人巨细胞病毒抑制粒-单及红系祖细胞的体外增殖及干预研究

探讨人巨细胞病毒 (HCMV)抑制脐血粒 -单系祖细胞的 (CFU GM)、红系爆式祖细胞 (BFU E)及红系祖细胞 (CFU E)的体外增殖和黄芪注射液与更昔洛韦(GCV)对此的干预作用 ,采用造血祖细胞体外培养、聚合酶链反应 (PCR)技术 ,培养、观察、计数CFU GM、BFU E及CFU E集落产率、抑制率、提高率 ,集落峰值时间和集落维持时间 ,并用PCR检测集落细胞内HCMV DNA。结果显示 :①HCMVAD169对CFU GM、BFU E及CFU E均有抑制作用 ,其抑制作用与HCMV浓度有关 ,高浓度 ( 1∶1 0 ,1 1 0 0 )感染组与对照组比较集落产率明显下降 (P <0 0 1 ) ,集落维持的时间明显缩短 (P <0 0 1 ) ,集落峰值时间无明显差异 (P >0 0 5) ,而低浓度组 ( 1∶1 0 0 0 )无此作用 ;②PCR检测发现在HCMV感染的造血祖细胞内存在HCMV DNA ;③在 1∶1 0感染组中 ,加入黄芪注射液与更昔洛韦后 ,HCMVAD169感染的CFU GM、BFU E及CFU E集落产率明显增加 (P <0 0 1 )。结论 :①造血祖细胞是HCMVAD169的宿主细胞之一 ,HCMVAD169能直接感染造血祖细胞 ;②在体外HCMVAD169对CFU GM、BFU E、CFU E的生长 ,集落形成有明显的抑制作用 ;③黄芪与更昔洛韦有抗HCMV作用 ,能促进受HCMV感染的造血祖细胞集落增殖     

人巨细胞病毒感染对脐血巨核系祖细胞体外增殖的影响

目的　探讨人巨细胞病毒 (HCMV)对脐血巨核系祖细胞 (CFU Mk)体外增殖的影响及其机制。方法　采用造血祖细胞体外培养技术 ,观察、计数HCMV AD169感染的CFU Mk集落产率、抑制率、集落峰值及维持时间 ;并采用聚合酶链反应 (PCR)技术检测集落细胞内HCMV AD169DNA。结果　 1.HCMV AD169感染组集落产率较对照组明显减少 ,HCMV对CFU Mk集落的抑制程度与病毒滴度有关 ,集落产率随病毒感染滴度增高而减少 ,抑制率随病毒感染滴度增高而渐增加 ;各组集落峰值出现时间无明显差异 (P均 >0 .0 5 ) ,但各感染组集落维持时间明显短于对照组 (P <0 .0 1) ;2 .用PCR在集落细胞内检测到HCMV AD169DNA。结论　CFU Mk是HCMV的宿主细胞之一 ,HCMV能直接感染CFU Mk ;在体外HCMV AD169对CFU Mk的增殖和集落形成有明显抑制作用 ,此作用可能与临床HCMV感染后患者血小板减少有关     

更昔洛韦对人巨细胞病毒感染的粒-单祖细胞体外增殖的影响

目的　探讨更昔洛韦对人巨细胞病毒 (HCMV)感染的粒 单祖细胞 (CFU GM )体外增殖的影响。方法　采用造血祖细胞体外培养技术 ,用更昔洛韦干预HCMV感染的CFU GM ,观察计数CFU GM的产率、大小、峰期及维持时间。结果　①更昔洛韦组集落产率明显高于病毒组 (P <0 0 1)。②更昔洛韦组大集落所占比例明显高于病毒组 (P <0 0 1)。③更昔洛韦组集落维持时间较病毒组延长。结论　在体外 ,更昔洛韦对HCMV感染的CFU GM的生长具有促进作用。     

黄芪注射液对人巨细胞病毒感染的粒-单系祖细胞体外增殖的影响

目的：探讨黄芪注射液对人巨细胞病毒(HCMV)感染的粒—单系祖细胞(CFU-GM)体外增殖的影响。方法：采用造血祖细胞体外培养技术,用黄芪干预HCMV感染的CFU-GM,观察计数CFU-GM的产率,大小,峰期及维持时间。结果：①黄芪组每2×105个细胞中CFU-GM簇和集落的产率分别为 333.33±12.69 和81.23±4.93,病毒组每2×105个细胞中簇和集落的产率分别为 167.80±16.63,53.70±1.67,两者相比差异有显著性(P<0.01)。②黄芪组大集落的比例占(9.5±0.8)%,明显高于病毒组(2.7±1.0)%,P<0.01。③黄芪组大集落峰期出现早,集落和大集落维持时间长。结论：在体外黄芪注射液可以促进HCMV感染的CFU-GM增殖。     

巨细胞病毒感染对淋巴系祖细胞增殖的影响及其干预措施

目的探讨人类巨细胞病毒（HCMV）对淋巴系祖细胞（CFU-TL）体外增殖的影响、作用机制及其干预措施。方法本实验共分为空白对照组、灭活对照组、HCMV感染组、更昔洛韦（GCV）干预组、黄芪注射液（AMI）干预组5组。采用甲基纤维素半固体培养CFU-TL集落，不同浓度HCMV-AD169持续攻击CFU-TL，用AMI、GCV粉剂干预，观察CFU-TL集落形成：用四甲基偶氮唑盐法测HCMV对宿主细胞增殖活性的影响；用PCR检测CFU-TL集落细胞内HCMV-AD169DNA。结果1．与空白对照组及灭活对照组比较，各病毒感染组CFU-TL集落产率明显减少、维持时间明显缩短（P均〈0．01），抑制程度与病毒感染滴度呈剂量依赖关系；2．HCMV感染48、72、96、120h对宿主细胞增殖活性的影响与对照组比较均有显著差异（F分别为11．412，18．058，13．259，56．360 P均〈0．01）。3．PCR检测到HCMV感染组CFU-TL集落细胞内HCMV-AD169DNA。4．与HCMV感染组比较，HCMV＋AMI组、HCMV＋GCV组CFU-TL集落产生率明显增加，集落维持时间均显著延长（P均〈0．01）。结论HCMV在体外能抑制CFU-TL集落的增殖和分化；HCMV感染患儿免疫功能低下可能与HCMV直接抑制CFU-TL有关；GCV、AMI在体外能有效干预HCMV感染所致的CFU-TL增殖抑制的发生。     

巨细胞病毒抑制多向祖细胞的增殖及干预研究

目的　在体外已证实人巨细胞病毒 (HCMV)能抑制骨髓造血祖细胞的增殖。该研究观察HCMV对脐血多向造血祖细胞 (CFU Mix)体外增殖的影响及黄芪和更昔洛韦 (GCV)对此的干预作用。方法　采用造血祖细胞体外培养技术 ,观察HCMV AD1 69感染的CFU Mix集落数、抑制率、提高率、集落峰值及集落维持时间 ;用聚合酶链反应 (PCR)技术检测集落细胞内HCMV AD1 69DNA。在 1∶1 0HCMV感染组中分别加入黄芪和 /或GCV ,观察黄芪和GCV干预HCMV AD1 69对CFU Mix增殖的抑制作用。结果　① 1∶1 0 ,1∶1 0 0 ,1∶1 0 0 0三种滴度HCMV AD1 69感染的CFU Mix集落数较对照组明显减少 (P <0 .0 5 ) ,集落数随病毒感染滴度的增高而减少 ,抑制率随病毒感染滴度的增高而逐渐增加 ;②各组集落峰值出现时间无明显差异 (P >0 .0 5 ) ,但感染组集落维持时间明显短于对照组 (P <0 .0 1 ) ;③ 1∶1 0 ,1∶1 0 0 ,1∶1 0 0 0病毒感染组中检测到HCMV AD1 69DNA ;④ 1∶1 0感染组中加入黄芪和 /或GCV后 ,HCMV AD1 69感染的CFU Mix集落数明显高于未加药 1∶1 0感染组 (P <0 .0 5 )。结论　CFU Mix是HCMV的宿主细胞之一 ,HCMV能直接感染造血祖细胞 ;在体外HCMV AD1 69对CFU Mix生长和集落形成有明显抑制作用 ;黄芪和GCV有明显的抗HCMV作用 ,二者联     

人类巨细胞病毒感染对脐血造血祖细胞增殖的影响(英文)

目的：探讨人类巨细胞病毒(HCMV)感染对脐血造血祖细胞(CFU-GM、CFU-E、BFU-E、CFU-Mix及CFU-Mk)体外增殖的抑制作用及其机制。方法：20例脐血标本收集于正常足月顺产新生儿。实验共分5组:(1)3个HCMV感染组,每个感染组分别加入0.1 mL的103、104及105空斑形成单位(PFU)HCMV-AD169病毒液于培养体系中;(2)灭活对照组,加入同体积灭活HCMV病毒液;(3)空白对照组,不加HCMV病毒液,代之以同体积的IMDM。采用造血祖细胞体外半固体培养技术,培养、观察、计数HCMV-AD169株对脐血CFU-GM、CFU-E、BFU-E、CFU-Mix及CFU-Mk集落数、抑制率和集落维持时间;并用聚合酶链反应(PCR)技术检测集落细胞内HCMV-DNA。结果：(1)在造血祖细胞培养体系中加入不同滴度的HCMV-AD169后,104和105PFU滴度感染对CFU-GM、CFU-E、BFU-E、CFU-Mix及CFU-Mk集落形成均有显著的抑制作用,103PFU滴度感染对CFU-Mix及CFU-Mk集落形成有显著的抑制作用,与空白对照组和灭活对照组比较,差异有显著性(P<0.05)。病毒滴度越高,抑制程度越明显(P<0.05)。(2)104和105PFU滴度感染组CFU-GM、CFU-E、BFU-E、CFU-Mix及CFU-Mk集落维持时间较对照组明显缩短(P<0.01),103PFU滴度感染组CFU-Mix和CFU-Mk集落维持时间较对照组明显缩短(P<0.01)。(3)PCR显示3个感染组的CFU-GM、CFU-E、CFU-Mix及CFU-Mk集落细胞内均有HCMV-AD169DNA存在。结论：HCMV-AD169能直接感染CFU-GM、CFU-E、BFU-E、CFU-Mix及CFU-Mk造血祖细胞,并抑制造血祖细胞的增殖,这可能与HCMV感染患儿出现粒细胞减少、血小板减少和贫血等造血功能紊乱有关。     

更昔洛韦和黄芪对巨细胞病毒感染所致造血祖细胞增殖抑制的影响

目的　探讨更昔洛韦 (GCV)和黄芪对巨细胞病毒 (CMV)感染所致脐血粒 巨噬系祖细胞 (CFU GM)、红系早、晚期祖细胞 (CFU E、BFU E)、多向造血祖细胞 (CFU Mix)及巨核系祖细胞(CFU Mk)体外增殖抑制的影响。方法　采用造血祖细胞培养技术 ,培养、观察、计数巨细胞病毒AD169株 (CMV AD169)感染CFU GM、CFU E、BFU E、CFU Mix和CFU Mk后各祖细胞集落、峰期及维持时间 ;用聚合酶链反应 (PCR)检测集落细胞内CMV DNA ;根据细胞毒性实验结果 ,将GCV和黄芪作用于CMV感染的CFU GM、CFU E、BFU E、CFU Mix及CFU Mk祖细胞 ,再分别计数集落、峰期及维持时间。结果 ( 1)CMV感染组CFU GM、CFU E、BFU E、CFU Mix及CFU Mk集落数较对照组明显减少 (P <0 0 1) ;集落维持时间CMV感染组较对照组明显缩短 ;( 2 )用PCR在感染组集落细胞内检测到CMV DNA的存在 ;( 3)黄芪和 (或 )GCV作用于CMV感染的祖细胞后 ,与病毒组比较集落维持时间明显延长 ,集落数和集落增殖率明显提高 (P <0 0 1) ,黄芪组集落增殖率分别为 2 7 2 %、4 5 2 %、4 9 1%、39 0 %、11 9% ;GCV组分别为 37 4 %、74 2 %、71 7%、6 7 4 %、38 9% ;GCV 黄芪组分别为 5 3 6 %、83 8%、88 7%、87 8%、6 1 5 %。结论　CMV AD169在体外能明显抑制CFU GM、CFU E、BFU     

人巨细胞病毒对造血系统的影响

目的 探讨人巨细胞病毒(HCMV)对造血系统的影响及其机制。方法 采用造血祖细胞体外半固体培养技术,研究HCMV AD169株对粒-巨噬系祖细胞(CFU-GM)、红系祖细胞(CFU—E)、多向造血祖细胞(CFU—Mix)及巨核系祖细胞(CFU-MK)集落生长的影响;分别用原位聚合酶链反应(IS-PCR)和聚合酶链反应(PCR)检测CFU-GM、CFU-Mix、CFU-MK及CFU-E集落细胞中的HCMV DNA;用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测CFU-E集落细胞中的晚期抗原(late antigen,LA)mRNA及CFU-MK集落细胞中的前早期抗原(immediate early antigen,IEA))mRNA;用免疫组化方法检测CFU—Mix集落细胞中HCMV早期蛋白P52。结果 HCMV AD169株在体外能明显抑制CFU—GM、CFU—E,CFU—Mix及CFU—MK的生长,抑制程度与病毒感染滴度呈剂量依赖关系;经IS-PCR或PCR检测发现病毒感染组CFU-GM,CFU-E,CFU-Mix及CFU-MK细胞中有HCMV DNA存在;RT—PCR检测发现病毒感染组CFU-MK细胞中有IEA mRNA的表达,而CFU-E细胞中的LA mRNA为阴性;免疫组化(IHC)检测发现病毒感染组CFU-Mix集落细胞中有HCMV P52的表达。结论 HCMV AD169可抑制CFU-GM,CFU-E,CFU-Mix及CFU-MK的分化和增殖;HCMV AD169对造血系统有直接损害作用。此作用可能是HCMV感染所致的粒细胞和血小板减少及贫血的原因之一。     

新生儿脐血粒-单系祖细胞体外培养的研究

本文应用体外培养方法对新生儿脐血粒－单系造血祖细胞（CFU-GM）进行了培养，并与成人外周血、骨髓CFU－GM数量及其特征进行了比较观察，评价了脐血作为造血干细胞／祖细胞来源重建骨髓造血的能力。结果显示：（1）脐血中CFU－GM数量明显高于成人外周血，约相当于成人外周血的18倍，与骨髓相比，其数量间无统计学差异；（2）脐血中CFU-GM集落大小、细胞构成、集落生长曲线明显不同于成人外周血及骨髓以上结果提示新生儿脐血中富含造血干／祖细胞，而且在数量和特性上明显不同于成人外周血及骨髓，在移植中可能更具有重建骨髓造血的能力。     

人巨细胞病毒对多向造血祖细胞的影响

目的：探讨人巨细胞病毒（HCMV）对多向造血祖细胞（CFU－Mix)的抑制作用及其机制。方法：采用造血祖 外半固体培养技术,研究HCVMVAD169株对脐血CFU－Mix集落生长的影响;用原位聚合酶链反应（IS－PCR）检测集落细胞中的HCVM DNA;用免疫组化方法检测集落细胞中HCV早期蛋白P52。结果：HCMVAD169在体外能明显抑制UF－Mix集落生长,集落数随病毒感染滴度的增高而减少,抑制幅度亦加大的趋势;经IS－PCR检测发现病毒感染线CFU－Mix集落细胞中有HCVMVDNA存在,免疫组化检测发现病毒感染缄CFU－Mix涨集落细胞中有HCMV P52的表棕,结论HCMV AD169可抑制 CFU－Mix的分化、增殖;HCMV AD169对CFU－Mix有直接损害作用。此作用可能 是HCMV感染所致的粒细胞和血小板减少,贫血的主要原因;并证实CFU－Mix集落细胞右存在HCMV蛋白的早期表达。     

人巨细胞病毒潜伏—激活及其对造血系统的影响

人巨细胞病毒（HCMV）感染在人群中相当普遍，通常呈潜伏感染，外周血单核细胞和骨髓造血祖细胞是HCMV主要潜伏部位，经过细胞分化、免疫抑制、细胞因子作用等潜伏－激活机制可致严重疾病。近10年来，随着免疫低下状态人群（艾滋病，器官移植和恶性肿瘤等患者）的增多，HCMV感染及其引发的严重疾病逐渐增加，造血系统常受累，其中骨髓抑制和血小板减少症常见。     

骨髓粒系祖细胞测定在小儿血液病中的应用

本文对86例不同血液病患儿的骨髓进行了粒系祖细胞(GM—CFU)测定。观察到增生性贫血和血小板减少性紫癜 GM—CFU 的测定值与正常骨髓相同,丛/集落比值<1,而再生障碍性贫血和急性白血病 GM—CFU 的测定值明显低于正常骨髓,丛/集落比值>1。这一明显的比值改变规律可以提示粒系祖细胞受累的疾病与非粒系祖细胞受累的疾病之间存在着明显的差异,并可利用这种差异作为这两类疾病的鉴别指标。     

人类细小病毒B19感染致特发性血小板减少性紫癜的发病机制

目的探讨人类细小病毒B19(HPVB19)感染对骨髓巨核祖细胞的影响。方法运用酶联免疫吸附试验检测HPVB19-IgM、PCR检测HPVB19VP独特区DNA。筛选出并HPVB19感染特发性血小板减少性紫癜(ITP)患儿。骨髓行巨核祖细胞体外培养,集落细胞计数。结果外周血HPVB19-DNA阳性及血清HPVB19IgM阳性ITP 31例患儿中,巨核祖细胞集落细胞形成减低,与正常对照组及非HPVB19感染组比较,差异有显著性。结论HPVB19可影响巨核祖细胞集落形成。     

特发性血小板减少性紫癜巨核系祖细胞巨细胞病毒感染的临床研究

目的特发性血小板减少性紫癜（ITP）是儿童常见的出血性疾病,其病因尚不十分清楚。很多研究表明,该病的发生与病毒感染密切相关。探讨人类巨细胞病毒（HCMV）感染巨核系祖细胞致ITP血小板减少的发病机制及其有效的治疗方法。方法HCMV相关ITP骨髓巨核细胞集落形成单位（CFU-MK）体外培养技术收集集落细胞,采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测HCMV晚期抗原基因mRNA,并给予更昔洛韦治疗。结果46例血清HCMV-DNAPCR阳性或血清HCMV-IgM阳性的ITP骨髓巨核细胞集落形成单位（CFU-MK）集落细胞HCMV晚期抗原基因mRNA阳性19例,更昔洛韦治疗有效16例;mRNA阴性27例,更昔洛韦治疗有效4例。阳性组疗效高于阴性组,P〈0．01,差异有统计学意义。结论HCMV可感染CFU—MK而成为1TP血小板减少的原因之一。巨核系祖细胞HCMV晚期抗原基因mRNA检测阳性者更昔洛韦治疗有效,能使血小板上升或恢复正常。     

造血器官及血液疾病

9 50247人胎盘血粒单系和红系祖细胞体外培养观察/黄绍良…//中国实用儿科杂志一1994 .9(4).一225一226 采用体外甲基纤维法同步培养人脐血粒单系祖细胞(C Fu一GM)和红系辛附侧泡(cFUE)、前红系祖细胞(B以J一E)结果:脐血cFU一GM及cFu一E集落离散.差异极大;7天cFu一GM生长有两种类型;生长低下型(4 .6」士4.63/2丫105)和生长良好型(小1.04士38.89/2丫105),14.21天的cFu一GM及BFU一E集落相当或超过骨髓组,集落多巨大,细胞数多)1 000,表明脐血具有不同于骨髓造血细胞的生物学特性,从一个侧面提示多数个体脐血富含更原始的造血干/祖细…     

三种重组人细胞因子对急性粒细胞白血病和非白血病骨髓细胞增殖的影响

应用重组人粒单细胞集落刺激因子（ｒｈＧＭＣＳＦ）、白细胞介素３（ｒｈＩＬ－３）和白细胞介素６（ｒｈＩＬ－６）作为刺激因子，通过集落形成和细胞周期动力学变化，观察急性粒细胞白血病和非白血病骨髓细胞增殖影响，以及它们之间的关系。结果表明：ｒｈＩＬ－３促成ＣＦＵ－ＧＭ形成率高于ｒｈＧＭ－ＣＳＦ和ｒｈＩＬ－６的作用，ＩＬ－３＋ＩＬ－６配伍时ＣＦＵ－ＧＭ产率大于任何一种因子单独应用组和其它两因子配伍组；ｒｈＩＬ－６与ｒｈＧＭＣＳＦ或ｒｈＩＬ－６与ｒｈＩＬ－３配伍在非白血病骨髓和白血病骨髓动力学方面影响不一致。在集落形成和动力学之间存在一定关系。     

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目的研究脐血红系祖细胞的HOXB6基因的表达情况以及人类巨细胞病毒(HCMV)感染对红系祖细胞的HOXB6基因表达的影响,以探讨HCMV导致脐血红系祖细胞损伤的机制。方法在泸州医学院附属医院儿科以实时荧光定量PCR技术(FQ-RT-PCR)检测人类巨细胞病毒感染和(或)用全反式维甲酸(ATRA)处理后HOXB6基因的表达水平。结果人脐血红系祖细胞可表达HOXB6基因;HCMV感染后,红系祖细胞HOXB6基因的表达明显下调;ATRA能显著上调红系祖细胞HOXB6基因的表达水平,且能够在一定时间内上调HCMV感染后的红系祖细胞HOXB6基因的表达。结论HCMV感染能诱导脐血红系祖细胞HOXB6的表达下调,HC-MV有可能通过调控HOXB6基因表达异常而引起红系祖细胞的增殖障碍。     

再生障碍性贫血患儿骨髓内人巨细胞病毒活动性感染对造血功能的影响

目的探讨再生障碍性贫血(再障)患儿骨髓内人巨细胞病毒(HCMV)活动性感染与骨髓CD34 细胞/有核细胞的百分比之间的关系,了解骨髓HCMV活动性感染对再障患儿骨髓造血功能的影响。方法收集23例再障初诊患儿(再障组),5例非血液病患儿作为对照。所有患儿均于治疗前抽取骨髓液标本,一部分骨髓液采用Trizol法抽提骨髓液RNA,然后进行反转录聚合酶链反应,扩增后通过琼脂糖凝胶电泳检测患儿骨髓内是否存在HCMV活动性感染;将再障组和对照组患儿另一部分骨髓液进行多参数流式细胞术检测,分别检测二组患儿骨髓CD34 细胞/有核细胞百分比。结果23例再障患儿中9例患儿骨髓标本内可检测到HCMV RNA表达,阳性率为39.1%;5例对照组患儿骨髓标本内均未检测到HCMV RNA表达。流式细胞术检测显示再障患儿骨髓CD34 细胞/有核细胞为(0.27±0.21)%,明显低于对照组[(1.57±0.45)%](P<0.05)。骨髓HCMV RNA阳性再障患儿的CD34 细胞/有核细胞为(0.13±0.07)%,显著低于HCMV RNA阴性患儿[(0.36±0.22)%](P<0.05)。结论HCMV可感染再障患儿的骨髓组织,其活动性感染可导致骨髓CD34 细胞/有核细胞的百分比明显减少,提示骨髓内HCMV活动性感染对骨髓造血功能有抑制作用。     

问：脐血中造血细胞有何特点？

问：脐血中造血细胞有何特点？答：１９７４年Ｋｎｕｄｔｚｏｎ等首先报告人类脐血中粒－巨噬细胞系集落形成单位（ＣＦＵ－ＧＭ）产率远较成人血多。此后，人们对脐血造血细胞进行了较多研究，发现：（１）脐血中存在骨髓所含有的所有造血干／祖细胞，如高增殖潜能集落形...