肺癌、良性实质性病变和正常肺组织端粒酶逆转录酶定位表达的研究

目的研究端粒酶在肺良、恶性病变和正常肺组织中表达的定位,以阐明端粒酶在上述疾病发病机制中的作用,以及在正常肺组织中的生物学意义。方法对38例肺癌、7例良性实质性病变及35例病灶旁正常肺组织标本用核酸原位杂交和免疫组织化学技术对端粒酶逆转录酶（hTERT）mRNA和蛋白质的定位表达进行了研究,同时与端粒酶活性进行了对比。结果肺癌、良性实质性病变和病灶旁正常肺组织端粒酶活性阳性分别为31/38、3/7、7/35（P<0.001）;肺癌组织癌细胞、肺良性实质性病变中的淋巴细胞、纤维母细胞、巨噬细胞等以及病灶旁正常肺组织小气道、细支气管上皮的部分细胞和少部分肺泡上皮细胞hTERT蛋白有阳性表达,在有淋巴小结的肺组织其生发中心可见hTERT表达,多数巨噬细胞也有hTERT阳性表达。hTERTmRNA所表达的细胞与免疫组织化学结果类似。肺癌hTERT免疫染色平均吸光度比较鳞癌A值比腺癌略高,Ⅲ期比Ⅰ期、Ⅱ期稍高,分化程度越低A值也越高,但P>0.05。结论(1)端粒酶除了参与肺癌的发病机制外,也参与肺良性实质性病变发生发展。（2）端粒酶对于维持正常肺组织支气管上皮细胞、肺泡巨噬细胞和淋巴细胞的功能可能有重要的生物学意义。(3)端粒酶是一种增殖指标,而非肺癌的恶性特异性标志,端粒酶作为肺癌诊断标记物时可能有一定的假阳性。     

肺癌支气管肺泡灌洗液细胞端粒酶测定的临床意义

目的探讨端粒酶活性在肺癌支气管肺泡灌洗液（ＢＡＬＦ）细胞中的表达与肺癌发生机制的关系。方法应用银染多聚酶链方法对肺癌患者和支气管、肺良性疾病患者各３０例的ＢＡＬＦ细胞端粒酶活性的表达进行检测。结果肺癌患者ＢＡＬＦ细胞端粒酶活性８３％阳性表达，支气管、肺良性疾病ＢＡＬＦ细胞表达均阴性（Ｐ＜０．００１）。同一肺癌患者患侧肺端粒酶活性在ＢＡＬＦ细胞８３％表达，健侧肺阳性表达２７％。结论端粒酶活性是肺癌诊断的标志物之一，与肺癌的发生发展密切相关。     

肺癌组织的粒酶活性表达及意义

应用ＰＣＲ－端粒重复旬扩增法（ＴＲＡＰ）检测３１例肺癌、４例癌旁及２６例肺良性肿瘤患者肿瘤组织的端粒酶活性表达。结果显示，肺癌组织中端粒酶生表达率为８０．６％（２５／３１）、癌旁组织无表达、肺良性肿瘤组织表达率为７．７％（２／２６）。端粒酶活性表达与肺癌分化程度呈负相关，与肺癌分期无关。有及无淋巴结锗 的端粒酶活性表达率有显著性差异。提示端粒酶在肺癌的发生、发展及转移过程中皆起重要作用；其在肺癌组     

肺癌组织的端粒酶活性表达及意义

应用ＰＣＲ－端粒重复序列扩增法（ＴＲＡＰ）检测３１例肺癌、４例癌旁及２６例肺良性肿瘤患者肿瘤组织的端粒酶活性表达。结果显示，肺癌组织中端粒酶活性表达率为８０．６％（２５／３１）、癌旁组织无表达、肺良性肿瘤组织表达率为７．７％（２／２６）。端粒酶活性表达与肺癌分化程度呈负相关，与肺癌分期无关。有及无淋巴结转移者的端粒酶活性表达率有显著性差异。提示端粒酶在肺癌的发生、发展及转移过程中皆起重要作用；其在肺癌组织中的高表达有望成为肺癌诊断、鉴别诊断的一项强有力的生物学指标。     

端粒酶逆转录酶基因反义寡核苷酸抑制肺癌细胞端粒酶活性和诱导细胞凋亡

目的 研究端粒酶逆转录酶（hTERT)基因反义寡核苷酸（ASODN）对肺癌细胞端粒酶活性和细胞凋亡的影响。方法 实验分为ASODN组、正义寡核苷酸（SODN）组和空白对照组,所用ASODN和SODN的浓度分别为10μmol/L,脂质体为16mg/L,采用端粒重复扩增法、逆转录－聚合酶链反应、Western Blot及流式细胞术分别观察各组端粒酶活性、hTERP mRNA和蛋白质表达以及细胞凋亡。结果 ASODN组显著下调或抑制肺癌细胞端粒酶活性和hTERT表达,但直到第21天才出现细胞凋亡增多。结论 端粒酶活性与hTERT表达密切相关。     

端粒酶逆转录酶和c-myc基因在肺癌中表达的研究

目的　研究端粒酶逆转录酶 (hTERT)和c myc基因在肺癌中的表达及其与端粒酶活性的关系。方法　采用端粒重复序列扩增 (TRAP)法对肺癌组织以及癌旁非癌肺组织的端粒酶活性进行测定。用原位逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)和免疫组织化学技术分别检测上述组织标本中hTERTmRNA与c myc蛋白表达。结果　端粒酶活性在肺癌组织中阳性率为 73 .2 % (3 0 /4 1) ,在癌旁非癌肺组织为 6.3 % (2 /3 2 ) ,P <0 .0 1。肺癌及癌旁非癌肺组织中hTERTmRNA阳性表达率分别为 78.0 % (3 2 /4 1)和 9.4% (3 /3 2 ) ,P <0 .0 1,c myc蛋白阳性表达率分别为 80 .5 % (3 3 /4 1)和 15 .6% (5 /3 2 ) ,P <0 .0 1。肺癌组织hTERTmRNA表达与端粒酶活性呈显著正相关 (r =0 .70 7,P <0 .0 1) ,同时c myc蛋白与hTERTmRNA表达亦呈明显正相关 (r =0 .60 9,P <0 .0 1)。 结论　hTERTmRNA表达增强不仅参与肺癌的发生 ,而且可能是调节肺癌端粒酶活性的限速步骤。c myc蛋白可能通过激活hTERTmRNA表达而促进肺癌的形成     

肺癌组织端粒酶活性测定的临床意义

目的：探讨端粒酶活性与肺癌的关系。方法：采用以聚合酶链反应（PCR）为基础的端粒重复序列扩增法（TRAP），结合聚丙酰胺凝胶电泳银染法检测经纤支气管镜取出的35例肺癌患者肺癌组织和相应健侧肺支气管粘膜及35例支气管－肺良性疾病患者支气管粘膜的端粒酶活性。结果：（1）肺癌组肺癌组织活检标本端粒酶阳性33例（94％），毛刷标本阳性32例（91％），其相应健侧肺活检标本阳性2例（5．7％），毛刷标本阳性4例（11％）；（2）支气管－肺良性疾病患者活检阳性0例（0％），毛刷阳性2例（5．7％）；（3）肺癌组织端粒酶活性与肺癌组织学类型和临床分期无明显关系（P＞0．05）。结论：端粒酶活性与肺癌密切相关，可作为检测肺组织癌的一种辅助手段。     

反义端粒酶逆转录酶对肺癌细胞的抑制作用

端粒酶活化与肿瘤发生发展密切相关 ,86 .8%肺癌患者的癌组织端粒酶活性为阳性[1 ] 。其逆转录酶组分 (ｈｕｍａｎｔｅｌｏｍｅｒａｓｅｒｅｖｅｒｓｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅ ,ｈＴＥＲＴ)是其主要活性组分 ,该组分表达与肺癌端粒酶活性密切相关[2 ] 。本实验采用逆转录病毒载体介导反义ｈＴＥＲＴ作用于端粒酶阳性肺癌细胞系Ａ549,以期通过抑制ｈＴＥＲＴ表达而抑制端粒酶活性 ,探讨其对肺癌细胞端粒酶活性和细胞生长增殖的影响 ,寻找可能的肺癌基因治疗方法。材料与方法　肺癌细胞系Ａ549和包装用鼠成纤维细胞系ＰＴ67为北京大学第一…     

支气管活检标本的端粒酶活性检测对肺癌的诊断价值

目的：探讨肺癌组织端粒酶活性检测对肺癌的诊断价值。方法采用端粒酶重复序列扩增法检测纤维支气管镜活组织检查的肺癌病变组织（７０例）、肺癌对侧支气管组织（７０例）及非癌性肺疾病支气管组织（２０例）的端粒酶活性,并和病理学及细胞学检查结果进行比较。结果肺癌病变组织端粒酶检出率为８１％,明显高于肺癌对侧支气管组织（１４％）（Ｐ〈０．０１）及非癌性肺疾病支气管组织（１０％）的检出率（Ｐ〈０．０１）;肺癌组织     

胆囊癌hTERT、c-myc表达及相关性研究

目的观察端粒酶催化亚基（hTERT）、c-myc在胆囊癌中的表达，探讨hTERT及c-myc与胆囊癌的相关性。方法采用免疫组织化学方法检测15例胆囊癌组织、癌旁组织、正常胆囊黏膜及20例胆囊腺瘤性息肉组织hTERT、c-myc的表达。结果①正常胆囊黏膜、胆囊腺瘤性息肉组织、癌旁组织及胆囊癌组织hTERT的阳性表达率分别为6，67％（1/15）、10．00％（2／20）、33．33％（5／15）及80％（12／15）；c-myc阳性表达率分别为20．00％（3／15）、45．00％（9／20）、40％（6／15）及86．67％（13／15）；胆囊癌组织中hTERT与c-myc阳性表达率明显高于其它组织（P〈0．05）；②胆囊癌组织hTERT和c-myc表达与淋巴结转移有关，伴淋巴结转移的胆囊癌hTERT及c-myc阳性表达率明显高于无淋巴结转移者（P〈0．05）；③c-myc在hTERT阳性的胆囊癌组织的表达率明显高于hTERT阴性组（P〈0．05）。结论hTERT过度表达在胆囊癌的发生发展过程中具有重要作用，c-myc在转录水平上调控hTERT的表达，进而激活端粒酶促进胆囊癌的形成。     

大肠癌组织端粒酶各组分基因表达及其与端粒酶活性的关系

目的　探讨大肠癌组织端粒酶各组分基因 (hTR、TP1、hTERT)表达及其与端粒酶活性的关系。方法　分别采用原位逆转录聚合酶链反应和端粒重复序列扩增法 ,检测 46例大肠癌及其相应正常组织中的端粒酶各组分基因表达及端粒酶活性。结果　hTR或TP1mRNA在大肠癌与其相应正常组织中表达比较 ,差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ,而hTERTmRNA在大肠癌组织中表达显著高于其相应正常组织 (P <0 .0 5 )。大肠癌组织端粒酶活性亦显著高于其相应正常组织端粒酶活性 (P <0 .0 5 )。端粒酶活性与hTERTmRNA表达显著相关 (r =0 .848,P <0 .0 5 ) ,而与hTR或TP1mRNA表达无相关性 (P >0 .0 5 )。结论　hTERTmRNA在端粒酶活性调节中可能起关键作用 ,hTERTmRNA表达水平可作为大肠癌诊断指标之一     

人端粒酶在宫颈癌组织中的表达及意义

目的探讨端粒酶表达量改变成为宫颈癌的早期诊断及治疗依据的可能性。方法本研究通过RT-PCR方法检测人端粒酶RNA（hTR）、端粒酶协同蛋白（hTP1）和端粒酶逆转录酶（hTERT）mRNA在正常宫颈（NCE）组织,宫颈上皮内瘤样病变（CIN）组织及宫颈浸润癌（ICC）组织中的表达水平。结果不同组织类型中hTR及hTP1 mRNA阳性表达比较,差异无统计学意义（P〉0.05）,hTERT mRNA阳性表达比较,差异有统计学意义（P〈0.01）。CIN组织与ICC组织不同分期hTERTmRNA阳性表达比较无统计学差异（P〉0.05）。结论hTERT表达的检测可能成为宫颈癌早期筛查、判断病情进展及预后的一个生物学指标。     

人类端粒酶逆转录酶mRNA和蛋白在嗜铬细胞瘤中的表达及其意义

目的研究人类端粒酶逆转录酶（hTERT）在嗜铬细胞瘤中的表达及其作为预测生物学行为标志物的价值。方法采用原位杂交方法测定hTERT mRNA在45例嗜铬细胞瘤和副神经节瘤和9例正常肾上腺髓质中的表达；免疫组织化学方法检测hTERT蛋白的表达水平。结果hTERT mRNA在5例恶性（5／7）和5例可疑恶性（5／7）肿瘤中表达，表达均高于良性肿瘤（3／31），差异有统计学意义（P〈0．01）；hTERT蛋白的表达在良性（3／31）和可疑恶性（6／7）以及恶性（5／7）差异有统计学意义（P〈0．01）；9例正常肾上腺髓质细胞中未发现hTERT mRNA和蛋白的表达；肿瘤组织hTERT蛋白和mRNA的表达存在正相关性（r=0．951，P〈0．01）；hTERT蛋白和mRNA的表达与临床因素，如性别、肿瘤大小和血压无关联。结论hTERT mRNA和蛋白检测对良、恶性嗜铬细胞瘤和副神经节瘤的鉴别诊断有重要临床意义。     

不同食管病变中端粒酶活性与端粒酶RNA组分、端粒酶逆转录催化亚单位的相关性及其意义

目的　探讨不同食管病变中端粒酶活性 (TA)、端粒酶RNA组分 (hTR)及端粒酶逆转录催化亚单位 (hTERT)的表达 ,彼此间相关性及其预后意义。方法　采用TRAP 银染、原位杂交及免疫组化技术检测TA、hTR及hTERT在 38例食管鳞癌组织、15例不典型增生及 12例正常食管粘膜中的表达情况。结果　食管鳞癌TA、hTR及hTERT的阳性表达率分别为 84 2 1%( 32 /38)、71 0 5 %( 2 7/38)及 81 5 8%( 31/38) ,不典型增生组织中TA、hTR及hTERT阳性表达率分别为 6 0 0 0 %( 9/15 )、33 33%( 5 /15 )及 40 0 0 %( 6 /15 ) ,与正常组织比较 ,具有显著性差异 (P <0 0 5 ) ,TA与hTR及hTERT的表达具有相关性 (P <0 0 5 )。TA、hTR及hTERT的表达与临床病理因素无关 (P >0 0 5 )。结论　TA、hTR及hTERT在食管癌的发生发展中起着重要作用 ;hTR及hTERT能够反应端粒酶活性 ,三者均为食管鳞癌恶性表型增高的标志 ;hTR及hTERT具有独立的预后意义。     

外周血端粒酶活性对肺癌血转移诊断的探讨

目的：探讨以端粒酶重复序列扩增法(PCR—TRAP)检测血中肺癌端粒酶活性对于肺癌血转移诊断、分型分期的临床意义。方法：选取24例肺癌、26例肺良性疾病患，应用PCR—TRAP法测定端粒酶活性，磁分离酶免法检查癌胚抗原(CEA)及血沉。结果：肺癌组端粒酶活性阳性率明显高于肺良性疾病组(p＜0．01)，按肺癌恶化程度分，Ⅲ-Ⅳ期比Ⅰ-Ⅱ期高。CEA和血沉在肺癌与肺良性疾病组异常率无显性差异(p＞0．05)。22．2％(4／18)晚期肺癌外周血端粒酶活性呈阴性，肺良性疾病患中19．2％(5／26)外周血端粒酶活性呈阳性，肺癌患外周血端粒酶活性敏感性比CEA、ESR高(p＜0．01和p＜0．05)，特异性无显性差别(p＞0．05)。结论：端粒酶对于肺癌分期分型及预后判断有临床应用价值。改进检测方法，对提高肺癌血转移诊断的特异性和敏感度显得重要。     

白藜芦醇对人喉鳞癌细胞增殖的影响及其机制探讨

目的观察白藜芦醇对喉鳞癌细胞增殖的影响,并探讨其机制。方法用不同浓度（12.5、25、50、100、200、400μmol/L）的白藜芦醇处理人喉鳞癌Hep-2细胞24、48、72 h,为白藜芦醇组。对照组不加白藜芦醇。采用MTT法测算Hep-2细胞增殖抑制率,采用TRAP-ELISA法检测Hep-2细胞端粒酶活性,采用W estern b lot法检测Hep-2细胞中的人端粒酶逆转录酶（hTERT）蛋白。结果白藜芦醇组Hep-2细胞增殖明显受到抑制,且呈浓度依赖性;细胞端粒酶活性受到抑制,hTERT蛋白水平明显下调,且呈浓度和时间依赖性。结论白藜芦醇可抑制喉鳞癌细胞增殖,与其下调癌细胞hTERT表达、抑制端粒酶活性有关。     

急性白血病端粒酶活性及端粒酶基因表达的研究

目的 :研究初发急性白血病 (AL)患者骨髓、外周血单个核细胞端粒酶活性及端粒酶逆转录酶基因(hTERT)的表达 ,探讨其临床意义。方法 :采用端粒酶PCR ELISA法检测 2 4例初治AL患者的端粒酶活性 ;采用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)方法检测hTERT基因mRNA的表达水平。结果 :在 2 4例初发AL患者骨髓、外周血样本中 ,18例 (75 .0 % )表达端粒酶活性 ,其吸光度 (A )均值分别为 0 .5 38± 0 .0 6 2和 0 .4 6 3± 0 .0 5 4 ,而 12例正常人外周血中只有 1例表达端粒酶活性 A 均值为 0 .16± 0 .0 12 ,前二者分别与后者比较差异有极显著性意义 (P <0 .0 1)。在 2 4例AL患者中 ,19例 (79.2 % )表达hTERT基因mRNA。 2 4例AL骨髓样本中 ,17例既有端粒酶活性表达 ,又有hTERT基因mRNA表达 ,端粒酶活性的表达和hTERT基因mRNA的表达具有明显的一致性。结论 :初发AL患者骨髓、外周血细胞端粒酶活性及hTERT基因mRNA表达明显高于正常 ;AL患者细胞端粒酶活化与其hTERT表达密切相关。     

端粒酶反义DNA影响肺癌细胞体外生长的初步研究

目的：研究端粒酶反义核苷酸对肺癌细胞体外生长的影响,探讨针对端粒酶进行肺癌基因治疗的可行性。方法：人工合成硫化修饰六核苷酸端粒酶反义DNA[5-d(TTAGGG)-3‘],在体外与端粒酶阳性肺癌细胞系801－D共同培养,观察其对肺癌细胞端粒酶活性,细胞形态和生长特性的影响,结果：端粒酶反义DNA对端粒酶阳性肺癌细胞系801－D生长,集落形成有明显的抑制作用,细胞形态发生明显改变,且端粒酶反义DNA的抑制作用与其浓度呈正比,结论：端粒酶反义DNA序列对肺癌细胞系801－D体外生长有明显的抑制作用。     

人端粒酶催化亚单位hTERT启动子的研究进展

近几年来随着对端粒酶及其调控机制的研究不断深入，逐渐认识到hTERT仅仅在端粒酶阳性的肿瘤细胞中高表达，在端粒酶阴性的细胞中不表达。近年又有研究表明hTERT是调节端粒酶活性的关键性因素，而hTERT核心启动子的激活是hTERT异常表达的前提。因此hTERT启动子调控机制的研究又为肿瘤的发生、发展、诊治开辟了一片新的研究领域，本文就该领域的研究进展进行综述。     

非小细胞肺癌hTERT与p16基因甲基化的表达

目的 探讨端粒酶逆转录酶(hTERT)和p16基因甲基化在非小细胞肺癌(NSCLC)发病中的作用.方法 应用实时荧光定量RT-PCR法和甲基化特异性PCR法检测45例NSCLC组织、21例肺正常组织hTERT和p16基因甲基化的表达.结果 NSCLC、正常肺组织hTERT mRNA的表达分别为2.854±0.728、2.042±0.378,组间比较差异有统计学意义(P<0.01);NSCLC组织、肺正常组织p16基因甲基化阳性率分别为57.8%、14.3%(P<0.01).hTERT mRNA与NSCLC病理类型相关,p16基因甲基化与NSCLC细胞分化程度及淋巴结转移相关(P均<0. 05).结论 hTERT与p16基因甲基化存在相关性,hTERT和p16基因甲基化的表达与NSCLC的发生、发展有关.