吡那地尔对人肺动脉平滑肌细胞内Ca2+浓度的影响

目的 探讨ATP敏感性钾(KATP)通道开放剂吡那地尔(Pin)对内皮素1(ET-1)诱导的人肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)增殖及细胞内[Ca2+]i的影响.方法 体外培养人PASMCs,用ET-1诱导其增殖,应用MTT法、Fluo-3和激光扫描共聚焦显微镜技术评价Pin对ET-1诱导的人PASMCs增殖及PASMCs[Ca2+]i调节的作用.结果 Pin显著抑制ET-1诱导的人PASMCs增殖.呈浓度依赖效应,KATP通道拮抗剂格列本脲呈浓度依赖性阻断Pin的作用;ET-1诱导人PASMCs内[Ca2+]i显著增加,Pin(10 μmol/L)拈抗ET-1诱导的人PASMCs内[Ca2+]i升高.结论 KATP通道开放剂Pin可明显抑制ET-1诱导的人PASMCs增殖作用,抑制细胞内Ca2+浓度增加.     

叶酸抑制同型半胱氨酸诱导大鼠血管平滑肌细胞增殖的研究

目的探讨叶酸抑制同型半胱氨酸致大鼠血管平滑肌细胞增殖的研究。方法培养大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞(VSMC),流式细胞仪检测VSMC周期,[3H]TdR参入测定VSMC的DNA合成。结果同型半胱氨酸以剂量依赖关系使VSMC周期中的G0/G1期细胞比例明显减少,S期细胞比例显著增多,增加VSMC的[3H]TdR参入。叶酸可明显抑制同型半胱氨酸诱导的作用。结论同型半胱氨酸能诱导VSMC增殖,叶酸能抑制同型半胱氨酸诱导的VSMC增殖。     

脱氢表雄酮对肺动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的：脱氢表雄酮(DHEA)对低氧内皮细胞条件培养液(HECCM)刺激肺动脉平滑肌细胞(PASMC)增殖的影响。方法：体外培养猪肺动脉内皮细胞(PAEC)，制备内皮细胞培养液，观察内皮细胞培养液在常氧(NECCM组)，HECCM组，NECCM DHEA及HECCM DHEA条件下，PASMC细胞周期和PASMCPCNA表达。结果：与NECCM组对照，HECCM可促进PASMC增殖，HECCM DHEA，能抑制G0／G1期细胞向S期转化及PASMC PCNA的表达。结论：DHEA对HECCM诱导的PASMC增殖有明显的抑制作用。     

普伐他汀对非对称性二甲基精氨酸促血管平滑肌细胞增殖的影响

目的　探讨非对称性二甲基精氨酸 (ADMA)对血管平滑肌细胞增殖的作用和普伐他汀对ADMA促平滑肌细胞增殖的影响及其机制。方法　用[3H]TdR掺入法和MTT比色法检测ADMA对培养的牛胸主动脉平滑肌细胞增殖作用的量效关系和时效关系 ,以及普伐他汀等药物对ADMA刺激平滑肌细胞增殖的影响。结果　用 30～ 30 0 μmol·L- 1ADMA分别孵育平滑肌细胞后 ,都明显增加血管平滑肌细胞DNA的合成 ,表现在 [3H]TdR掺入量由对照组的(6 38± 134)cpm增加到大剂量ADMA组的 (12 79±111)cpm。用 30 0 μmol·L- 1ADMA孵育细胞 2 4～ 96h呈时间依赖性地促进血管平滑肌细胞增殖 ,表现为 [3H]TdR掺入量随着时间的延长分别增加为对照组的 1.5 ,2 .7,4 .3和 5 .6倍。普伐他汀 (10 0 μmol·L- 1)可逆转ADMA所致的细胞DNA合成的增加 ,[3H]TdR掺入量由ADMA单独孵育组的 (6 10± 2 0 2 )cpm降低至普伐他汀处理组的 (35 6± 12 6 )cpm。此外 ,一氧化氮供体硝普钠和抗氧化剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐处理后也可逆转这种增加。MTT法测定细胞数也证明 ,30～ 30 0 μmol·L- 1普伐他汀呈剂量依赖性地对抗ADMA所致的平滑肌细胞增殖。结论ADMA可促进血管平滑肌细胞的增殖 ;普伐他汀对ADMA所诱导的平滑肌细胞增殖具有抑制作用 ;这两者均可能与细?     

SB_(224289)对5-HT诱导的肺动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的研究 5 HT1B受体拮抗剂SB2 2 42 89对 5 HT诱导的肺动脉平滑肌细胞增殖的影响 ,探讨肺血管构型重建的 5 HT1B受体机制。方法分离培养大鼠肺动脉平滑肌细胞 ,用MTT法和3 H TdR掺入法检测细胞增殖和DNA合成。结果SB2 2 42 89能剂量依赖地抑制 5 HT诱导的肺动脉平滑肌细胞增殖。SB2 2 42 89能剂量依赖地抑制 5 HT诱导的肺动脉平滑肌细胞的DNA合成 ,SB2 2 42 89能阻断 5 HT对肺动脉平滑肌细胞的促有丝分裂作用。结论SB2 2 42 89能抑制 5 HT引起的肺动脉平滑肌细胞的增殖。5 HT1B受体在 5 HT诱导的肺动脉平滑肌细胞增殖中有重要作用。     

普洛托品对兔胸主动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的　观察普洛托品 (Pro)对正常和内皮素 (ET)诱导的血管平滑肌细胞 (VSMC)增殖的影响。方法　采用组织块贴壁法培养兔胸主动脉VSMC ,应用细胞计数、[3 H] TdR参入量、微量MTT比色测定及电镜法 ,观察Pro对VSMC增殖、DNA合成和细胞超微结构的变化。结果　ET对VSMC的增殖和DNA合成有显著的促进作用 ;1、10、10 0μmol·L-1浓度Pro能够逆转ET所致的 [3 H] TdR参入量、MTT比色的吸光度、细胞计数的增多及电镜下细胞超微结构的改变 ,且随着浓度的增加及时间的延长 ,抑制作用愈显著 ;10、10 0 μmol·L-1浓度Pro对未经ET处理的VSMC有抑制其增殖作用 ,但其抑制作用弱于ET处理组。结论　Pro可显著地抑制正常及ET诱导的VSMC增殖 ,并且对ET诱导的VSMC增殖抑制作用更明显 ,提示Pro可作为临床防治动脉粥样硬化的有效药物。     

内源性一氧化碳调节肺动脉平滑肌细胞增殖的信号转导

目的　探讨内源性一氧化碳 (CO)抑制肺动脉平滑肌细胞 (PASMC)增殖的细胞内信号转导机制。方法　培养的大鼠PASMC低氧 2 4h ,采用3 H 胸腺嘧啶 (3 H TdR)参入法检测DNA合成率 ;Western Blot检测细胞外信号调节激酶(ERK)的蛋白表达。结果　低氧使PASMC的3 H TdR参入增加 137 2 8% (P <0 0 1) ;血红素氧合酶 (HO)诱导剂氯化血红素 (Hemin)以浓度依赖的方式抑制低氧PASMC的3 H TdR参入 ,分别降低 19 14 %、2 9 94 %、4 3 97% (P均 <0 0 1) ;HO抑制剂锌原卟啉 (ZnPP)促使低氧PASMC的3 H TdR参入增加 37 89% (P <0 0 1) ;MEK1抑制剂PD980 5 9降低了低氧和低氧 +ZnPP组PASMC的 3 H TdR参入34 88%和 2 3 94 % (P均 <0 0 1)。低氧使PASMC的ERK蛋白表达增加 4 0 9% ;Hemin以浓度依赖的方式抑制低氧PASMC的ERK表达 ,分别降低 33 99%、4 5 97%、6 6 0 1%(P均 <0 0 1) ;ZnPP促使低氧PASMC的ERK表达增加5 7 76 % ,(P <0 0 1) ,PD980 5 9降低了低氧和低氧 +ZnPP组PASMC的ERK表达 34 88%和 2 4 78% (P均 <0 0 1)。结论　内源性CO抑制低氧PASMC增殖的作用可能通过MAPK来介导     

盐酸埃他卡林对动脉平滑肌ATP敏感性钾通道与其开放剂[3H]P1075特异性结合与解离动力学过程的影响

目的 :研究盐酸埃他卡林 (iptakalimhydrochlo ride ,Ipt)对 [3 H]P10 75与血管平滑肌ATP敏感性钾通道 (ATP sensitivepotassiumchannel ,KATP)结合和解离动力学过程的影响。方法 :KATP开放剂 [3 H]P10 75与大鼠去内皮主动脉平滑肌特异性结合与解离的动力学试验。结果 :Ipt预先与主动脉平滑肌孵育后 ,[3 H]10 75的结合速率减慢 ,结合幅度降低 ,平衡结合常数KA 降为对照组的 2 8.3% (P <0 .0 1) ;结合[3 H]P10 75的解离速率增快 ,解离幅度增加 ,平衡解离常数KD 则较对照组增加 3.5 3倍 (P <0 .0 1)。在相同条件下 ,KATP 开放剂吡那地尔 (pinacidil ,Pin)的作用与之相似 ,KA值降为对照组的 35 % (P <0 .0 1) ,KD 值较对照组增加 2 .88倍 (P <0 .0 1)。结论 :Ipt与KATP开放剂Pin的作用相似 ,两者均可变构调节KATP,抑制其与开放剂的结合过程 ,促进其解离过程。     

埃他卡林对兔肺动脉平滑肌内皮细胞钙浓度的影响

目的观察埃他卡林(IPT)对内皮素1(ET-1)诱导培养的兔肺动脉平滑肌细胞(PASMC)增殖的影响,并探讨其作用机制。方法应用细胞培养、氚-胸腺嘧啶核苷([3H]-TdR)参入实验、Fluo-3和激光扫描共聚焦显微镜技术评价IPT对ET-1诱导的兔PASMC增殖及PASMC[Ca2+]i调节的作用。结果ET-1(10-7mol.L-1)使PASMC[3H]-TdR参入量增加146.8%,与对照组比较,差异有显著性(P<0.01);在相同条件下,加入ET-1的同时,分别向培养基中加入IPT10-7、10-6、10-5mol.L-1,细胞[3H]-TdR参入量分别下降(19.8±4.6)%、(41.2±9.5)%、(54.7±10.1)%,与ET-1组比较差异有显著性(P<0.01);对照组PASMC[Ca2+]i荧光强度和荧光光密度值较低;ET-1组中[Ca2+]i荧光光密度值明显增高,从73.7±10.1增加到143.8±28.2,两者比较差异有显著性(P<0.01);而IPT组细胞内荧光光密度值明显降低,仅从74.30±10.2增加到86.03±9.82,与ET-1组比较差异有显著性(P<0.01)。结论IPT可明显抑制ET-1诱导的兔PASMC增殖、DNA合成;减少钙通道的开放时间,抑制细胞内Ca2+浓度增加。     

吡那地尔对人肺动脉平滑肌细胞KATP通道蛋白及ERK1/2磷酸化的影响

目的 探讨ATP敏感性钾(KA口)通道开放剂吡那地尔(Pin)对内皮素1(ET-1)诱导的人肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)KATe通道蛋白表达及细胞外信号调节激酶1和2(ERK1/2)磷酸化的影响.方法 体外培养人PASMCs,用ET-1诱导其增殖,应用Westem blot方法评价Pin对ET-1诱导的人PASMCs KArP通道蛋白磺酰脲受体亚单位(SUR2B)和内向整流性孔区亚单位(Kir6.1)表达的影响以及ERK1/2的磷酸化作用.结果 ET-1显著下调SUR2B的表达,Pin呈浓度依赖性上调SUR2B表达;KATP通道拮抗剂格列本脲阻断Pin的作用,而Kir6.1的表达不受影响.ET-1呈时间依赖性促进人PASMCs ERK1/2磷酸化,10min时最明显,Pin(10μmol/L)拮抗ET-1对ERK1/2磷酸化的影响,格列本脲逆转Pin的作用.结论 KATP通道开放剂Pin通过上调KATP通道蛋白的表达,抑制ET-1诱导的人PASMCs ERK1/2的磷酸化.     

脂质体携载C型利钠利尿肽对血管效应的影响

目的　观察脂质体携载Ｃ 型利钠利尿肽（ＣＮＰ） 对大鼠主动脉血管舒张、平均动脉血压和内皮素（ＥＴ） 刺激主动脉平滑肌细胞增殖的影响。方法　主动脉环灌流测定血管张力;平滑肌细胞培养;［３Ｈ］ ＴｄＲ参入测定ＤＮＡ合成;反相蒸发法制备脂质体。结果　脂质体携载ＣＮＰ的舒张主动脉和降低平均动脉压作用显著强于单用ＣＮＰ。ＥＴ刺激平滑肌细胞增殖,使ＶＳＭＣ［３Ｈ］ ＴｄＲ 参入量增加１－８ 倍。１０ －８ 、１０－ ７ 、１０－ ６ ｍｏｌ·Ｌ－１ ＣＮＰ可使ＥＴ 刺激［３Ｈ］ ＴｄＲ参入量分别下降２％ （ Ｐ＞ ０－０５）, ２１ ％ （ Ｐ＜ ０－０５） 和５５％ （ Ｐ＜０－０１） ,而同样浓度的脂质体携载ＣＮＰ 使ＥＴ 刺激ＶＳＭＣ［３Ｈ］ ＴｄＲ参入量分别下降５６％ （ Ｐ＜ ０－０１）,５９％ （ Ｐ＜０－０１） 和６６ ％ （ Ｐ＜ ０－０１）, 其作用强于ＣＮＰ。脂质体和ＣＮＰ对［３Ｈ］ ＴｄＲ 参入量与对照组相比差异无显著性。结论　脂质体携载ＣＮＰ的舒张血管、降低平均动脉压和抑制ＥＴ 刺激平滑肌细胞增殖作用强于ＣＮＰ     

Anti-proliferating effect of iptakalim, a novel KATP channel opener, in cultured rabbit pulmonary arterial smooth muscle cells

ATP-sensitive potassium (K(ATP)) channels of pulmonary arterial smooth muscle cells (SMCs) have been implicated in pulmonary hypertension. Iptakalim, designed and synthesized by ourselves, is a newly selective K(ATP) channel opener. Here, we explored the effects of iptakalim on the rise of cytoplasmic free Ca(2+) concentration ([Ca(2+)](cyt)) induced by endothelin-1 (ET-1) and on the proliferation of cultured rabbit pulmonary arterial SMCs. The results showed that iptakalim inhibited the [Ca(2+)](cyt) increase. The enhanced [(3)H]thymidine incorporation was inhibited and the transition of cells from static phase (G(0)/G(1)) to DNA synthesis (S) and mitotic phase (G(2)/M) was held back by iptakalim in a concentration-dependent manner. Glyburide abolished the inhibitory effect of iptakalim. In conclusion, we have shown that iptakalim had an inhibitory effect on [Ca(2+)](cyt) increase and the proliferation of pulmonary arterial SMCs induced by endothelin-1 through activation of K(ATP) channels. These findings suggest that iptakalim might be a promising candidate for the treatment of pulmonary arterial remodeling in pulmonary hypertension.     

Iptakalim inhibited endothelin-1-induced proliferation of human pulmonary arterial smooth muscle cells through the activation of K(ATP) channel

To determine whether iptakalim inhibited endothelin-1(ET-1)-induced proliferation of human pulmonary arterial smooth muscle cells (PASMCs) through the activation of ATP-sensitive potassium (K(ATP)) channel, the effect of iptakalim on the ET-1-induced proliferation of human PASMCs was examined by [3H]thymidine incorporation, staining with propidium iodide and flow cytometry analyses, measurement of cytosolic free Ca2+ concentration ([Ca2+]cyt) and Western blot for the phosphorylation of extracellular signal-regulated kinases 1 and 2 (ERK1/2) in vitro. The results showed that iptakalim inhibited the ET-1-induced proliferation of human PASMCs, including [3H]thymidine incorporation and the transition of cell cycle phase, and blocked the ET-1-induced transient raise of [Ca2+]cyt, and the ET-1-induced phosphorylation of ERK1/2 in the human PASMCs. Iptakalim exerted a similar role as pinacidil did in human PASMCs and both inhibited the [3H] thymidine incorporation and the transition of cell cycle phase induced by ET-1 in the human PASMCs. Furthermore, we found that the inhibition of iptakalim and pinacidil on the ET-1-induced proliferation of human PASMCs was blocked by glyburide, a selective K(ATP) channel antagonist. These findings provide a strong evidence to support that iptakalim acts as a specific K(ATP) channel opener to antagonize the proliferating effect of ET-1 in the human PASMCs. This study provides further evidence that iptakalim may serve as another candidate drug to treat pulmonary hypertension.     

肝素对生长因子诱导的大鼠肺动脉平滑肌细胞分裂和增殖的影响

目的：探讨肝素是否能抑制生长因子诱导的大鼠肺动脉平滑肌细胞（ＰＡＳＭＣ）分裂和增殖。方法：应用含１０％ＦＢＳ的Ｍ－１９９培养液培养大鼠ＰＡＳＭＣ。细胞分裂及细胞增殖分别用［ｍｅｔｈｙｌ－＾３Ｈ］ＴｄＲ和细胞计数监测。结果：ＦＢＳ（１０％），以及ＦＢＳ（１％）与ＰＤＧＦ（５０μｇ·Ｌ＾－１），ＦＧＦ（５０μｇ·Ｌ＾－１），或ＩＬ－１α（１００ｎｇ·Ｌ＾－１）联合应用均能增加大鼠ＰＡＳＭＣ分裂。肝素（     

DDPH对血管平滑肌细胞增殖及PDGF-B、bFGFc-sis、c-myc的影响

目的：观察１－（２，６－二甲基苯氧基）－２－（３，４－二甲氧基苯乙胺基）丙烷盐酸盐（ＤＤＰＨ）对血管平滑肌细胞增殖的作用及对生长因子ＰＤＧＦ－Ｂ，ｂＦＧＦ及其相关癌基因ｃ－ｓｉｓ，ｃ－ｍｙｃ表达的影响。方法：内皮素建立培养的ＶＳＭＣ增殖模型，氚—胸腺嘧啶核苷（３Ｈ－ＴｄＲ）参入法，流式细胞术，１９９７－０３－２３收稿，１９９７－０４－０４修回＊国家教委优秀年轻教师基金资助项目１同济医院心内科，武汉４３００３０作者简介：熊一力，女，４１岁，博士后钱家庆，男，６３岁，博士生导师，药理教研室主任，中国药理学会常务理事免疫细胞化学及Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ杂交方法测定。结果：ＤＤＰＨ能逆转内皮素所致的３Ｈ－ＴｄＲ参入量增多，阻止ＶＳＭＣ由静止期（Ｇ０／Ｇ１期）进入ＤＮＡ合成期（Ｓ期）和有丝分裂期（Ｇ２／Ｍ期），并能逆转内皮素引起的ＰＤＧＦ－Ｂ，ｂＦＧＦ抗原，ｃ－ｓｉｓ，ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ表达增强。结论：ＤＤＰＨ能抑制ＶＳＭＣ增殖，与生长因子及癌基因调控的分子生物学机制有关。     

Cl~-通道在内皮素-1引起的血管平滑肌细胞增殖中的作用

目的　研究Cl-通道在内皮素 1(endothelin 1,ET 1)引起的血管平滑肌细胞增殖中的作用 ,并探讨其可能的作用机制。方法　通过细胞计数和3H TdR参入实验 ,并结合fura 2 /AM荧光测定胞浆游离Ca2 + 浓度 ([Ca2 + ]i)等技术 ,观察了Cl-通道阻断剂对ET 1引起的 [Ca2 + ]i 变化及血管平滑肌细胞增殖的影响。结果　Cl-通道阻断剂DIDS可呈浓度依赖性地抑制 10nmol·L-1ET 1引起的血管平滑肌细胞增殖 ,其它Cl-通道阻断剂如IAA 94、NPPB、SITS、DPC和速尿均无此作用 ,DIDS也能抑制 10nmol·L-1ET 1引起的内流相 [Ca2 + ]i 升高 ,而对ET 1引起的Ca2 + 释放无影响 ;预先将细胞与 1μmol·L-1nifedipine作用后 ,3μmol·L-1DIDS对 10nmol·L-1ET 1引起的内流相 [Ca2 + ]i 升高及血管平滑肌细胞增殖不再有效 ,将细胞与 10 μmol·L-1SK&F96 36 5预孵后 ,DIDS却能进一步抑制ET 1的上述作用 ;3μmol·L-1DIDS对 30mmol·L-1KCl引起的胞浆[Ca2 + ]i升高无影响。结论　DIDS可通过阻断Cl-通道来抑制ET 1因促发Cl-通道开放经电压依赖性钙通道的Ca2 +内流及细胞增殖 ,DIDS敏感的Cl-通道可能在ET 1促发的Ca2 + 内流及血管平滑肌细胞增殖的调控上都起着重要的作用     

DDPH抑制血管平滑肌细胞增殖及对HSP70和P53的影响

采用内皮素建立培养的血管平滑肌细胞增殖模型，用氚－胸腺嘧啶核苷（［３Ｈ］－ＴｄＲ）参入法，流式细胞术，Ｗｅｓｔｅｒｎ及Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ杂交方法，观察了１－（２，６－二甲基苯氧基）－２－（３，４－二甲氧基苯乙胺基）丙烷盐酸盐（ＤＤＰＨ）对血管平滑肌细胞增殖的作用及对热应激蛋白７０ｋｄ（ＨＳＰ７０）及其ｍＲＮＡ和抑癌基因Ｐ５３表达的影响。结果发现：ＤＤＰＨ能逆转内皮素所致的［３Ｈ］－ＴｄＲ参入量增多，阻止血管平滑肌细胞由静止期（Ｇ０／Ｇ１期）进入ＤＮＡ合成期（Ｓ期）和有丝分裂期（Ｇ２／Ｍ期），并能逆转内皮素引起的ＨＳＰ７０及ｍＲＮＡ表达增强，Ｐ５３抑癌基因及ｍＲＮＡ表达减弱。提示：ＤＤＰＨ能抑制血管平滑肌细胞增殖，与ＨＳＰ７０及Ｐ５３的调控有关。     

血管紧张素转化酶和血管紧张素Ⅱ对低氧促培养的肺内小动脉平滑肌细胞增殖作用的影响

目的：研究局部血管紧张素转化酶及血管紧张素Ⅱ和低氧促进肺动脉平滑肌细胞增殖作用之间的关系。方法：分离培养肺内小动脉平滑肌细胞,测定[^3H]thymidine掺入和细胞计数作为细胞增殖的指标。结果：低氧显著促进培养的肺内小动脉平滑肌细胞增殖,其[^3H]thymidine掺入和细胞计数分别增加166．6％（P＜0．01）和52．0％（P＜0．01）。captopril和losartan预处理可显著抑制低氧对肺内小动脉平滑肌细胞增殖的促进作用,[^3H]thymidine掺入分别被抑制51．3％（P＜0．01）和49．8％（P＜0．01）,细胞计数分别被抑制22．2％（P＜0．01）和17．％（P＜0．01）。而PD－123319基本无明显作用。结论：肺内小动脉平滑肌细胞局部血管紧张素转化酶的过度表达及血管紧张素Ⅱ在低氧促平滑肌细胞增殖中发挥重要作用。