促红细胞生成素对新型支气管肺发育不良早产鼠模型TGF－β1表达的影响

目的：观察重组人促红细胞生成素（rhEPO）对新型支气管肺发育不良（BPD）早产鼠模型肺组织病理变化及转化生长因子－β1（TGF－β1）表达的影响。方法40只定期受孕SD大鼠于孕第15天孕囊内注射脂多糖（ LPS）或磷酸盐缓冲液（ PBS）,孕第21天剖宫娩出早产鼠,早产鼠于生后6 h内分为5组：PBS＋空气组、PBS＋高氧组、LPS＋高氧组、PBS＋高氧＋rhEPO组、LPS＋高氧＋rhEPO组。 PBS＋高氧＋rhEPO组、LPS＋高氧＋rhEPO组于高氧暴露6 h后开始第1次背部皮下注射rhEPO 1200 IU／kg,隔天1次,共7次。分别在高氧暴露第1、7、14天处死早产鼠,观察肺组织病理变化及辐射状肺泡计数（RAC）,采用ELISA 法检测肺泡灌洗液（BALF）及肺组织TGF－β1的表达量。结果与PBS＋空气组比较,经高氧干预后其病理损伤加重、RAC降低、BALF及肺组织TGF－β1表达量升高（P＜0.01）,并且以LPS＋高氧组更显著（P＜0.05,P＜0.01）,上述指标在高氧暴露后第14天与第7和（或）第1天差异有统计学意义（P＜0.05）;rhEPO干预后与相应对照组比较上述指标得到相应改善（P＜0.05, P＜0.01）;BALF中TGF－β1水平与RAC呈高度负相关,与肺组织TGF－β1水平呈高度正相关（ P＜0.05或P＜0.01）。结论 rhEPO可能通过参与调解TGF－β1相关通路,改善BPD模型大鼠肺组织损伤,从而对BPD起到一定的干预和治疗作用。     

rhEPO对新型BPD模型肺组织BCL-2和Caspase-9表达的影响及意义

目的：探讨磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶 B(PI3K/AKT)通路在重组人促红细胞生成素( rhEPO)保护新型支气管肺发育不良( BPD)中的作用。方法40只定期受孕的SD大鼠,于孕第15天孕囊内注射脂多糖( LPS)或磷酸盐缓冲液( PBS ),新生大鼠分为4组：对照组、高氧组、rhEPO 组、rhEPO+LY294002组。采用Western blot法和RT-PCR法检测肺组织中BCL-2和Caspase-9蛋白及mRNA表达。结果高氧组、rhEPO+LY294002组新生大鼠肺组织BCL-2蛋白及mRNA表达减少, Caspase-9蛋白及 mRNA 表达明显增加;rhEPO组BCL-2蛋白及mRNA表达增加, Caspase-9蛋白及mRNA表达减少;于高氧暴露第1、7、14天各组间的差异均有统计学意义( P<0．05)。结论宫内炎性暴露联合生后高氧可导致肺细胞凋亡增加,rhEPO可能通过减少肺细胞凋亡,对新型 BPD 起一定的保护作用,其机制可能与 PI3K/AKT信号转导通路有关。     

宫内致敏及生后高氧暴露对新生小鼠TGF-β1及α-SMA表达的影响

目的观察宫内炎性致敏及生后高氧暴露新生小鼠转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)在新生鼠肺组织的表达情况,探讨支气管肺发育不良(Bronchop-ulmonary dysplasia,BPD)发病机制。方法新生小鼠按照随机数字表法分为LPS组+空气组、LPS+高氧组、生理盐水+空气对照组、生理盐水+高氧组,应用HE染色、放射性肺泡计数(RAC)、免疫组织化学、免疫荧光化学和荧光定量PCR技术,讨论生后第1、3、7、10、14天肺组织的病理改变,检测TGF-β1、α-SMA蛋白和基因mRNA表达水平。结果LPS+高氧组和生理盐水+高氧组出现肺发育障碍,肺泡逐渐融合,RAC逐渐降低,与生理盐水+高氧组比较,LPS+高氧组降低明显(P<0.05)。②LPS+高氧组和生理盐水+高氧组第3天后肺组织TGF-β1蛋白表达明显高于LPS组+空气组和生理盐水+空气组(P=0.000),随着暴露时间的延长进行性增高。③LPS+高氧组和生理盐水+高氧组7d后肺组织α-SMA蛋白表达明显高于LPS组+空...     

重组人促红细胞生成素对高氧肺损伤新生大鼠细胞凋亡及蛋白激酶B表达的影响

目的支气管肺发育不良(bronchopulmonary dysplasia,BPD)是新生儿呼吸系统常见疾病,文中探讨rhEPO对高氧肺损伤新生大鼠肺细胞凋亡和蛋白激酶B(又称Akt)表达的影响,为BPD的防治提供实验依据。方法将新生大鼠给予60%高氧暴露,rhEPO组皮下注射rhEPO,采用TUNEL法检测肺细胞凋亡和RT-PCR法检测Akt mRNA表达水平。结果①高氧组新生大鼠肺细胞凋亡指数为44.312±12.337,明显高于空气组的12.810±4.353(P<0.01);rhEPO组凋亡指数为23.371±9.508,明显低于高氧组(P<0.01)。②高氧组肺组织Akt mRNA表达水平为0.462±0.122,明显低于空气组的1.236±0.357(P<0.01);rhEPO组肺组织Akt mRNA表达水平为0.893±0.235,明显高于高氧组(P<0.01)。结论高氧可引起新生大鼠肺细胞凋亡增多,rhEPO可明显减少肺细胞凋亡,其机制可能与肺组织Akt mRNA表达有关。     

早产大鼠宫内感染肺损伤时支气管肺泡灌洗液及肺组织中脂肪型脂肪酸结合蛋白的表达

目的:观察宫内感染肺损伤时脂肪型脂肪酸结合蛋白(FABP4)在早产大鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)及肺组织中的表达,探讨其与新型支气管肺发育不良(BPD)发病的关系。方法:定期受孕的SD大鼠分为LPS组和对照组,于孕15 d羊膜腔内注射LPS或生理盐水。2组动物均于出生后第1天(P1)、第4天(P4)和第7天(P7)各取8只,应用ELISA方法检测BALF中FABP4的含量,采用免疫组化法和RT-PCR技术检测肺组织中FABP4蛋白及mRNA的表达水平。结果:FABP4主要在肺泡巨噬细胞、血管内皮细胞及少量支气管上皮细胞表达。LPS组早产大鼠BALF中FABP4含量、肺组织中FABP4蛋白及mRNA的相对表达量较对照组均升高,且与时间存在交互作用(P均<0.05)。结论:宫内感染肺损伤时FABP4表达升高,可能是引起肺微血管病理性重塑及肺泡化进程受阻,进而导致新型BPD发生发展的重要因素。     

肺泡形成基因P311在支气管肺发育不良中的作用

目的:了解肺泡形成基因P311在支气管肺发育不良(BPD)中的作用;方法:64只早产昆明小鼠随机均分为空气组和高氧组,空气组置于室内,高氧组置于密闭的氧浓度＞90％的氧舱中复制BPD动物模型;分别于造模后第1、3、7及14天取小鼠肺组织,分别采用苏木精-伊红染色观察小鼠肺组织病理改变鉴定造模是否成功,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)法检测P311基因mRNA表达水平.结果:早产小鼠肺组织发育不成熟,高氧组随着吸氧时间的延长,小鼠表现反应迟钝、体重增长缓慢、毛发发涩无光泽、鼻尖发绀、呼吸急促,肉眼见肺组织表面有散在甚至弥漫的淤血点、小血管扩张充血,第3天镜下见肺泡腔内有炎性细胞浸润,第7天肺泡腔增大、肺间质增生,第14天肺泡腔内间质增生、少数肺泡融合、肺泡数量减少、肺泡结构简单化,说明BPD模型造模成功;第3天时2组P311基因mRNA表达量最高,随后下降;高氧组P311基因mRNA表达水平均高于同一时点空气组(P＜0.05).结论:长时间吸入高浓度氧成功构建支气管肺发育不良的动物模型,P311基因可能是影响肺损伤修复的调控因子.     

rhEPO对高氧肺损伤Akt、GSK-3β表达的影响

目的:研究重组人促红细胞生成素(recombinant human erythropoietin,rhEPO)对新生大鼠高氧肺损伤蛋白激酶B(Akt)、糖原合成酶激酶(GSK-3β)表达的影响。方法:实验采用Wistar新生大鼠120只,随机分为三组:空气对照组、高氧模型组和高氧+rhEPO治疗组,每组各40只。建立高氧模型后,空气组新生大鼠暴露于室内正常的空气中,高氧组及治疗组新生大鼠暴露于氧气浓度≥85%的高氧模型玻璃箱中。于高氧暴露实验的第1天开始,治疗组每天接受rhEPO(800 IU/kg)腹腔注射治疗,取肺组织进行W/D测定,运用Western blotting测定肺组织中Akt和GSK-3β蛋白及它们的磷酸化表达水平。结果:①肺组织W/D比值结果:高氧暴露第1天,各组W/D比值无明显变化;高氧第3天、第7天、第14天时,高氧组与空气组比较,W/D比值增加,且随着高氧时间延长W/D比值增加,治疗组与高氧组比较,W/D比值降低,差异有统计学意义(P<0.05)。②Western Blotting结果:与空气对照组比较,高氧组p-Akt/Akt、GSK-3β、Bcl-2/Bax表达水平明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);与高氧组比较,治疗组中p-Akt/Akt、p-GSK-3β/p-GSK-3β/GSK-3β、Bcl-2/Bax蛋白表达水平显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:rhEPO通过增强Akt、GSK-3β蛋白的表达,抑制肺细胞凋亡,对高氧肺损伤起保护作用。     

重组人β防御素-2基因对支气管肺发育不良新生鼠肺泡及肺血管发育的影响

目的研究重组人β防御素-2（humanβdefensin-2,hBD2）对高氧诱导支气管肺发育不良（BPD）新生鼠肺泡及肺血管发育的影响。方法将48只新生SD大鼠随机分为空气组、高氧组、空载体组和hBD2组,每组12只。大鼠暴露于90%高氧箱内14d建立BPD模型,hBD2组于第4天气管穿刺注入1×107/ml含有hBD2编码基因的重组腺病毒25滋l,空载体组注入等量空载体腺病毒。于第7、14天采集肺组织标本,qPCR检测肺组织hBD2mRNA表达;比较各组大鼠肺组织形态学变化,测定肺泡辐射状计数（RAC）和平均内衬间隔（MLI）;免疫组化测定肺组织血管内皮生长因子（VEGF）表达,ELISA法测定肺组织炎症因子TNF-ɑ、IL-1β、IL-6、IL-10表达水平。结果梯度稀释法测定病毒滴度为1×109/ml,用稀释液稀释100倍得到1×107/ml。在大鼠出生后第7、14天,与hBD2组比较,空气组、高氧组、空载体组大鼠hBD2mRNA表达水平均明显为低,差异均有统计学意义（均P＜0.05）;第7、14天,高氧组和空载体组大鼠的RAC、MLI、AOD值、TNF-ɑ、IL-1β、IL-6和IL-10的表达水平与空气组、hBD2组比较差异均有统计学意义（均P＜0.05）。HE染色及免疫组化染色结果显示高氧暴露后大鼠肺泡及肺血管发育受阻,hBD2组大鼠肺泡和肺血管发育改善。结论hBD2基因治疗可促进高氧诱导BPD新生鼠的肺泡及肺血管发育,并减轻肺部炎症。     

骨髓间充质干细胞外泌体在高氧诱导的新生大鼠支气管肺发育不良模型中的修复作用

目的 明确骨髓间充质干细胞外泌体(BMSCs-Exo)对高氧诱导的大鼠支气管肺发育不良(BPD)模型的修复作用。方法 将新生4 d的Sprague Dawley(SD)大鼠吸入85%高氧建立高氧肺损伤模型。分为空气对照组、高氧组、高氧+PBS组和高氧+Exo组4组。使用BMSCs-Exo腹腔注射1周后处死SD大鼠，取肺组织进行石蜡包埋，分别进行HE染色，辐射状肺泡计数(radial alveolar counts, RAC),Masson染色、免疫组化染色和TUNEL染色。ELISA和Real time-PCR(qPCR)检测血清和肺组织蛋白白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、组织金属蛋白酶-9(MMP-9)及血管内皮生长因子-A(VEGF-A)的表达。结果 动物模型中，HE染色后对各组肺泡进行统计学分析显示，高氧+Exo组的肺泡数量显著高于高氧组及高氧+PBS组(P<0.001)。Masson染色后对蓝色胶原纤维所占面积百分比进行定量分析显示，高氧+Exo组胶原纤维所占面积百分比显著低于高氧组和高氧+PBS组(P<0.001)。免疫组化染色示高...     

血管内皮生长因子与地塞米松对早产鼠肺泡表面活性物质结合蛋白B表达的影响

目的:研究血管内皮生长因子(VEGF)以及地塞米松单独或联合应用对早产大鼠肺泡表面活性物质结合蛋白B(SP-B)mRNA表达的影响,及与肺发育的关系,为临床防治早产儿呼吸窘迫综合征(NRDS)提供新途径。方法:孕15d清洁级Wistar大鼠12只,随机分为4组,每组平均3只,试验分组:VEGF组、地塞米松组、VEGF加地塞米松组和对照组进行试验,应用RT-PCR检测早产鼠肺组织中SP-BmRNA的表达。结果:地塞米松组、VEGF加地塞米松组肺组织中SP-BmRNA表达与对照组比较,P<0.05,差异有显著性,VEGF加地塞米松组较地塞米松组SP-BmRNA表达进一步增加(P<0.05),而VEGF单独应用组与对照组比较,P>0.05,差异无显著性。结论:地塞米松能促进肺表面活性物质的合成和分泌,VEGF能协同地塞米松促进肺表面活性蛋白的分泌与合成。     

60%氧暴露对早产大鼠支气管肺泡灌洗液内血管内皮生长因子及其受体的影响

目的：观察60%氧暴露对早产大鼠支气管肺泡灌洗液（BALF）内血管内皮生长因子（VEGF）及其受体（Flk-1）含量的影响,探讨其与新型支气管肺发育不良（BPD）发病机制之间的关系。方法早产鼠生后6 h 内随机分为高氧组和对照组,对照组置于常压空气中,高氧组置于浓度为60%的高氧舱中,氧浓度维持在60%,两组动物均于出生后第1（P1）、7（P7）、11（P11）、14天（P14）各随机取8只,应用 ELISA 方法检查 BALF 中 VEGF 及其受体的含量。结果高氧组随鼠龄递增,VEGF 含量逐渐减少,至 P14达最低。与对照组相比,高氧组在 P11及 P14显著低于对照组（P〈0.05）;其受体 Flk-1的含量高氧组随鼠龄增加而逐渐增高,但在 P1- P14均低于对照组,且在 P11与对照组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论宫内炎性暴露可能会导致肺微血管发育障碍,肺泡化过程受阻,进而导致 BPD 的发生。     

高氧暴露早产大鼠肺组织线粒体蛋白质组学初步研究以及ND4动态表达

目的 初步分析高氧暴露下早产大鼠肺组织线粒体蛋白质表达谱的改变,并对还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)脱氢酶亚单位4(ND4)的动态表达进行研究.方法 建立高氧暴露早产大鼠动物模型,采用双向电泳检测线粒体蛋白质差异性表达,运用RT-PCR和Western blot方法分别检测ND4 mRNA及其蛋白表达.结果 与空气组比较,高氧暴露4 d导致46种肺组织线粒体蛋白质出现差异性表达;高氧暴露1、4和7 d,早产大鼠肺组织ND4 mRNA和蛋白表达均较空气对照组显著降低(均P＜0.01),10 d时,差异则无显著性意义(P＞0.05).结论 高氧暴露导致肺细胞线粒体(包括呼吸链)功能状态改变可能是促使肺损伤发生发展的重要因素.     

高氧对新生大鼠脑组织中NRP-cGMP信号通路的影响

目的：构建高氧诱导新生大鼠脑损伤模型,探讨高氧对新生大鼠脑组织中钠尿肽受体-环磷酸鸟苷（NRP-cGMP）信号通路的影响。方法：60只新生Wistar大鼠随机分为对照组和高氧模型组,每组30只。高氧模型组大鼠置于自制高氧箱内（氧浓度>85%）吸入氧气7 d;对照组大鼠置于同一室内常压空气环境下,持续吸入空气7 d。高氧暴露1、3和7d时,每组随机选取10只大鼠取脑组织,检测2组大鼠体质量;HE染色法观察2组大鼠脑组织形态表现;透射电镜下观察2组大鼠脑组织超微结构;Western blotting法检测2组大鼠脑组织中钠尿肽受体A（NPR-A）和钠尿肽受体B（NPR-B）表达水平;ELISA法测定2组大鼠脑组织中cGMP水平。结果：高氧暴露1、3和7d时,高氧模型组大鼠体质量明显低于对照组（P<0.05）。HE染色,高氧暴露3d时,光镜下可见高氧模型组大鼠海马锥体细胞体积缩小,排列稀疏;高氧暴露7d时,高氧模型组大鼠海马细胞出现深染皱缩,细胞与周围分界不清。电镜下形态表现,高氧暴露3d时,高氧模型组大鼠线粒体双层膜结构破坏,少许嵴消失,线粒体及突触数量减少;高氧暴露7d时破坏进一步加重。Western blotting检测,高氧暴露1、3和7d时,高氧模型组大鼠脑组织中NPR-A表达水平高于对照组（P<0.05）,但仅高氧暴露1 d时大鼠脑组织中NPR-B水平高于对照组（P<0.05）。ELISA法检测,高氧暴露1、3和7d,高氧模型组大鼠脑组织中cGMP水平均高于对照组（P<0.05）。结论：NRP-cGMP信号通路参与了高氧诱导脑损伤的发生。     

谷氨酰胺对新生大鼠高氧肺损伤的干预作用及其机制

目的：探讨谷氨酰胺（GLN）对高氧诱导下新生大鼠肺损伤的保护作用,并阐明其作用机制。方法：选取足月新生Wistar大鼠90只,雌雄不限,随机分为对照组（吸入氧浓度为21%）、高氧组（吸入氧浓度>85%）和高氧（吸入氧浓度>85%）+GLN组,每组30只,高氧组和高氧+GLN组大鼠制备高氧肺损伤（HALI）模型。从实验第1天开始,高氧+GLN组新生大鼠定时腹腔内注射GLN（0.75 g·kg^-1·d^-1）,另外2组新生大鼠腹腔注射等量生理盐水。在实验开始的第3、7和14天测定各组大鼠体质量,检测各组大鼠肺组织含水量,采用HE染色法观察各组大鼠肺组织形态表现,应用酶联免疫吸附法（ELISA）检测各组大鼠肺组织匀浆中白细胞介素6（IL-6）、白细胞介素1β（IL-1β）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平。结果：实验第3、7和14天,与同时间对照组比较,高氧组大鼠体质量明显降低（P<0.05）;与同时间高氧组比较,高氧+GLN组大鼠体质量明显增加（P<0.05）。与同时间对照组比较,高氧组大鼠肺组织含水量明显增加（P<0.05）,且高氧暴露时间越长升高越明显;与同时间高氧组比较,高氧+GLN组大鼠肺组织含水量明显降低（P<0.05）。与对照组比较,高氧组大鼠肺泡结构有一定程度的破坏,伴随肺泡融合、间隔增宽、间质炎性渗出及纤维组织增生等改变,高氧暴露时间越长损伤程度越重;与同时间高氧组比较,高氧+GLN组大鼠肺泡损伤程度、炎性渗出及纤维组织增生程度均减低。与同时间对照组比较,高氧组大鼠肺组织匀浆中IL-6、IL-1β和TNF-α水平明显升高（P<0.05）;与高氧组比较,高氧+GLN组大鼠肺组织匀浆中IL-6、IL-1β和TNF-α水平明显降低（P<0.05）。结论：GLN对新生大鼠HALI具有一定的保护作用,可缓解高氧诱导的肺组织水肿,减轻肺泡结构的损伤和破坏,并能抑制肺组织中IL-6、IL-1β和TNF-α表达。     

高氧暴露对新生大鼠肺SP-C表达的影响

目的探讨高氧暴露对新生大鼠肺组织表面活性蛋白C（SP-C）表达的影响。方法将新生的72只SD大鼠随机分为空气组、高氧组,每组36只。每组又分为3、7、14d三个亚组。于空气或高氧暴露后3、7、14d取肺组织,采用免疫组化方法观察肺组织中SP-C表达的变化。结果高氧组3d SP-C表达强度较空气组增强（P〈0.05）,高氧组7dSP-C表达强度与空气组比较,差异无统计学意义（P〉0.05）,高氧组14d SP-C表达强度较空气组减弱,差异有统计学意义（P〈0.01）。结论高氧暴露可导致新生大鼠肺SP-C表达减弱或功能缺失,SP-C表达异常可能是高氧肺损伤的重要因素。