二氮嗪预处理对培养H9C2心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

目的 探讨线粒体KATP(Mito-KATP)通道特异性开放剂二氮嗪预处理在H9C2心肌细胞缺氧、复氧损伤中的作用及其机制.方法 将培养的H9C2心肌细胞随机分为5组,即(Ⅰ)对照组;(Ⅱ)缺氧/复氧组;(Ⅲ) 二氮嗪(DZ)预处理组;(Ⅳ) 二氮嗪加ROS清除剂2-巯基丙酰氨基乙酸(MPG)预处理加缺氧/复氧组;(Ⅴ) 二氮嗪加PKC的特异性抑制剂氯化白屈菜赤碱(CH)预处理加缺氧/复氧组.对照组常规培养;缺氧/复氧组缺氧培养100min,复氧30min;其余各组则加入相应的药物预处理10min,DZ、MPG和CH的终浓度分别为200、400mmol/L和2mmol/L,更换无血清培养基培养20 min,然后再缺氧100min,复氧30 min.采用Hoechst33258染色、JC-1荧光标记和Western blotting等方法分别检测H9C2心肌细胞的凋亡率、线粒体膜电位变化和细胞色素C的释放量.结果 二氮嗪预处理能减少缺氧/复氧损伤后H9C2心肌细胞的凋亡率(P＜0.01);阻止线粒体膜电位的下降(P＜0.01);减少线粒体释放细胞色素C(P＜0.01);预处理过程中加入MPG、CH在一定程度上可抑制二氮嗪预处理的心肌保护效应.结论 缺氧/复氧损伤可通过降低H9C2心肌细胞线粒体膜电位,引发线粒体释放细胞色素C,从而诱导心肌细胞的凋亡.开放Mito-KATP通道能减轻H9C2心肌细胞的缺氧/复氧损伤,其机制可能与开放Mito-KATP通道、释放信号分子ROS和激活PKC有关.     

色素上皮衍生因子对骨肉瘤治疗的作用

骨肉瘤是一种好发于青少年的常见骨骼系统恶性肿瘤。骨肉瘤的生长和转移主要依赖肿瘤中血管的生成。色素上皮衍生因子(pigment epithelium-derived factor,PEDF)是一种最有力的血管生成抑制剂,并被证实在骨肉瘤生长、侵袭和转移的过程中具有多种重要作用,故有望成为治疗骨肉瘤的新药物。     

色素上皮衍生因子与氧化应激

色素上皮衍生因子(PEDF)是一种糖蛋白,属于丝氨酸蛋白酶抑制剂超家族,它首次从人视网膜色素上皮细胞的条件培养基中被纯化出来,具有很强的神经分化活性。之后被发现有抗氧化应激,抗血管新生,抗炎,抗血小板活化、聚集抑制血栓形成,抗细胞凋亡,营养保护神经等作用,并且它的一系列性能无一例外均涉及其抗氧化应激性能。现将PEDF与氧化应激的相互作用以及作用机制进行综述。     

色素上皮衍生因子对人HepG2肝细胞脂代谢的影响

【摘　要】目的：探讨色素上皮衍生因子（Pigment epithelium-derived factor, PEDF）对人HepG2肝细胞脂代谢的影响。方法：分别用重组人PEDF细胞因子和PEDF抗体干预HepG2肝细胞,采用实时荧光定量PCR和Western blot方法检测脂质合成和分解的关键酶mRNA及蛋白水平的变化;裂解细胞后用酶法测定细胞内甘油三酯（Triglyceride,TG）含量。结果：（1）PEDF干预人HepG2肝细胞后,固醇调节元件结合蛋白1（Sterol regulatory element-binding protein1,SREBP1）、脂肪酸合成酶（Fatty acid syn－thase,FAS）、乙酰辅酶A羧化酶1（Acetyl coenzyme A carboxylase1,ACC1）、羟甲基戊二酰辅酶还原酶（HMG-coA reductases,HMGR）mRNA的表达较正常对照分别降低39%、38%、61%、32%（P<0.05）,而脂肪甘油三酯脂酶（Adipose triglyceride lipase,ATGL）的表达增加了98%（P<0.05）;用PEDF抗体干预后,SREBP1、FAS、ACC1、HMGR mRNA的表达分别较正常对照增加92%、56%、67%、42%（P<0.05）,ATGL的表达则减少了51%（P<0.05）。（2）在蛋白水平,PEDF干预后 FAS、ACC1、HMGR表达较正常组分别减少58%、54%、43%,而 ATGL的表达增加20%（P<0.05）;用 PEDF抗体干预后,FAS、ACC1、HMGR表达较正常组分别增加41%、39%、48%,而ATGL的表达减少40%（P<0.05）。（3）PEDF的干预使细胞内TG明显减少[（410.40±13.43） mg/g vs. （234.70±35.70） mg/g,P<0.05],而 PEDF抗体干预后,细胞内TG含量有上升趋势,但无统计学差异[（410.40±13.43） mg/g vs. （440.32±25.67） mg/g,P=0.67]。结论：PEDF在 HepG2肝细胞中可抑制脂肪酸的合成,并促进脂肪分解,从而降低细胞内TG的含量。     

醛固酮对H9C2细胞的诱导作用

目的 探讨醛固酮对H9C2细胞凋亡的诱导作用.方法 以培养的H9C2细胞为模型,观察100 nmol/L醛固酮刺激H9C2细胞后3、6、12、24、48 h后盐皮质激素受体(MR)的表达情况、丙二醛(MDA)的含量以及超氧化物歧化酶(SOD)和Caspase-3、-8、-9的活性变化.结果 醛固酮刺激H9C2细胞3 h开始,MR表达增高,6 h达高峰.TBARS法检测结果显示,醛固酮刺激后MDA含量在3 h开始增高,24 h达高峰.而SOD 活性在醛固酮刺激后逐渐下降,24 h达最低.Caspase-3、-8、-9的活性在在醛固酮刺激后逐渐升高,24 h达高峰.与无醛固酮刺激的对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 醛固酮刺激H9C2细胞后,通过与MR结合诱导氧化应激导致细胞凋亡.     

Ghrelin 预处理对 H9C2心肌细胞缺氧/复氧损伤的影响

目的：探讨 Ghrelin 预处理对 H9C2心肌细胞缺氧/复氧损伤的影响。方法培养 H9C2心肌细胞并建立心肌细胞缺氧(21 h)/复氧(6 h)模型。细胞随机分成4组：对照组,缺氧/复氧组(H/ R 组),缺氧/复氧+ Ghrelin 组(H/ R +G 组),缺氧/复氧+ Ghrelin +生长激素促分泌素受体(GH-SR)-siRNA 组(H/ R + G + G-siRNA 组);采用 siRNA 干扰技术阻断 Ghrelin 受体 GHSR 的表达以及 Hoechst 33258染色剂和流式细胞术检测各组细胞凋亡率,Western blot 法检测各组凋亡相关蛋白表达情况。结果 GHSR 存在于正常H9C2心肌细胞中,GHSR-siRNA 可以显著抑制 H9C2心肌细胞中 GHSR 的表达。与 H/ R 组相比,在 H/ R + G 组中缺氧/复氧损伤所导致心肌细胞的凋亡率明显下降(P <0．05),B淋巴细胞瘤-2蛋白/ Bcl-2相关 X 蛋白(Bcl-2/ Bax)比率明显上调(P <0．05),含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(caspase-3)表达水平被显著抑制(P <0．05)。而与 H/ R + G组相比,H/ R + G + G-siRNA 组心肌细胞凋亡率增加( P <0．05),Bcl-2/ Bax 比率显著下降(P <0．05),caspase-3表达上调(P <0．05)。结论 Ghrelin 具有减轻缺氧/复氧所引起的心肌细胞损伤、抑制心肌细胞凋亡的作用。     

色素上皮衍生因子对人脑胶质瘤细胞增殖与凋亡的影响

目的 探究分析色素上皮衍生因子(pigment epithelium-derived factor, PEDF)对人脑胶质瘤细胞增殖与凋亡的影响。方法 培养人胶质母细胞瘤细胞株U87MG,分别添加0 nmol/L、80 nmol/L、160 nmol/L、320 nmol/L PEDF蛋白,记为空白对照组、实验A组、实验B组、实验C组,采用CCK8实验和细胞单克隆实验检测PEDF在U87MG增殖中的作用;采用流式细胞凋亡实验检测PEDF在U87MG凋亡中的作用;采用流式细胞周期实验检测PEDF在U87MG细胞周期中的作用。结果 与空白对照组比较,同一时点各实验组细胞增殖率和细胞单克隆能力明显降低(P<0.05),实验C组细胞增殖率与细胞单克隆量明显低于实验A组和实验B组(P<0.05),实验B组的细胞增殖率与单克隆形成量明显低于实验A组(P<0.05);与空白对照组比较,各实验组细胞凋亡率明显增加(P<0.05),细胞G1期、S期进程明显减缓(P<0.05),实验C组细胞凋亡率明显高于实验A、B组(P<0.05),C组S期细胞数明显少于实验A、B组(...     

大鼠心肌细胞H9C2活性氧水平检测方法探究

目的比较3 种细胞内活性氧（ROS）的检测方法,分析优缺点,筛选1 种合适、准确的检测大鼠心肌细胞H9C2 缺氧/复氧（H/R）模型中细胞内活性氧的方法。方法培养H9C2 细胞,选择密度合适（80%～90%）的H9C2 细胞进行铺板,加入2,7- 双乙酸二氯荧光素（DCFH-DA）荧光探针孵育,应用荧光显微镜、流式细胞仪及荧光酶标仪3 种方法检测对照组（正常含氧量培养条件,CON）和实验组（缺氧复氧处理,H/R6h）心肌细胞的荧光强度,从而反映大鼠心肌细胞内活性氧水平,并利用数据分析软件进行统计分析。结果流式细胞仪检测分析结果：对照组（152 690±34 104）FU/μg,实验组（325 669±12 755）FU/μg;荧光酶标仪检测分析结果：对照组（282.3±12.57）FU/μg,实验组（1 274±37.05）FU/μg。实验组的ROS 水平与对照组的ROS 水平比较,差异有统计学意义（P <0.05）,实验组高于对照组,而荧光显微镜观察法无法定量地分析出实验结果。结论3 种ROS检测方法中,荧光酶标仪检测方法能更好地判断大鼠心肌细胞H9C2 活性氧水平。     

色素上皮衍生因子的抗肿瘤作用及研究进展

色素上皮衍生因子(PEDF)是一种由SERPINF1表达的丝氨酸蛋白酶抑制剂,最初因能诱导视网膜母细胞瘤细胞分化被发现。PEDF具有强有力的抑制血管新生、肿瘤生长和转移的作用。PEDF通过与肿瘤细胞表面受体结合,进而引起一系列的细胞反应,包括调节细胞凋亡、分化、迁移、侵袭和干细胞维持,这使PEDF成为一种潜在的肿瘤靶向治疗药物。有关将PEDF用作肿瘤治疗的研究策略已经被提出,然而将其应用到临床仍需要大量研究进一步阐明PEDF的功能和作用机制。     

细胞穿透肽PEP-1介导过氧化氢酶转导大鼠心肌H9C2细胞

目的:探索细胞穿透肽PEP-1介导的人过氧化氢酶转导入H9C2细胞的能力。方法:利用基因工程方法表达和纯化His-tag-PEP-1-CAT及His-tag-CAT融合蛋白后,与体外培养的H9C2细胞株共孵育,利用免疫细胞荧光技术和Westernblot检测PEP-1-CAT融合蛋白是否转导入H9C2细胞内;并检测H9C2细胞内的过氧化氢酶活性。结果:制备的PEP-1-CAT融合蛋白纯度为90%以上,其浓度达0.501mg/mL;PEP-1介导的CAT融合蛋白能高效转导入H9C2细胞内,呈时间及剂量依赖性,6h时达峰值;转导入H9C2细胞内的融合蛋白的过氧化氢酶活性亦呈现出时间及剂量依赖的特点。结论:PEP-1-CAT能高效稳定转导入H9C2细胞内,为PEP-1介导的过氧化氢酶防治心肌缺血/再灌注损伤研究奠定基础。     

缺氧条件下血管内皮生长因子受体2对视锥细胞的保护作用

目的 探讨缺氧条件下血管内皮生长因子受体2（vascular endothelial growth factor receptor 2,VEGFR2）对视网膜视锥细胞的作用。方法 8周龄视锥细胞特异性敲除VEGFR2（cone-specific VEGFR2 knockout）小鼠（简称KO小鼠）和野生型C57BL/6小鼠（简称WT小鼠）各6只,右眼均予以玻璃体腔内一次注射8 mmol/L氯化钴（CoCl₂）制作缺氧模型,左眼注射磷酸盐缓冲液（PBS）作为对照。次日行视网膜电图（ERG）检查光感受器功能,免疫荧光共定位法检测视锥细胞密度,并观察其形态。结果 KO和WT小鼠缺氧侧眼的暗适应ERG a波振幅和b波振幅均下降,与PBS对照侧相比差异有统计学意义（P<0.01）,但KO小鼠与WT小鼠之间相比差异无统计学意义（P>0.05）。KO小鼠和WT小鼠缺氧侧眼的明适应ERG a波振幅和b波振幅较对照侧均下降,差异有统计学意义（P<0.01）,且KO小鼠较WT小鼠下降更明显（P<0.05,P<0.01）,说明视锥细胞功能下降。形态学观察发现KO小鼠和WT小鼠缺氧侧眼的视锥细胞均出现变化,表现为密度下降,形态短小,排列疏松、紊乱,且KO小鼠的改变更为显著。结论 VEGFR2在缺氧条件下对视锥细胞具有保护作用。     

醛固酮对H9C2细胞胶原表达的影响

目的 探讨醛固酮对H9C2细胞胶原表达的影响.方法 以培养的H9C2细胞为模型,观察100nM醛固酮刺激H9C2细胞后0、1、3、6、12、24及48 h后盐皮质激素受体、转化生长因子β、结缔组织生长因子、Ⅰ型和Ⅲ型胶原的表达情况.结果 免疫印记检测可见醛固酮刺激H9C2细胞3h开始,盐皮质激素受体表达增高,6 h达高峰.Real-time PCR检测结果显示,醛固酮刺激后,转化生长因子β和结缔组织生长因子的表达在6h开始增高,12h达高峰.Ⅰ型和Ⅲ型胶原的表达在6 h开始增高,24h达高峰.与空白对照组相比差异有显著性(P＜0.05).结论 醛固酮刺激H9C2细胞后,通过与盐皮质激素受体结合后促进转化生长因子β和结缔组织生长因子的表达进而促进胶原表达.     

心肌营养素-1预处理减轻缺氧复氧对心肌细胞损伤的机制研究

目的观察心肌营养素-1(CT-1)预处理对大鼠心肌细胞缺氧复氧损伤模型细胞损伤、凋亡及血红素加氧酶-1(HO-1)表达的影响,进一步探讨其心肌保护机制。方法选择H9C2大鼠心肌细胞株,实验分为对照组、缺氧复氧组(H2/R24组)、各浓度CT-1预处理组,酶标仪检测细胞上清中LDH释放率,RT-qPCR检测HO-1 mRNA,Western Bolt检测活Cleaved Caspase3及HO-1蛋白。设计合成靶向HO-1的特异性siRNA片段,通过脂质体转染至H9C2细胞中,48 h后给予CT-1预处理及缺氧复氧(si-HO-1组)并重复检查HO-1 mRNA及蛋白的表达、LDH释放率、Cleaved Caspase3表达验证干扰效果。结果与H2/R24组相比,各浓度CT-1预处理组细胞上清LDH释放率下降,Cleaved Caspase3表达减少,而HO-1 mRNA及蛋白表达水平与H2/R24相比均明显增加。经siRNA干扰后,si-HO-1组HO-1表达水平与对照组相当,较H2/R24组、CT-1组则明显减少;而LDH释放率、Cleaved Caspase3蛋白表达较H2/R24组下降,而较CT-1组升高。结论 CT-1能通过上调HO-1表达,减轻心肌细胞缺氧复氧损伤。     

PEDF对肺鳞状细胞癌SK-MES-1细胞增殖、侵袭和凋亡的影响

目的: 探讨色素上皮衍生因子(PEDF)对肺鳞状细胞癌(鳞癌)SK-MES-1细胞增殖、凋亡和侵袭的影响,阐明PEDF与肺鳞癌发生发展的关系。方法: 培养SK-MES-1细胞,设不加PEDF的细胞为阴性对照组,PEDF干预组细胞分别加入180、360和720 nmol·L^-1 PEDF;MTT法检测各组SK-MES-1细胞增殖抑制率,细胞侵袭实验测定阴性对照组和720 nmol·L^-1 PEDF干预组SK-MES-1细胞穿透数,倒置显微镜观察各组SK-MES-1细胞形态学,流式细胞术检测各组SK-MES-1细胞凋亡率。结果: PEDF干预组细胞增殖抑制率均显著高于阴性对照组(P<0.01),不同剂量PEDF干预组间比较差异也有统计学意义(P<0.05)。阴性对照组细胞贴壁生长良好,PEDF干预组细胞排列逐渐稀疏,形态改变明显。720 nmol·L^-1 PEDF干预组SK-MES-1细胞穿透数(31.6±15.8)低于阴性对照组(75.4±19.3),差异有统计学意义(P<0.01)。随着PEDF干预剂量增加,细胞凋亡率逐渐升高,不同剂量PEDF干预组与阴性对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论: PEDF抑制SK-MES-1细胞增殖和侵袭,促进细胞凋亡,对肺鳞癌生长和转移发挥对抗效应。提示PEDF可能成为肺鳞癌患者预后判定、抗癌治疗的有效因子。     

Elabela对同型半胱氨酸诱导的H9C2细胞凋亡的影响与机制

目的探究多肽Elabela（ELA）对同型半胱氨酸（homocysteine, Hcy）诱导的H9C2细胞凋亡的作用及机制。方法采用CCK-8检测细胞活性,根据试验结果选择Elabela和Hcy的适宜浓度建立细胞实验模型。随机将细胞分成NC组（正常对照组）、ELA组、Hcy组、Hcy+ELA组。使用试剂盒检测ROS含量;利用TUNEL荧光染色和流式细胞术检测细胞的凋亡程度;通过Western印迹法检测H9C2细胞中PARP、Bcl-2、Bax、cleaved-Caspase3蛋白以及MAPK信号通路相关蛋白的表达水平。使用ERK特异性抑制剂U0126验证相关信号通路作用,检测细胞中凋亡相关蛋白的表达水平。结果与NC组相比,1mmol/L的Hcy处理使H9C2细胞活性明显下降（P<0.001）,而10μmol/L的Elabela显著逆转了Hcy诱导的H9C2细胞活性下降（P<0.001）。与Hcy处理组相比,Elabela的干预使细胞内ROS的产生减少,凋亡率下降,促凋亡蛋白cleaved-PARP、Bax、cleaved-Caspase3蛋白的表达水平下调,而Bcl-2、p-ERK蛋白的表达水平上调,p-P38、p-JUNK蛋白的表达水平下调（均P<0.05）。与Hcy+ELA组相比,U0126的干预抑制了Elabela对H9C2细胞的保护作用,使细胞促凋亡相关蛋白的表达水平上调,而Bcl-2的表达水平下调（均P<0.05）。结论多肽Elabela可能通过调节ERK/MAPK信号通路抑制Hcy诱导的H9C2细胞的凋亡。     

丁香酚对H2O2诱导H9C2心肌细胞损伤的保护作用

目的 研究丁香酚对H₂O₂诱导H9C2心肌细胞损伤的影响。方法 使用不同浓度H₂O₂建立H9C2心肌细胞氧化损伤模型,将建立好的心肌细胞氧化损伤模型分为对照组、50 μg/mL丁香酚处理组、100 μg/mL丁香酚处理组和200 μg/mL丁香酚处理组,采用MTT法观察吸光度值（OD）变化来评价丁香酚对H9C2心肌细胞活力的影响;采用Hoechst染色法观察细胞核形态变化,评价丁香酚对H9C2心肌细胞凋亡的影响;为进一步研究丁香酚的抗氧化损伤作用,采用比色法检测试剂盒观察丁香酚对H9C2心肌细胞乳酸脱氢酶（LDH）、丙二醛（MDA）及超氧化物歧化酶（SOD）含量的影响。结果 400 μmol/L H₂O₂显著降低H9C2细胞活力,增加细胞凋亡,适宜建立H9C2心肌细胞氧化损伤模型。100 μg/mL和200 μg/mL的丁香酚增加H9C2细胞活力,减少细胞凋亡（P<0.05）;同时,H₂O₂诱导H9C2细胞LDH及MDA含量增加和SOD含量减少的效应也可被100 μg/mL和200 μg/mL的丁香酚抑制。结论 丁香酚对H₂O₂诱导H9C2心肌细胞损伤具有保护作用。