河南省输入性卵形疟原虫2个亚种富色氨酸抗原基因的多态性分析

目的分析河南省2015年输入性卵形疟原虫富色氨酸抗原(Plasmodium ovale tryptophan-rich antigen,Po TRA)基因序列。方法采集河南省2015年22例输入性卵形疟患者的血样,收集患者相关信息。提取血样DNA,用巢式PCR方法扩增Po TRA基因,连接至p MD18-T载体,提取质粒进行测序,在Gen Bank中进行同源性比对,判断卵形疟原虫的亚种,并对其基因长度及种类进行分析。对Po TRA基因的氨基酸序列进行比对,分析氨基酸的差异。用邻接法构建系统进化树,分析样本间的亲缘关系。结果 22例卵形疟中,8例为卵形疟原虫wallikeri亚种(P.ovale wallikeri),占36.4%,Po TRA基因长度有245和299 bp 2种类型,以245 bp为主;14例为卵形疟原虫curtisi亚种(P.ovale curtisi),占63.6%,Po TRA基因长度有299、317和335 bp等3种类型,以299 bp为主。氨基酸序列比对显示,wallikeri亚种的2种基因类型相差2个氨基酸单元(MANPINMANPIN和AITPIN),curtisi亚种的3种基因类型间相差2个氨基酸单元(TITPIS和TINPIN)。系统进化树显示,22例样本分为curtisi和wallikeri 2个亚群,其中curtisi亚群又分为2个亚支,299 bp的样本在同一亚支内,317和335 bp的样本在另一亚支内,亲缘关系更近。结论 2015年河南省输入性卵形疟有curtisi和wallikeri 2个亚种,其Po TRA基因存在多态性,curtisi亚种有3种基因类型,wallikeri亚种有2种基因类型。     

福建省3例输入性卵形疟的实验诊断分析

目的 随着输入性疟疾的增加,通过镜检结合PCR方法,提高检出率。方法 福建省2013年成立基因诊断参比实验室,用PCR方法回顾性筛查过往病例时发现有3例卵形疟原虫误诊为间日疟。结果 镜检结合PCR扩增和序列分析发现FJ1、FJ2为卵形疟亚种curtisi和恶性疟混合感染,FJ3为单一卵形疟亚种curtisi感染。结论 福建省以往卵形疟报道很少,需要加强诊断培训,镜检结合PCR检查提高检出率。     

河南省输入性卵形疟的实验室检测分析北大核心CSCD

目的对河南省输入性卵形疟进行实验室检测,比较不同方法的检测效果。方法采用镜检法、2种巢式PCR和2种疟原虫抗原快速检测试剂盒,对河南省2011-2016年采集的输入性卵形疟患者血样进行检测,比较不同方法的检出率。结果 110例卵形疟中curtisi亚种感染43例,占39.1%;wallikeri亚种感染67例,占60.9%。5种检测方法对卵形疟的总检出率,M-nest检测体系的巢式PCR法为100%,镜检法为94.5%,RDT-Wondfo法为51.8%,NP-1993检测体系的巢式PCR法为40.9%,RDT-CareStart法为25.5%,差异有统计学意义(χ2=205.940,P<0.05);对于卵性疟curtisi亚种,M-nest检测体系的巢式PCR法的检出率为100%,NP-1993检测体系的巢式PCR法为97.7%,镜检法为90.7%,RDT-Wondfo法为46.5%,RDT-CareStart法为18.6%,差异有统计学意义(χ2=109.700,P<0.05);对于卵性疟wallikeri亚种,M-nest检测体系的巢式PCR法检出率为100%,镜检法为97.0%,RDT-Wondfo法为55.2%,RDT-CareStart法为29.9%,NP-1993检测体系的巢式PCR法为4.5%,差异有统计学意义(χ2=190.292,P<0.05)。结论巢式PCR方法检测卵形疟敏感性高,但NP-1993检测体系的巢式PCR方法仅对卵形疟curtisi亚种敏感;镜检法次之;抗原检测的RDT方法敏感性低,且不同试剂盒的检出率不同。     

2015年重庆市输入性疟疾病例特征分析

目的 分析重庆市2015年输入性疟疾病例实验室诊断结果及流行病学特征。方法 按照《重庆市疟疾诊断参比实验室工作手册》操作规程,采用涂片镜检、快速疟疾诊断试纸条（RDT）及巢式PCR对该市输入性病例进行实验室诊断分型,并从寄生虫病防治信息管理系统收集疟疾个案调查资料进行分析。结果 2015年重庆市共报告境外输入性疟疾病例31例,其中间日疟2例（6.45%）、恶性疟23例（74.19%）、卵形疟5例（16.13%）、三日疟1例（3.22%）,5例卵形疟中3例经实验室诊断为卵形疟wallikeri亚型。30例（96.77%）输入自非洲,1例（3.33%）输入自东南亚;30例为男性,1例为女性,年龄23～61岁,病例分布无明显季节性。病例从发病到初次就诊时间、从初次就诊到确诊时间的中位数均为2 d,初次就诊单位多为县级单位,确诊单位多为省级单位。结论 重庆市2015年疟疾病例均为输入性,未发现本地病例,仍保持消除疟疾状态,但仍要加强输入性疟疾病例的管理及病原学监测工作,并加强相关疟疾防治机构医务人员的防治能力培训。     

四川省输入性卵形疟原虫wallikeri亚种实验室检测分析

目的 鉴定四川省疑似输入性卵形疟原虫感染病例wallikeri亚种感染情况,并对2014-2017年全省1 079份复核血样卵形疟原虫wallikeri亚种感染情况进行分析。方法 对2018年1-4月四川省10例疑似输入性卵形疟原虫感染病例进行血涂片镜检、快速诊断试纸条（RDT）检测和巢式PCR检测并进行测序分析,同时回顾性检测2014-2017年全省 1 079份复核血样卵形疟原虫wallikeri亚种感染情况。结果 2018年1-4月四川省10例疑似输入性卵形疟原虫感染病例镜检结果均为卵形疟原虫阳性,其中2例存在恶性疟原虫混合感染;RDT检测结果均为疟原虫阳性;常规巢式PCR检测除2例结果为恶性疟原虫阳性外,其余均为阴性;采用卵形疟原虫wallikeri亚种特异性引物进行PCR检测,10例均为阳性,序列分析结果显示为卵形疟原虫wallikeri亚种。对2014-2017年全省1 079份复核血样进行回顾性检测,发现2例卵形疟原虫wallikeri亚种与恶性疟原虫混合感染病例,均为2017年报告,此前检测结果为单纯恶性疟原虫感染。结论 四川省首次鉴定发现输入性卵形疟原虫wallikeri亚种感染病例。     

一宗输入性卵形疟个案调查分析与实验室诊断

目的 调查深圳市首例境外输入性卵形疟患者的发病和诊疗过程,为科学防治卵形疟提供借鉴. 方法 收集患者的临床和流行病学资料,采集外周血作涂片镜检疟原虫,疟疾快速诊断试验(rapid diagnostic test,RDT)检测疟原虫特异性抗原,巢式PCR扩增富色氨酸抗原基因鉴定基因型.结果 患者由非洲几内亚疟疾流行区回国,具有寒战、发热、出汗等临床症状.血涂片查见疟原虫,受感染红细胞呈伞矢状,薛氏点明显,可见滋养体、裂殖体和配子体,形态特点与卵形疟原虫相符;但疟疾RDT抗原检测结果为阴性;基因分型鉴定为卵形疟原虫wallikeri新亚种,采用青蒿琥酯片与磷酸伯氨喹联合用药治愈. 结论 根据患者流行病学史、临床表现以及实验室检测结果判断为一宗输入性卵形疟个案.     

2015年重庆市3例输入性卵形疟原虫wallikeri亚种感染病例的实验室诊断

目的   分析重庆市2015年3例输入性卵形疟原虫wallikeri亚种感染病例病原、抗原及核酸检测过程,减少卵形疟原虫的漏诊和误诊。 方法  收集流行性病学资料及血样,按照WS259-2015疟疾的诊断标准对3例血样进行血涂片镜检、快速疟疾诊断试纸条检测（RDT）及巢式PCR检测。 结果  3例患者均为非洲务工归国人员,并都有疟疾发病史。血涂片镜检结果,3例血样均为疟原虫阳性。RDT检测结果3例均为除恶性疟以外其他疟原虫阳性。国家参比实验室推荐的巢式PCR检测DNA,3例均为阴性。用卵形疟原虫wallikeri亚种的种特异性引物的PCR检测,3例均为阳性。 结论  根据镜检、RDT和卵形疟原虫wallikeri亚种种特异性PCR检测确定,重庆市2015年首次发现了3例卵形疟原虫wallikeri亚种感染输入病例,为重庆地区首次发现。     

罕见输入性卵形疟原虫wallikeri亚种的PCR鉴定和测序分析

目的应用PCR技术对与间日疟原虫形态相识的卵形疟原虫亚种wallikeri进行鉴定。方法采集1例镜检可疑间日疟输入性疟疾患者滤纸血,采用PCR扩增18核糖体小亚单位RNA（18Small Subunit ribosomal RNA,18S SurRNA）片段,并进行测序分析。结果采用5对引物（rFAL1、rFAL2,rVIV1、rVIV2,rMAL1、rMAL2,rOVA1、rOVA2,rOVA1v、rOVA2v）进行PCR扩增,其中rOVA1v、rOVA2v引物扩增阳性,PCR产物大小为760bp;测序分析该基因片段（GenBank accession number KJ786425）与GenBank数据库中Plasomdium ovale wallikeri克隆RSH10 18S rRNA基因部分序列（KF219561.1）及卵形疟ssrRNA基因（AJ001527.1）的序列一致性都为100%。结论卵形疟与间日疟原虫形态相似,可采用PCR技术确认。本例患者感染的疟原虫经PCR鉴定和测序分析确定为卵形疟原虫变形P.ovale wallikeri变形亚种。     

山东省14例输入性卵形疟原虫wallikeri亚种的鉴定

目的 对山东省14例输入性卵形疟原虫wallikeri亚种进行鉴定分析。方法 收集14例输入性疟疾病例,进行快速疟疾诊断试纸条检测(RDT)、血涂片镜检、NP-1993常规巢式PCR鉴定和卵形疟原虫wallikeri(P. ovale wallikeri)亚种的特异性PCR检测。PCR扩增产物测序后,进行Blast比对分析。结果 14例患者RDT检测结果:泛疟原虫(非恶性疟)阳性12例,阴性2例;镜检结果,13例卵形疟原虫,1例间日疟原虫;NP-1993常规巢式PCR结果,14例样本4种疟原虫引物扩增结果均为阴性。P. ovale wallikeri亚种的特异性PCR检测结果:14例样本均能扩增到P. ovale wallikeri亚种特异性条带780 bp。Blast分析测序结果,检索结果为P. ovale wallikeri亚种。结论 14 例镜检阳性、NP-1993常规巢式PCR检测阴性的输入性疟疾病例均确诊为P. ovale wallikeri亚种感染。     

河南省输入性卵形疟的实验室检测分析

目的对河南省输入性卵形疟进行实验室检测,比较不同方法的检测效果。方法采用镜检法、2种巢式PCR和2种疟原虫抗原快速检测试剂盒,对河南省2011-2016年采集的输入性卵形疟患者血样进行检测,比较不同方法的检出率。结果 110例卵形疟中curtisi亚种感染43例,占39.1%;wallikeri亚种感染67例,占60.9%。5种检测方法对卵形疟的总检出率,M-nest检测体系的巢式PCR法为100%,镜检法为94.5%,RDT-Wondfo法为51.8%,NP-1993检测体系的巢式PCR法为40.9%,RDT-CareStart法为25.5%,差异有统计学意义(χ2=205.940,P0.05);对于卵性疟curtisi亚种,M-nest检测体系的巢式PCR法的检出率为100%,NP-1993检测体系的巢式PCR法为97.7%,镜检法为90.7%,RDT-Wondfo法为46.5%,RDT-CareStart法为18.6%,差异有统计学意义(χ2=109.700,P0.05);对于卵性疟wallikeri亚种,M-nest检测体系的巢式PCR法检出率为100%,镜检法为97.0%,RDT-Wondfo法为55.2%,RDT-CareStart法为29.9%,NP-1993检测体系的巢式PCR法为4.5%,差异有统计学意义(χ2=190.292,P0.05)。结论巢式PCR方法检测卵形疟敏感性高,但NP-1993检测体系的巢式PCR方法仅对卵形疟curtisi亚种敏感;镜检法次之;抗原检测的RDT方法敏感性低,且不同试剂盒的检出率不同。     

万孚疟原虫检测试剂盒检测卵形疟原虫效果评价及影响因素分析

目的 目的 评价万孚疟原虫检测试剂盒 （Pf?LDH/Pan?pLDH） 对卵形疟原虫的检测效果, 并分析原虫密度、 疟原虫乳 酸脱氢酶 （pLDH） 浓度和基因多态性等因素对检测结果的影响。方法 方法 按照万孚疟原虫检测试剂盒的操作说明书, 对经 PCR确认的100份卵形疟患者血样进行检测。采用显微镜镜检法计数患者血片的原虫密度, 以ELISA法检测血样中的 pLDH浓度, 以PCR扩增卵形疟原虫LDH （Po?LDH） 基因并测序, 并分析上述3个因素对检出率的影响。结果 结果 万孚疟原 虫检测试剂盒对上述100份卵形疟患者血样的总体检出率为70.0% （70/100）。当原虫密度 ≤ 500个/μl时, 检出率为 27.3%; 原虫密度> 500个/μl时, 检出率为75.0%～75.4%。当pLDH浓度较低时 （A值 ≤ 0.100）, 检出率为6.7%; pLDH达 到一定浓度时 （A值 > 0.100）, 检出率为95.1%～100%。Po?LDH基因序列分析结果显示所有卵形疟样本可分为2种亚 型, 分别为卵形疟原虫curtisi亚种 （P. o. curtisi） 和卵形疟原虫wallikeri亚种 （P. o. wallikeri）。2种亚型的LDH基因同源 性为97%, 共有24个单核苷酸多态性 （SNP）, 其中3个SNPs为非同义突变, 其余均为同义突变。2种亚型的LDH编码氨 基酸序列同源性为99%, 共有3个氨基酸的差异。万孚疟原虫检测试剂盒对P. o. curtisi的检出率为73.1% （38/52）, 对 P. o. wallikeri的检出率为66.7% （32/48）, 两者差异无统计学意义 （P > 0.05）。结论 结论 万孚疟原虫检测试剂盒对卵形疟原虫的 检测效果优于大部分同类产品, 其检出率与原虫密度、 pLDH浓度关系密切, 与pLDH基因多态性无关。     

1例国内罕见的输入性卵形疟的实验室检测

目的对1例输入性疑似疟疾患者的血样进行实验室检测。方法制备疑似疟疾患者血样的血涂片,吉姆萨染色后进行疟原虫的镜检观察。利用实验室自行研制的疟原虫属特异性（通用型）和4种疟原虫种特异性的巢式PCR和实时荧光PCR检测方法,对该血样进行疟疾检测及分型。将PCR扩增片段进行序列测定,并与已知的卵形疟序列进行blast比对分析。结合血样的分子生物学检测结果,重新对镜检结果进行复核。结果血样初次镜检为疟疾阴性。使用疟原虫巢式PCR通用引物对血样的DNA进行PCR检测,扩增出了预期大小约240bp的条带;巢式PCR分型检测表明,血样仅扩增出预期大小约450bp的卵形疟条带,无对应大小的恶性疟、间日疟和三日疟扩增条带产生。疟原虫通用型和卵形疟特异性的荧光PCR检测结果均为典型的S形阳性曲线,卵形疟扩增片段的熔解温度为72.5℃。序列分析表明,扩增片段长度为434bp,blast比对发现去除引物后的393个碱基与GenBank DQ845247等卵形疟的SSU rRNA对应部分的基因序列同源性为100%。重新对血涂片进行镜检复核,结果在薄血膜中发现了卵形疟的环状滋养体,被寄生的红细胞为椭圆形,边缘呈伞矢状。结论使用巢式PCR、实时荧光PCR、序列分析和镜检等方法,证实该例输入性的疑似疟疾患者为卵形疟原虫感染。     

2012—2020年江苏省输入性卵形疟流行病学特征

目的　分析2012—2020年江苏省输入性卵形疟病例流行病学特征,为该省制定输入性疟疾防控策略提供科学依据。方法　在传染病报告信息管理系统和寄生虫病防治信息管理系统中,收集2012—2020年江苏省卵形疟确诊病例相关信息,包括出国、回国时间,在国外患病次数,发病、初诊和确诊时间,初诊和确诊单位等资料,进行描述性统计分析。结果　2012—2020年江苏省累计报告卵形疟病例347例,其中2015年报告例数最多（71例）。347例卵形疟病例均为实验室确诊的境外输入性病例,占该阶段江苏省报告疟疾病例总数的14.32%。全省卵形疟报告例数居前5位的地级市依次为连云港市（53例,占15.27%）、南通市（44例,占12.68%）、淮安市（44例,占12.68%）、泰州市（44例,占12.68%）和扬州市（36例,占10.37%）。报告病例数以10月最多,达39例（占11.24%）;12月最少,为21例（占6.05%）。卵形疟病例境外感染来源地主要为赤道几内亚（97例,占37.95%）、安哥拉（60例,占17.29%）、尼日利亚（40例,占11.53%）。卵形疟病例从回国到发病中位时间为64（144） d,其中7.49%（26/347）的病例回国1年后发病。病例初诊单位主要集中在县级医疗机构（117例,占33.72%）,确诊单位主要集中在地市级医疗机构（122例,占35.16%）。2012—2020年江苏省卵形疟病例初诊正确率从2012年的0提升到2020年的78.26%,呈逐年上升趋势（[χ2] = 50.90,P＜0.01）。结论　2012—2020年江苏省每年均有输入性卵形疟病例报告,感染来源地主要为非洲,初诊和确诊单位主要集中在地市级和县级等基层医疗机构。今后应重点开展基层镜检人员疟原虫检测能力培训,以提高卵形疟诊断能力、巩固消除疟疾成果。     

日照市首例输入性卵形疟的实验室检测分析

目的 目的 对日照市首例输入性卵形疟病例进行实验室检测, 以明确诊断。方法 方法 收集患者流行病学资料和血样, 分别进行疟疾快速诊断检测 （RDT）、 疟原虫镜检及巢式PCR检测。结果 结果 患者从非洲刚果金务工返乡, 回居住地莒县陵 阳镇1个月后出现不规则发热、 乏力。RDT检测提示为非恶性疟原虫感染。血涂片镜下可见感染红细胞明显变形, 呈多 种不规则形状; 环状体粗大, 可见大滋养体期和裂殖体期疟原虫。巢式PCR扩增基因产物长度约800 bp, 与卵形疟原虫 相符。综合上述结果, 该病例诊断为单一卵形疟原虫感染。结论 结论 虽然镜检是疟疾诊断的金标准, 但卵形疟原虫在镜下 很难鉴别, 结合 PCR检测结果可明确诊断。