肝细胞癌组织中β-Catenin的表达与第三外显子突变的关系

背景与目的:广西南部是肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)高发地区,也是粮食受黄曲霉毒素B1(aflatoxin B1,AFB1)污染较重的地区.β-Catenin 的异常表达与多种肿瘤有关.而AFB1是诱发HCC的重要因素.本研究旨在探讨AFB1高暴露地区HCC患者癌组织中β-Catenin基因突变及表达情况.方法:用基因直接测序、RT-PCR、免疫组化和Western blot等方法,检测52例来自广西南部AFB高暴露地区HCC患者癌、癌旁组织和18例非肝癌肝组织中β-Catenin基因的表达.结果:癌组织中未见β-Catenin基因第三外显子的突变.β-Catenin mRNA 在癌、癌旁和正常肝组织中的表达分别为0.42±0.24、0.20±0.16和0.23±0.12,癌组织中的表达显著高于癌旁组织或正常肝组织(P＜0.01);免疫组化染色癌组织中阳性率为55.8%(29/52),显著高于癌旁组织[36.5%(19/52)](P＜0.05).β-Catenin蛋白表达与肝外转移、术后复发、门静脉癌栓和临床分期有关(P＜0.05),而mRNA的表达与上述临床参数均无明显关系(P＞0.05).结论:β-Catenin在HCC组织中高表达,但其异常表达不是由基因第三外显子上GSK-3β磷酸化位点的突变引起.     

转酮醇酶在肝癌中的表达及临床意义

目的:研究转酮醇酶基因家族在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma, HCC)中的表达及其与临床病理特征之间的相关性.方法:检测42 例HCC组织及对应癌旁组织中转酮醇酶活性;采用RT-PCR法检测转酮醇酶基因家族各成员[转酮醇酶(transketolase, TKT)基因、转酮醇酶样基因1(transketolase-like1, TKTL1)和转酮醇酶样基因2(transketolase-like2, TKTL 2)] mRNA在HCC及癌旁组织中的表达,并研究其与临床病理特征之间的相关性.结果: HCC组织中的转酮醇酶活性明显高于癌旁组织(P＜0.05);TKTL1 mRNA的阳性表达率明显高于TKT和TKTL 2 mRNA的阳性表达率(P＜0.05),HCC中TKTL1 mRNA的表达率及表达量均明显高于癌旁组织(P＜0.05),且TKTL1 mRNA的表达同肿瘤分化程度,是否有静脉癌栓,肝内有无卫星灶以及5年生存情况有关(P＜0.05).结论:转酮醇酶在HCC的发生发展中起重要作用,而TKTL 1 mRNA的高表达是HCC转酮醇酶活性增高的主要原因.HCC中TKTL1 mRNA的高表达预示着肝癌的分化差,易于转移以及预后不佳.     

凋亡抑制因子survivin在肝细胞肝癌的表达及临床意义

目的:探讨survivin mRNA在肝细胞肝癌(HCC)及癌旁组织的表达及意义。方法:用逆转录聚合酶链反应测定32例HCC癌组织及癌旁组织中survivin mRNA的表达。结果:Survivin mRNA在HCC组织中高度表达,阳性率为65.6%,癌旁组织中未见表达,Survivin mRNA的表达与HCC门静脉癌栓发生密切相关(P<0.05),而与其它指标无明显差异。结论:Survivin mRNA高表达可以作为判断HCC侵袭性和进展的一个潜在重要指标。     

银杏叶对黄曲霉毒素B1诱发大鼠肝癌IGF-Ⅱ mRNA及蛋白表达影响的观察

目的:动态观察银杏叶提取物(EGb761)在抑制黄曲霉毒素B1 (AFB1)诱发大鼠肝癌(HCC)过程中对肝组织相关基因IGF-ⅡmRNA及蛋白表达水平的影响,从分子生物学水平揭示银杏叶抗癌的机制及其效果.方法:将70只4周龄Wistar雄性大鼠随机分为AFB1组(25只)、AFB1+ EGb761组(25只)及对照组(20只).在诱发大鼠HCC过程中,分别于第13周、33周及53周对大鼠进行肝组织活检；实验至第73用处死全部动物取肝组织.利用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法动态检测肝组织中IGF-ⅡmRNA及相应蛋白的表达情况.结果:AFB1组原发性HCC发生率为58.8％(10/17)；AFB1+EGb761组发生率为29.4％(5/17)；对照组为0(0/16).AFB1+EGb761组HCC发生率显著低于AFB1组(P＜0.05).AFB1+ EGb761组肝组织IGF-2 mRNA及相应蛋白表达水平在第53周及73周较AFB1组均显著下降,差异有统计学意义,P＜o.05.结论:银杏叶提取物(EGb761)具有抑制AFB1致大鼠HCC的作用.其机制可能与调控肝细胞增殖基因IGF-ⅡmRNA及蛋白表达水平有关.     

tktl1在肝细胞肝癌中的表达及临床意义

目的:研究转酮醇酶样基因1(tktl1)在肝细胞肝癌(HCC)中的表达及其与临床病理的关系.方法:RT-PCR法检测转酮醇酶基因家族各成员(tkt、tktl1、tktl2)mRNA在42例HCC及癌旁组织中的表达并研究其与临床病理参数间的关系.结果:HCC组织中tktl1 阳性表达率明显高于tkt和tktl2的阳性表达率 (P＜0.05).tktl1在HCC中的阳性表达率明显高于癌旁组织(P＜0.05);而 tkt和tktl2阳性表达率在肝癌及癌旁组织间无明显差异(P＞0.05). HCC中tktl1的高表达同肿瘤分化程度,静脉癌栓,CLIP评分有关 (P＜0.05),而与性别、年龄、肿瘤大小、肝内及淋巴转移、AFP水平无关(P＞0.05).结论:tktl1与HCC的发生发展有关,影响肝癌的分化、转移及患者预后,有望成为HCC治疗的新靶点.     

肝细胞癌组织AP-1和NF-κB蛋白表达临床意义的研究

目的:探讨转录因子激活蛋白1(AP-1)和核转录因子κB(NF-κB)在肝细胞癌(HCC)组织中的表达及其临床意义.方法:采用链菌素抗生物素-过氧化物酶法(SP)检测50例HCC组织和癌旁正常肝组织中AP-1和NF-κB的表达,并分析两者与HCC临床病理因素的关系.结果:HCC组织中AP-1(c-Jun/c-Fbs)和NF-κB阳性表达率均明显高于癌旁肝组织,差异有统计学意义,P＜0.01.Ac-Jun和c-Fos蛋白的表达与有无门静脉癌栓、淋巴结转移明显相关,P＜0.05.NF-B蛋白表达与病理分级明显相关,P＜0.05.HCC组织中AP1(c-Jun/c-Fos)和NF-κB表达呈正相关,r值分别为0.556和0.538,P值均＜0.01.结论:AP-1、NF-κB与HCC的发生有关,且在HCC的发生发展过程中起着不同程度的作用;NF-κB可能通过上调AP-1的表达和活性而促进HCC的浸润和转移.     

广西乙肝病毒/黄曲霉毒素B1双暴露人肝细胞癌中PTEN mRNA表达及突变的初步研究

目的探讨乙肝病毒/黄曲霉毒素B1双暴露相关肝细胞性肝癌(HCC)中PTEN基因的突变特点及其mRNA的表达水平。方法 108例HCC来自广西不同地区样本,按照乙肝病毒与黄曲霉毒素的暴露情况,分为4个亚组:A组:HBV(+)/AFB1-DNA(+),共48例;B组:HBV(+)/AFB1-DNA(-),共27例;C组:HBV(-)/AFB1-DNA(+),共19例;D组:HBV(-)/AFB1-DNA(-),共14例。采用PCR联合基因直接测序法,检测108例肝癌组织中PTEN基因第4、5、8外显子的突变情况。同时采用RT-PCR法检测其基因mRNA的表达状况。结果①PTEN基因第4、5、8外显子测序结果未发现发生在外显子上的突变。但在第4外显子与第4内含子交界处有61例发生大片段的缺失,缺失率为56.4%。②PTEN缺失率在A、B、C、D组中分别为60.4%、62.9%、47.3%和46.6%,其差异在4个亚组间均无统计学意义(P>0.05)。③PTEN mRNA在4个亚组中的表达半定量灰度值分别为:A组:0.54±0.13;B组:0.59±0.16;C组:0.97±0.16;D组:0.92±0.13。其中,A、B组分别与C、D组相比,其差异均具有统计学意义(PAC=0.002,PAD=0.032,PBC=0.000,PBD=0.011)。结论在广西乙型肝炎病毒/黄曲霉毒素B1的双暴露肝细胞癌中,PTEN mRNA的表达下调是一个常见的分子生物学事件,PTEN mRNA表达下调可能主要与HBV感染有关。AFB1对PTEN mRNA的表达下调可能有协同作用。     

凋亡抑制因子Survivin在肝细胞肝癌的表达及临床意义

目的:探讨Survivin蛋白表达与肝细胞肝癌(HCC)临床病理特征相关性及临床意义.方法:应用链霉菌抗生物素-过氧化物酶免疫组织化学法(SP法),检测67例HCC中Survivin、血管内皮生长因子(VEGF)的蛋白表达.结果:67例肿瘤组织中35例Survivin呈阳性表达,阳性率为52.2%.肿瘤组织表达阳性率高于癌旁组织(P＜0.05).Survivin的表达与HCC肿瘤镜下门静脉癌栓发生密切相关(P＜0.05).VEGF阳性表达者为41例,阳性率为61.1%.VEGF的表达与HCC肿瘤大小、门静脉癌栓发生以及肿瘤TNM分期密切相关(P＜0.05).应用Kaplan-Meier法制作累积生存曲线并经Long-rank检验,结果显示Survivin表达阳性与阴性组患者术后累积生存率有显著性差异(P=0.0018).结论:HCC中Survivin、VEGF蛋白表达上调,Survivin和VEGF均与HCC门静脉癌栓发生密切相关.HCC患者Survivin表达者预后不良,应密切随访.     

erbB家族在肝细胞癌中的表达及临床意义

目的:探讨erbB家族在肝细胞癌(HCC)组织中的表达及其意义.方法:采用免疫组化SP法检测55例HCC患者癌组织及癌旁组织中erbB家族中表皮生长因子受体(EGFR)、C-erbB-2、C-erbB-3、C-erbB-4的表达情况.结果:55例HCC患者癌组织及癌旁组织中,EGFR阳性表达率分别为58.18%(32/55)和36.36%(20/55),两者差异有显著性(P＜0.05);C-erbB-4阳性表达率分别为47.27%(26/55)和72.73%(40/55),两者差异有显著性(P＜0.05);而C-erbB-2、C-erbB-3在癌组织及癌旁组织中阳性表达率差异无显著性(P＞0.05).EGFR在HCC组织中的阳性表达率与临床分期、门静脉癌栓、肝外转移、术后复发等有关,C-erbB-2、C-erbB-3、C-erbB-4阳性表达率与各临床病理参数无关.结论:EGFR与肝癌的发生、发展有关,可作为HCC预后不良的参考指标;C-erbB-2及C-erbB-3可能与肝癌的发生、发展无关,而C-erbB-4低表达可能与HCC的发生有关.     

胸腺素β10在肝细胞癌中的表达及其临床意义

目的 探讨人肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)患者组织胸腺素β10 (Thymosin beta-10,Tβ10) mRNA的表达及其临床意义.方法 采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测70例HCC患者癌组织、癌旁肝组织及18例正常肝组织中Tβ10 mRNA的表达情况,分析Tβ10 mRNA表达水平与肝癌患者的临床分期、有无术后复发、有无肝外转移、有无门静脉癌栓、肿瘤个数、肿瘤直径、血清AFP水平和病理分级等指标的关系.结果 Tβ10 mRNA在正常肝组织(1.30±0.53)及癌旁肝组织(1.21±0.50)中的表达水平明显高于在HCC组织(1.01±0.41)中的表达水平(P＜0.05),而在正常肝组织及癌旁肝组织中的表达水平差异无统计学意义(P＞0.05).Tβ10 mRNA在人HCC组织中的表达与门静脉癌栓、肿瘤个数及肿瘤直径明显相关(P＜0.05),而与临床分期、肝外转移及术后复发、血清AFP 水平及分化程度无明显关系(P＞0.05).结论 Tβ10 mRNA在HCC组织中低表达,可能与HCC的发生、发展的早期阶段有关.     

大鼠实验性肝癌发生过程中存活素基因表达的动态观察

目的动态观察大鼠实验性肝细胞肝癌(HCC)不同发生发展阶段中存活素(survivin)基因的表达状态。方法采用免疫组织化学法和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法,检测大鼠HCC不同时期survivin的表达。结果黄曲霉毒素(AFB1)诱发大鼠HCC形成的最早时间在第46周,46周后,实验组存活的大鼠HCC发生率为54.9%(28/51),58周存活的大鼠HCC发生率为64.9%(24/37)。实验组HCC、癌旁肝组织survivin蛋白阳性率分别为41.7%和54.2%,两者差异无统计学意义(P>0.05)。而相应的大鼠,在46周之前及无肿瘤形成的大鼠和正常对照组无survivin蛋白表达。58周时,大鼠HCC中survivin mRNA的表达水平明显高于同期无肿瘤形成大鼠和正常对照肝组织(P均<0.01);相应癌旁肝组织亦明显高于同期无肿瘤形成大鼠和对照肝组织(P均<0.01);HCC与癌前活检肝组织比较,差异有统计学意义(P<0.01)。12、20、36和46周时,有肿瘤形成大鼠活检肝组织与正常对照组大鼠同期活检肝组织比较,survivin mRNA表达差异均有统计学意义(P均< 0.01)。结论survivin基因在HCC组织中高表达,提示该基因对HCC的发生发展起重要作用,检测HCC组织中survivin基因的表达,可能对HCC诊断有参考价值。     

肝癌及相关组织中NET-1基因与蛋白的表达

背景与目的:NET-1是最近发现的肿瘤相关基因,它在肝癌中的表达目前尚未见报道。本研究在胚胎肝、成人肝、肝癌及相应的癌旁组织中筛检和比较NET-1基因和蛋白表达,以探讨NET-1基因在肝癌表达的特征。方法:用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)分别检测3例胚胎肝、4例成人肝、4例验证肝癌组织和28例肝癌与相应癌旁组织中NET-1mRNA的表达,由四星图像分析系统软件检测NET-1基因mRNA的光密度。用基因生物工程方法制备NET-1多克隆抗体,并用激光共聚焦显微镜观察免疫荧光细胞化学检测培养的人肝癌细胞系SMMC-7721中NET-1抗体的表达,免疫组化法检测28例肝癌与癌旁组织中NET-1蛋白的表达。结果:(1)正常成人和胎儿肝组织中NET-1基因mRNA不表达,4例验证肝癌组织中NET-1基因mRNA均呈阳性表达;肝癌与癌旁组织中NET-1基因mRNA高表达,阳性率均为85.71%(24/28)。肝癌组织中NET-1mRNA的平均光密度显著高于癌旁组织(0.64与0.47,P<0.05)。(2)经激光共聚焦显微镜观察SMMC-7721细胞中NET-1抗体的表达定位于胞浆。(3)免疫组化检测NET-1多克隆抗体在同组肝癌和癌旁组织中NET-1蛋白检出率分别为96.43%(27/28)和71.43%(20/28),两者差异具有显著性意义(P<0.05)。(4)RT-PCR方法和免疫组化方法检测肝癌和癌旁组织中NET-1基因mRNA表达与蛋白表达两者之间阳性率无显著性差异,并呈显著性正相关(癌中r=0.48,癌旁r=0.40,均P<0.05)。结论:NET-1基因表达可能是肝癌发生的早期分子事件,该基因在肝癌诊断中可能有一定的参考价值。     

EGF mRNA和EGFR mRNA在肝细胞癌组织中的表达及其意义

背景和目的有众多证据表明表皮生长因子受体(epidermalgrowthfactorreceptor,EGFR)家族在一系列恶性肿瘤的发生发展中起重要作用,但EGFR与肝癌的关系目前尚未明确。本文旨在探讨表皮生长因子(epidermalgrowthfactor,EGF)及其受体的mRNA在人肝细胞癌(hepatocellularcarcinoma,HCC)组织中的表达及其意义。方法用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测60例HCC患者癌组织及癌旁肝组织中EGFmRNA和EGFRmRNA的表达情况。结果EGFmRNA阳性率在肝癌组织中(60%,36/60)显著低于癌旁组织(80%,48/60)(P<0.05);EGFRmRNA阳性率在肝癌组织中(60%,36/60)显著高于癌旁组织(41.67%,25/60)(P<0.05)。EGFRmRNA在肝癌组织中的检出率与临床分期、门静脉癌栓、肝外转移、术后复发、肿瘤数目等明显有关,而与肿瘤直径、血清AFP水平、分化程度以及癌旁肝硬化无明显关系。EGFmRNA检出率与肿瘤直径明显有关,而与临床分期、门静脉癌栓、肝外转移、术后复发、肿瘤数目、血清AFP水平、分化程度以及癌旁肝硬化等无明显关系。结论本研究结果提示EGF可能与肝癌的发生、发展无关;而EGFR与肝癌的发生、发展及术后复发有关;可作为预测肝癌复发、转移的参考指标。     

HHLA2在肝细胞癌组织中的表达及其临床意义

目的:探讨人内源性逆转录病毒-H长末端重复关联蛋白2(human endogenous retrovirus subfamily H long terminal repeat associating protein 2,HHLA2)在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织中的表达及其与...     

核因子-κB和nm23-H1在肝细胞肝癌中的表达及其意义

目的探讨核因子NF-κB和转移抑制基因nm23-H1在肝细胞癌（HCC）组织的表达情况及与临床病理特征的关系。方法采用免疫组织化学方法检测41例HCC中NF-κB和nm23-H1的表达情况，以相应癌旁肝组织、肝硬化组织（10例）、肝血管瘤旁正常肝组织（11例）作对照，并分析其与病理特征的关系。结果NF-κB蛋白在41例HCC组织中阳性28例，表达率为68．3％；41例相应癌旁肝组织中有5例表达，阳性率12．2％，10例肝硬变组织中1例表达，11例正常肝组织未见表达，HCC与非癌组织中NF-κB蛋白的表达差异有统计学意义（χ^2=41．1，P〈0．01）；NF-κB的表达与HCC的临床病理特点无显著相关性。nm23-H1蛋白在41例HCC组织中14例为阳性染色，27例为阴性染色。nm23-H1阴性表达与肝被膜浸润和门静脉浸润显著相关（χ^2=4．16，χ^2=4．19，P均〈0．05）。结论NF-κB可能参与了HCC的发生、发展，可望作为基因治疗的靶点。nm23-H1在HCC中的阴性表达与HCC的恶性生物学特征相关，可能表明肿瘤的预后不良。     

肝细胞肝癌中survivin与p53蛋白的表达及相关性

目的:研究survivin与突变型p53基因在原发性肝细胞肝癌(hepatocellularcarcinoma,HCC)中的表达和意义并探讨其相关性。方法:采用免疫组化SP法检测67例HCC组织、13例癌旁组织和17例正常肝组织中survivin和p53的表达。结果:HCC组织中survivin与p53表达阳性率分别为71.6%(48/67)和58.2%(39/67)。HCC组织中survivin与p53的阳性表达率高于癌旁组织及正常肝组织(P<0.05)。survivin与p53基因的表达与肿瘤的侵袭转移相关(P<0.05)。在HCC中survivin与p53基因的表达显著相关(r=0.340,P=0.005)。结论:survivin的过度表达和p53的突变可能在HCC的发生和发展中起重要作用。