商陆皂苷甲对 IL －1β诱导的肾小球系膜细胞ERK 通路活化的影响

目的：观察商陆皂苷甲（ EsA）含药血清对大鼠肾小球系膜细胞（ rGMC）增殖及其对IL－1β诱导rGMC的ERK1／2 mRNA、p－ERK1／2表达的影响,探讨EsA治疗肾小球系膜细胞增殖性疾病的可能机制。方法将SD大鼠随机分成对照组（0.5％羧甲基纤维素钠灌胃）,EsA（5 mg／kg）组,EsA （10 mg／kg）组,EsA （20 mg／kg）组,EsA （40 mg／kg）组,药物灌胃后,获取含药血清;取6代rGMC随机分成对照血清组,EsA （5 mg／kg）血清组, EsA （10 mg／kg）血清组,EsA（20 mg／kg）血清组,EsA（40 mg／kg）血清组,MTT法检测各组对rGMC增殖的影响;将rGMC分为对照组,IL－1β组,IL－1β＋EsA组,IL－1β＋U016组,IL－1β＋U0126＋EsA组,同步化后培养48 h, RT－PCR法检测各组ERK1／2 mRNA的相对表达量,Western blot法检测p－ERK1／2的表达并成像分析。结果EsA （5～10 mg／kg灌胃）含药血清抑制了细胞增殖（ P＜0.05,P＜0.01）;IL－1β组促进了rGMC的ERK1／2 mR-NA、p－ERK1／2表达（P＜0.05）,IL－1β＋EsA组、IL－1β＋U0126组,IL－1β＋U0126＋EsA组作用rGMC后,其ERK1／2 mRNA、p－ERK1／2表达均降低（P＜0.05）。结论 EsA含药血清（5～10 mg／kg灌胃）可显著抑制rGMC的増殖,EsA（10 mg／kg）血清组作用48 h效果最佳;EsA通过下调p－ERK1／2表达,抑制了IL－1β诱导的rGMC增殖,ERK1／2通路是EsA抑制rGMC增殖通路之一。     

商陆皂苷甲对IL-1β诱导的肾小球系膜细胞增殖及CDK2、P27的影响

目的观察商陆皂苷甲(EsA)对白细胞介素(IL)-1β诱导的大鼠肾小球系膜细胞(rGMC)增殖和细胞周期依赖性蛋白激酶(CDK2)及其抑制蛋白(P27)表达的影响。方法噻唑蓝(MTT)法检测EsA对rGMC增殖与毒性的影响;碘化丙啶(PI)染色法,流式细胞仪检测细胞周期;蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测CDK2、P27的表达。结果观察剂量中EsA对rG-MC没有细胞毒作用,EsA(2.5～5.0mg/L)作用rGMC 48h后明显抑制其增殖;IL-1β减少了rGMC的G1期细胞数并增加了S期的细胞数,促进了rGMC的CDK2的表达,抑制了P27的表达;EsA增加了IL-1β诱导的rGMC的G1期的细胞数并减少了S期的细胞数,抑制了IL-1β诱导的rGMC的CDK2的表达,并促进了P27的表达。结论 rGMC可能是EsA的作用靶细胞,EsA通过抑制CDK2及激活P27的表达抑制了IL-1β诱导的rGMC的增殖,阻滞了细胞周期的进程。     

商陆皂苷甲对白细胞介素1β诱导的肾小球系膜细胞增殖及Caspase-3的影响

目的观察商陆皂苷甲（EsA）对白细胞介素1β（IL-1β）诱导的大鼠肾小球系膜细胞（rGMC）增殖及Caspase-3表达的影响,探讨EsA治疗狼疮性肾炎等系膜细胞增殖性肾小球肾炎的可能机制。方法MTT法检测不同浓度的EsA对rGMC增殖的影响;蛋白质印迹法检测Caspase-3的表达,并成像分析。结果观察剂量中EsA对rGMC没有明显的细胞毒作用,EsA作用rGMC48h后抑制细胞增殖的有效浓度为2．5～5．0mg／L（P〈0.05或P〈0．01）;IL-1β促进了rGMC的Caspase-3的表达（P〈0．01）,与IL-1β组比较,EsA＋IL-1β组对rGMCC的Caspase-3的表达差异无统计学意义（P〉0.05）。结论在体外EsA（2．5～5mg／L）可显著抑制rGMC的增殖,GMC可能是EsA的作用靶细胞;但其促凋亡作用不明显。     

商陆皂苷甲对兔滑膜细胞产生IL-1和TNF的影响

目的：研究商陆皂苷甲（EsA)对脂多糖（LPS）刺激兔滑莫膜细胞产生白介素1（IL－1）和肿瘤坏死因子（TNF）的影响。方法：用胸腺细胞增殖法和甲L929细胞作靶细胞的生物测定法,分别检测与EsA共育的受LPS刺激的兔滑膜细胞培养上清中IL－1和TNF的含量。结果：EsA在5－40μg/ml范围内能明显抑制LPS诱导兔滑膜细胞产生IL－1和TNF,结论：EsA可抑制滑膜细胞产生IL－1和TNF的作用提示其可能有助于消除类风湿性关节炎的关节炎症。     

IL-1对肾小球系膜细胞增殖和周期素依赖激酶2表达的影响

目的 探讨白细胞介素－１（ＩＬ－１）对肾小球系膜细胞增殖及周期素依赖激酶２（ＣＤＫ２）表达的影响。方法 利用体外培养的大鼠肾小球系膜细胞,分别采用噻唑蓝掺入法、流式细胞仪检测、免疫细胞化学等观察ＩＬ－１作用前后系膜细胞增殖民政部以及ＣＤ听表达变化。结果 ＩＬ－１可以明显促进系膜细胞增殖,同时伴有ＣＤ听表达增高。结论ＩＬ－１对系膜细胞有明显的促增殖春机制可能与影响ＣＤＫ２的表达有关。     

氟伐他汀对高糖诱导的大鼠系膜细胞ERK1/2和CTGF表达的调控

目的：观察氟伐他汀对高糖刺激下的大鼠系膜细胞ERK1/2活性及CTGF表达的影响,阐明糖尿病肾病(DN)的发生机制和早期防治。方法：实验分两部分,第一部分为重复已有的高糖对系膜细胞刺激作用的实验,验证高糖可通过激活ERK通路使系膜细胞结缔组织生长因子(CTGF)蛋白表达增加,且这种变化与高渗状态无关,分组如下：①正常对照组(NG);②高糖组(HG);③高渗组(MN);④NG+ERK抑制剂PD98059组(NG+PD);⑤HG+ERK抑制剂PD98059组(HG+PD)。第二部分观察氟伐他汀干预前、后ERK1/2活性和CTGF蛋白表达的变化,分组如下：①正常对照组(NG);②高糖组(HG);③正常糖+氟伐他汀组(NG+F);④高糖+氟伐他汀组(HG+F);⑤高糖+氟伐他汀及甲羟戊酸组(HG+F+M)。采用Western blotting、RT-PCR方法检测肾小球系膜细胞ERK1/2、CTGF蛋白及mRNA表达量,ELISA方法检测肾小球系膜细胞培养上清纤维连接蛋白（FN）含量,用考马斯亮兰法测定肾小球系膜细胞内总蛋白变化。结果：第一部分实验HG的ERK1/2活性、CTGF蛋白表达较NG明显增加(P<0.01),HG+PD的ERK1/2活性、CTGF蛋白表达较HG明显减少(P<0.01),而MN、NG+PD与NG比较差异无显著性。第二部分实验观察到HG的大鼠系膜细胞ERK1/2活性、CTGF蛋白及mRNA表达量较NG明显增高(P<0.01),且系膜细胞内总蛋白量和FN量明显增高(P<0.01);HG+F的ERK1/2 活性和CTGF mRNA及蛋白的表达较HG明显减少(P<0.01),同时系膜细胞内总蛋白量和FN量减少(P<0.01);HG+F+M的上述指标与HG+F比较差异无显著性。结论：氟伐他汀可能通过抑制ERK1/2活性降低肾小球内CTGF表达及FN含量,减轻肾小球肥大,起到抑制和延缓DN进展的作用。     

人参皂苷Rg1对阿霉素诱导系膜细胞凋亡的影响

目的:探讨人参皂苷Rg1对阿霉素毒性诱导的人肾小球系膜细胞(HRMC)凋亡的影响及其可能的调控机制。方法:实验分为5组:正常对照组、模型组及低、中、高剂量人参皂苷Rg1与阿霉素共孵育干预组。HRMC培养24 h后采用CCK-8法检测细胞的存活率,流式细胞术Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡率,Real-Time PCR检测HRMC细胞凋亡相关基因Bcl-2、caspase-3相对表达水平。结果:阿霉素可显著诱导HRMC凋亡;中、低剂量的人参皂苷Rg1可减少HRMC的凋亡率,并可上调Bcl-2基因水平下调caspase-3水平;高剂量的人参皂苷Rg1促进HRMC的凋亡,在降低Bcl-2表达的同时caspase-3呈高表达。结论:阿霉素具有直接的肾毒性作用。通过增加Bcl-2和抑制caspase-3的表达,低、中剂量的人参皂苷Rg1可有效抑制阿霉素诱导的系膜细胞凋亡,且中剂量效果显著。     

熊果酸对活化型肝星状细胞NADPH氧化酶亚基p47Phox表达及ERK1/2信号通路活化的影响

目的 研究熊果酸（Ursolic acid ,UA）对瘦素诱导的大鼠肝星状细胞（HSC-T6）NADPH氧化酶（NOX）亚基p47Phox及ERK1/2信号通路活化的影响,并观察细胞增殖及I型胶原合成情况。方法 将培养激活的HSC-T6细胞株分为6组：正常对照组不加任何药物;瘦素组给予重组大鼠瘦素(100ng/ml)刺激细胞;各干预组分别给予UA、JAK抑制剂AG490、NOX抑制剂DPI、ERK抑制剂PD98059预处理30min,再加入瘦素刺激不同时间。采用Western blotting检测细胞膜移位的p47Phox蛋白、细胞总的p47Phox蛋白和磷酸化的ERK1/2（p-ERK1/2）蛋白表达;采用MTT法检测细胞增殖;采用RT-PCR法检测I型胶原mRNA的表达。结果 瘦素刺激HSC-T6细胞30min后细胞膜p47phox蛋白表达显著增高于正常对照组（0.68±0.09比0.44±0.11,P<0.01）,细胞内p-ERK1/2蛋白表达也随之增高（P<0.01）;UA、AG490及DPI干预后抑制了p47phox蛋白向细胞膜移位和细胞内ERK1/2蛋白磷酸化,PD98059抑制p47phox蛋白膜移位的作用较弱。瘦素刺激HSC-T6细胞12h后I型胶原的mRNA表达较正常对照组升高（P<0.01）,UA干预后I型胶原的mRNA表达明显低于瘦素组（0.57±0.18比1.02±0.5,P<0.01）,AG490、DPI及PD98059干预后I型胶原mRNA的表达均低于瘦素组（P<0.01）。瘦素刺激HSC-T6细胞12h、24h、48h后细胞增殖率高于正常对照组（均P<0.01）;UA、AG490、DPI及PD98059干预不同时间点的细胞增殖率均低于瘦素组（均P<0.01）,UA的抑制作用稍弱于DPI。结论：UA能抑制瘦素诱导的HSC-T6细胞增殖及I型胶原表达,机制可能与抑制NOX亚基p47phox向细胞膜移位及下游信号通路ERK1/2的激活有关。     

商陆皂苷甲对BXSB小鼠肾脏细胞凋亡及Bax和Bcl-2表达的影响

目的 通过观察商陆皂苷甲(esculentoside A,EsA)对BXSB小鼠肾脏细胞凋亡及Bax和Bcl-2表达的影响,探讨EsA治疗狼疮肾炎的可能机制.方法 将24只18周龄雄性BXSB小鼠随机分为模型对照组、地塞米松治疗组和EsA治疗组,分别腹腔注射治疗4周后留取各组动物肾组织标本,进行TUNEL法检测肾脏细胞凋亡;免疫组织化学法检测肾组织Bax和Bcl-2表达.结果 3组间肾小球和肾小管细胞凋亡指数的差异有统计学意义(P<0.05),EsA治疗组凋亡指数最高,其次是地塞米松治疗组;与模型对照组比较,EsA治疗组和地塞米松治疗组BXSB小鼠的肾组织Bcl-2光密度值明显下降,差异有统计学意义(P<0.05),EsA治疗组和地塞米松治疗组差异无统计学意义(P>0.05);Bax的表达3组间差异无统计学意义(P>0.05);而3组间肾组织Bcl-2/Bax的比值差异有统计学意义(P<0.05).结论 EsA具有诱导BXSB小鼠肾小球和肾小管细胞凋亡作用,EsA可以下调BXSB小鼠肾组织中的凋亡调节蛋白Bcl-2表达及Bcl-2/Bax比值而加速细胞凋亡的发生.     

黄芩苷通过TGF-β1/ERK1/2信号通路抑制鼻咽癌细胞增殖

目的 探讨黄芩苷(baicalin)对鼻咽癌CNE2细胞增殖及TGF-β1/ERK1/2信号通路的作用.方法 采用CCK8法检测不同浓度黄芩苷(2.5、5、10、20、40、80μmol·L-1)、顺铂(4μg·mL-1)在24、36、48 h对CNE2细胞增殖的作用;细胞成像多功能检测系统(CytationTM 5)...     

不同炮制方法对商陆中商陆皂苷甲含量的影响

目的?建立商陆中商陆皂苷甲的含量测定方法,并考察不同炮制方法对商陆中商陆皂苷甲含量影响的差异。方法分别用醋炙法、醋蒸法、清蒸法、绿豆蒸法、高压蒸法炮制商陆,HPLC法测定不同炮制品中商陆皂苷甲含量,以SinoChrom ODSBP柱为分析柱,以1‰甲酸乙腈溶液和1‰甲酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,检测波长210nm,柱温30℃,流速1.0mL/min 。结果?商陆醋炙或清蒸1h后,商陆皂苷甲含量升高,醋蒸,清蒸10h,绿豆蒸,高压蒸后,商陆皂苷甲含量下降,尤以醋蒸品下降明显。结论?所建立的商陆皂苷甲含量测定方法操作简便快速,结果准确可靠,但以商陆皂苷甲为指标来控制商陆饮片的质量较为单一,有必要进一步研究。      

阻断ERK途径对PTH培育的大鼠系膜细胞上清的TGF-β1的影响

目的探讨阻断ERK途径对甲状旁腺素（PTH）培育大鼠系膜细胞上清的TGF-β1的影响。方法采用酶联免疫吸附（ELISA）法观察PTH培育大鼠系膜细胞上清以及预先阻断ERK途径后上清液中其TGF-β1的变化。结果PTH10^-R mol／L培育的大鼠系膜细胞的上清的转换生长因子β1呈现时间依赖性增加（12-48h），而ERK信号途径抑制剂能够抑制PTH培育的大鼠系膜细胞上清的TGF-β1浓度，在一定的范围内呈剂量（5—50u mol／L）及时间（12-48h）依赖性。结论ERK信号途径对PTH培育的大鼠系膜细胞上清液的TGF-β1的有影响，这可能对探讨慢性肾衰的高PTH血症对机体的毒性作用，特别是高PTH血症可能时肾小球系膜细胞外基质的形成甚至肾小球硬化的形成机制有一定的理论价值。     

NO介导脂多糖及IL—1β刺激肾小球系膜细胞的增殖

为了研究ＮＯ在介导细胞脂多糖及白细胞介素－１β对大鼠肾小球系膜细胞增殖的影响。采用重氮化反应法和＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入法观察系膜细胞产生ＮＯ及促细胞增殖能力。结果显示，ＩＬ－１β和ＬＰＳ有明显刺激系膜细胞产生ＮＯ能力和促细胞增殖作用，并具有协同作用。     

榄香烯对胃癌SGC-7901细胞株ERK1/2通路的影响

目的 探讨榄香烯对人胃癌SGC-7901 细胞株增殖以及对细胞外信号调节激酶(ERK1/2)信号通路的影响,并探讨其可能的作用机制.方法 用不同浓度榄香烯(0.01、0.02、0.04mg/ml)处理胃癌SGC-7901细胞,然后用CCK -8法观察细胞增殖抑制作用,光镜和透射电镜观察细胞形态学改变,Western-blot 法检测磷酸化ERK1/2 的表达水平.结果 榄香烯可抑制胃癌SGC-7901细胞的增殖,呈浓度和时间依赖性;光镜和透射电镜下可以观察到典型的细胞凋亡形态学改变;榄香烯作用48h后胃癌SGC-7901细胞磷酸化ERK1/2表达水平受到明显抑制,并呈浓度依赖性,各浓度组与对照组比较,差异均有统计学意义(均P＜0.01).结论 榄香烯可以抑制胃癌SGC-7901 细胞的增殖,诱发其凋亡,作用机制可能为抑制了细胞的ERK1/2 信号通路.     

三七总皂苷对HB-EGF诱导的系膜细胞增殖作用研究

目的：观察三七总皂苷对肝素结合性表皮生长因子样生长因子（HB-EGF）诱导大鼠肾小球系膜细胞增殖的作用。方法：以原代培养大鼠肾小球系膜细胞为细胞模型,以400ng／mL三七总皂苷和100ng／mLHB-EGF为干预因素,实验分对照组、100ng／mLHB-EGF纽和400ng／mL三七总皂苷＋100ng／mLHB-EGF组,刺激系膜细胞24、36、48h,采用MTT方法,观察三七总皂苷对重组HB-EGF诱导系膜细胞增殖的作用情况。结果：HB-EGF刺激36h时,系膜细胞明显增殖,与对照组比较,P〈0．05;三七总皂苷能抑制HB-EGF诱导的系膜细胞的增殖,与HB-EGF组比较,P〈0．05。随着刺激时间的延长,三七总皂苷对HB-EGF诱导系膜细胞增殖的抑制作用增强,但36h与24h比较,差异无统计学意义（P〉0．05）;与48h比较,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：三七总皂苷能抑制HB-EGF诱导的系膜细胞增殖作用,且作用随着刺激时间延长而增强。三七总皂苷可能通过抑制HB-EGF对系膜细胞增殖作用而延缓肾小球硬化。     

商陆皂苷甲对BXSB狼疮性肾炎小鼠的治疗作用

[摘要]目的 观察商陆皂苷甲（EsA）在LN模型BXSB小鼠体内的作用,来探讨其对LN的治疗价值。方法 12周龄雄性BXSB小鼠24只,随机分成模型对照组、EsA低剂量治疗组和EsA高剂量治疗组。腹腔注射4周,每日一次至治疗终点。留取标本,行尿蛋白、血清肌酐、白蛋白测定及肾脏病理检查。结果 1.模型小鼠尿蛋白升高,治疗组经治疗后较对照组下降,高剂量治疗组进一步下降。2.经药物治疗后,BXSB小鼠肾组织病理损伤明显减轻。3.各组血清肌酐及白蛋白均不高,无统计学差异。结论 1.EsA具有降低BXSB狼疮性肾炎小鼠的尿蛋白的作用。2.EsA可以改善BXSB狼疮性肾炎小鼠的肾脏病理。     

ERK1/2信号转导通路对骨髓基质细胞条件培养液诱导大鼠中脑神经干细胞分化作用的影响

目的：探讨ERKl／2信号转导通路在骨髓基质细胞条件培养液（BMSCs-CM）诱导大鼠中脑神经干细胞（NSCs）分化中的作用。方法：将神经干细胞球种植于预先包被多聚赖氨酸的35mm的培养皿中,神经干细胞球约30min后贴壁,自然分化组将培养液换为含2％B27的neurobasal培养液,对照组换为BMSCs-CM,抑制剂组将培养液换为含有信号转导通路抑制剂PD98059（5μmol／L）的BMSCs-CM,7d后采用免疫荧光染色方法观察NSCs后代细胞中神经元和星形胶质细胞的数量比例与形态差别。结果：用成年大鼠BMSCs-CM体外培养新生大鼠中脑NSCs,自然分化组NSCs分化的神经元为（15．7±10．3）％[低于对照组的（51．17±10．30）％,P〈0.05],星形胶质细胞为（66．9±14.8）％[明显高于对照组的（23．26±5．60）％,P〈O．05]。而抑制剂组神经元所占比例为（39．48±7．29）％[明显低于对照组,P％0．01],星形胶质细胞的比例为（31．01±8．96）％[明显高于对照组,P％0．01]。结论：BMSCs-CM可以提高神经干细胞分化为神经元的比例,并且同时降低了其分化为星形胶质细胞的比例,这两种作用很可能是通过ERKl／2信号转导通路实现的。     

冬虫夏草对肾小球系膜细胞增殖的影响

目的：观察冬虫夏草菌丝对体外培养的大鼠系膜细胞(MsC)增殖的影响。方法：应用血清药理学,使用氚标胸腺嘧啶([^3H]-TdR)掺入法检测大鼠肾小球MsC增殖。结果：含虫草菌丝血清可抑制MsC的增殖。结论：虫草菌丝可用于肾小球硬化的防治。     

醛固酮及其受体拮抗剂对肾小球系膜细胞转化生长因子β1基因表达的影响

目的研究醛固酮（aldosteroen，ALD）及其受体拮抗剂螺内酯（spironolactone，SPI）对大鼠肾小球系膜细胞转化生长因子β1（TGF-β1）基因表达的影响。方法以不同浓度的ALD（10^-11、10^～9、10^-7mol／L）及／或10^-7mol／L SPI刺激系膜细胞24h后，应用半定量RT—PCR方法检测细胞TGF—β1 mRNA的表达；以10^-9mol／L浓度的ALD刺激系膜细胞不同时间（12h、24h、48h）后，应用半定量RT—PCR方法检测细胞TGF—β1 mRNA的表达。结果半定量RT—PCR结果显示，ALD促进培养的大鼠肾小球系膜细胞TGF—β1 mRNA的表达，且具有浓度依赖性和时间依赖性的特点，SPI能够拮抗ALD的作用。结论ALD促进肾小球系膜细胞TGF—β1的基因表达，进而导致肾小球硬化。SPI能够拮抗ALD的作用，从而可能有益于延缓肾小球硬化的进展。     

ERK1/2-PKM2/P53信号通路在喉癌Hep-2细胞株增殖中的作用

目的:探究ERK 1/2通过PKM2/P53信号通路调节喉癌Hep-2细胞株增殖的潜在机制。方法:采用细胞计数的方法统计经ERK 1/2抑制剂U0126、P53抑制剂PFTα处理后0,24,48 h时Hep-2细胞的细胞密度,实验随机分为空白对照组(Control)、对照组(Vehicle)、处理组(U0126或PFTα)。采用转染PKM2-siRNA或PKM2-cDNA的方法在Hep-2细胞株上抑制或过表达PKM2。采用免疫印迹(Western Blot)的方法检测不同处理情况下ERK 1/2、p-ERK 1/2、P53、PKM2的蛋白水平。结果:抑制ERK 1/2的磷酸化可抑制Hep-2细胞生长,抑制P53可阻断抑制ERK 1/2导致的Hep-2细胞生长变缓。同时,抑制ERK 1/2可下调PKM2水平,抑制或过表达PKM2可分别上调或下调P53。过表达PKM2可阻断抑制ERK 1/2引起的Hep-2细胞生长变缓。结论:抑制ERK 1/2的磷酸化可通过下调PKM2水平促进P53表达进而抑制Hep-2细胞生长。