喉癌患者不同来源淋巴细胞毒性的对比研究

应用细胞生物学方法，从１２例喉癌患者分离的外周血淋巴细胞（ＰＢＬ）、肿瘤引流淋巴结淋巴细胞（ＴｄＬＮＬ）和肿瘤浸润淋巴细胞（ＴＩＬ）在体外经重组务细胞介素２（ｒＩＬ－２）诱导５－７天后，成为具有杀瘤活性的淋巴因子激活的杀伤细胞（ＬＡＫ细胞）或激活的ＴＩＬ。采用＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入法，检查它们对Ｋ５６２靶细胞的杀伤能力。实验结果显示：加入ｒＩＬ－２栖外培养的ＰＢＬ、ＴＤＬＮＬ和ＴＩＬ细胞体积增大，呈不     

分枝杆菌多糖促人LAK细胞增殖及对喉癌HEP－2细胞杀伤活性的研究

为探讨分枝杆菌多糖（ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉａｌｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ，ＭＰＳ）在体外对ＬＡＫ细胞（ｌｙｍ－ｐｈｏｋｉｎｅａｃｔｉｖａｔｅｄｋｉｌｅｒｃｅｌｋｉｎｅ）活性的影响，以提高ＬＡＫ细胞杀瘤活性、减少ＩＬ－２（白细胞介素－２）用量和毒副作用。通过ＭＴＴ法测定不同浓度ＩＬ－２、不同浓度ＭＰＳ对ＬＡＫ细胞促增殖能力的影响；以细胞计数法测定不同浓度ＩＬ－２、ＭＰＳ对ＬＡＫ细胞扩增倍数的影响；应用乳酸脱氢酶法测定不同条件刺激的ＬＡＫ细胞对喉癌ＨＥＰ－２细胞杀伤活性的作用。结果证明小剂量ＩＬ－２（２×１０５Ｕ／Ｌ）诱导ＬＡＫ细胞过程中加入ＭＰＳ０．４ｍｇ／Ｌ能显著增强ＬＡＫ细胞的增殖和杀伤喉癌ＨＥＰ－２细胞的活性。其扩增倍数及杀伤活性均显著超过单纯应用ＩＬ－２（１０６Ｕ／Ｌ）诱导的ＬＡＫ细胞。通过检测不同条件下诱导的ＬＡＫ细胞表型，显示ＭＰＳ联合ＩＬ－２诱导的ＬＡＫ细胞ＣＤ２５百分率明显增高，提示ＭＰＳ可能通过促进ＬＡＫ细胞表面ＩＬ－２膜受体表达，提高ＬＡＫ细胞增殖及杀伤活性。因此，ＭＰＳ可望作为一种新型免疫调节剂用于抗肿瘤治疗     

分枝杆菌多糖促人LAK细胞增殖及对喉癌HEP—细胞杀伤活…

为探讨分枝杆菌多糖在体外对ＬＡＫ细胞活性的影响，以提高ＬＡＫ细胞杀瘤活性，减少ＩＬ－２用量和毒副作用，通过ＭＴＴ法测定不同浓度ＩＬ－２，不同浓度ＭＰＳ对ＬＡＫ细胞促增殖能力的影响；以细胞计数法测定不同浓度ＩＬ－２，ＭＰＳ对ＬＡＫ细胞扩增倍数的影响；应用乳酸脱氢酶法测定不同条件刺激的ＬＡＫ细胞对喉癌ＨＥＰ－２细胞杀伤活性的作用。     

两种免疫调节剂辅助LAK细胞杀伤喉癌细胞的体外研究

为探讨如何提高白细胞介素－２（ＩＬ－２）／ＬＡＫ细胞过继免疫治疗的抗肿瘤作用，应用免疫调节剂分枝杆菌多糖或ＣＤ３单克隆抗体协同ＩＬ－２诱导的健康人外周血淋巴细胞来源的ＬＡＫ细胞在体外扩增，测定其对喉癌ＨＥＰ－２细胞杀伤活性。实验结果：（１）不同免疫调节剂对ＬＡＫ细胞扩增的影响。实验组三且细胞于体外扩增均明显高于对照组（Ｐ〈０．０１）；ＭＰＳ组或ＣＤ３组细胞的扩增倍数比单纯应用ＩＬ－２组为高（Ｐ〈０     

两种免疫调节剂辅助LAK细胞杀伤喉癌细胞的体外研究

为探讨如何提高白细胞介素－２（ＩＬ－２）／ＬＡＫ细胞过继免疫治疗的抗肿瘤作用，应用免疫调节剂分枝杆菌多糖（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉａｌｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ，ＭＰＳ）或ＣＤ３单克隆抗体协同ＩＬ－２诱导的健康人外周血淋巴细胞来源的ＬＡＫ细胞在体外扩增，测定其对喉癌ＨＥＰ－２细胞杀伤活性。实验结果：①不同免疫调节剂对ＬＡＫ细胞扩增的影响：实验组三组细胞于体外扩增均明显高于对照组（Ｐ＜０．０１）；ＭＰＳ组或ＣＤ３组细胞的扩增倍数比单纯应用ＩＬ－２组为高（Ｐ＜０．０１）；其中扩增倍数最高者为ＭＰＳ组，与ＣＤ３组相比，Ｐ＜０．０５。②不同免疫调节剂诱导的ＬＡＫ细胞对喉癌ＨＥＰ－２细胞的杀伤活性比较：在培养一周时，实验组三组对ＨＥＰ－２细胞的杀伤活性均高于对照组，以ＣＤ３组及ＭＰＳ组杀伤活性最高，其杀伤活性均为５５．５％；于培养第二周，ＣＤ３组杀伤ＨＥＰ－２细胞活性仍较高，其他实验组细胞杀伤活性均明显下降。结论：免疫调节剂ＭＰＳ和ＣＤ３单克隆抗体均可通过增强ＬＡＫ细胞体外增殖和杀瘤活性而提高肿瘤过继免疫治疗效果。     

人LAK细胞在体外和裸鼠体内抗头颈部肿瘤细胞的研究

报道人ＬＡＫ细胞对头颈疗肿瘤细胞的影响。结果发现：①ＬＡＫ细胞，在体外对人喉鳞癌细胞系ＨＥＰ－２、人鼻鳞癌细胞系ＣＮＥ－２和人口腔鳞癌细胞系ＫＢ均表现出明显的杀伤活性，与对照组比较差异有显著性（Ｐ＜０．０５）。②ＬＡＫ细胞在移植瘤裸鼠体内同样具有很强的抑瘤作用。本实验结果提示临床上运用ＬＡＫ细胞治疗头颈部肿瘤可能是一种较新的有效方法。     

CD3A细胞体内,外抗喉鳞癌细胞株（Hep—2）的实验研究

为探索理理想的过继免疫治疗手段，对由健康人外周血分离、经ＣＤ３单克隆抗体与白细胞介素－２共同诱导激活的ＣＤ３Ａ细胞的体外扩增情况及其杀２务喉癌细胞Ｈｅｐ－２的活性水平进行了观察和研究，并与ＬＡＫ细胞作了比较。研究发现，ＣＤ３ＡＫ细胞除具有体外扩增能力强，存活时间长、ＩＬ－２依赖性等特点外，其体内、外抗喉癌作用亦十分显著。培养早期，ＣＤ３ＡＫ细胞的抗瘤活性与常规培养的ＬＡＫ细胞相似，延长培养时间至７     

喉癌患者肿瘤浸润淋巴细胞抗肿瘤活性的研究

采用双梯度不连续密度梯度离心的方法，由喉鳞状细胞癌组织中分离出肿瘤浸润性淋巴细胞（ｔｕｍｏｒｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｎｇｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ，ＴＩＬ），经重组人类白细胞介素－２（ｒｅｔｕｒｎｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－２，ｒＩＬ－２）激活，成为活化的ＴＩＬ细胞。采用￣５１Ｃｒ体外释放的方法，检查活化的ＴＩＬ细胞对自体肿瘤细胞、异体肿瘤细胞的杀伤特性；并观察了ＴＩＬ细胞在裸鼠体内对自体肿瘤细胞生长的抑制作用。结果发现活化的ＴＩＬ细胞对自体肿瘤细胞有较强的杀伤作用，但对异体肿瘤细胞的杀伤作用则较弱。实验还证明，在裸鼠体内，ＴＩＬ细胞能抑制自体肿瘤移植瘤系的生长。由新鲜喉鳞癌肿瘤组织中可成功地分离出ＴＩＬ细胞并可大量增殖，可望成为喉癌患者过继免疫治疗的有效来源。     

喉癌患者肿瘤浸润淋巴细胞抗肿瘤活性的研究

采用双梯度不连续密度梯度离心的方法，由喉鳞状细胞癌组织中分离出肿瘤浸润性淋巴细胞（ｔｕｍｏｒ ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｎｇ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ，ＴＩＬ），经重组人类白细胞介素－２（ｒｅｔｕｒｎ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－２，ｒＩＬ－２）激活，成为活化的ＴＩＬ细胞。采用＾５１Ｃｒ体外释放的方法，检查活化的ＴＩＬ细胞对自体肿瘤细胞、异体肿瘤细胞的杀伤特性；并观察了ＴＩＬ细胞在裸鼠体内对自体肿瘤细胞生长的抑     

RA和VD诱导喉癌患者LAK细胞TNF－α的表达

本文应用全反式维甲酸（ＲＡ）和１，２５－二羟维生素Ｄ３（ＶＤ）诱导培养喉癌患者ＬＡＫ细胞，采用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交技术和ＥＬＩＳＡ检测ＴＮＦ－α基因ｍＲＮＡ及其蛋白的表达。结果显示，ＶＤ或ＲＡ加ＶＤ诱导的ＬＡＫ细胞ＴＮＦ－αｍＲＮＡ及其蛋白的表达显著增高。提示ＶＤ或ＲＡ加ＶＤ能够促进ＬＡＫ细胞合成和释放ＴＮＦ－α，有可能因此增强了ＬＡＫ细胞的抗肿瘤作用。这为提高头颈部恶性肿瘤过继免疫治疗的疗效开避了一条新的途径。     

Nd-YAG激光汽化结合光动力学治疗对鼻咽癌患者SIL-2R、IL-2水平及NK活性的影响

应用双抗体夹心ＥＬＩＳＡ法、３Ｈ－ＴｄＲ掺入法和１２５Ｉ－ＵｄＲ释放法对２４例鼻咽癌（ＮＰＣ）患者ＹＡＧ激光汽化结合光动力学治疗前后外周血可溶性ＩＬ－２受体（ＳＩＬ－２Ｒ）、白细胞介素２（ＩＬ－２）水平和自然杀伤细胞（ＮＫ）活性分别进行测定。结果表明鼻咽癌患者在接受激光光动力学治疗后ＳＩＬ－２Ｒ水平呈明显下降（Ｐ＜０．０００５），而ＩＬ－２水平和ＮＫ活性显著上升（Ｐ＜０．０００５）。结果提示激光光动力学治疗对恢复鼻咽癌患者免疫功能起促进作用。     

RA和VD诱导喉癌患者LAK细胞TNF—α的表达

本文应用全反式维甲酸和１，２５－二羟维生素Ｄ３诱导培养喉癌患者ＬＡＫ细胞，采用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交技术和ＥＬＩＳＡ检测ＴＮＦ－α基因ｍＲＮＡ及其蛋白的表达，结果显示，ＶＤ或ＲＡ加ＶＤ诱导的ＬＡＫ细胞ＴＮＦ－αｍＲＮＡ及其蛋白的表达显著增高。     

正常清醒豚鼠的畸变产物耳声发射特性

目的 研究正常清醒豚鼠的畸变产物耳声发射（ＤＰＯＡＥ）的特性。方法 采用ＣＥＬＥＳＴＡ ５０３型耳声发射分析仪对２６只正常清醒豚鼠（３５耳）进行ＤＰ图及ＤＰ输入／输出曲线（ＤＰ－Ｉ／Ｏ）的测试，随机选择１１只正常清醒豚鼠（２０耳）进行ＤＰＯＡＥ的重复测试，用ＳＰＳＳ１０．０对数据进行统计分析。结果 在ＤＰ图中，当初始音强度Ｌ１／Ｌ２为 ７０／６５ ｄＢ ＳＰＬ时，正常清醒豚鼠的 ＤＰＯＡＥ幅值随测试频率ｆ０从０．７５－８ｋＨｚ的增加而逐渐升高（２７．９０±１．９６－5０．６５±０．７１）。在 ＤＰ－Ｉ／Ｏ中，当ｆ０分别为４、６、８ ｋＨｚ时，正常清醒豚鼠的ＤＰＯＡＥ幅值随Ｌ１／Ｌ２从７０／６５以５ｄＢ－挡降至１５／１０ ｄＢ ＳＰＬ而呈线性下降（Ｐ＜０．０１），在Ｌ１／Ｌ２为５５／５０或６０／５５ ｄＢ ＳＰＬ处出现饱和或低谷，同一Ｉ／Ｏ曲线上Ｌ１／Ｌ２分别从７０／６５及５５／５０ ｄＢ ＳＰＬ递减至阈值的Ｉ／Ｏ斜率（分别记为ＫＴ及ＫＬ）均接近于１，且ＫＬ大于ＫＴ（Ｐ＜０．０１）。重复测试的ＤＰＯＡＥ幅值差异小（＜ １ｄＢ ＳＰＬ）且无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。结论 正常清醒豚鼠ＤＰＯＡＥ测试充分表现了其捡出率高、反应幅值大     

喉癌引流淋巴结淋巴细胞对裸鼠移植人喉癌的治疗观察

为研究喉癌引流淋巴结淋巴细胞（ｌｙｍｐｈｎｏｄｅｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ，ＬＮＬ）在体内是否仍然具有抗肿瘤作用，分次向皮下接种了人喉鳞癌瘤系ＰＨＣ３的裸鼠体内转输活化的人喉鳞癌引流ＬＮＬ，观察到治疗组的肿瘤生长明显受到抑制。用间接免疫荧光法分析ＬＮＬ的表型发现：新鲜ＬＮＬ中主要是ＣＤ３＋的Ｔ细胞（６７．８％±１１．３％），其中主要是Ｔｈ／ｉ细胞，Ｔｓ／ｃ较少，ＣＤ４＋／ＣＤ８＋比率为３．３０±０．６５。体外ＩＬ－２短期培养细胞无明显增殖，ＣＤ３＋、ＣＤ４＋／ＣＤ８＋无明显改变，但ＨＬＡ－ＤＲ＋、ＣＤ２５＋细胞明显增加，提示活化细胞增加。以上结果证明，喉癌引流ＬＮＬ经ＩＬ－２短期培养后具有体内抗肿瘤能力，可试用于临床肿瘤免疫治疗。     

庆大霉素对豚鼠内淋巴囊和血管纹Na~＋－K~＋－ATP酶活性的影响

应用酶细胞化学技术和计算机图像分析，对豚鼠连续肌注庆大霉素（１００ｍｇ·ｋｇ－１／ｄ）２～１５ｄ后内淋巴囊上皮细胞和血管纹边缘细胞的Ｎａ＋－Ｋ＋－ＡＴＰ酶活性变化进行了定量观察。结果发现，与正常对照组相比，用药２ｄ后两类细胞的Ｎａ＋－Ｋ＋－ＡＴＰ酶活性反应产物没有明显变化，但连续用药５ｄ后二者的产物均明显减少，１０ｄ和１５ｄ仍呈继续轻微减少趋势。表明庆大霉素既可抑制血管纹边缘细胞Ｎａ＋－Ｋ＋－ＡＴＰ酶活性，降低其分泌功能；同时也能抑制内淋巴囊上皮细胞的该酶活性，减弱其液体重吸收功能。     

庆大霉素对豚鼠内淋巴囊和血管纹Na^＋—K^＋—ATP酶活性的影响

应用酶细胞化学技术和计算机图像分析，对豚鼠连续肌注庆大霉素２－１５ｄ后内淋巴囊上皮细胞和血管纹边缘细胞的Ｎａ＾＋－Ｋ＾＋－ＡＴＰ酶活性变化进行了定量观察。结果发现，与正常对照组相比，用药２ｄ后两类细胞的Ｎａ＾＋－Ｋ＾＋－ＡＴＰ酶活性反应产物没有明显变化，但连续用药５ｄ后二者的产物均明显减少，１０ｄ和１５ｄ仍呈继续轻微减少趋势。表明庆大霉素既可抑制血管纹边缘细胞Ｎａ＾＋－Ｋ＾＋－ＡＴＰ酶活性，降低其     

豚鼠壶腹嵴毛细胞内钙离子活动及ATP的影响

目的 探讨离体前庭毛细胞（ＶＨＣ）去极化时细胞内钙离子活动特征及内耳活性物质ＡＴＰ对离体ＶＨＣ内钙离子浓度的影响及其机制。方法 采用酶孵育后机械分离法分离豚鼠壶腹嵴ＶＨＣ,６μｍｏｌ／Ｌ钙荧光探针Ｆｌｕｏ－３染色,利用激光扫描共聚焦显微镜（ＬＳＣＭ）记录静息状态下、加入高Ｋ＾＋液及不同浓度ＡＴＰ时代表ＶＨＣ内［Ｃａ＾２＋ｉ的荧光强度相对值的变化。结果 细胞外有Ｃａ＾２＋存在时,７５ｎｍｏｌ／ＬＫ＾     

Nd—YAG激光汽化结合光动力学治疗对鼻咽癌患者SIL…

应用双抗体夹心ＥＬＩＳＡ法、＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入法和＾１２５Ｉ－ＵｄＲ释放法对２４例鼻咽癌患者ＹＡＧ激光汽化结合光动力学治疗前后外周血可溶性ＩＬ－２受体（ＳＩＬ－２Ｒ），白细胞介素２（ＩＬ－２）水平和自然杀伤细胞活性分别进行测定。     

嗅神经母细胞瘤的临床与免疫组化研究

嗅神经母细胞瘤系发生于鼻腔上部或筛板的罕见的恶性肿瘤，病理组织学诊断较困难。配方报告１１例，采用免疫组化进行了ＮＳＥ，ＮＦ－Ｓ－１００，ＧＦＡＰ，ＬＣＡ和Ｋａｒａｔｉｎ抗体联合标记结果显示，ＮＳＥ阳性率１１／１１，ＮＦ５／１１，Ｓ－１００３／１１；而ＧＡＦＰ，ＬＣＡ和Ｋａｒａｔｉｎ均为阴性；为５例光镜下病理确诊困难者明确诊断。     

癌症患者外周血T淋巴细胞丝裂原反应性和血浆IL－2、IL－6活性及IL－2受体的表达

应用生物测定法，检测２６例癌症患者外周血Ｔ淋巴细胞丝裂原反应性和血浆ＩＬ－２、ＩＬ－６活性及ＩＬ－２Ｒ的表达。结果表明：癌症各组Ｔ淋巴细胞丝裂原反应性和血浆ＩＬ－２、ＩＬ－６活性均显著低于对照组，而ＩＬ－２Ｒ表达却均显著高于对照组，具有统计学意义。癌症各组之间上述各项指标比较均无明显差异。提示，癌症患者外周血Ｔ细胞功能被严重抑制，ＩＬ－２，ＩＬ－６和ＩＬ－２Ｒ可能在该病的发病机理中起着一定作用。