产气荚膜梭菌生长所需最低水分活度研究

目的 考察产气荚膜梭菌在不同水分活度下的生长趋势,以及生长所需最低水分活度.方法 分别以氯化钠、葡萄糖和甘油调节硫乙醇酸盐流体培养基(FTM),至水分活度限值、低于水分活度限值0.01、高于水分活度限值0.01.取产气荚膜梭菌菌悬液适量,加入上述培养基中,绘制3种介质调节的水分活度条件下产气荚膜梭菌的生长曲线.结果 水...     

金黄色葡萄球菌与烟曲霉生长最低水分活度的研究

目的 探讨使用葡萄糖、甘油、氯化钠3种介质调节不同水分活度的生长环境对金黄色葡萄球菌及烟曲霉生长的影响。方法 分别加入3种不同的介质控制胰酪大豆胨液体（TSB）培养基、沙氏葡萄糖琼脂（SDA）培养基的水分活度，通过定时对金黄色葡萄球菌进行平板计数、烟曲霉的菌落生长直径测量，判定微生物生长的最低水分活度。结果 金黄色葡萄球菌在甘油与氯化钠调节的水分活度环境下，菌落数均呈下降趋势；在蔗糖介质调节水分活度为0.85，0.86时，菌落数在初始值上下波动，基本维持不变；调节水分活度为0.87时，菌落数在略减后迅速增加。烟曲霉在3种介质调节的所有水分活度环境下，均处于生长停滞状态。结论 环境水分活度的高低对金黄色葡萄球菌、烟曲霉的生长有一定影响。金黄色葡萄球菌在蔗糖介质中的生长最低水分活度近似为0.86，烟曲霉生长最低水分活度>0.83。金黄色葡萄球菌在甘油与氯化钠基质，烟曲霉在3种基质中的最低水分活度与美国药典中收录的最低水分活度值并不相符。     

白色念珠菌生长临界水分活度研究

目的 探讨白色念珠菌生长所需的临界水分活度.方法 分别用氯化钠、葡萄糖和甘油制备不同水分活度的沙氏葡萄糖液体培养基,在白色念珠菌菌悬液中分别加入上述培养基,(25±1)℃条件下培养,按2020年版《中国药典(四部)》通则1105倾注平皿法计数,计算菌液浓度,并绘制白色念珠菌生长曲线,通过定性、定量试验确定临界水分活度....     

厌氧罐法检查硫乙醇酸盐流体培养基灵敏度

目的 建立厌氧罐法检查硫乙醇酸盐流体培养基灵敏度的方法。方法 用氧化还原指示剂检查厌氧罐的密封性能,确保厌氧罐内能达到厌氧状态;测定达到厌氧状态的时间以及能够保持的时间;将生孢梭菌接种至不同的固体培养基上,根据菌落生长情况选择适宜生孢梭菌生长的培养基;同时用厌氧罐法和试管法对同一批号的生孢梭菌菌悬液培养计数,并对计数结果进行比对。结果 硫乙醇酸盐流体培养基能够作为厌氧罐内厌氧状态的指示剂,罐盖密封后30min可达厌氧状态,至少可以保持7天;中国药典规定的营养琼脂培养基适宜生孢梭菌的生长;厌氧罐法比试管法更适合对生孢梭菌菌悬液的培养计数。结论 用厌氧罐法检查硫乙醇酸盐流体培养基的灵敏度能更真实地反映培养基的质量,符合中国药典要求,方法切实可行。     

对无菌试验培养基灵敏度试验法准确性的初步研究

目的：研究《中国生物制品规程》(2000年版)(简称《规程》)中需氧菌和厌氧菌无菌试验培养基灵敏度试验法及真菌无菌试验培养基灵敏度试验法的准确性。方法：按照《规程》中需氧菌和厌氧菌无菌试验培养基灵敏度试验法及真菌无菌试验培养基灵敏度试验法，同时采用平皿[乙型溶血性链球菌采用血琼脂平皿，短芽孢杆菌采用营养琼脂平皿，生孢子梭状芽孢杆菌(简称生孢梭菌)采用硫乙醇酸盐软固体琼脂平皿(厌氧培养)，白色念珠菌采用真菌培养基琼脂平皿]计数法，在相同稀释度及培养温度条件下平行进行1mL菌液的菌落形成单位(Colony Forming Units，CFU)计数。将菌液稀释至与标准比浊管相同之浓度，然后作10倍系列稀释。将稀释度为10^-6～10^-8的短芽孢杆菌、10^-6～10^-8的生孢梭菌，10^-7～10^-9的乙型溶血性链球菌菌液各1mL，分别接种到9mL硫乙醇酸盐培养基中；将稀释度为10^-5～10^-7的白色念珠菌菌液各1mL，分别接种到9mL真菌培养基。每个稀释度至少接种3管，用未接种培养基作对照。将接种短芽孢杆菌的培养基，置35℃培养5d，接种生孢梭菌或乙型溶血性链球菌的培养基，置35℃培养3d，接种白色念珠菌的培养基，置25℃培养5d，同时重复3次试验，记录结果。用每个菌种，按照需氧菌和厌氧菌无菌试验培养基灵敏度试验法及真菌无菌试验培养基灵敏度试验法重复进行3次灵敏度试验。结果：按照《规程》中需氧菌和厌氧菌无菌试验培养基灵敏度试验法及真菌无菌试验培养基灵敏度试验法，同一种培养基，用同一质控菌种重复3次灵敏度试验，结果往往不同，尤其是用乙型溶血性链球菌进行质控时，更为明显。平皿CFU计数与比浊菌数常有显著差异。结论：《规程》中需氧菌和厌氧菌无菌试验培养基灵敏度试验法及真菌无菌试验培养基灵敏度试验法准确性欠佳。     

水分活度对黑根霉生长的影响

目的 探讨不同调节剂作用下黑根霉的最低生长水分活度（Aw）,以及对其生长的影响。方法 以氯化钠、甘油、蔗糖为调节剂,配制系列Aw不同的沙氏葡萄糖琼脂培养基,将黑根霉菌落转移至培养基上,22.5℃温度下培养21 d,每天测量菌落直径,观察菌落变化。结果 氯化钠组Aw <0.93时,黑根霉无生长迹象;甘油组Aw <0.87时,黑根霉无生长迹象,Aw <0.89时不能产孢;蔗糖组Aw <0.86时,黑根霉无生长迹象,Aw <0.88时不能产孢。随着Aw的降低,黑根霉开始生长时间、产孢时间均推迟,黑根霉的生长速率下降。结论 黑根霉在不同调节剂作用下最低生长Aw分别为0.93（氯化钠）、0.87（甘油）、0.86（蔗糖）。不同调节剂种类对黑根霉最低生长Aw有较大影响。     

复方磺胺嘧啶银混悬液无菌检查方法的建立及验证

目的:建立复方磺胺嘧啶银混悬液无菌检查法并进行验证。方法:将样品经无菌定性滤纸初过滤后,取滤液适量,采用pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液作为冲洗剂,冲洗量分别为300、600、900mL,以大肠杆菌、金黄色葡萄球菌,铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌、白色念珠菌、黑曲霉作为试验菌种,按照薄膜过滤法进行无菌检查,以金黄色葡萄球菌为阳性对照菌进行验证试验。结果:最佳冲洗量为细菌检查600mL、真菌检查300mL;验证试验中阳性对照菌24h内生长正常,各供试品管均未见菌生长,检验结果符合规定。结论:复方磺胺嘧啶银混悬液无菌检查时可以通过定性滤纸过滤和薄膜过滤联用的方法消除其抑菌活性。     

硫酸小诺霉素注射液无菌检查方法的建立及验证

目的:验证硫酸小诺霉素注射液的无菌检查方法。方法:根据《中国药典》2010年版二部附录无菌检查法,采用薄膜过滤法,以0.1%无菌蛋白胨氯化钠水溶液为冲洗液,考察冲洗量分别为每筒100和200 mL时,金葡菌、枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌、生孢梭菌、白色念珠菌和黑曲霉的生长情况。结果:冲洗量为每筒100 mL时,大肠埃希菌生长情况不佳;冲洗量为每筒200 mL时,所有菌均生长良好。结论:冲洗量为每筒200 mL时,可消除硫酸小诺霉素的抗菌作用,大肠埃希菌可作为硫酸小诺霉素的敏感菌株。经过验证,该法适用于硫酸小诺霉素注射液的无菌检查。     

注射用多西他赛胶束无菌检查方法验证

目的 建立针对2种注射用多西他赛胶束的无菌检查方法。方法 参照2015年版《中国药典》（四部）通则1105无菌检查法,取注射用多西他赛胶束15瓶,用500 mL 0.9%氯化钠溶液溶解,作为供试液,平均分配至3个滤筒过滤。同法制备6个滤筒。每个滤筒用pH 7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液冲洗3次,每次100 mL,然后加入相应培养基,并分别接种<100 CFU/mL的金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、生孢梭菌和黑曲霉,于适宜温度下观察培养。以等量无菌氯化钠溶液替代注射用多西他赛胶束供试液后采用相同的后续操作,作为对照组。采用薄膜过滤法,用pH 7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液冲洗滤膜,每个滤筒冲洗3次,每次100 mL,检测各菌株生长情况。结果 6种验证菌株均在48 h内生长良好,样品的抑菌活性被完全消除。结论 注射用多西他赛胶束可用上述方法进行无菌检查。     

羧氨基葡聚多糖钠生物胶体液无菌检查法的建立

目的:建立羧氨基葡聚多糖钠生物胶体液的无菌检查方法。方法:采用薄膜过滤法,对样品中金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌、白色念珠菌、黑曲霉生长情况进行考察;对受抑制的试验菌(生孢梭菌、白色念珠菌)采用加热冲洗液的方法消除样品对其的抑制作用并进行验证。结果:羧氨基葡聚多糖钠生物胶体液对生孢梭菌的抑菌作用最强;采用加热至45℃的0.1%无菌蛋白胨水溶液500mL(每膜)冲洗可消除其抑菌作用,验证试验中试验菌生长良好。结论:所建立的方法可用于羧氨基葡聚多糖钠生物胶体液的无菌检查,且结果准确、可靠。     

注射用夫西地酸钠无菌检查方法的建立及验证

目的:建立注射用夫西地酸钠的无菌检查方法。方法:采用薄膜过滤法,考察不同冲洗量(300、400、500、600、700、800、900、1000mL)对样品中金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌、生孢梭菌、白色念珠菌、黑曲霉生长情况的影响;以金黄色葡萄球菌为试验菌考察不同样品稀释浓度(8.3、6.25、5mg·mL-1)时的生长情况,并进行方法验证。结果:注射用夫西地酸钠对金黄色葡萄球菌的抑菌作用最强;采用预浸润滤膜,将样品制成约5mg·mL-1浓度的溶液,并按每膜800mL的冲洗量冲洗的方法,可消除其抑菌作用,验证试验中试验菌生长良好。结论:所建立的薄膜过滤法可用于注射用夫西地酸钠的无菌检查。     

伊曲康唑注射液无菌检查方法研究

目的建立伊曲康唑注射液的无菌检奎方法。方法采用薄膜过滤法,每管接种量50mL,用pH=7．0的氯化钠-蛋白胨缓冲液500mL冲洗,对伊曲康唑注射液进行无菌检查。结果用400mL的pH=7．0的氯化钠-蛋白胨缓冲液冲洗,可消除该药对金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌和生孢梭菌的抗菌作用,用500mL冲洗可消除其对黑曲霉菌和白色念珠菌的抗菌作用。该药对真菌的抗菌作用比对细菌的抗菌作用更强。结论所建立的方法简便、准确、可靠、重现性好。     

Reductive debromination of (alpha-bromoiso-valeryl)urea by intestinal bacteria

The reductive debromination of the hypnotic (alpha-bromoiso-valeryl)urea to (3-methylbutyryl)urea by intestinal bacteria has been studied. The caecal contents of rats, mice, hamsters, guinea-pigs and rabbits had significant debrominating activity toward (alpha-bromoiso-valeryl)urea. The cell-free extract of intestinal bacteria from the caecal contents of rats had debrominating activity in the presence of both flavin mononucleotide (FMN) and NADH (or NADPH) under anaerobic conditions. Seven pure strains of intestinal bacteria were also tested and the highest activity was observed with Clostridium sporogenes. The cell-free extract of Clostridium sporogenes had debrominating activity in the presence of both FMN and NADH (or NADPH), and this activity was inhibited by sodium arsenite and potassium cyanide. The activity of the cell-free extract was also supported by the photochemically reduced form of FMN. The debromination in intestinal bacteria seems to proceed in two steps--reduction of flavins by bacterial flavin reductase(s) in the presence of NADPH or NADH, and then the reductive debromination of (alpha-bromoiso-valeryl)urea to (3-methylbutyryl)urea by bacterial dehalogenase(s) using the reduced flavins as an electron donor. These results indicate that intestinal bacteria play a role in the reductive debromination of (alpha-bromoiso-valeryl)urea to (3-methylbutyryl)urea in animals. The debromination is inhibited by oxygen and dependent on flavins.     

生孢梭菌孢子作为生物指示剂的研究

用生孢梭菌孢子作为输液产品湿热灭菌工艺的生物指示剂，采用残存曲线法测定生孢梭菌孢子在3种溶液中的耐热性，确定灭菌工艺的最小F0值，制订合理的灭菌工艺微生物学验证方案。     

生孢梭菌孢子作为生物指示剂用于残存概率灭菌工艺验证的可行性

测定并分析生孢梭菌孢子在不同介质及不同温度下的耐热参数，评价生孢梭菌孢子的耐热特性及其作为生物指示剂在残存概率湿热灭菌工艺验证中的应用。     

In vitro antimicrobial activity of carbapenem antibiotics against Pseudomonas aeruginosa, measured using a low-concentration Mueller-Hinton Agar culture medium]

Ohya et al. noted that the antibacterial activity of carbapenem-family antibiotics against Pseudomonas aeruginosa was significantly enhanced through lowering the basic amino acid concentration in the culture medium. They reported that there was a marked difference in antimicrobial activity of panipenem (PAPM) against Pseudomonas aeruginosa between the culture medium with Mueller-Hinton Agar (MHA) diluted with distilled water and the non-diluted culture medium. We used 2,312 strains of fresh Pseudomonas aeruginosa, isolated from clinical materials, to examine the antibacterial activity of PAPM in non-diluted and diluted culture media. For testing the susceptibility, we employed the Showa disc method and agar plate dilution method. In the Showa disc method, the inhibition diameters of the tested microbial strains showed a larger distribution for both 16-fold and 40-fold diluted MHA, compared to the non-diluted MHA. The MIC values in the agar plate dilution method were also smaller in distribution for the 16-fold as well as the 40-fold diluted MHA, compared to the non-diluted culture media. Approximately 90% of the strains showed decreased MIC values, 2-8 times in the 16-fold diluted MHA and 2-16 times in the 40-fold diluted MHA. From the above results, we confirmed that the in vitro antibacterial activity of PAPM against Pseudomonas aeruginosa was enhanced through lowering the MHA concentration.