拉米夫定和干扰素α2b体外细胞毒性与抗乙型肝炎病毒作用比较

目的 体外比较拉米夫定和α-干扰素的细胞毒性和抗乙型肝炎病毒作用. 方法体外培养L-02和 HepG2.2.15细胞,给予不同浓度的拉米夫定和干扰素α2b,作用72 h后,噻唑蓝(MTT) 法检测L-02和 HepG2.2.15细胞的生存率;收集不同浓度的拉米夫定和干扰素α2b处理的HepG2.2.15细胞上清液,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测HBsAg、HBeAg的分泌.结果拉米夫定对L-02和 HepG2.2.15有一定的毒性作用,而干扰素α2b对细胞无毒性作用,甚至能促进正常细胞的增殖;拉米夫定对HBsAg和HBeAg的抑制作用大于干扰素α2b,拉米夫定对HBsAg的抑制率较高,而干扰素α2b对HBeAg的抑制率较高.结论拉米夫定和α干扰素联合使用可提高抗HBV的作用和质量.     

基于唾液酸酶和岩藻糖转移酶的抗体—细胞偶联物构建

目的 通过基于唾液酸酶和岩藻糖转移酶的糖链工程将曲妥珠单抗高密度偶联到人外周血白血病T细胞Jurkat细胞,并评价偶联细胞对HER2+靶细胞的识别活性。方法 首先通过凝集素染色和流式细胞术探究去唾液酸化对细胞上α-1,3FucT催化的岩藻糖编辑效率的影响。然后制备含有叠氮标签的曲妥珠单抗,与GDP-炔基岩藻糖通过生物正交反应构建GDP-岩藻糖-抗体偶联物。再利用α-1,3FucT将GDP-岩藻糖-抗体偶联物转移至唾液酸酶处理过的细胞表面,构建抗体-细胞偶联物,并通过流式细胞术和共聚焦成像验证。最后通过荧光成像观察抗体-细胞偶联物对靶细胞SK-BR-3细胞的识别。结果 细胞表面糖链的末端α-2,6唾液酸切除后能够显著提升α-1,3FucT催化的岩藻糖编辑的效率,成功制备GDP-岩藻糖-抗体偶联物并转移至细胞表面得到曲妥珠单抗-Jurkat偶联物,去唾液酸化显著增加了Jurkat细胞偶联曲妥珠单抗的容量,构建的曲妥珠单抗-Jurkat偶联物具备HER2+细胞靶向性。结论 细胞糖链工程可实现细胞偶联分子容量的调节,应用于抗体对免疫细胞的功能化,也为构建海洋糖类活性化合物偶联细胞提供了新的思路...     

胰岛素-5-氟尿嘧啶偶联物在体外的细胞毒性和细胞亲和性

目的 研究胰岛素-5-氟尿嘧啶偶联物(insulin-5-Fu)在体外的细胞毒性和细胞亲和性.方法 通过MTI比色法和荧光标记成像来检测insulin-5-Fu对正常肝细胞和肝癌细胞的作用效应.结果 偶联物在体外能够与肝癌细胞迅速地特异性结合;在中、低浓度下对肝癌细胞具有与原药相近的细胞毒性,对于正常细胞,其初期毒性较低;在高浓度下对正常细胞和肿瘤细胞的毒性急剧增加.结论 以胰岛素为靶向载体的偶联物能够靶向肿瘤细胞,在中、低浓度范围内能够达到与原药相近的抑瘤效果,对正常细胞的毒性表现出时间延迟现象,高浓度时具有一定的细胞毒性.     

雷公藤内酯醇-溶菌酶偶联物的性能研究及体外评价

目的 研究肾靶向前体药物雷公藤内酯醇-溶菌酶偶联物的理化性质.方法 采用HPLC法考察偶联物在37℃不同pH缓冲液、大鼠血浆及大鼠肾脏溶酶体溶液中的稳定性及细胞毒性.结果 体外稳定性试验表明,偶联物在37℃的不同pH缓冲液及大鼠血浆中稳定,在大鼠肾脏溶酶体溶液中可降解.偶联物能降低肾近端小管的细胞毒性,减少脂多糖引导的NO产生.结论 雷公藤内酯醇-溶菌酶偶联物可提高雷公藤内酯醇的肾靶向性,并可降低不良反应.     

力达霉素-单抗Fab'片段不同连接偶联物的抗肿瘤作用比较

研究力达霉素与抗Ⅳ型胶原酶单抗的不同连接键的小型化免疫偶联物的抗肿瘤作用。制备长短链的二硫键以及硫醚键抗肿瘤抗生素力达霉素(LDM)与抗Ⅳ型胶原酶单抗3G11的Fab'片段连接的免疫偶联物,ELISA法测定偶联物的免疫活性,体外细胞克隆形成测定和体内荷瘤裸小鼠模型观察两种偶联物的抗肿瘤作用。体外研究显示,Fab'-LDM偶联物部分保留了抗Ⅳ型胶原酶单抗3G11对抗原的亲和力,硫醚键偶联物对体外培养的人纤维肉瘤HT-1080细胞的杀伤作用强于LDM和二硫键偶联物。实验结果显示,LDM等剂量条件下硫醚键偶联物Fab'-SSMPB-LDM和Fab'-SMBS-LDM组的抑瘤率分别为87.7%和78.0%,二硫键偶联物Fab'-SPDP-LDM和Fab'-LCSPDP-LDM组分别为74.8%和72.3%,游离LDM组为70.9%,相比较长连接键的硫醚键偶联物抑瘤作用显著增强。Fab'-SSMPB-LDM和Fab'-SMBS-LDM组动物的平均生存时间延长为165.8%和145.2%,Fab'-SPDP-LDM和Fab'-LCSPDP-LDM组分别为82.2%和107.5%,LDM组为71.9%。与二硫键偶联物组比较...     

干扰素α仅对Raji细胞的生长抑制作用及其作用机制

目的探讨干扰素α对白血病Raji细胞生长的抑制作用及其作用机制.方法以不同浓度的干扰素α作用于体外培养的Raji细胞,应用MTT法检测细胞生长抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Hoechst 33258荧光染色法观察细胞凋亡,TRAP-PCR-ELISA法检测细胞凋亡前后的端粒酶活性.结果5×103 U*ml-1以上的干扰素α可显著降低Raji细胞端粒酶活性,抑制细胞的生长及诱导细胞发生凋亡,并呈现出明显的量-效与时-效关系.药物(10×103 U*ml-1)作用48～60 h在Hoechst染色图片上可见核浓缩及核碎裂等典型的凋亡改变.结论干扰素α能抑制Raji细胞的生长并诱导细胞发生调亡,降低细胞端粒酶活性可能是其重要作用机制之一;这为干扰素应用于临床治疗淋巴瘤细胞白血病提供了有力的试验依据.     

甲氨蝶呤-聚乙二醇偶联物的合成及其体外抗肿瘤活性

为了改善甲氨蝶呤的溶解性能和生物学性能，本工作在合成甲氨蝶呤-聚乙二醇偶联物的基础上，考察了该偶联物的溶解性和体外抗肿瘤活性。通过采用微波催化与化学催化相结合的方法，制备了新型甲氨蝶呤-聚乙二醇偶联物，其结构得到了紫外、红外和核磁共振谱的确证。测定了偶联物在水中的溶解度及其在辛醇/水中的分配系数，测得偶联物的水溶性和脂溶性均有明显增加，在纯水中的溶解度提高了128倍，分配系数提高了近5倍。以小鼠L1210白血病细胞作为研究对象，测定该偶联物的体外抗肿瘤活性，结果表明，偶联物的抗肿瘤活性与甲氨蝶呤基本接近。与文献相比，该甲氨蝶呤的聚乙二醇修饰方法具有快捷、方便的特点。     

单克隆抗体与博来霉素A6偶联物对肝癌的实验研究

用Dextran T40为中介体的方法偶联抗人肝癌单抗Hlll和博来霉素A6,体外实验显示Hlll与A6偶联物对人肝癌细胞抑制90%克隆生成浓度(IC₉₀)为0.17μmol/L:游离A6以及无关抗体与A6偶联物M3-A6分别为17/μmol/L和7μmol/L;同时加入Hlll单抗明显降低Hill-A6偶联物的细胞毒性;体内实验证明:Hlll-A6偶联物对裸鼠移植的人肝癌抑制率达78%,等剂量A6,M3-A6偶联物和Hlll与A6混合物的抑制率均约为30%。结果表明单抗Hlll与A6偶联物对肝癌的抑制作用明显比游离A6强。     

蓖麻蛋白A链与单抗3G11偶联物的制备及体外生物活性研究

目的:Ⅳ型胶原酶在肿瘤生长和转移的多个环节发挥着重要作用.将抗Ⅳ型胶原酶单克隆抗体3G11与蓖麻毒素A链(RA)偶联形成免疫毒素(ITs),并评价了该偶联物的体外生物活性.方法:从蓖麻籽中提取纯RA,与N-琥珀酰亚胺基3-(2-吡啶二硫基)丙酸酯(SPDP)修饰的单抗3G11偶联,进一步纯化后得到3G11-RA.以ELISA实验测定ITs的免疫反应性,并通过四甲基偶氮唑盐(MTT)实验对其体外细胞毒性进行评价.结果:ITs基本保持了单抗3G11对人肝癌细胞BEL-7402的免疫反应性,其对BEL-7402的细胞毒性比RA显著增强近50倍,而对人正常肝细胞LO2的毒性与RA相似.结论:3G11-RA免疫毒素对BEL-7402肝癌细胞具有较好的免疫反应性和体外细胞毒性.     

干扰素与维拉帕米逆转乳腺癌细胞耐药作用的研究

目的:研究α-干扰素与维拉帕米对体外培养的乳腺癌细胞多药耐药(MDR)的逆转作用。方法:以对药物敏感的人乳腺癌细胞系MCF-7和经阿霉素(ADM)诱导具有MDR表型的人乳腺癌耐药细胞系MCF-7/ADR为体外试验模型,分别单用及联用α-干扰素与维拉帕米对细胞系进行处理,MTT法检测各组细胞存活率,计算半数抑制浓度(IC50)、耐药倍数和逆转倍数;流式细胞术定量检测细胞表面P-170的表达。结果:α-干扰素与维拉帕米联用后使乳腺癌细胞耐ADM的IC50降低为0.32μmol·L-1,优于二者单用(2.29、1.23μmol·L-1),逆转倍数升高到51.88(二者单用为7.25、13.49),P-170表达低于二者单用。结论:单独应用α-干扰素、维拉帕米均可达到部分逆转MCF-7/ADR对ADM的耐药作用,但二者联用效果更强。     

肝靶向半乳糖基干扰素的合成及其生物学性质研究

本文采用２－亚氨基－２－甲氧乙基－１－β－硫代－Ｄ－半乳吡喃糖甙与基因工程干扰素（ＩＦＮａ１）相偶联，得到半乳糖基基因工程干扰素ａ１偶物（Ｇａｌ－ＬＦＮａ１）。并分别进行小鼠体内分布实验和家兔显像实验，其趋肝性实验结果表明，肝脏对Ｇａｌ－ＩＦＮａ１和ＩＦＮａ１的最大摄取值分别为２９．１％和１０．０％，并采用细胞致病变效应（ＣＰＥ）抑制微量法测定了偶联物的效价，偶联物Ｇａｌ－ＩＦＮａ１与对照品（ＩＦ     

紫杉醇与抗HER2单抗Sc7301偶联物对肿瘤细胞株的体外杀伤效应

目的：研究紫杉醇（TAX）与抗HER2单抗Sc7301偶联物对HER2表达阳性肿瘤细胞的特异性杀伤作用，为进一步研究卵巢癌靶向治疗奠定基础。方法：采用活化酯法制备紫杉醇与抗HER2单抗Sc7301的免疫偶联物；ELISA法检测TAX与Sc7301偶联后抗体活性的变化；四氮唑蓝（MTT）法观察TAX—Sc7301偶联物的抗肿瘤作用；流式细胞仪检测凋亡细胞比率。结果：偶联后抗体的活性保持为原有活性的54．8％以上，抗体的活性基本保持；偶联物NTT试验中，对人卵巢癌细胞株SKOV3细胞的抑制作用为相同剂量TAX与Se7301的混合物的2～3倍，而对HER2表达阴性的人肝癌细胞株HepO2的作用则较混合物相差不大；流式细胞仪观察随偶联物浓度的升高，细胞的亚二倍体凋亡峰越明显。结论：TAX与Sc7301的偶联物在体外可选择性杀伤HER2表达阳性的肿瘤细胞。     

干扰素α对Raji细胞的生长抑制作用及其作用机制

目的 :探讨干扰素α对白血病Raji细胞生长的抑制作用及其作用机制。方法 :以不同浓度的干扰素α作用于体外培养的Raji细胞 ,应用MTT法检测细胞生长抑制率 ,流式细胞仪检测细胞凋亡率 ,Hoechst 332 5 8荧光染色法观察细胞凋亡 ,TRAP PCR ELISA法检测细胞凋亡前后的端粒酶活性。结果 :5× 10 3 U·ml-1以上的干扰素α可显著降低Raji细胞端粒酶活性 ,抑制细胞的生长及诱导细胞发生凋亡 ,并呈现出明显的量 效与时 效关系。药物 (10×10 3 U·ml-1)作用 4 8～ 6 0h在Hoechst染色图片上可见核浓缩及核碎裂等典型的凋亡改变。结论 :干扰素α能抑制Raji细胞的生长并诱导细胞发生调亡 ,降低细胞端粒酶活性可能是其重要作用机制之一 ;这为干扰素应用于临床治疗淋巴瘤细胞白血病提供了有力的试验依据     

青藤碱-硝酸酯偶联物的合成及体外抗肿瘤活性筛选

目的:为寻找青藤碱有效的结构修饰方法以挖掘其抗肿瘤作用。方法:基于对母体结构特点的剖析设计合成了一系列青藤碱-硝酸酯偶联物,所合成偶联物的结构经IR光谱、¹H-NMR、¹³C-NMR和高分辨质谱确证。运用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法筛选偶联物对人源5种肿瘤细胞(宫颈癌Hela细胞、肺癌A549细胞、肝癌HepG2细胞、乳腺癌MCF-7细胞和结肠癌HT-29细胞)体外抗肿瘤活性。结果:共设计合成了9个青藤碱-硝酸酯偶联物。相比其他系列的偶联物,6-苯腙基青藤碱-硝酸酯偶联物体外抗肿瘤作用更为突出,其中衍生物10d对Hela, MCF-7及HT-29细胞株的抑制作用均优于阳性对照药顺铂,IC₅₀分别为(9.72±0.53),(15.46±8.16),(8.19±1.05)μmol·L^-1。结论:衍生物10d对多种待测肿瘤细胞有良好的体外抗肿瘤活性,可作为抗肿瘤的前体药物分子,值得继续开展进一步的研究。     

重组干扰素α-2b栓的抗疱疹病毒作用

目的探讨重组干扰素α-2b栓(IFNα-2b栓)的体外、体内抗单纯疱疹病毒Ⅰ型和Ⅱ型作用。方法应用细胞病变抑制法,观察IFNα-2b栓的体外抗病毒作用。建立HSV-2豚鼠阴道炎模型和HSV-1型豚鼠皮肤感染模型,分别用0.75、2.25、6.75 mg.kg-1的IFNα-2b栓治疗,进行豚鼠阴道分泌物的病毒毒力检测及阴道组织的病理组织学等检查,每天记录豚鼠皮肤损伤病变分值情况,观察IFNα-2b栓的体内抗病毒作用。结果体外实验,IFNα-2b栓、重组人干扰素α-2b注射液和阿昔洛韦对单纯疱疹病毒Ⅱ型的IC50分别是(0.59±0.11)、(0.56±0.08)、(21.20±1.90)mg.L-1。体内实验,各给药组中,IFNα-2b栓6.75 mg.kg-1剂量抗病毒作用最强,豚鼠阴道分泌物中病毒毒力显著低于模型组(P<0.01)。阴道组织切片病理结果也表明IFNα-2b栓对豚鼠阴道损伤具有较好的治疗作用。IFNα-2b栓能显著的减轻单纯疱疹I型病毒感染豚鼠的皮肤损伤程度(P<0.01),在相同剂量下,干扰素α-2b栓剂与干扰素α-2b注射液的抗单纯疱疹病毒活性相比较,2.25 mg.kg-1的干扰素α-2b栓剂组与其注射液组的治疗作用相当。结论 IFNα-2b栓在体外及体内均有一定的病毒抑制作用。     

抗IV型胶原酶单抗与平阳霉素新型免疫偶联物的抗肿瘤作用

目的考察抗IV型胶原酶单抗3G11与平阳霉素(PYM)偶联物的抗肿瘤作用。方法采用多聚谷氨酸(PLG)为中间载体制备3G11-PLG-PYM偶联物,MTT法测定其对肿瘤细胞增殖的抑制作用,以小鼠移植性肝癌H22为模型观察体内抗肿瘤作用。结果偶联物保留了单抗3G11对IV型胶原酶的免疫活性,对体外培养H22和KB细胞的杀伤作用弱于PYM。动物实验中PYM10mg·kg-1对H22肝癌的抑制率为60·6%,而等细胞毒性剂量的3G11-PLG-PYM偶联物抑瘤率达到90·8%,与PYM相比可显著延长小鼠的中位生存时间。结论3G11-PLG-PYM偶联物对小鼠肝癌H22的抑瘤作用比PYM强,可能成为新型的抗肿瘤靶向药物。     

抗IV型胶原酶单抗与平阳霉素新型免疫偶联物的抗肿瘤作用

目的考察抗IV型胶原酶单抗3G11与平阳霉素(PYM)偶联物的抗肿瘤作用。方法采用多聚谷氨酸(PLG)为中间载体制备3G11-PLG-PYM偶联物,MTT法测定其对肿瘤细胞增殖的抑制作用,以小鼠移植性肝癌H22为模型观察体内抗肿瘤作用。结果偶联物保留了单抗3G11对IV型胶原酶的免疫活性,对体外培养H22和KB细胞的杀伤作用弱于PYM。动物实验中PYM 10 mg·kg^-1对H22肝癌的抑制率为60.6%,而等细胞毒性剂量的3G11-PLG-PYM偶联物抑瘤率达到90.8%,与PYM相比可显著延长小鼠的中位生存时间。结论3G11-PLG-PYM偶联物对小鼠肝癌H22的抑瘤作用比PYM强,可能成为新型的抗肿瘤靶向药物。     

MTX-右旋糖酐偶联物的合成及其对K562细胞的敏感性初探

用溴化氰活化右旋糖酐(T-77)后,通过6-氨基己酸间隔桥,用水溶性碳二亚胺(EDC)法将抗癌药甲胺喋呤(MTX)与糖基相偶联,合成MTX-右旋糖酐偶联物(MTX-D).应用细胞凋亡荧光染色(AFS)法检测该偶联物MTX-D对人白血癌K562细胞的敏感性,结果该偶联物对K562细胞凋亡有诱导作用和影响其生长周期的作用.     

大鼠单克隆抗体与博来霉素A6偶联物治疗人大肠癌实验研究

用Dextran T-40为中介体偶联大鼠抗人大肠癌单克隆抗体R19和博来霉素A6。体外实验显示R19与A6偶联物对人盲肠癌细胞Hce-8693抑制50%克隆生成浓度(IC₅₀)为0.019μmol/L;游离A6及无关单抗与A6偶联物M3-A6分别为1.05和1.00μmol/L;对人结肠HT-29细胞IC₅₀为0.078μmol/L,而游离A6为4.0μmol/L。同时加入R19单抗能阻断R19-A6偶联物的细胞毒性。体内实验显示:R19-A6偶联物对裸鼠移植的人盲肠癌生长的抑制率达90%,而同等剂量的游离A6,R19与A6混合物和M3-A6的抑制率分别为52,34和48%。结果表明单抗R19与A6偶联物对人大肠癌的抑制作用明显比游离A6强。     

三甲基壳聚糖-维生素B12偶联物的制备与表征

目的 合成两种具有肠上皮细胞靶向的三甲基壳聚糖-Vit B12偶联物,并测定Vit B12的修饰度.方法 分别以丁二酸和PEG2000为间隔基制备三甲基壳聚糖-Vit B12偶联物.结果与结论 合成了两种不同间隔基的三甲基壳聚糖-Vit B12偶联物;目标偶联物及重要中间体经1HNMR、MS和UV确证;两种偶联物中Vit B12的修饰度分别为3.3％、3.1％.