粉葛组织培养及同源四倍体诱导

目的建立粉葛的组织培养体系;培育粉葛同源四倍体新种质。方法以M S培养基为基本培养基,培养外植体茎尖或茎段获得组培再生植株;用不同体积分数的秋水仙素对无菌苗茎尖进行不同时间的处理,诱导遗传物质加倍的同源四倍体。结果其最适愈伤组织诱导培养基为M S 6-BA 1.0 m g/L 2,4-D 1.0 m g/L NAA0.2 m g/L,分化和增殖培养基为M S 6-BA 1.0 m g/L 2,4-D 0.2 m g/L,生根培养基为1/2 M S IBA 0.2 m g/L;从长出约1 cm的丛生芽上切取0.3~0.5 cm的茎尖用0.4%~0.5%的秋水仙素处理48 h效果较好,体积分数过低或过高和处理时间太短或太长都不易成功。结论同源四倍体粉葛为葛根中药用物质质量分数的提高提供了基础。     

高山红景天同源四倍体诱导与鉴定研究

目的 获得高山红景天同源四倍体无性体系。方法 秋水仙素诱导种子加倍,通过多次组培再生进行嵌合体分离,采用气孔大小与密度测量、染色体计数和流式细胞学分析进行倍性鉴定。结果 秋水仙素质量分数与处理时间对种子萌发率、幼苗死亡率及诱变率均有十分明显的影响,0.2%秋水仙素处理露白种子72 h的萌发率、幼苗死亡率及诱变率分别为18.2%、73.6%、68.7%;倍性变异植株气孔明显增大,气孔密度变小;正常二倍体染色体数目为2n＝2x＝26,四倍体染色体数为 2n＝4x＝52,发现非整倍体的存在;倍性变异植株经3次再生纯化后获得纯合四倍体无性系,流式细胞学检测无嵌合体存在。结论 秋水仙素处理高山红景天种子获得同源四倍体具有可行性。     

盾叶薯蓣四倍体诱导的研究

目的 选育盾叶薯蓣Dioscoreazingiberensis新种质资源,以期为高产、高皂苷元含量薯蓣育种打下基础。方法 以刚露出绿色芽点的盾叶薯蓣愈伤组织块为材料,采用两种方法处理:①愈伤组织块浸泡到秋水仙素水溶液中。②培养基中添加秋水仙素。结果 成功获得了染色体数加倍的薯蓣新材料,其中以1×103mg/L秋水仙素水溶液浸泡24 h效果最好,诱导率达到35.2%,四倍体植株与二倍体亲本相比,二者在外观形态、生理指标、显微结构上有明显区别。结论 四倍体植株体型大、具生长优势,离体条件下利用愈伤组织块诱导多倍体是盾叶薯蓣倍性育种的一条有效途径。     

诱导八角莲愈伤组织的研究

目的:探讨八角莲诱导愈伤组织的过程,为快速繁殖幼苗奠定基础。方法:以八角莲的根茎、叶片为外植体,采用MS培养基,附加不同的植物激素进行实验。结果:以八角莲的叶片为外植体,在培养基MS NAA1.0mg/L 2,4-D2.0mg/L 6-BA0.5mg/L,愈伤组织诱导率可达55.0%。结论:通过合理配制培养基和激素,可以诱导八角莲的愈伤组织。     

叶下珠愈伤组织的诱导与培养

目的建立叶下珠愈伤组织培养方法。方法采用组织培养方法,比较不同外植体、蔗糖、植物生长物质及其配比对叶下珠愈伤组织诱导的影响。结果茎段的诱导率最高,为55.56%,叶片诱导不出愈伤组织。6-BA是叶下珠愈伤组织形成的主要影响因素,2,4-D、NAA、蔗糖次之。结论叶下珠愈伤组织诱导及继代的适宜培养基为MS 2,4-D0.5mg/L 6-BA1.0mg/L NAA0.1mg/L 蔗糖10g/L。     

珍稀植物跳舞草愈伤组织的诱导

①目的筛选出跳舞草外植体的最佳消毒方案及愈伤组织诱导的最佳条件。②方法以跳舞草的叶片为实验材料,利用离体培养技术,分析了不同消毒时间和培养条件对跳舞草愈伤组织诱导的影响。③结果外植体最佳的消毒方案为：75％的酒精消毒30 s;愈伤组织诱导的最佳条件为：MS,NAA：0．02 mg/L,BA：2 mg/L,糖：30 g/L,琼脂：6 g/L。④结论为进一步建立跳舞草组培快速繁殖体系奠定了基础。     

药用植物决明的愈伤组织诱导与生长增值的培养条件研究

本实验成功地以决明的胚轴、子叶诱导出愈伤组织。实验表明，MS比B5更利于愈伤组织诱导。正交试验表明，添加1mg／L的IAA、6－BA、GA3可明显促进愈伤组织的生长；添加1mg／L的NAA、2，4－D可抑制其生长；添加1mg／L的6－BA、2，4－D对抑制愈伤组织的分化有明显的效应。适合愈伤组织生长及维持分化率低水平的蔗糖浓度为2％～3％。愈伤组织的诱导及生长周期为30d左右。     

药用植物决明的愈伤组织诱导与生长增殖的培养条件研究

本实验成功地以决明的胚轴、子叶诱导出愈伤组织。实验表明，ＭＳ比Ｂ５更利于愈伤组织诱导，正交试验表明，添加１ｍｇ／Ｌ的ＩＡＡ、６－ＢＡ、ＧＡ３可明显促进愈伤组织的生长；添加１ｍｇ／Ｌ的ＮＡＡ、２，４－Ｄ可抑制其生长；添加１ｍｇ／Ｌ的６－ＢＡ、２，４－Ｄ对抑制愈伤组织的分化有明显的效应。适合愈伤组织生长及维持分化率低水平蔗糖浓度为２－３％。愈伤组织的诱导及生长周期为３０天左右。     

冬凌草愈伤组织诱导及细胞培养的研究

用组织培养、细胞悬浮培养和单细胞平板培养技术,诱导出冬 凌草愈伤组织,并探讨 了细胞悬浮培养时间、培养方法和接种密度对冬凌草单细胞平板培养植板率的影响。结果表 明：从冬凌草叶和嫩茎诱导愈伤组织,以 MS 2,4D 1 mg/L NAA 0.5 mg/L 培养基较好 ,愈 伤组织诱导率高达 96.80%。用普通单细胞平板培养法培养冬凌草单细胞的植板率很低,而 以悬浮培养 15～18 d 的单细胞为材料,接种密度为 5×103个/毫升时,进行条件培养 和 看护培养,植板率达 21.63%。本研究结果可供利用细胞培养技术筛选冬凌草高产冬 凌草素细胞株时参考。     

中国粗榧愈伤组织的诱导

目的:应用现代生物技术研究中国粗榧的组织培养技术.方法:观察不同消毒时间(5 min,10 min,15min),不同激素(6-苄基嘌呤(6-BA)、萘乙酸(NAA)、6-呋喃氨基嘌呤(KT)、2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D))组合及不同激素浓度的MS培养基对中国粗榧不同的外植体材料(茎尖、当年生幼茎、当年生幼叶)愈伤组织诱导的影响.结果与结论:选用茎尖、幼茎为外植体,消毒时间为10 min,培养基以MS 6-BA NAA 2,4-D(6-BA、NAA质量浓度均为20 mg/L,2,4-D为1.0 mg/L)可较好地诱导中国粗榧愈伤组织的形成.     

甘西鼠尾草愈伤组织诱导、增殖及分化研究

目的 考察不同质量浓度激素组合对甘西鼠尾草愈伤组织诱导、增殖及分化的影响。方法 以甘西鼠尾草叶片为外植体,采用正交试验研究2,4-D、NAA、6-BA、KT对愈伤组织诱导及增殖的影响,并探讨适宜愈伤组织分化的培养条件。结果 以诱导率和相对生长速率为指标,6-BA和2,4-D均对甘西鼠尾草细胞脱分化和细胞增殖具有显著影响,愈伤组织诱导的最佳激素组合为2,4-D 0.5 mg/L＋NAA 1.0 mg/L＋6-BA 0.5 mg/L,增殖的最佳激素组合为2,4-D 0.5 mg/L＋6-BA 2.0 mg/L＋KT 0.1 mg/L,MS＋NAA 0.5 mg/L＋6-BA 1.0 mg/L的培养基有利于不定芽的分化,而1/2 MS＋IBA 1.0 mg/L的培养基则有利于不定根的分化。结论 本实验所建立的组织培养体系,适宜甘西鼠尾草的植株再生。     

白芨愈伤组织诱导、增殖与分化研究

目的 建立白芨愈伤组织诱导、增殖和分化再生体系。方法 以MS为基本培养基,应用正交试验方法设计植物生长调节剂组合和质量浓度配比,研究不同外植体及植物生长调节剂对白芨愈伤组织形成、增殖和分化的影响。结果 白芨假鳞茎为诱导愈伤组织形成的最佳外植体;1.0 mg/L 6-苄氨基嘌呤（6-BA）与2.0 mg/L 2, 4-二氯苯氧乙酸（2, 4-D）组合不仅可诱导白芨愈伤组织形成,还有利于愈伤组织分化成芽。1.0 mg/L 6-BA与3.0 mg/L 2, 4-D的组合促进愈伤组织增殖,增殖系数为7.8;在分化培养基中附加0.5 mg/L噻二唑苯基脲（TDZ）,可提高愈伤组织分化率。结论 白芨愈伤组织诱导的最佳培养基为MS＋6-BA 1.0 mg/L＋2, 4-D 2.0 mg/L;最佳增殖培养基为MS＋6-BA 1.0 mg/L＋2, 4-D 3.0 mg/L;分化最佳培养基为MS＋6-BA 1.0 mg/L＋2, 4-D 2.0 mg/L＋TDZ 0.5 mg/L。     

白芨愈伤组织诱导、增殖与分化研究

目的 建立白芨愈伤组织诱导、增殖和分化再生体系。方法 以MS为基本培养基,应用正交试验方法设计植物生长调节剂组合和质量浓度配比,研究不同外植体及植物生长调节剂对白芨愈伤组织形成、增殖和分化的影响。结果 白芨假鳞茎为诱导愈伤组织形成的最佳外植体;1.0 mg/L 6-苄氨基嘌呤（6-BA）与2.0 mg/L 2, 4-二氯苯氧乙酸（2, 4-D）组合不仅可诱导白芨愈伤组织形成,还有利于愈伤组织分化成芽。1.0 mg/L 6-BA与3.0 mg/L 2, 4-D的组合促进愈伤组织增殖,增殖系数为7.8;在分化培养基中附加0.5 mg/L噻二唑苯基脲（TDZ）,可提高愈伤组织分化率。结论 白芨愈伤组织诱导的最佳培养基为MS＋6-BA 1.0 mg/L＋2, 4-D 2.0 mg/L;最佳增殖培养基为MS＋6-BA 1.0 mg/L＋2, 4-D 3.0 mg/L;分化最佳培养基为MS＋6-BA 1.0 mg/L＋2, 4-D 2.0 mg/L＋TDZ 0.5 mg/L。     

天门冬组培快繁体系研究

目的 建立天门冬组培快速繁殖体系,保护和合理利用天门冬资源。方法 采用不同基本培养基和不同种类及质量浓度的植物生长调节剂对天门冬不同外植体进行愈伤组织诱导、丛生芽诱导及生根培养研究。结果 愈伤组织诱导的最适培养基为1/2 MS＋1.0 mg/L 6-BA＋0.5 mg/L NAA,pH 5.8;丛生芽诱导的适宜培养基为MS＋1.5 mg/L 6-BA＋0.5 mg/L IAA,pH 5.8;生根的适宜培养基为1/2 MS＋0.5 mg/L IBA＋0.5 mg/L IAA,其中培养基中铁盐的质量浓度降低到6.95 mg/L,蔗糖的质量浓度降低至20 g/L,pH值为5.8。结论 天门冬不同外植体均可诱导出愈伤组织,其中嫩芽诱导愈伤率最高,为天门冬最适组织培养的外植体;利用组织培养技术能够实现天门冬快速繁殖,为其人工扩大栽培奠定了良好基础。     

基于ISSR的新疆贝母属植物遗传多样性研究

目的 通过对新疆贝母属植物进行遗传多样性分析,以期获得新疆贝母属不同种之间的遗传多态性。方法 应用琼脂糖凝胶电泳法结合ISSR分子标记,对所选材料进行遗传多样性与亲缘关系的综合分析。结果 2%琼脂糖凝胶电泳扩增总条带数为185条,其中多态性条带为181条,多态性条带比率（PPB）为97.84%。基于UPGMA软件对10种贝母的遗传差异性分析表明,12个ISSR引物可以将新疆贝母不同种之间遗传差异明显区分开来,其遗传相似系数范围在0.37～0.80,以0.50为最低遗传相似系数,可将10种贝母分成4个大类。结论 揭示了10种贝母种质资源间的遗传多样性与亲缘关系,为新疆野生贝母属植物资源的收集和种间分类等提供理论依据。     

RP-HPLC法测定短筒兔耳草中松果菊苷

目的 建立短筒兔耳草中松果菊苷的RP-HPLC测定方法。方法 短筒兔耳草经流动相超声提取后,用RP-HPLC法测定。采用Alltech Prevail C₁₈（250 mm×4.6 mm,5 μm）色谱柱,流动相为乙睛-甲醇-1%醋酸（10∶15∶75）,体积流量1.0 mL/min,检测波长334 nm,柱温为室温。结果 松果菊苷进样量在0.46～18.40 μg内与峰面积呈良好的线性关系（r＝0.999 9）;平均回收率为101.11%,RSD为2.09%（n＝6）。结论 采用RP-HPLC测定短筒兔耳草药材中松果菊苷的含量,该方法准确、快速、简便,重复性好,适用于短筒兔耳草中松果菊苷的质量控制。     

藏药马尿泡离体快繁技术研究

目的 通过对马尿泡组织培养技术的研究,为马尿泡的快速繁殖提供技术支撑。方法 以马尿泡野生植株上的休眠芽为外植体,将它们接种到一系列含有不同激素的培养基中。结果 外植体野生芽不易进入正常萌发生长阶段,一旦进入正常阶段,能迅速进入生长状态,诱导野生芽分化的最适培养基是MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 1.0 mg/L,且侧芽要比主芽分化得快,增殖率明显高于主芽的增殖率。25 d转接1 次,增殖倍数在5倍以上。最适生根培养基是1/2 MS+IBA 0.5 mg/L,诱导生根率达96%。无菌苗幼叶诱导愈伤组织最适培养基是MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.5 mg/L+2,4-D 1.0 mg/L,诱导率达100%。结论 一方面建立了稳定高效的马尿泡再生体系,另一方面通过组织培养达到了其种质资源的保存。     

鼓槌石斛特异性PCR分子鉴定

目的 研究能够特异性鉴别鼓槌石斛的PCR引物,并优化PCR检测体系,确立一种快速、准确鉴别鼓槌石斛的方法。方法 从GenBank数据库中下载石斛属rDNA ITS序列170余条,运用MEGA 5.0对所有序列进行同源性比较,找出各变异位点,在非保守区设计1对特异性引物。对35份石斛属植物DNA模板进行特异性引物PCR扩增,显示阳性者为鼓槌石斛。结果 将退火温度升至58 ℃时,鼓槌石斛能被该引物特异性地扩增出来,而其他石斛属植物均为阴性,且该引物的灵敏度可达到0.69 ng/μL。结论 建立一种特异性鉴别鼓槌石斛的方法,运用该特异性引物可实现从同源物种中快速、准确地鉴定出鼓槌石斛,具有特异性好,操作简便、高效、准确等优点。     

转双价抗虫基因 Bt-CpTI 提高四倍体菘蓝对小菜蛾抗性

目的 将外源苏云金芽孢杆菌杀虫蛋白基因 CryIA(c) 和豇豆胰蛋白酶抑制剂基因 CpTI 共同转入四倍体菘蓝以获得鳞翅目昆虫小菜蛾抗性。方法 构建了以 CaMV 35S 为启动子,新霉素磷酸转移酶 (Npt-Ⅱ) 为选择标记,带有 CryIA(c) 基因和 CpTI 基因的植物表达载体 pGBI121S4ABC 并转入根癌农杆菌 LBA4404。采用叶盘法遗传转化四倍体菘蓝。转基因再生植株经 PCR 和 Southern 杂交检测,并进行抗小菜蛾实验。结果 T₀ 代转化四倍体菘蓝的双基因阳性转化率达到 16.67%。Southern 杂交检测结果表明外源 CryIA(c) 基因和 CpTI 基因均已经随机整合到转基因菘蓝的基因组中。与野生对照相比,转基因四倍体菘蓝对小菜蛾显示出明显抗性。结论 转双价抗虫基因 Bt-CpTI 是提高四倍体菘蓝对小菜蛾抗性的有效手段。