncRNA GAS5进而干预白细胞介素-1β(IL-1β)诱导的软骨细胞炎症反应的效果及机制,为乌头汤的临床应用提供实验依据。方法：4周龄SPF级SD雄性大鼠10只,提取大鼠双膝关节软骨,进行体外软骨细胞的分离与培养,采用Ⅱ型胶原免疫组化法对软骨细胞进行鉴定;经10 ng·mL^-1 IL-1β干预24 h诱导软骨细胞退变。将软骨细胞随机分为空白对照组、模型对照组(10 ng·mL^-1 IL-1β)和乌头汤组(150μg·m L^-1乌头汤水提物)。通过Real-time PCR检测各组软骨细胞中lncRNA GAS5的相对表达水平。免疫荧光染色技术检测软骨细胞中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、基质金属蛋白酶-3(MMP-3)和解聚蛋白样金属蛋白酶-5(ADAMTS-5)的荧光表达量。结果：与空白对照组比较,模型对照组lncRNA GAS5相对表达水平显著升高(P <0.01),TNF-α、MMP-3和ADAMTS-5荧光表达增强;与模型对照组比较,乌头汤组lncRNA GAS5相对表达水平显著降...     

自噬在大鼠椎间盘软骨终板退变中的作用

背景:椎间盘退变引起的下腰痛是导致老年人瘫痪的主要原因,但是有关椎间盘退变的机制仍未完全明确.自噬可能在椎间盘退变过程中起重要作用.目的:研究自噬对大鼠腰椎间盘软骨终板细胞Ⅱ型胶原纤维α1(COL2A1)和聚集蛋白聚糖(aggrecan)分泌的影响.方法:将细胞分为对照组、巴弗洛霉素(Baf)组、肿瘤坏死因子-α(TN...     

TRPV4影响软骨细胞退变的初步研究

目的:探讨并验证瞬时受体电位香草素受体4(transient receptor potential vanilloid 4,TRPV4)影响软骨细胞的退变。方法:取新生SD大鼠软骨细胞,甲苯胺蓝染色和阿利新蓝染色鉴定;通过白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)构建体外软骨细胞炎症模型,采用TRPV4抑制剂处理炎症条件下软骨细胞,经荧光定量PCR(real-time PCR,PCR)法检测软骨细胞中TRPV4、基质金属肽酶-13 (matrix metallopeptidase 13,MMP-13)、血小板反应蛋白解整合素金属肽酶-5(A aisintegrin and metalloproteinase with thrombospondin 5,ADAMTS-5)、一氧化氮合酶2(nitric oxide synthase2,NOS2)、Ⅱ型胶原α1 (collagen,typeⅡ,alpha 1,Col2α1)和软骨蛋白聚糖(aggrecan,Acan)mRNA;通过TRPV4不同浓度过表达质粒处理原代软骨细胞,筛选最佳过表达剂量,并经RT-PCR法检测最佳TR...     

益气化瘀方减轻HIF-1α条件性基因敲除小鼠膝关节软骨退变的研究

目的:观察低氧诱导因子-1α(HIF-1α)条件性基因敲除(HIF-1αcKO)小鼠膝关节软骨退变情况,以及中药复方益气化瘀方对减缓HIF-1αcKO小鼠椎间盘软骨退变的作用。方法:①将杂交繁殖获得同窝的HIF-1α+/+小鼠和HIF-1α-/-小鼠,分为HIF-1α+/+小鼠4月龄组、HIF-1α-/-小鼠4月龄组,HIF-1α+/+小鼠6月龄组、HIF-1α-/-小鼠6月龄组,每组3只。在4、6月龄依次处死相应的小鼠,取膝关节软骨,分别进行Mankin评分、藏红固绿、HE及免疫组化相关指标染色及分析,研究软骨组织的改变情况。②将2月龄HIF-1α-/-小鼠随机分为生理盐水组和益气化瘀方组,以生理盐水组小鼠作为正常对照,每组6只,共12只。灌胃给药2个月后,取各组小鼠的膝关节,分别进行Mankin评分、HE染色和藏红固绿染色,ColⅡ、ColX、VEGF、MMP-13和Sox9免疫组化染色及分析。结果:①HIF-1α-/-小鼠4月龄组膝关节软骨组织出现破损和骨化,细胞分布不均匀,软骨细胞减少。HIF-1α-/-小鼠6月龄组膝关节软骨损伤更加严重。HIF-1α-/-小鼠4月龄组椎间盘软骨中Ⅱ型胶原(ColⅡ)和Sox9表达降低,X型胶原(ColX)、基质金属蛋白酶-13(MMP-13)、VEGF蛋白表达增加。HIF-1α-/-小鼠6月龄组ColⅡ蛋白与Sox9表达进一步降低,ColX、MMP13、VEGF蛋白表达进一步上升。②与生理盐水组比较,益气化瘀方干预后膝关节软骨部位的骨化和缺损减轻,软骨细胞分布较均匀,细胞总数增加。免疫组化染色显示,益气化瘀方组ColⅡ和Sox9蛋白的表达升高,ColX、VEGF、MMP-13蛋白表达减少。结论:HIF-1α基因敲除小鼠出现了膝关节软骨退变,并且这种退变随着小鼠增龄而加重;益气化瘀方可以减轻HIF-1α基因敲除小鼠的膝关节软骨退变。     

壳聚糖微球介导人IL-1Ra与TGF-β1基因转染兔软骨细胞的研究

目的 探讨壳聚糖微球介导人IL-1Ra与TGF-β1基因转染兔软骨细胞.方法 制备壳聚糖微球介导IL-1Ra质粒与TGF-β1质粒转染系统,检测其载药、体外释药、降解,转染体外培养的兔膝软骨细胞,荧光显微镜、荧光定量PCR、MTT检测.结果 壳聚糖-IL-1Ra DNA和壳聚糖-TGF-β1 DNA微球平均径粒(2.8±0.2)μm和(2.6±0.1)μm,包封率(88.3±4.1)%和(87.2±2.6)%;缓释分3个阶段.荧光显微镜观察、荧光定量PCR证实软骨细胞转染基因得到30 d表达.MTT提示转染促进软骨细胞增殖.结论 壳聚糖微球介导IL-1Ra与TGF-β1基因转染软骨细胞可获得较长期目的基因表达,可促进软骨细胞增殖,为用于基因治疗软骨退变和促进软骨修复提供基础.     

炎症因子与椎间盘退变

椎间盘退变是导致腰背痛的主要原因之一。研究证明,肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-1β、前列腺素E2、环氧化酶-2、一氧化氮等炎症因子在椎间盘退变进程中起重要作用。它们主要通过引起炎症反应、诱导细胞凋亡等途径促进椎间盘退变,同时各种炎症因子之间还可相互影响。针对性地阻断退变椎间盘中炎症因子的作用途径,抑制其引起的炎症反应,减少椎间盘细胞凋亡,对于延缓椎间盘退变进程,减轻患者临床症状具有重要意义。     

退变颈椎间盘中IL-17表达与分布的研究

目的 观察退变颈椎间盘中自细胞介素-17(IL-17)的表达与分布,并探讨其与颈椎间盘退变发生发展的关系.方法 实时荧光相对定量PCR(RQ-PCR)检测30例退变颈椎间盘及10例正常对照椎间盘中IL-1β、IL-17、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和孤核受体(retinoid-related orphan re-ce...