慢性应激大鼠中枢5-羟色胺含量及色氨酸羟化酶-2的表达变化

目的 探讨慢性不可预知轻度刺激（CUMS）大鼠模型中枢5-羟色胺（5-HT）含量和色氨酸羟化酶-2（TPH-2）的表达变化以及抗抑郁药的影响.方法 24只大鼠被随机分成3组,每组8只,A组为对照组,不给予刺激;B组为刺激不给药组,即CUMS应激鼠;C组为刺激给药组,即CUMS应激＋西酞普兰治疗组.实验为期6周,每周为大鼠称重,每3周测大鼠的糖水偏爱性,造模前后通过旷场试验评价大鼠行为,6周后对大鼠进行处死.处死后脑组织取样测定各脑区5-HT浓度及TPH-2 mRNA的表达水平.结果 经过6周干预,与A组比较,B组和C组体重明显降低（P＜0.05）;与A组及C组比较,B组糖水偏爱度显著降低（P＜0.05）,同时行为增多;B组5-HT浓度在海马中高于A组和C组,差异有统计学意义（P＜0.05）;在纹状体中,B组和C组5-HT浓度低于A组,差异有统计学意义（P＜0.05）;B组大鼠TPH2 mRNA在中缝核中表达低于A组,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 慢性应激可能引起中枢海马5-HT浓度增高及中缝核TPH-2表达降低,抗抑郁药可能引起中枢海马5-HT浓度降低,但未能影响中枢TPH-2的表达.     

Wnt3a调控大鼠骨髓间充质干细胞向胆碱能神经元分化的实验研究

目的 探讨经典Wnt/β-catenin通路对大鼠MSCs在体外分化为神经元和胆碱能神经元的调节作用。方法 取SD大鼠股骨和胫骨的骨髓,利用差速贴壁法分离、扩增及纯化MSCs,绘制生长曲线; 应用免疫荧光和Western-Blot的方法检测Wnt3a处理后β-catenin蛋白的分布变化; 取第4代MSCs分为3组; A组为空白对照组,用空白DMEM培养基培养细胞; B组为诱导分化对照组,用含100 ng/mL碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast grown factor, bFGF)、5 umol/L维甲酸(retinoic acid, RA)的DMEM诱导培养基培养细胞; C组为Wnt3a诱导分化组,在上述诱导培养基中加入50 ng/mL Wnt3a培养细胞; 用形态学观察和Western-Blot的方法比较各组对MSCs向神经元及胆碱能神经元分化的影响; 应用形态学观察和Western-Blot的方法比较各组对MSCs向神经元及胆碱能神经元分化的影响。结果 利用差速贴壁法细胞传至P3代时形态趋于一致,呈均匀分布生长。P3代细胞的生长曲线显示,接种后的第1、2 d细胞处于潜伏期; 第3、4 d细胞进入对数生长期; 第5 d进入平台期。P4代细胞高度表达CD29和CD44(阳性率分别为99.9%和73.2%)。Wnt3a处理组细胞的β-catenin在细胞核的分布较对照组细胞显著增多(P<0.01)。诱导分化细胞组中A组细胞可检测到少量神经元的标记物,但未检测到胆碱能神经元的标志物,B组和C组细胞均可检测到神经元和胆碱能神经元的标志物,B组和C组分化为神经元的比例较A组显著增高(P<0.01); C组分化为胆碱能神经元的比例较B组显著增高(P<0.01)。结论 Wnt3a能够促进MSCs内的β-catenin的核转移激活经典Wnt信号通路,促进体外培养的MSCs向胆碱能神经元分化。     

丁苯酞对慢性脑缺血大鼠海马iNOS及MG表达的影响

目的观察丁苯酞对慢性脑缺血大鼠海马区诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)、小胶质细胞(microglia,MG)表达的影响,探讨丁苯酞脑保护作用机制。方法 48只雄性SD大鼠随机分为4组:正常大鼠组为A组,假模型组为B组,模型组为C组,丁苯酞干预组为D组。行双侧大鼠颈总动脉永久结扎的方法制作大鼠慢性脑缺血模型。丁苯酞干预组在慢性脑缺血模型成功后给予丁苯酞软胶囊0.2g·kg~(-1)治疗12周,采用Y迷宫测定各组大鼠学习记忆能力,免疫组化染色测定iNOS及OX42(小胶质细胞的标志)表达,特异性尼氏染色方法测定海马CA1区神经元。结果 A、B组大鼠学习记忆能力正常,海马区iNOS、OX42少量表达,神经元数目正常。C、D组大鼠学习记忆能力下降,海马区iNOS、OX42表达增多,神经元数目减少。与C组相比,D组大鼠学习记忆能力明显增加(P0.01),海马区iNOS、OX42表达减少(P0.01),神经元数目增加(P0.01)。结论丁苯酞可减少慢性脑缺血大鼠海马区iNOS、OX42表达,减少MG的过度激活,减少海马区神经元坏死,提高大鼠的学习记忆能力,具有脑保护作用。     

艾司西酞普兰对抑郁大鼠海马BDNF表达及细胞凋亡的影响

目的观察艾司西酞普兰对抑郁大鼠海马BDNF表达及细胞凋亡的影响,探讨其作用机制。方法40只雄性SD大鼠随机分为对照（A）、对照＋药（B）、抑郁模型（C）和抑郁模型＋药（D）组共4组,采用慢性不可预见性的温和刺激结合孤养法建立抑郁大鼠模型,TUNEL法检测海马细胞凋亡情况,实时荧光定量PCR方法检测海马BDNF、Bax、Bcl2、Caspase3mRNA的表达。结果（1）C组海马细胞凋亡数显著增加,与A组比较差异有统计学意义（P〈0．01）,而B组细胞凋亡数与A组差异无统计学意义（P〉0．05）;D组细胞凋亡数明显减少,与c组比较差异有统计学意义（P〈0．01）。（2）C组海马BDNF、Bel—2mRNA表达降低,Bax、Caspase3mRNA表达升高,与A组比较差异均有统计学意义（P〈0．01）;D组BDNF、Bcl2mRNA表达增加,Bax、Caspase3mRNA表达降低,与C组比较差异均有统计学意义（P〈0．01）。结论艾司西酞普兰可改善抑郁大鼠的抑郁行为及海马细胞凋亡,其机制可能是通过增加海马BDNFmRNA的表达,上调Bcl一2及下调Bax、Caspase3mRNA的表达,从而预防海马细胞凋亡而发挥脑保护的作用。     

度洛西汀和氟西汀对抑郁模型大鼠 S100B、ERK1/2－NF－κB 表达的影响

目的：比较度洛西汀和氟西汀对抑郁模型大鼠海马 S100B、ERK1/2－NF－κB 表达的影响.方法慢性轻度不可预知应激刺激法制备54只抑郁症模型大鼠,随机分为非干预组(B 组)、度洛西汀干预组(C 组)、氟西汀干预组(D 组),各18只.另外选取18只大鼠为对照组(A 组).各组灌胃[A组和 B 组(生理盐水),C 组(度洛西汀)、D 组(氟西汀)]28 d 后,应用糖水偏爱试验和旷场试验检测大鼠行为学改变.Western blot 检测各组海马 S100B、ERK1/2和 NF－κB 的表达.结果灌胃28 d 后 B 组糖水消耗率(43±15)％显著较 A、C、D 组低[(63±11)％,(67±6)％,(61±10)％](P ＜0．05). C 和 D组大鼠干预28 d 后旷场试验水平评分、垂直运动评分与潜伏期分别为(70．66±11．53)分和(67．54±10.08)分,(20．32±8．85)分和(21．34±7．46)分,(1．0±0．4)s 和(1．1±0．3)s,与 A 组(71．19±12．08)分,(20．42±8．76)分,(1．01±0．3)s 比较,差异均无统计学意义(P ＞0．05);C、D 组与 B 组比较,水平运动评分和垂直运动评分升高,潜伏期降低.A、C、D 组大鼠海马 S100B、ERK1/2、NF－κB 表达显著高于 B组(P ＜0．05),C 和 D 组差异无统计学意义.结论度洛西汀和氟西汀均能够改善抑郁模型大鼠的行为能力及上调海马 S100B、p－ERK1/2－NFκB 表达水平,但度洛西汀和氟西汀对相关因子表达的影响无差异.     

糖基化终产物对大鼠海马组织小胶质细胞活化及COX-2、p-NF-κB表达的影响

目的 研究糖基化终产物(AGEs-BSA)对大鼠海马小胶质细胞活化及COX-2、p-NF-κB表达的影响.方法 30只Wistar大鼠随机分为正常对照组(NC组)、BSA-C组、AGEs-BSA组、RAGE-Ab组及RAGE-Ab-C组.通过向大鼠海马区注射AGEs-BSA,建立AD大鼠局部炎症病理模型.Morris水迷宫检测大鼠认知功能,免疫荧光观察海马组织小胶质细胞标记物(CD11b)、星形胶质细胞标记物胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达的变化;蛋白质免疫印迹法检测各组海马组织COX-2、p-NF-κB的表达.结果 与NC组比较,AGEs-BSA组大鼠认知功能下降,在海马区可见神经胶质细胞增生,以小胶质细胞为主;COX-2、p-NF-κB的表达明显增高(P<0.001);RAGE-Ab组海马区小胶质细胞增生减弱,COX-2、p-NF-κB表达显著下调(P<0.01),但仍高于NC组;NC组、BSA-C组、RAGE-Ab-C组COX-2、p-NF-κB表达差异不显著(P>0.05).结论 大鼠海马区注射AGEs-BSA可诱导小胶质细胞增殖、活化,促进COX-2、p-NF-κB的蛋白表达增强.     

丁基苯酞对慢性脑缺血老龄大鼠海马中NMDA受体亚单位NR2B及突触素表达的影响

目的 观察丁基苯酞对慢性脑缺血老龄大鼠海马中N-甲基-D-天门冬氨酸受体2B亚单位(NR2B)及突触素表达的影响.方法 采用免疫组化方法观察丁基苯酞对慢性脑缺血老龄大鼠海马中NR2B及突触素表达的影响.结果 B组与A组比较,海马CA1区、CA3区及齿状回NR2B及突触素的表达明显减少(P＜0.05),C、D组大鼠海马各区NR2B及突触素的表达与单纯缺血组比较均不同程度增加(P＜0.05);D组与C组比较,NR2B及突触素的表达增加更明显(P＜0.05).结论 慢性缺血3个月后,大鼠海马CA1区、CA3区及齿状回中NR2B 及突触素的表达明显减少,而丁基苯酞能改善这种缺血改变,增加NR2B 及突触素的表达.     

miR34a在戊四氮致癫痫大鼠中通过下调Bcl-2导致神经元凋亡

目的探讨miR34a对戊四氮致癫痫大鼠的影响及其可能的机制。方法将24只雄性健康的Wister大鼠随机分为正常对照组和癫痫组(PTZ 35 mg/kg),采用腹腔注射方式,连续注射28 d最后一次施用药物24 h后处死实验大鼠、取材。通过Racine评分标准对癫痫大鼠模型的建立进行评价;应用生物信息学方法分析癫痫大鼠海马中差异表达的、靶向Bcl-2的miRNA;应用qRT-PCR方法验证检测大鼠海马中miRNA34a的表达情况;应用Western blot检测大鼠海马中bcl-2的表达情况;应用Hoechst检测大鼠海马神经元的凋亡情况。结果癫痫组大鼠的Racine评分明显高于正常对照组(P0.01);通过生物信息学方法发现miRNA34a是差异高表达前十的miRNA中唯一可以靶向Bcl-2的miRNA;癫痫组大鼠海马组织中miR34a的表达量明显高于正常对照组(P0.01)、Bcl-2的表达量明显低于正常对照组(P0.01)、海马神经元凋亡情况明显高于正常对照组(P0.01)。结论miRNA34a对戊四氮致癫痫大鼠海马可能具有损伤神经元的作用,并且其作用机制可能是通过下调Bcl-2导致海马神经元凋亡进而对癫痫大鼠产生影响。     

HIF-1α对大鼠创伤后认知功能障碍的影响研究

目的提高低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)的水平对大鼠颅脑创伤(Traumatic Brain Injury,TBI)后认知功能障碍的影响及其机制初步探索。方法将大鼠随机分为3组:sham组、TBI组、脯氨酸羟化酶(Prolyl Hydroxylase,PHD)抑制剂组,TBI组和PHD抑制剂组均采用皮质撞击致伤法构建模型; TBI完成3 d后每组大鼠随机取10只,取海马组织,采用Western blot法检测HIF-1α及其下游蛋白表达水平,荧光原位末端标记法(Td T-mediated d UTP nick end labeling,TUNEL)检测神经细胞凋亡; 1 m后采用Morris水迷宫试验检测大鼠记忆功能,取海马组织,检测认知功能障碍相关蛋白。结果大鼠TBI术后3 d TBI组与sham组相比HIF-1α、促血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)、促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)表达水平升高(P 0. 01),差异具有统计学意义,PHD抑制剂组与TBI组相比HIF-1α、VEGF、EPO表达水平升高(P 0. 01),差异具有统计学意义;大鼠TBI术后1m TBI组与sham组相比平均逃避潜伏期延长(P 0. 01),目标象限停留时间与穿越平台次数减少(P 0. 01),海马组织中淀粉样蛋白β1-42(β-amyloid peptide1-42,Aβ1-42)、tau含量明显升高(P 0. 01),差异具有统计学意义; PHD抑制剂组与TBI组相比平均逃避潜伏期缩短(P 0. 01),目标象限停留时间与穿越平台次数增加(P 0. 01),海马组织中Aβ1-42、tau含量明显减少(P 0. 01),差异具有统计学意义。结论提高HIF-1α的表达水平可明显改善大鼠神经功能预后,提高大鼠记忆水平,减少TBI大鼠的海马组织中Aβ1-42和tau的含量,减少大鼠TBI后认知功能障碍的发生,为TBI后认知功能障碍的治疗及预防提供一个新的靶点。     

Toll样受体4/核因子-κB信号通路在癫癎持续状态大鼠海马损伤中的作用

目的 通过观察癫疴持续状态(status epilepticus,SE)后大鼠海马Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)及核因子-κB(nuclear factor KB,NF-κB)的表达;并观察应用NF-κB抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)后,对TLR4/NF-κB信号通路及海马损伤的影响,探讨TLR4/NF-κB信号通路在SE后大鼠海马损伤的发生发展过程中的作用.方法 106只SD大鼠随机分为对照组(A组)、SE组(B组)和PDTC干预组(C组),其中B组再随机分为B1～B4组(分别于惊厥后4、24、48和72 h处死),B组和C组采用氯化锂.匹罗卡品法制作大鼠SE模型,C组在大鼠惊厥终止后30 min,给予100 mg/kg PDTC腹腔注射,每天1次,连用3 d.光镜下观察大鼠海马病理学改变;免疫组织化学法检测海马TLR4和NF-κB/p65蛋白的表达变化;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测海马TLR4 mRNA表达的动态改变.结果 长程惊厥发作后,脑内神经元损伤存在动态变化,在72 h内随着观察时间的延长,神经元损伤逐渐加重,C组改变较B4组明显减轻.B组各时间点TLR4蛋白的表达(B1组0.1287±0.0260,B2组0.1296±0.0285,B3组0.1330 4-0.0329,B4组0.1604 4-0.0457)均明显高于A组(0.0964±0.0324,t=0.0641～0.3236,P<0.05),并随时间延长明显增高;C组TLR4蛋白表达(0.1271±0.0330)较B4组显著降低(t=-0.0334,P<0.01).B组可见NF-κB/p65蛋白在胞核内有不同程度表达,与A组比较差异有统计学意义(P<0.05);C组与B4组比较,NF-κB/p65蛋白表达水平明显降低(P<0.01).B组各时间点TLR4 mRNA的表达均较A组(0.268±0.072)高(P<0.05),且随时间延长逐步升高,惊厥后72 h达到高峰(1.242±0.100);C组海马TLR4 mRNA的表达(0.984±0.263)明显低于B4组(t=-0.2578,P<0.05).各组TLR4的表达情况与NF-κB/p65一致.结论 ,TLR4及NF-κB/p65在SE后的大鼠海马中表达升高,NF-κB抑制剂PDTC可以下调TLR4的表达,并减轻惊厥后海马病理损伤程度,提示TLR4/NF-κB信号通路在惊厥后海马损伤的发生发展过程中起促进作用.     

氯胺酮复合异丙酚麻醉对抑郁大鼠电休克后海马谷氨酸受体亚基1和亚基2的影响

目的评价小剂量氯胺酮复合异丙酚麻醉对抑郁大鼠电休克(electroconvulsive therapy,ECT)后海马谷氨酸受体亚基1(glutamate receptor subunit 1,Glu R1)及亚基2(glutamate receptor subunit 2,Glu R2)的影响。方法健康成年雄性SD大鼠32只,采用孤养与慢性轻度不可预见性应激(chronic unpredictable mild stress,CUMS)建立抑郁模型,建模成功后随机分为抑郁组(A组)、ECT组(B组)、ECT+异丙酚组(C组)和ECT+异丙酚+氯胺酮组(D组)4组,每组8只;另取8只正常大鼠作为对照组。对照组不做任何处理;A组腹腔注射生理盐水8 m L/kg后给予伪ECT处理;B、C、D组分别腹腔注射生理盐水8 m L/kg、异丙酚80 mg/kg、异丙酚80 mg/kg+氯胺酮10 mg/kg后行ECT处理,上述处理连续7 d。分别采用糖水偏好实验和Morris水迷宫实验评价大鼠抑郁状态和学习记忆功能,Western-blot及RT-PCR检测大鼠海马Glu R1和Glu R2及其m RNA表达。结果 ECT处理后,B、C、D组糖水偏好百分比变化均较A组和对照组明显,其中D组升高最为明显(均P0.05);B组逃避潜伏期延长且变化值与其他组均具有统计学差异,而D组逃避潜伏期缩短最为明显,其次为A组(均P0.05);B组空间探索时间缩短且变化值均大于其他组,D组空间探索时间延长最为明显(均P0.05)。ECT处理后,B、C、D组Glu R1表达较A组高,其中D组最高(均P0.05);Glu R1m RNA表达在组间无统计学差异B、C组Glu R2及其m RNA表达较其余组低,其中B组最低(均P0.05),A、D组和对照组间Glu R2及其m RNA差异无统计学意义(P0.05)。结论小剂量氯胺酮复合异丙酚麻醉在协同ECT抗抑郁效果的同时,能够更大程度地改善ECT后学习记忆功能,其机制可能与上调海马Glu R1和Glu R2表达相关。     

黄芪多糖对颅脑损伤大鼠学习记忆能力及海马BDNF表达的影响

目的探讨黄芪多糖(APS)对颅脑损伤大鼠学习记忆能力及海马组织脑源性神经生长因子(BDNF)表达的影响。方法将30只成年雄性SD大鼠按随机数字表随机分为3组:假手术组、TBI组、APS组,每组10只。TBI组和APS组建立颅脑损伤大鼠模型,假手术组不建模型。假手术组、TBI组分别给予生理盐水灌胃,APS组给予APS悬液(100 mg/kg)灌胃;每天1次,持续8周。采用Morris水迷宫实验测试大鼠学习记忆能力。水迷宫实验结束后,RT-PCR与Western blot测定海马组织BDNF mRNA和蛋白表达水平。结果与假手术组比较,TBI组大鼠逃避潜伏期明显延长(P0.05),平台象限路径百分比和平台象限时间明显缩短(P0.05),海马组织BDNF mRNA和蛋白表达水平明显降低(P0.05);与TBI组比较,APS组大鼠逃避潜伏期明显缩短(P0.05)、平台象限路径百分比和平台象限时间明显延长(P0.05),海马组织BDNF mRNA和蛋白表达水平明显升高(P0.05)。结论APS能够减轻颅脑损伤所致的大鼠学习记忆能力减退,可能与提高BDNF表达水平有关。     

亚低温治疗对颅脑创伤后β-淀粉样蛋白表达影响的实验研究

目的 探讨亚低温治疗对大鼠颅脑创伤( TBI)后β-淀粉样蛋白(Aβ)基因和蛋白表达的影响.方法 将60只SD大鼠分为假手术组(n=20)、常温脑创伤组(37C,n=20)和亚低温脑创伤组(32℃,n =20).建立SD大鼠液压打击致颅脑创伤模型.亚低温脑创伤组在液压打击伤后立即接受持续6h的亚低温治疗.伤后24h处死大鼠并取海马组织行HE染色,用RT-PCR、蛋白免疫印迹( Western blot)和免疫组化法检测Aβ基因转录和蛋白的表达.结果 与假手术组比较,颅脑创伤后24hAβ免疫阳性细胞数明显增加(P＜0.01),其mRNA和蛋白表达分别升高1.58和1.76倍.与常温脑创伤组比较,亚低温组Aβ免疫阳性细胞数明显减少(P＜0.01),其mRNA和蛋白表达分别下降68％和64％.结论 亚低温治疗可降低颅脑创伤后Aβ基因转录和蛋白的上调表达,通过抑制Aβ的神经毒性来发挥神经保护作用,而亚低温与Aβ的确切关系还有待进一步研究.     

无抽搐电休克治疗大鼠抑郁症的谷氨酸能机制研究

目的 观察抑郁大鼠电休克治疗后海马内谷氨酸含量以及N-甲基-D天门冬氨酸(NMDA)受体的表达,探讨电休克治疗抑郁症的谷氨酸能神经机制.方法 36只SD大鼠随机分为无抽搐电休克组(电休克组)、抑郁模型对照组(抑郁组)、对照组,每组12只.前两组采用孤养加慢性不可预见性应激建立抑郁模型,建模后电休克组在丙泊酚麻醉下行无抽搐电休克治疗,隔天1次共2周.检测各组海马谷氰酸含量和海马CA1区、CA3区NMDA受体2B亚单位(NMDA-NR2B)的表达.结果 ①电休克治疗后电休克组大鼠水平移动格数、垂直竖立次数和糖水消耗量都高于抑郁组(P＜0.01).②电休克组大鼠海马内谷氨酸含量低于抑郁组(P＜0.01),而抑郁组高于正常组(P＜0.01).③电休克组大鼠海马CA1区和CA3区NMDA-NR2B的表达量高于正常组(P＜0.05),而抑郁组低于正常组(P＜0.01).结论 无抽搐电休克治疗可抑制抑郁症模型大鼠海马内谷氨酸含量的升高并使NMDA-NR2B的表达量上调,这可能足其抗抑郁机制之一.     

抑制胶质细胞增生对创伤性癫癎大鼠神经胶质细胞谷氨酸转运的影响

目的　探讨海马胶质细胞增生和谷氨酸转运异常在铁离子诱发创伤性癫大鼠发病机制中的作用,以及胶质细胞增生对谷氨酸转运体表达的影响。方法　36只SD大鼠随机分3组,A组单侧杏仁核内注射生理盐水,B组仅注射氯化铁,C组注射氯化铁后,静脉注射含7β羟基胆固醇的脂质包被微泡。动态观察大鼠脑电图和行为改变,并用免疫组化、免疫印迹方法观察鼠脑海马胶质纤维酸性蛋白(glialfibrillaryacidicprotein,GFAP)在注射氯化铁后15d的表达,同时应用逆转录聚合酶链反应(RT -PCR)检测双侧海马谷氨酸天门冬氨酸转运体(GLAST)、谷氨酸转运体1 (GLT1 )和兴奋性氨基酸载体1(EAAC1)mRNA的表达。结果　A组大鼠行为学和脑电图表现无明显改变;B组大鼠致成功92%,致潜伏期为( 6 .09±0 .37 )d;C组致比例降低到67%,致潜伏期延长至(10. 07±0. 56)d。致大鼠抽搐发作的同时记录到阵发的节律性的高幅棘波和尖波。B组大鼠双侧海马GFAP表达均比A组明显增高(P<0 05),C组双侧海马GFAP表达比B组低50% ~60%。与A组比较,B组大鼠双侧海马GLASTmRNA表达显著降低(P<0 .05),而EAAC1mRNA表达增高(P<0 .05);C组双侧海马GLASTmRNA表达与A组无明显差异,而GLT1和EAAC1均比A组明显增高(P<0. 05)。结论　胶质细胞的增生和GLAST的下调可能参与     

克罗卡林对急性脑缺血再灌注大鼠的脑保护作用

目的 探讨急性脑缺血再灌注后大鼠脑内小胶质细胞的活化及K-ATP通道开放剂克罗卡林(Cromakalin)的脑保护作用.方法 将72只SD大鼠,随机分为3组:A组为假手术组,B组为单纯缺血再灌注组,C组为克罗卡林干预组.应用改良Zea Longa线栓法制备大鼠大脑中动脉缺血再灌注(MCAO)模型,免疫组化染色检测OX42(小胶质细胞的标志)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达情况;应用特异性尼氏染色进行海马CA1区神经元计数.结果 A组各时间点海马 CA1区OX42,iNOS均有少量表达,B组OX42,iNOS随时间推移表达增多,72 h达高峰,7 d减少,与A组相比两者表达明显增多,差异有统计学意义(P<0.01).C组各时间点OX42、iNOS与B组相比表达明显减少,差异有统计学意义(P<0.01).结论 Cromakalin能明显抑制急性脑缺血再灌注后大鼠脑内OX42增殖,减少iNOS的表达,降低海马神经元的死亡程度,具有脑保护作用.     

基因转染人羊膜细胞对颅脑创伤大鼠海马的作用

目的 观察移植转染胶质源性神经营养因子(GDNF)基因人羊膜细胞(HACs)对创伤性脑损伤(TBI)大鼠海马神经元的影响.方法 采用改进Feeney法制作TBI致海马神经元损伤模型.TBI 24 h后于挫伤灶边缘移植,移植处距硬脑膜4 mm和2 mm深浅两点移植,共5μl含5×10~5个细胞.TBI+GDNF组移植转染GDNF基因HACs;TBI+eGFP组移植转染eGFP基因HACs;TBI+PBS组注射5μl PBS;假TBI组未行移植操作.移植后12 d Morris水迷宫检测结束后制片并行焦油紫染色,检测海马及移植针道靶点周围组织,取移植针道靶点周围组织行RT-PCR检测GDNFmRNA水平.结果 免疫荧光法检测转染GDNF基因HACs荧光显微镜下呈红色荧光.TBI+GDNF组大鼠学习记忆功能明显好于TBI+eGFP组和TBI+PBS组,TBI+eGFP组和TBI+PBS组大鼠损伤侧海马神经元显著缺失,胞体缩小,深染.TBI+GDNF组部分海马神经元缺失.RT-PCR检测TBI+GDNF组GDNFmRNA高水平表达.结论 移植转染GDNF基因HACs对TBI大鼠海马神经元有保护作用.     

多次化学性缺氧对大鼠海马CA1区神经元凋亡及Bcl-2蛋白表达的影响

目的研究不同间隔时间多次化学性缺氧对大鼠海马CA1区神经元凋亡及Bcl-2蛋白表达的影响.方法应用原位末端标记技术及免疫组化技术,观察分析对照组(A组)、3-硝基丙酸(3-NPA)连续给药组(B组)、3-NPA间隔给药组(C组)大鼠海马CA1区神经元凋亡及Bcl-2蛋白表达情况.结果 (1)大鼠海马CA1区神经元凋亡B组较A、C组有显著增加(均P<0.05),而A组与C组比较差异无显著性(P>0.05);(2)Bcl-2蛋白免疫反应强度C组较A、B组增强非常显著(均P<0.001),而A组与B组比较差异无显著性(P>0.05).结论连续多次应用小剂量3-NPA可使大鼠海马CA1区神经元凋亡明显增加,间隔多次应用小剂量3-NPA对神经元有保护作用.     

慢性应激模型大鼠脑内5-HT1A受体表达分析

目的 探讨慢性不可预见性轻度应激(CUMS)模型大鼠各脑区(海马、中缝核、前额叶及纹状体)5-HT1A受体表达及与旷场行为变化的关系;西酞普兰对5-HT1A受体表达的影响.方法 将24只雄性SD大鼠随机分为3组(n=8):A组为对照组;B组为CUMS应激组;C组为CUMS应激+西酞普兰用药组(每天腹腔注射西酞普兰水溶液2 ml,10mg/kg).实验为期6周,通过旷场试验评价大鼠行为,6周后处死大鼠获取脑组织,采用Real-Time PCR检测各脑区5-HT1A mRNA表达水平,并分析其与矿场行为的相关性.结果 B组海马5-HT1A mRNA表达较A组有增高趋势(P=0.05),其余各脑区5-HT1A mRNA表达均差异无统计学意义(P＞0.05).海马5-HT1AmRNA表达大鼠移动次数、转身次数呈正相关,与总不动时间呈负相关;中缝核、纹状体5-HT1A mR-NA表达与中心移动距离呈正相关,纹状体5-HT1A mRNA表达与中心停留时间呈正相关(P均＜0.05).结论 慢性应激可能会引起海马5-HT1A受体表达增高;抗抑郁剂西酞普兰对5-HT1A受体表达无影响.5-HT1A mRNA表达与旷场行为变化有相关性.     

氯硝西泮预处理对癫痫大鼠海马区γ-氨基丁酸A受体γ2亚单位表达的影响

目的 探讨氯硝西泮预处理对癫痫大鼠海马区γ-氨基丁酸A受体γ2亚单位(GABAARγ2)表达的影响.方法 60只健康雄性SD大鼠随机分为假手术组、癫痫组和氯硝西泮预处理组;癫痫组再分为6h、12 h、1 d、3d、7d、15 d和30 d7个亚组;药物预处理组再分为假预处理组、预处理6h、12h和ld亚组.药物预处理组给予氯硝西泮6 mg/(kg·d)分2次灌胃,连续5d;然后癫痫组和预处理组通过向大鼠海马C3区注射海人酸建立颞叶癫痫模型;采用免疫组化法在相应时点检测各组大鼠海马区GABAARγ2的表达.结果 与假手术组比较,癫痫组CA1区癫痫发作ld后、CA3区癫痫发作后各时间点GABAARγ2表达明显下降(P＜0.05 ～0.01).与癫痫组相应亚组比较,预处理6h、12 h亚组海马CA3区及预处理ld亚组海马CA1区及CA3区GABAARγ2的表达明显增高(P＜0.05～0.01).结论 氯硝西泮预处理可上调癫痫大鼠海马区GABAARγ2的表达.