雷公藤甲素对人肝癌Bel-7402细胞增殖及凋亡的影响

目的:研究雷公藤甲素影响人肝癌Bel-7402细胞增殖及凋亡的作用及机制。方法:采用细胞药理学实验方法,人肝癌细胞株Bel-7402与雷公藤甲素(10μg/mL、5μg/mL及0.25μg/mL)共培养,MTT法检测其对Bel-7402细胞增殖的影响,TUNEL技术检测其对Bel-7402细胞凋亡的影响,免疫组织化学(SABC)染色法检测Bax及Bcl-2蛋白表达。结果:作用48h后雷公藤甲素(10μg/mL、5μg/mL、0.25μg/mL)3个剂量对Bel-7402细胞增殖均有显著抑制作用,P<0.01,抑制作用随药物浓度增高而有加强趋势,最高抑制率可达38.67%,且呈量效关系,3个剂量组间有显著性差异,P<0.01。雷公藤甲素(10μg/mL、5μg/mL、0.25μg/mL)能有效诱导Bel-7402细胞凋亡,作用显著,P<0.01,且呈显著的量效关系。雷公藤甲素(10μg/mL、5μg/mL、0.25μg/mL)用药组Bax、Bcl-2表达与对照组比较,无显著性差异,P>0.05。结论:雷公藤甲素能抑制人肝癌Bel-7402细胞增殖和诱导其凋亡,其诱导Bel-7402细胞凋亡的作用机制可能不是通过Bax、Bcl-2途径。     

枸杞多糖对人肺癌A549细胞凋亡及Survivin表达的影响

目的 探讨枸杞多糖(LBP)诱导人肺癌A549细胞的凋亡的作用及其作用机制.方法 在体外培养的肺癌A549细胞株中加入不同浓度的LBP,应用流式细胞仪FITC/PI双染法检测细胞凋亡率,RT - PCR及Western blot法分析加药前后凋亡抑制基因Survivin mRNA和蛋白表达情况.结果 流式细胞仪FITC/PI双染法检测结果显示LBP可诱导人肺癌A549细胞凋亡,并且随着LBP浓度增加,凋亡率逐渐增加;LBP可使Survivin mRNA和蛋白的表达明显降低,并成一定的量效关系.结论 LBP可显著诱导人肺癌A549细胞凋亡,其作用机制可能与LBP抑制A549细胞凋亡抑制基因Survivin表达有关.     

绞股蓝总皂苷对人肝癌细胞Bel-7402增殖与凋亡的影响

目的:探讨绞股蓝总皂苷(gypenosides,Gyp)对人肝癌细胞Bel-7402增殖与凋亡的影响.方法:采用MTT法检测Gyp对体外培养的人肝癌细胞Bel-7402的增殖抑制作用;单细胞凝胶电泳法检测Gyp对人肝癌细胞Bel-7402 DNA损伤的影响;RT-PCR技术从分子水平上检测Gyp对人肝癌细胞Bel-7402的诱导凋亡作用机制.结果:100 ～400 μg· mL-1的Gyp对人肝癌细胞Bel-7402增殖生长有抑制作用,Gyp(182 μg·mL-1)作用4,8,12,16,24 h后,单细胞凝胶电泳观测到DNA损伤,12h时DNA损伤最大,达到(81.15±14.23)％,且有时间依赖性;Gyp组细胞caspase-8大量表达,对照组细胞无表达.结论:Gyp能抑制人肝癌细胞Bel-7402增殖且促进其凋亡,其作用机制与DNA损伤以及caspase-8的大量表达有关.     

低分子姬松茸多糖对Bel-7402细胞端粒酶-RNA mRNA表达的影响

目的探讨低分子姬松茸多糖(a low molecular weight polysaccharide isolated from Agaricus blazei,LMPAB)对人肝癌细胞Bel-7402端粒酶-RNA mRNA表达的影响。方法5,10和20μg.ml-1浓度的LMPAB处理体外培养的Bel-7402细胞48 h后,采用原位杂交法检测端粒酶-RNAmRNA表达。结果LMPAB下调体外培养Bel-7402端粒酶-RNAmR-NA的表达,呈剂量依赖性。与空白对照组比较,端粒酶-RNA mRNA的表达差异具有统计学意义(P<0.01)。结论LMPAB具有下调端粒酶-RNA mRNA表达的作用,进而降低端粒酶活性,抑制肿瘤细胞生长。     

四氢大麻酚THC抑制肝癌细胞Bel-7402增殖和诱导其凋亡的研究

目的探讨激活大麻受体对肝癌细胞增殖凋亡的作用,并对其机制进行初步研究。方法将细胞分成对照组,不同剂量大麻受体激动剂delta-tetrahydrocannabinol(THC)处理组。MTT法测定THC对Bel-7402细胞增殖的影响;DNA梯度电泳法和流式细胞技术检测分析各组细胞凋亡情况;Western blot法检测大麻受体CB1、CB2、Caspase-3和c-myc的表达水平,分光光度法检测细胞的活性。结果 Bel-7402细胞中大麻受体CB1、CB2较L02正常肝细胞明显增强。THC能抑制Bel-7402细胞增殖,诱导Bel-7402细胞凋亡,上述效应具有浓度依赖性。THC能抑制Bel-7402细胞中c-myc的表达,诱导Bel-7402细胞中的Caspase蛋白表达和活性。结论大麻受体激动剂THC能抑制肝癌细胞增殖,诱导肝癌细胞凋亡,并与caspase和c-myc蛋白表达相关。     

犀黄丸诱导人肝癌细胞凋亡及其机制的研究

观察犀黄丸含药血清诱导人肝癌Bel-7402细胞凋亡的作用,并对其机制进行初步的探讨,目的:研究犀黄丸含药血清诱导人肝癌Bel-7402细胞凋亡的作用,并对其机制进行初步探讨.方法:犀黄丸含药血清对肝癌细胞生长的影响,检测对肿瘤Bel-7402杀伤率.在用不同浓度犀黄丸含药血清作用Bel-7402细胞不同时间后,用TUNEL法检测凋亡,用SASB法检测细胞bcl-2、c-myc、p53蛋白表达.结果:犀黄丸含药血清能明显抑制Bel-7402细胞生长,其肿瘤细胞Bel-7402杀伤率最高达75%,与对照组比较有显著性差异(P＜0.01).TUNEL法显示,细胞凋亡率明显提高,与对照组比较有显著性差异;Bel-7402细胞的bcl-2、c-myc基因蛋白表达降低,而p53基因蛋白表达增强.     

麝黄消瘤汤诱导人肝癌细胞系(Bel-7402)凋亡的研究

目的:研究麝黄消瘤汤对人肝癌细胞系(Bel-7402)的诱导凋亡作用.方法:制备含药血清,孵化人肝癌细胞系(Bel-7402),用电子显微镜观察法、荧光显微镜观察法研究凋亡细胞超微结构,用流式细胞仪检测凋亡细胞DNA直方图及凋亡率.结果:电子显微镜及荧光显微镜下,麝黄消瘤汤含药血清诱导人肝癌细胞系(Bel-7402)出现凋亡征象,最大凋亡率为50.96%.流式细胞仪检测凋亡细胞DNA直方图上出现亚二倍体峰,细胞周期分布频率与对照组有显著区别(P≤0.05).结论:麝黄消瘤汤对人肝癌细胞系(Bel-7402)有显著的诱导凋亡作用.     

白花蛇舌草多糖对人宫颈癌Hela细胞和人肝癌Bel-7402细胞生长的影响

目的研究白花蛇舌草多糖对体外培养的人肝癌Bel-7402细胞和人宫颈癌Hela细胞生长的影响。方法常规法体外培养人肝癌Bel-7402细胞和人宫颈癌Hela细胞,设空白对照组、阳性对照组和供试药物组(大、中、小剂量),分别采用MTT法和流式细胞仪检测白花蛇舌草多糖对人宫颈癌Hela细胞和人肝癌Bel-7402细胞的生长抑制率和凋亡率;采用倒置显微镜观察细胞形态学变化。结果白花蛇舌草多糖可抑制人肝癌Bel-7402细胞和人宫颈癌Hela细胞的生长,并促进其凋亡,其作用效果与其浓度正相关,与空白对照组相比具均有显著性差异(P﹤0.01)。结论本研究结果提示,白花蛇舌草多糖具有较好的抗肿瘤活性。     

华蟾素对人肝癌细胞Bel-7402细胞增殖及周期的影响

目的:观察华蟾素注射液对人肝癌Bel-7402细胞增殖及周期的影响.方法:将不同浓度的华蟾素注射液作用于Bel-7402细胞,应用噻唑蓝还原法(MTT比色法)检测华蟾素注射液对Bel-7402细胞增殖的影响;应用流式细胞术(FCM)检测Bel-7402细胞周期分布.结果:华蟾素注射液可以抑制Bel-7402细胞增殖,其抑制作用与作用时间和剂量呈正相关,并可使细胞阻滞于G2/M期.结论:华蟾素注射液能够抑制人肝癌细胞Bel-7402的增殖,并可使细胞阻滞于G2/M期,诱导细胞凋亡.     

枸杞多糖诱导人食管癌细胞Eca-109凋亡的实验研究

目的 研究枸杞多糖诱导人食管癌细胞Eca-109凋亡作用及其作用机制.方法 利用MTT染色在普通光镜下观察细胞凋亡形态学变化并观测枸杞多糖对肿瘤细胞的抑制率;通过流式细胞仪分析人食管癌细胞Eca-109凋亡率、细胞周期变化; DNA 琼脂糖凝胶电泳方法检测肿瘤细胞凋亡的DNA水平变化;激光扫描共聚焦显微镜(LSCM) 检测细胞内钙离子浓度变化.结果 经枸杞多糖作用后的人食管癌细胞Eca-109 出现核固缩、凋亡小体、新月状浓染区等细胞凋亡形态学改变,各剂量LBP 组的肿瘤细胞均表现生长抑制,且具有剂量依赖性, 1 000μg/ml LBP处理组的抑制率达96.02%.DNA 琼脂糖凝胶电泳呈现典型的梯形电泳条带.药物处理组的肿瘤细胞更多地被阻止于G2/M期,各剂量组均出现明显的凋亡变化,最大凋亡率可达21.3%.各剂量药物处理组的肿瘤细胞内的Ca2+浓度明显高于对照组( P<0.01).结论 枸杞多糖可明显抑制人食管癌细胞Eca-109的生长增殖,诱导细胞凋亡,并能改变该肿瘤细胞周期分布, 阻止细胞周期于G2/M期.     

半夏蛋白对人肝癌细胞Bel-7402的诱导凋亡作用

目的观察并比较半夏蛋白对体外培养的人肝癌细胞Bel-7402的生长抑制作用。方法应用流式细胞技术,检测半夏蛋白对人肝癌细胞Bel-7402的诱导凋亡作用,并观察了其诱导凋亡作用的量-效关系。结果60%硫酸铵沉淀蛋白没有明显诱导Bel-7402细胞凋亡的作用,而30%硫酸铵沉淀蛋白有诱导Bel-7402细胞凋亡的作用。30%沉淀进一步分离结果显示,只有0.1 mol/L NaCl洗脱峰有一定诱导Bel-7402细胞凋亡的作用。结论半夏蛋白有一定的诱导Bel-7402细胞凋亡作用,其主要成分可能存在于总有机酸部位。     

复合中药多糖对人肝癌Bel-7402细胞株抗癌作用研究

目的：探讨复方中药多糖对人肝癌Bel-7402细胞株的影响。方法：采用T淋巴细胞转化试验观察复合多糖对人肝癌小鼠细胞，屯疫功能的影响；采用MTT法观察复合多糖对Bel-7402株的细胞增殖抑制；采用流式细胞仪观察复合多糖对Bel-7402株细胞凋亡的影响。结果：复合多糖为1．5、0．75、0．25g，kg剂量时可提高Bel-7402小鼠的淋巴细胞转化功能；复合多糖在40、20mg／L浓度时对Bel-7402细胞株增殖具有抑制作用；复合多糖浓度在40、200、10mg／L时作用24、48、72h使Bel-7402株细胞凋亡率增加。结论：复合多糖可提高Bel-7402小鼠的淋巴细胞转化功能；对Bel-7402细胞株增殖具有抑制作用；使Bel-7402株细胞凋亡率增加，并呈现时间、浓度依赖性。     

人参多糖注射液对肝细胞癌的增殖抑制作用及机制探讨

目的:观察人参多糖注射液对人肝癌细胞BEL-7402和HpeG2增殖抑制作用,并探讨其机制。方法:将不同浓度的人参多糖注射液与人肝癌细胞BEL-7402和HpeG2作用,采用cell counting kit-8(CCK8)检测细胞的增殖抑制,通过倒置显微镜观察用药前后细胞形态、数量变化,透射电镜观察细胞坏死、凋亡等形态学变化,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肿瘤坏死因子受体1(TNFR1)蛋白表达情况。结果:人参多糖注射液对人肝癌细胞BEL-7402和HpeG2的增殖有明显抑制作用(P0.05),并且与浓度和时间呈正相关。60,80,100 g·L~(-1)人参多糖注射液作用于人肝癌细胞BEL-7402和HpeG2 24,48,72h后,可显著抑制其增殖(P0.01),40 g·L~(-1)人参多糖注射液作用于人肝癌细胞BEL-7402和HpeG2 24,48,72 h后可明显抑制其增殖(P0.05)。人参多糖注射液作用人肝癌细胞BEL-7402和HpeG2 48 h后,细胞出现细胞核边集、凋亡小体等凋亡形态变化,72 h后部分细胞出现空泡样变等形态学变化。与空白组比较,40,60,80 g·L-1人参多糖注射液组作用人肝癌细胞BEL-7402和HpeG2后,TNFR1蛋白相对表达量明显升高(P0.05,P0.01)。结论:人参多糖注射液对人肝癌细胞BEL-7402和HpeG2的增殖有明显的抑制作用;诱导细胞凋亡可能是抑制作用的机制。     

麝黄消瘤汤诱导人肝癌细胞系（Bel-7402）凋亡的研究

目的：研究麝黄消瘤汤对人肝癌细胞系(Bel-7402)的诱导凋亡作用。方法：制备含药血清，孵化人肝癌细胞系(Bel-7402)，用电子显微镜观察法、荧光显微镜观察法研究凋亡细胞超微结构．用流式细胞仪检测凋亡细胞DNA直方图及凋亡率。结果：电子显微镜及荧光显微镜下，麝黄消瘤汤含药血清诱导人肝癌细胞系(Bel-7402)出现凋亡征象，最大凋亡率为50．96％。流式细胞仪检测凋亡细胞DNA直方图上出现亚二倍体峰，细胞周期分布频率与对照组有显著区别(P≤0．05)。结论：麝黄消瘤汤对人肝癌细胞系(Bel-7402)有显著的诱导凋亡作用。     

枸杞多糖对人肝癌细胞HepG2生长的影响及其分子机制

目的探讨枸杞多糖(Lycium barbarumpolysaccharides,LBP)对人肝癌细胞HepG2生长的影响及可能机制。方法人肝癌HepG2细胞用100~1 000 mg/L LBP处理1~5 d,分别用MTT方法、流式细胞术检测细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡。用Western blotting分析周期蛋白(cyclin)和周期蛋白依赖性激酶(cyclin-dependentkinase,CDK)表达的变化。结果 LBP以质量浓度依赖方式抑制肝癌细胞的生长,阻滞细胞在G0/G1期,并诱导细胞凋亡;其分子机制为引起cyclin Dc、yclin E和CDK2蛋白表达下降。结论 LBP抑制人肝癌细胞HepG2增殖的机制包括阻滞细胞周期和诱导细胞凋亡。     

半枝莲提取物诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡及其对凋亡相关蛋白表达的影响

目的探讨半枝莲提取物(Scutellaria barbata D.Don extract,SBE)对人肝癌SMMC-7721细胞凋亡及凋亡相关蛋白Bcl-2,Survivin和Caspase-3表达的影响。方法体外培养SMMC-7721细胞,以2.5,5和10 mg.L-1SBE处理48 h,并以2.5 mg.L-1顺铂(DDP)作为阳性对照。用MTT法检测细胞抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,二步法免疫组化检测Bcl-2,Survivin和Caspase-3蛋白表达。结果与正常对照组相比,SBE各浓度组细胞抑制率显著升高(P(0.001),细胞凋亡率明显上升(P(0.01),Caspase-3蛋白表达显著上升(P<0.01或P<0.05),Bcl-2和Survivin蛋白表达明显下降(P<0.01或P<0.05)。结论SBE具有诱导肝癌SMMC-7721细胞凋亡的作用,其分子机制可能与上调Caspase-3蛋白表达以及下调Bcl-2和Survivin蛋白表达有关。     

姬松茸多糖抗肿瘤作用研究

目的:研究姬松茸多糖(ABP)对肝癌细胞生长的抑制作用。方法:采用MTT法检测ABP体外与肝癌细胞Bel-7402作用48小时的直接细胞毒作用、ABP与小鼠脾细胞共培养上清(ABP-SL-CM)体外与Bel-7402细胞作用48小时的抑制作用;用流式细胞仪分析诱导肿瘤细胞凋亡情况;腹腔注射给药观察对移植性H22小鼠腹水型肝癌模型的抑瘤率。结果:ABP体外无直接细胞毒作用;不同浓度的ABP-SL-CM体外对Bel-7402细胞生长均有抑制作用,其中低剂量组(ABP-SL-CM-L)作用最显著,抑制率为39.65%;诱导Bel-7402细胞凋亡率为21.68%,DNA直方图上可见到亚二倍体峰;体内实验对肿瘤的生长的抑瘤率为45.83%。结论:姬松茸多糖对肝癌细胞生长有一定的抑制作用,其作用机制不是直接的细胞毒作用,而是通过增强小鼠的细胞免疫功能诱导肿瘤细胞凋亡实现的。     

四藤方对Bel-7402细胞增殖和凋亡作用研究

目的:观察清热解毒中药-四藤方对肝癌细胞Bel-7402增殖和凋亡的影响。方法:不同浓度四藤方处理人肝癌细胞Bel-7402、人肝细胞HL-7702,WST-8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Hoechst 33258染色检测细胞凋亡形态变化,Western Blot法检测半胱天冬酶-3(caspase-3)活化。结果:与对照组比较,四藤方对人肝细胞HL-7702增殖无明显影响;100～400μg.mL-1四藤方作用24 h可显著抑制肝癌Bel-7402细胞增殖,促使细胞Bel-7402凋亡,呈现细胞凋亡形态,并可活化Bel-7402细胞caspase-3。结论:四藤方可以抑制Bel-7402细胞增殖,促Bel-7402细胞凋亡,并可能与活化caspase-3相关。     

蒺藜皂苷对人肝癌细胞BEL7402生长抑制和诱导凋亡作用的研究

目的 :探讨蒺藜皂苷 (STT)对体外培养的人肝癌细胞BEL-7402的增殖抑制作用及诱导凋亡作用。方法 :应用MTT与SRB法检测蒺藜皂苷对人肝癌细胞BEL-7402的抑制作用 ,采用形态学观察以及流式细胞术 (FCM)检测了STT诱导人肝癌细胞BEL-7402凋亡的效应 ,采用流式细胞术检测BEL-7402细胞Bcl-2蛋白表达。结果 :①STT能够剂量依赖地抑制人肝癌细胞BEL-7402的增殖 ;②细胞显现典型的凋亡形态学改变 ,FCM出现凋亡峰 ;③STT能降低BEL-7402细胞的Bcl-2蛋白表达。结论 :STT在体外能抑制BEL-7402细胞的增殖并能诱导细胞凋亡 ,其诱导凋亡作用的途径之一是下调Bcl-2蛋白表达。     

白藜芦醇致敏TRAIL诱导人肝癌细胞凋亡及其相关机制的研究

目的研究白藜芦醇对TRAIL诱导肝癌细胞SMMC-7721凋亡的影响及其机制。方法培养人肝癌细胞株SMMC-7721,分为对照组、TRAIL干预组、Res+TRAIL干预组,进行DNA末端原位标记(TUNEL)染色法作凋亡分析;Western Blot检测白藜芦醇对SMMC-7721细胞Survivn表达的影响。结果对照组SMMC-7721细胞的凋亡指数为(1.78±0.49)%,TRAIL干预组凋亡指数为(9.86±0.53)%,Res+TRAIL干预组中25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L浓度Ros凋亡指数分别为(11.30±0.80)%,(20.89±0.69)%和(27.78±1.88)%。除Res+TRAIL干预组(25μmol/L)与TRAIL干预组比较无显著性差异(P0.05),其余各组之间比较差异均有统计学意义(P均0.05)。Western Blot测定结果显示:25μmol/L Ros处理组Survivin/β-actin的值与对照组相比无统计学差异(P0.05);50μmol/L和100μmol/L Res处理组Survivin/β-actin的值较对照组显著降低(P0.01);100μmol/L Res处理组Survivin/β-actin的值较50μmol/L显著降低(P0.01)。结论 TRAIL对SMMC-7721细胞有凋亡诱导作用;Res对TRAIL诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡有致敏作用,并且这种作用呈剂量依赖关系;其分子机制可能与下调凋亡抑制因子Survivin的表达有关。