胆囊收缩素酶联免疫测定法的研究

为探索多肽类物质的酶联免疫测定方法，采用紫外线照射及戊二醛活化酶标板包被八肽胆囊收缩素（ＣＣＫ８），并以此为基础进行酶联免疫吸附试验。结果显示：该方法可使ＣＣＫ８稳固地结合于酶标板上；竞争性抑制实验中游离的ＣＣＫ８与固相ＣＣＫ８可与抗体发生竞争结合，并呈良好的定量关系。该方法简便、重复性及稳定性好（批内及批间变异系数分别为４７５％及７８０％），可用于ＣＣＫ相关肽初步的结构分析。     

猪胰细胞膜缩胆囊肽结合蛋白的纯化

从猪胰细胞膜提取、纯化得到一种缩胆囊肽（ＣＣＫ）结合蛋白，达电泳纯。经十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ），其亚基分子量为４３．１×１０－２２ｋｇ。此结合蛋白与不同的ＣＣＫ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ作用时显示，其与硫酸化ＣＣＫ－８、ＣＣＫ－８、硫酸化亮氨酸脑啡肽（Ｌｅｕ－ｅｎｋ）结合活性较大，而与ＣＣＫ－６、ＣＣＫ－４及Ｌｅｕ－ｅｎｋ结合活性较弱。说明ＣＣＫ羧基末端第七位上酪氨酸的硫酸化对ＣＣＫ结合活性有较大影响。并与ＣＣＫ肽链的长度有关。     

鸡胚胆囊收缩素结合蛋白的纯化及性质

目的 研究胆囊收缩素（ＣＣＫ）酪氨酸的硫酸化的意义及胚胎中ＣＣＫ结合蛋白的性质。方法 用亲和层析法从鸡胚提取，纯化得到一种ＣＣＫ结合蛋白，经十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）达电泳纯。用辣根过氧化物酶标记的凝集素作点印迹法分析。结果 其亚基Ｍｒ为３４×１０＾３，此结合蛋白与不同的ＣＣＫ－Ｓｅｐｈａｒｅｓｅ作用时显示，其与硫酸化的ＣＣＫ８、非硫酸化的ＣＣＫ８、硫经亮氨酸脑啡肽（Ｌｅ     

胆囊收缩素酶联免疫测定法的应用

对已建立的八肽胆囊收缩素（ＣＣＫ８）酶联免疫吸附试验的应用作初步探索。结果显示：相关肽２Ａｇ、３Ａｇ及ＣＣＫ８之抑制曲线斜率有异,分别为－０．４６、－０．１７、－０．６８;脑组织提取物可被ＣＣＫ８定量抑制;ＣＣＫ８不与其他４种八肽抗血清发生反应,表明该法可用于对ＣＣＫ相关肽进行初步结构分析,亦可用于组织提取物ＣＣＫ成分鉴定及多肽抗血清筛选,因而具有较好的应用前景。     

胆囊收缩素酶联免疫测定法的应用

对已建立的八肽胆囊收缩素（ＣＣＫ８）酶联免疫吸附试验的应用作初步探索,结果显示：相关肽２Ａｇ,３Ａｇ及ＣＣＫ８之抑制曲线斜率有异,分别为－０．４６,－０．１７,－０．６８,脑组织提取可被ＣＣＫ８定量抑制;ＣＣＫ８不与其他４种八肽抗血清发生反应,表明该法可用于对ＣＣＫ相关肽进行初步结构分析,亦可用于组织提取物ＣＣＫ成分鉴定及其多肽抗血清筛选,因而具有较好的应用前景。     

鸡胚胆囊收缩素结合蛋白的纯化及性质

目的研究胆囊收缩素（ＣＣＫ）酪氨酸的硫酸化的意义及胚胎中ＣＣＫ结合蛋白的性质。方法用亲和层析法从鸡胚提取，纯化得到一种ＣＣＫ结合蛋白，经十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）达电泳纯。用辣根过氧化物酶标记的凝集素作点印迹法分析。结果其亚基Ｍｒ为３４×１０３，此结合蛋白与不同的ＣＣＫ－Ｓｅｐｈａｒｅｓｅ作用时显示，其与硫酸化的ＣＣＫ８、非硫酸化的ＣＣＫ８、硫酸化亮氨酸脑啡肽（Ｌｅｎ－Ｅｎｋ）结合活性较大，而与ＣＣＫ６、ＣＣＫ４、Ｌｅｕ－Ｅｎｋ结合活性较弱，且在ｐＨ６．５时结合最好。此结合蛋白与ＤＳＡ、ＷＧＡ、Ｓ－ＷＧＡ呈阳性反应，而不与ＣｏｎＡ、ＬＣＡ反应。结论ＣＣＫ羧基末端第７位上酪氨酸的硫酸化对ＣＣＫ结合活性有较大影响，且ＣＣＫ与其结合蛋白的结合呈ｐＨ依赖性。提示此结合蛋白含有糖链成分，以Ｎ－糖链为主，为多天线，呈平分型，不含核心岩藻糖。     

猪胰细胞膜缩胆囊肽结合蛋白的纯化

从猪胰细胞膜提取、纯化得到一种缩胆囊肽（ＣＣＫ）结合蛋白，达电泳纯。经十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ），其亚基分子量为４３．１×１０＾－２２ｋｇ。此结合蛋白与不同的ＣＣＫ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ作用时显示，其与硫酸化ＣＣＫ－８、ＣＣＫ－８、硫酸化亮氨酸脑啡肽（Ｌｅｕ－ｅｎｋ）结合活性较大，而与ＣＣＫ－６、ＣＣＫ－４及Ｌｅｕ－ｅｎｋ结合活性较弱。说明ＣＣＫ羧基末端第七位上酪氨酸的硫酸     

嗜麦芽假单胞菌绒毛膜促性腺激素受体酶联测定法的研究

为建立嗜麦芽假单胞菌ｈＣＧ受体酶联测定法,先将Ｌ－赖氨酸加入酶标板中温育,再加入戊二醛以产生多聚赖酸,通过多聚赖氨酸将完整细菌吸附于酶标板上,并以此为基础进行酶联受体测定法的研究。结果显示：该方法可使细胞稳固、均匀地吸附于酶标板上。竞争性抑制曲线显示未标记的ｈＣＧ能与细菌上的ｈＣＧ受体发生竞争性结合,并呈现良好的定量关系。该方法简单、重复性和稳定性好,可用于ｈＣＧ受体初步的结构分析及配体的定量测定。     

等高线法研究八肽胆囊收缩素与血管紧张素Ⅱ在拮抗大鼠吗啡镇 …

目的：探讨八肽胆囊收缩素（ＣＣＫ－８）与血管紧张素Ⅱ（ＡⅡ）在拮抗吗啡镇痛时是否相互协同。方法：皮下注射吗啡（５ｍｇ／ｋｇ）１０ｍｉｎ后，再向侧脑室单独注射ＣＣＫ－８或ＡⅡ，以及同时注射二者不同剂量和不同比例的混合物，观察其对吗啡镇痛效应的影响。结果：联合应用ＣＣＫ－８与ＡⅡ所产生的拮抗吗啡镇痛的作用明显大于单独使用ＣＣＫ－８或ＡⅡ。结论：ＣＣＫ－８和ＡⅡ以一定的比例联合应用，其拮抗吗啡镇痛的作用     

胆囊收缩素对大鼠催乳素释放的调节及其机理

给清醒自由活动的大鼠第三脑室内微量注射０．０５和０．５μｇ胆囊收缩素（ＣＣＫ－８）观察到，可显著兴奋前叶垂体催乳素（ＰＲＬ）的静息分泌，并进一步促进限制性应激引起的ＰＲＬ释放。０．０５μｇＣＣＫ－８的上述两种作用较０．５μｇＣＣＫ－８的效应更强。在体外培养的前叶垂体细胞中，分别加入０．０５、０．５、１．０μｇＣＣＫ－８，孵育１ｈ，看到３种剂量的ＣＣＫ－８均显著兴奋ＰＲＬ释放，兴奋效应依ＣＣＫ－８的剂量增加而增大；２×１０－４ｍｏｌ／ＬＣＣＫ－８可使前叶垂体细胞的胞内Ｃａ２＋浓度显著升高，而１０－６～１０－８ｍｏｌ／Ｌ的ＣＣＫ－８不影响其胞内ｃＡＭＰ的含量。     

Cholecystokinin octapeptide inhibits the in vitro expression of CD14 in rat pulmonary interstitial macrophages induced by lipopolysaccharide

Obejective To study the effect of cholecystokinin octapeptide (CCK-8) on lipopolysaccharide (LPS)-stimulated pulmonary interstitial macrophages （PIM） in vitroMethods PIM were isolated and cultured in the presence or absence of LPS, CCK-8, proglumide (the antagonist of CCK receptors) and vehicle. The expression of membrane CD14 (mCD14) protein was assayed by flow cytometry and soluble CD14 (sCD14) in the supernatant was analyzed semi-quantitatively by Western blot. TNF-α in the supernatant was detected with ELISA.Results CCK-8, at concentrations of 10［-7］ mol/L and 10［-6］ mol/L, significantly inhibited the expression of mCD14. Release of sCD14 and TNF-α in the supernatant was up-regulated by LPS (1μg/ml) but reduced by CCK-8. The effect of CCK-8 was inhibited by proglumide.Conclusion CCK-8 negatively modulated several functions of LPS-stimulated PIM through CCK receptors. This may be one of the mechanisms for CCK-8 to alleviate inflammation in lung tissue during endotoxemia.     

CCK-8法检测重组人白细胞介素-2的活性

目的:建立快速、简便、稳定的检测白细胞介素-2(Interleukin-2,IL-2)活性的方法.方法:利用CCK-8(cell counting kit-8)试剂盒,检测3个生产厂家的IL-2对CTLL-2细胞株增殖的影响.结果:IL-2浓度在2～2 000 U/ml范围内,IL-2浓度与细胞增殖成正比,3个厂家的I...     

胆囊收缩素对豚鼠结肠平滑肌及其细胞膜L-型钙电流和膜电位的影响

目的 探讨胆囊收缩素8肽(CCK-8S)对豚鼠近端结肠平滑肌及细胞膜L-型钙电流和膜电位的电生理作用及其机制.方法 (1)采用RM6240多道生理信号采集处理系统记录CCK-8S对豚鼠近端结肠平滑肌肌条收缩的影响;(2)检测Fluo-2/AM标记的近端结肠平滑肌细胞膜内钙离子浓度([Ca2+]i)变化;(3)用EPC-10膜片钳放大器测量全细胞模式下CCK-8S对近端结肠平滑肌细胞膜静息电位(RP)、动作电位(AP)和L-型钙通道电流(ICa-L)的影响.结果 CCK-8S(10-1mol/L)作用后:(1)豚鼠近端结肠平滑肌肌条收缩幅值和频率分别为对照组的(149±12)%和(132±13)%(均P＜0.05);(2)近端结肠平滑肌细胞膜的[Ca2+]i为对照组的(738±24)%(P＜0.05);(3)RP、AP峰值及AP快速复极时间分别为对照组的(52±9)%、(140±4)%和(61±13)%(均P＜0.05),该效应可被预先加入的CCK1受体拮抗剂地伐西匹和(或)L-型钙通道阻断剂尼非地平阻断(n=8,均P＜0.05),而预先向灌流液中加入CCK2受体拮抗剂CI 988后,CCK-8S对RP、AP峰值及AP快速复极时间的作用仍存在;(4)从-60 mV去极化至+10 mV,ICa-L为对照组的(138±7)%(P＜0.05),但分别可被相应拮抗剂抑制;当向电极内液加入肝素(10-6 mol/L)或向细胞外液加入staurosporine(10-6 mol/L)后,CCK-8S对Ica-L均没有影响(2.9%±2.6%和1.9%±2.3%,均P＞0.05).结论 CCK-8S通过CCK1受体促进近端结肠平滑肌自发性收缩频率和强度;其机制与激活1,4,5-三磷酸肌醇介导的蛋白激酶C途径进而促进L-型钙通道开放有关.

Abstract：

Objective To investigate the effects and mechanism of cholecystokinin octapeptide (CCK-8S) on the contractile activity of smooth muscles,L-type calcium current and membrane potentials of proximal colon myocytes in guinea pig.Methods ( 1 ) Strips of proximal colon were obtained from adult guinea pigs.The contraction of these stripes was measured by a RM6240 multi-channel physiological signal system.(2) Suspension of single smooth muscle cells (SMCs) were obtained from proximal colon and isolated by enzymatic digestion.The effect of CCK-8S on intracellular calcium concentration ( [Ca2+] i) of SMCs was examined by fura-2-1oaded miscrofluorimetric measurement.(3) Resting potential ( RP),action potential (AP) and L-type calcium current (ICa-L ) were recorded by patch-clamp technique.Results ( 1 )The contractile amplitude and frequency of muscle stripes enhanced by CCK-8S ( 10 -7 mol/L) were ( 149 ±12)% and (132 ± 13 )% respectively of those of control group (all P ＜ 0.05 ).They were significantly attenuated by pretreating strips with CCK1 receptor antagonist devazepide ( 10-7 mol/L),L-type calcium channel blocker nifedipine ( 10 -5 mol/L),Ca2+ -ATPase inhibitor TG (thapsigargin) ( 10-5 mol/L) and BA (boric acid) (10-5 mol/L) respectively.(2) [Ca2+]i of SMCs intensified by CCK-8S was (738 ±24)% of that of control group.And it was inhibited by pretreating SMCs with devazepide(all P ＜0.05).(3) After the superfusion of CCK-8S,RP depolarized to (52 ±9)%,the exogenously stimulated peak values of AP rose to (140±4)% and fast repolarization time of AP decreased to (61 ± 13)% (all P ＜0.05).They were significantly inhibited when these cells were pretreated with devazepide and/or nifedipine (n = 8,P ＜0.05 for each group) whereas CI 988 had little effect.(4) The CCK-8S-evoked ICa-L of SMCs at the voltage of + 10 mV was boosted to ( 138 ± 7 )%.Such an effect was suppressed by a pretreatment with nifedipine,devazepide,TG and BA respectively.In the presence of an inhibitor of inositol 1 ,4,5-trisphosphate (IP3 ) receptors,heparin (10-6 mol/L) and an protein kinase C (PKC) inhibitor,saurosporine (10-6 mol/L),CCK-8S did not significantly intensify ICa-L (all P ＞ 0.05 ).Conclusion CCK-8S promotes proximal colon contraction by CCK1 receptors through the activation of IP3-mediated PKC pathway.     

酶联免疫吸附试验(ELISA)测定风疹病毒抗体的探讨

本文介绍ELISA测定风疹病毒抗体的方法。用ELISA和HAI两种方法同时测定300份脐血。HAI效价≥1:8的274份阳性脐血中265份ELISA也是阳性。总的不符合率仅4.3％。比较来看,ELISA是一种简便、敏感和有效地检测风疹病毒抗体的方法。     

FHL1对肺腺癌细胞株A549生物学特性的影响

 目的 研究FHL1的表达对人肺腺癌细胞株A549生物学特征的影响。方法 以FHL1 mRNA及shRNA慢病毒载体转染肺腺癌细胞株A549,并采用Western blot及RT-PCR法筛选检测稳定过表达FHL1肺腺癌细胞株模型及低表达细胞株模型;运用CCK-8实验、Transwell实验、流式细胞仪、细胞集落形成实验等方法对其增殖、侵袭、凋亡及锚定非依赖性生长生物学特性进行检测评估。结果 FHL1稳定过表达及低表达组的Western blot及RT-PCR法检测显示病毒转染效果可靠稳定;CCK-8实验提示低表达组的细胞增殖情况明显高于过表达组及空白组(P=0.002 2);流式细胞仪检测提示过表达组的细胞总体凋亡率为50.48%,明显高于两个低表达组(16.41%、20.12%)及空白对照组(25.90%),差异有统计学意义(P<0.001);Transwell实验提示过表达组细胞表现出的侵袭性明显低于低表达组及空白组差异有统计学意义(P<0.001);成集落实验显示过表达组细胞株形成的集落数为28.7±6.0,明显少于两个低表达组(157.0±6.4、150.7±9.5),差异有统计学意义(P<0.001)。结论 稳定过表达FHL1肺腺癌细胞株A549模型及低表达模型构建成功。FHL1的表达对于肺腺癌细胞株A549的增殖、侵袭及转移均有抑制作用,并能够诱导其加速凋亡。     

~(131)I-Rituximab对B细胞淋巴瘤的放射免疫导向治疗的实验研究

目的:探讨放射性核素131I标记Rituximab及131I-Rituximab对B细胞淋巴瘤细胞进行放射免疫导向治疗的可行性。方法:采用氯胺-T法制备131I-Rituximab,采用CCK-8法观察131I-Rituximab对Raji细胞的抑制作用,对照组为131I、Rituximab组。结果:131I-Rituximab标记率在92%以上,放化学纯度达98%以上。CCK-8法表明131I-Rituximab对Raji细胞的抑瘤率与131I组和Rituximab组的抑瘤率有统计学差异(P<0.01)。结论:提示131I-Rituximab对人B细胞淋巴瘤的放射免疫导向治疗具有可行性。     

EGCG对肾小球系膜细胞MMP-9和细胞外基质合成的影响

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对脂多糖（LPS）诱导的肾小球系膜细胞（GMCs）基质金属蛋白酶系统和细胞外基质合成的影响。方法以大鼠GMCs为实验对象,分为正常对照组、LPS组、LPS＋EGCG组。CCK细胞计数法检测EGCG作用下大鼠GMCs的OD值,酶联免疫吸附实验（ELISA）检测基质金属蛋白酶-9（MMP-9）及抑制物金属蛋白酶组织抑制因子-1（TIMP-1）蛋白表达,并检测细胞外基质成分纤维连接蛋白（FN）、Ⅳ型胶原（ColⅣ）及层粘连蛋白（LN）的含量。结果LPS诱导TIMP-1蛋白和细胞外基质合成增加,与正常对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）,EGCG能抑制升高TIMP-1蛋白表达和细胞外基质合成。而各组MMP-9蛋白表达变化不明显。结论EGCG可抑制LPS诱导的大鼠GMCs增殖和细胞外基质的合成,为EGCG的肾脏保护作用提供理论依据。     

八肽胆囊收缩素对脂多糖诱导RAW264.7细胞IL-1β、IL-6、IL-10表达的影响

目的 研究脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导RAW 264.7细胞促炎性细胞因子IL-1β、IL-6及抗炎性细胞因子IL-10的动态变化规律及八肽胆囊收缩素(cholecystokinin octapeptide,CCK.-8)对其表达的影响.方法 LPS诱导RAW 264.7细胞不同时间(0、...     

聚乳酸乙醇酸共聚物与纳米羟基磷灰石共混制备组织工程纤维环支架的实验研究

目的探讨以聚乳酸乙醇酸共聚物(poly(lactic-co-glycolic acid),PLGA)与纳米羟基磷灰石(hydroxyapa-tite,HA)为原料,利用静电纺丝的技术制备出的三维多孔支架构建组织工程纤维环的可行性。方法将PLGA与HA溶解于丙酮中,配制20%(w/v)的溶液,磁力搅拌均匀后,进行静电纺丝,制备三维多孔支架。支架通过扫描电镜和磷酸盐缓冲液降解(phosphate buffered saline,PBS)的方式,观察支架的形貌和降解性能;利用CCK-8和伊红染色的方法观察支架的生物相容性。结果支架具有良好的纤维形貌,直径均匀,扫描电镜下可见HA结晶。支架在磷酸盐缓冲液中降解速度较快,8周时支架失重可达40%,表现出良好的降解性能。细胞毒性试验和伊红染色均表明细胞在支架上的生长情况较好,支架具有良好的生物相容性。结论 PLGA与HA共混制备的纳米纤维支架具有良好的空间结构和生物相容性,因此该支架是一种良好的组织工程纤维环支架材料。