葛根素抑制人子宫颈癌细胞株HeLa增殖和诱导凋亡作用研究

目的:探讨葛根素对人子宫颈癌细胞株HeLa的作用及其机制。方法:取对数生长期的HeLa细胞分别用不同剂量的葛根素处理(0μmol,12.5μmol,25μmol,50μmol)。细胞培养48 h后,利用MTT法检测HeLa细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡水平,RT-PCR法检测Bax mRNA和Bcl-2 mRNA水平。Western blotting法检测Wnt、β-catenin、Bax、Bcl-2、p53和p21表达水平。结果:葛根素成剂量依赖性地抑制HeLa细胞增殖,促进细胞凋亡,促进BaxmRNA表达,减少Wnt、β-catenin、Bcl-2 mRNA、p53和p21表达。结论:葛根素可抑制宫颈癌HeLa细胞增殖并诱导其凋亡,其作用机制与减少Wnt/β-catenin信号通路活化相关。     

小檗碱对HeLa细胞凋亡及其凋亡相关蛋白表达的影响

目的 研究小檗碱对人宫颈癌HeLa细胞株增殖及凋亡的影响及其发生机制.方法 采用MTT法观察小檗碱对HeLa细胞增殖的影响,DNA ladder、流式细胞仪等方法进行细胞凋亡检测,用Western blotting方法检测凋亡过程中相关蛋白Bel-2和Bax表达的变化.结果 小檗碱在体外试验中能明显抑制HeLa细胞的增殖,在一定的时间、剂量范围内呈时间-剂量依赖关系.20、40 mg/L小檗碱作用48 h后,细胞DNA片段分析可看到凋亡时降解形成的梯带,流式细胞仪检测到了细胞凋亡峰,各组的凋亡率分别是(16.7±2.8)%、(29.6±4.4)%,与对照组(1.9±0.6)%和5 mg/L小檗碱组(2.3±0.8)%相比差异显著(P＜0.01).在凋亡过程中,Bax蛋白表达明显增高,而Bcl-2蛋白表达下凋.结论 小檗碱体外能抑制HeLa细胞增殖并诱导其发生凋亡,其机制可能与Bax蛋白表达明显增高,而Bcl-2蛋白表达下调有关.     

血根碱对人类宫颈癌细胞生长和转移的抑制作用

目的利用宫颈癌细胞株探讨血根碱（SAN）的抗肿瘤作用。方法采用MTT、克隆形成及细胞划痕试验研究不同浓度SAN对体外培养的人类宫颈癌HeLa和Siha细胞的影响。结果经1.0μmol/L和5.0μmol/LSAN处理后,Siha细胞的存活率分别为对照组的72%和10%（P〈0.01）,HeLa细胞比Siha细胞更敏感。用1.0μmol/LSAN处理后,HeLa和Siha细胞的克隆形成数从33个降低到14个和16个（P〈0.05）。划痕试验显示培养48h后,HeLa细胞和Siha细胞的“细胞伤口”宽度对照组分别为（0.51±0.04）mm和（0.64±0.02）mm,而0.5μmol/LSAN处理组为（1.22±0.02）mm和（1.63±0.01）mm（分别P〈0.01和P〈0.05）。MTT、克隆形成及细胞划痕试验均呈剂量和时间依赖性。结论SAN可抑制宫颈癌细胞的生长和转移。该研究为SAN作为一种新药应用于宫颈癌的治疗提供了初步的实验依据和理论基础。     

瑞舒伐他汀对胶质瘤U87细胞迁移、侵袭的抑制作用

目的探讨瑞舒伐他汀对胶质瘤细胞U87迁移、侵袭的抑制作用及相关机制。方法 0、5、10、20μmol/L的瑞舒伐他汀作用U87细胞24、48、72 h,CCK-8法检测细胞活力,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell实验检测细胞侵袭能力,Western blot检测基质金属蛋白酶MMP2、MMP9及Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达。结果与对照组比较,5μmol/L组、10μmol/L组、20μmol/L组U87细胞活力降低(P0.01),呈时间及剂量依赖性,细胞迁移及侵袭能力降低(P0.01),MMP2、MMP9、Wnt1、Wnt3a、Wnt7a、β-catenin表达量下调(P0.01)。结论瑞舒伐他汀能显著抑制胶质瘤细胞U87迁移及侵袭能力,可能与阻断Wnt/β-catenin信号通路有关。     

DHA对宫颈癌细胞株凋亡、侵袭和转移的影响

目的探讨多不饱和脂肪酸DHA对宫颈癌细胞（HeLa、Siha）凋亡、迁移侵袭的影响。方法HeLa、Siha细胞,分为空白对照 组、不同浓度DHA组,观察不同药物浓度作用于宫颈癌细胞后的形态学改变,Hoechst 33258染色检测48 h后细胞核凋亡情况; MTT法检测DHA作用于宫颈癌细胞24、48、72 h后的细胞凋亡情况;流式细胞仪检测不同浓度DHA作用于宫颈癌细胞48 h后 的凋亡率;细胞划痕实验和Transwell 迁移实验检测不同浓度DHA对宫颈癌细胞体外迁移能力的影响;Western Blotting检测 DHA刺激细胞48 h 后凋亡相关蛋白（Bax、Bcl-2、cleaved-caspase3）及肿瘤转移侵袭相关蛋白MMP-9、VEGF表达情况。结果 倒置显微镜下及经Hoechst33258染色后,随着DHA浓度增加,宫颈癌细胞形态改变越明显,凋亡小体增多;MTT结果显示DHA 呈时间-浓度依赖性抑制宫颈癌细胞增殖,促进其凋亡;细胞划痕实验和transwell迁移实验提示DHA作用于细胞后,浓度越高, 对细胞的体外迁移能力的抑制作用越强;Western Blotting 显示DHA作用于细胞48 h 后,cleaved-caspase3、Bax蛋白表达增加 （P<0.05）,而Bcl-2、MMP-9、VEGF 蛋白表达下降（P<0.05）,Bcl-2/Bax 比值下降（P<0.05）。结论DHA 可通过调控 cleaved-caspase3、Bax及Bcl-2表达,促进宫颈癌细胞凋亡的作用并能通过降低MMP-9、VEGF的表达抑制宫颈癌细胞的迁移和 侵袭。     

舒尼替尼通过Wnt/β-catenin信号抑制肾癌细胞体外生长和侵袭的实验研究

目的:研究舒尼替尼对肾癌细胞体外生长、侵袭及Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法:培养肾癌细胞株ACHN并用不同剂量舒尼替尼(1、2、4、8μmol/L)进行处理,以不含舒尼替尼的处理条件作为阴性对照。处理后24h时,测定细胞中凋亡基因、侵袭基因、Wnt/β-catenin信号通路的mRNA表达量。结果:处理后24h时,1、2、4、8μmol/L舒尼替尼组中NPRL2、Bax、caspase-3、caspase-9的mRNA表达量显著高于阴性对照组,MMP2、MMP9、Vimentin、N-cadherin、Wnt、β-catenin的mRNA表达量显著低于阴性对照组;舒尼替尼剂量越高,细胞中NPRL2、Bax、caspase-3、caspase-9的mRNA表达量越高,MMP2、MMP9、Vimentin、N-cadherin、Wnt、β-catenin的mRNA表达量越低。结论:舒尼替尼能够通过抑制肾癌细胞中Wnt/β-catenin信号通路来增加凋亡基因的表达、抑制侵袭基因的表达,进而抑制细胞的生长和侵袭。     

MTA1通过β-catenin、MMP-9调节HeLa细胞粘附、侵袭、转移

目的观察转染转移相关基因1(metastasis-associated 1,MTA1)基因对人宫颈癌细胞HeLa迁移、侵袭、粘附能力以及β-catenin、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响。方法 Western blot法检测HeLa、SiHa细胞中MTA1表达;以脂质体LipofectamineTM2000介导的方法将含MTA1全长基因的质粒pEGFP-C1-MTA1转染HeLa细胞,Western blot法检测目的基因表达;划痕、侵袭、粘附试验分别检测HeLa细胞迁移、侵袭、粘附能力变化;Western blot法检测β-catenin、MMP-9表达变化。结果与SiHa细胞相比,MTA1在HeLa细胞中表达较低(P<0.05);MTA1质粒转染的HeLa细胞中,MTA1表达、划痕愈合、Matrigel侵袭、Matrigel粘附能力均明显高于未转染及转染空载体对照组(均P<0.05);β-catenin、MMP-9表达在转染后均上调(均P<0.05)。结论 MTA1基因过表达可促进HeLa细胞转移、侵袭和粘附,上调β-catenin、MMP-9表达,MTA1基因可能成为肿瘤治疗靶点。     

EGB761对人子宫颈癌Siha细胞株的促凋亡作用

目的:研究银杏叶提取物EGB761对人子宫颈癌Siha细胞的促凋亡作用。方法:EGB761干预人子宫颈癌Siha细胞后,CCK-8观察50、100和200mg/L不同浓度EGB761作用下人子宫颈癌Siha细胞的增殖状况,流式细胞仪分析用AnnexinV-FITC和PI双染检测不同浓度EGB761对人子宫颈癌Siha细胞凋亡的影响。结果:EGB761可抑制人子宫颈癌Siha细胞的增殖,呈浓度和时间依赖性反应;EGB761 100mg/L、200mg/L干预人子宫颈癌Siha细胞后,流式细胞仪检测显示细胞凋亡率明显升高(P<0.01)。结论:EGB761可诱导人子宫颈癌Siha细胞凋亡。     

Wnt/β-catenin/TCF-4信号通路调节livin表达在肾癌细胞增殖凋亡中的研究

目的：研究人肾癌细胞系786-0中Wnt/β-catenin/TCF-4通路与livin的关系,探索Wnt/β-catenin/TCF-4通路在肾癌细胞中的凋亡调节机制。方法：不同浓度吲哚美辛处理肾癌786-0细胞,CCK-8法检测各组细胞活性;流式细胞术检测各组细胞凋亡改变;荧光定量PCR检测β-catenin、TCF-4、caspase-3及livin转录水平变化;Western blot检测β-catenin、caspase-3及livin蛋白表达水平变化。结果：随吲哚美辛浓度增加,细胞活力降低,呈剂量-效应关系（P=0.000）。流式结果显示伴随吲哚美辛浓度升高,细胞凋亡逐渐增加,25 μmol/L组、50 μmol/L组和100 μmol/L组凋亡率分别为（32.07±1.01）%、（40.03±1.95）%和（72.33±0.02）%,与对照组比较差异存在统计学意义（P=0.000,P=0.002,P=0.000）。Real-time PCR结果显示,β-catenin、TCF-4和livin相对表达水平均呈下降趋势（P=0.002,P=0.000,P=0.000）,而caspase-3相对表达呈明显上升趋势（P=0.001）。Western blot分析显示在25 μmol/L组、50 μmol/L组和100 μmol/L组中β-catenin相对表达量分别为0.568±0.020（P=0.001）、0.396±0.030（P=0.000）、0.142±0.038（P=0.000）;livin相对表达量分别为0.139±0.016（P=0.005）、0.050±0.006（P=0.000）、0.011±0.001（P=0.000）;而caspase-3相对表达量分别为0.278±0.035（P=0.046）、0.396±0.071（P=0.000）、0.518±0.015（P=0.000）。结论：吲哚美辛介导的肾癌细胞中β-catenin/TCF-4降解可能导致livin的转录抑制和caspase-3表达水平的上调,进而诱导肾癌细胞凋亡。     

PD98059对人子宫颈癌细胞株Siha增殖和凋亡的影响

目的探讨ERK1/2抑制剂PD98059对人子宫颈癌细胞株Siha细胞增殖和凋亡的影响。方法不同浓度（10μmol/L25μmol/L,50μmol/L,100μmol/L）PD98059作用于Siha,取不同时间点（6h,12h,24h,48h）,然后采用MTT法检测细胞的增殖情况,流式细胞仪检测细胞的凋亡情况。结果 PD98059能够抑制Siha细胞增殖,诱导细胞凋亡,并且呈时间-剂量依赖性（P〈0.05）。结论 PD98059能够抑制子宫颈癌细胞株Siha细胞增殖,诱导凋亡,可能与PD98059抑制了RAS-RAF-MEK-ERK信号转导途径有关。     

芹菜素增强TRAIL诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡

目的:研究芹菜素(API)与重组人可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)合用对人宫颈癌HeLa细胞凋亡的影响。方法:体外培养人宫颈癌HeLa细胞。碘化丙啶(PI)染色流式细胞术(FCM)定量分析sub-G1百分率。DNA琼脂糖凝胶电泳观察细胞DNA梯形条带。结果:API(20μmol/L)和TRAIL(20ng/mL)以及两者合用作用48h的人宫颈癌HeLa细胞sub-G1百分率分别是3.56%±0.20%、6.69%±0.40%和59.8%±4.20%;DNA琼脂糖凝胶电泳显示:20μmol/LAPI与20ng/mL的TRAIL联合处理,展示出典型DNA梯形条带图谱。结论:芹菜素具有增强TRAIL诱导HeLa细胞凋亡作用。     

紫柏凝胶抑制宫颈癌Siha细胞增殖和诱导凋亡的实验研究

目的 研究紫柏凝胶对HPV阳性宫颈癌细胞Siha的增殖抑制和凋亡诱导作用.方法 选取对数生长期Siha细胞,采用不同浓度(15、7.5、3.25 mg/mL)组,不加药物Siha细胞为对照组.MTS检测细胞生长抑制,台盼蓝染色检测细胞存活率,HOECHST 33342/PI染色法检测凋亡细胞形态学改变.结果 MTS法检测,各组紫柏凝胶对Siha细胞的生长均有不同程度的抑制作用,3.125 mg/mL剂量组与空白组相比有统计学意义(P<0.05),IC50为(15±2.1)mg/mL;台盼蓝染色,紫柏凝胶对Siha细胞生长有一定抑制作用,各浓度组细胞生长抑制率均高于对照组(P<0.05);紫柏凝胶作用Siha细胞后细胞间质变松,细胞质颗粒增多,染色质凝聚,分块,胞质浓缩;HOECHST 33342/PI染色,荧光显微镜下观察到紫柏凝胶引起细胞发生凋亡.结论 紫柏凝胶能抑制宫颈癌Siha细胞的增殖和诱导其凋亡.     

Expression and biological function of N-myc down-regulated gene 1 in human cervical cancer

The expression of N-myc down-regulated gene 1 (NDRG1) has previously been reported to be involved in the proliferation,differentiation,invasion and metastasis of cancer cells,but its role in cervical cancer is still unclear.This study aimed to investigate the expression of NDRG1gene in human cervical cancer and its effect on aggressive tumor behaviors.The NDRG1 expression in cervical tissues and cells was detected by RT-PCR.Specific expression plasmid pEGFP-N1-NDRG1-GFP was used to enhance the expression of NDRG1 in human cervical cancer cell lines.The mRNA and protein level of NDRG1 was assessed by RT-PCR and Western blotting,respectively.Its effects on cell proliferation,migration,invasion,cell cycle and apoptosis were detected by MTT,transwell migration assay and flow cytometry (FCM),respectively.The results showed that the expression of NDRG1 in cervical cancer tissues and cells was significantly lower than in normal cervical tissues (P<0.001).After transfection with pEGFP-N1-NDRG1-GFP,the mRNA and protein expression of NDRG1 was up-regulated in Siha cells,which suppressed cell proliferation (P<0.001),induced cell cycle arrest (P<0.05),reduced invasion and migration of Siha cells (P<0.05),but caused no cell apoptosis.Moreover,vascular endothelial growth factor (VEGF),a tumor-induced angiogenesis factor,was markedly reduced and E-cadherin,a cell adhesion molecule,was increased in the cells transfected with pEGFP-N1-NDRG1-GFP.It was concluded that up-regulated NDRG1 may play a role in the suppression of malignant cell growth,invasion and metastasis of human cervical cancer.     

沉默SLP-2 可抑制人宫颈癌细胞的迁移及侵袭能力

目的研究沉默SLP-2对人宫颈癌细胞迁移及侵袭能力的影响及其作用机制。方法用siRNA转染人宫颈腺癌Hela细胞 及宫颈鳞癌Siha细胞作为沉默组,同时设立空白对照组及阴性对照组,转染48 h后,用Western blot检测SLP-2蛋白的表达量, 用划痕实验、Transwell 实验检测沉默SLP-2 对Hela 和Siha 细胞迁移能力的影响,用基质胶Transwell 实验检测沉默SLP-2 对 Hela 和Siha 细胞侵袭能力的影响,用Western blot 检测沉默SLP-2 后Hela 和Siha 细胞上皮间质转化标志分子E-cadherin、β- catenin、vimentin及上皮间质转化上游转录因子Twist蛋白表达量的变化。结果与对照组相比,Western blot结果显示沉默组 SLP-2蛋白的表达量明显下降;划痕实验显示沉默组的划痕面积愈合率明显下降（P<0.01）;Transwell实验及基质胶Transwell实 验均显示沉默组穿过小室膜至下室的细胞数明显减少（P<0.01）;Western blot结果显示沉默组上皮细胞标志分子E-cadherin及 β-catenin表达升高,而间质细胞标志分子vimentin表达下降,表明Hela细胞和Siha细胞的上皮间质转化受到抑制;Western blot 结果显示沉默组Twist蛋白的表达量也明显下调。结论沉默SLP-2可抑制人宫颈癌细胞上皮间质转化（EMT）的发生,使宫颈 癌细胞的迁移及侵袭能力下降,其作用机制可能与下调Twist蛋白的表达有关。     

不同浓度As2O3对293t细胞和HeLa细胞的凋亡及增殖的影响

目的初步研究三氧化二砷(As2O3)作为急性早幼粒细胞性白血病(acute promyelocytic leukemia,APL)的治疗剂和环境污染物的毒副作用.方法用As2O3作用于293t细胞和HeLa细胞不同时间后,用流式细胞仪、Hoechst33258染色、形态学和超微结构观察检测细胞凋亡和增殖;检测293t细胞增殖用细胞记数板连续记数6天.结果 3～5μmol/L As2O3作用24h可诱发HeLa细胞发生凋亡,而293t则不发生明显的凋亡.低浓度As2O3(<2μmol/L)可抑制293t细胞增殖.结论不同浓度的As2O3对HeLa细胞和293t细胞的增殖和凋亡作用不同.     

5-氨基乙酰丙酸光动力疗法诱导人宫颈癌细胞株Hela和Siha凋亡的研究

目的  探讨5-氨基乙酰丙酸结合光动力疗法对人宫颈腺癌Hela细胞株和鳞癌Siha细胞株凋亡的影响及其相关机制。方法  噻唑蓝（MMT）法检测光动力疗法对人宫颈癌细胞株Hela和Siha增殖的影响,并比较不同的抑制作用。Annexin V-FITC/PI双染法检测光动力疗法对Hela和Siha细胞株凋亡的影响。免疫细胞化学法检测光动力疗法对两种细胞Her-2/neu基因的蛋白表达影响。结果   Hela比Siha细胞株对光动力治疗更敏感。5-氨基乙酰丙酸2mmol/L、10J/cm2激光剂量孵育为光动力疗法体外杀伤Hela和Siha细胞株较理想的实验条件,在该条件下Hela、Siha细胞的IC50分别为0.724、1.206mmol/L。光动力疗法可显著诱导Hela和Siha细胞凋亡,并抑制Hela和Siha细胞Her-2/neu基因的蛋白表达。结论  光动力治疗在体外对人宫颈腺癌Hela细胞株和鳞癌Siha细胞株有明显的增殖抑制作用,还能诱导两种细胞发生凋亡,其机制可能与抑制Her-2/neu基因表达有关。     

溶血磷脂酸对宫颈癌细胞形态学影响的体外研究

目的观察溶血磷脂酸对宫颈癌细胞株Siha生长及细胞形态的影响。方法①体外培养人宫颈癌细胞株Siha,以终浓度为1μmol/L、5μmol/L、10μmol/L、15μmol/L的溶血磷脂酸和终浓度为5mg/L、10mg/L、20mg/L、40mg/L的多西环素分别干预,并设不加任何药物作为空白对照组。各组均干预72h后进行过碘酸雪夫反应(PAS)染色,用倒置显微镜观察各组宫颈癌细胞的生长及形态变化。②体外培养Siha细胞,用终浓度为10μmol/L的溶血磷脂酸和终浓度为40mg/L的多西环素干预,72h后固定过夜,电镜扫描。结果①溶血磷脂酸组Siha细胞随着溶血磷脂酸浓度升高,癌细胞数量明显增多,细胞异形性及可塑性增加;多西环素处理组随着多西环素浓度增加,细胞数量明显减少,细胞核固缩、碎裂,细胞破坏。②电镜下可见经溶血磷脂酸干预后Siha细胞表面出现大量分泌颗粒,细胞变形伸出细长突起相互连接。多西环素组干预者则细胞数量减少,形态轮廓不清晰,细胞皱缩变形,核碎裂,细胞溶解。结论溶血磷脂酸促进宫颈癌细胞株Siha生长增殖并改变Siha细胞形态,而多西环素则具有相反的抑制作用。