氯沙坦对大鼠动脉损伤后平滑肌细胞凋亡和增殖的影响

目的:观察氯沙坦对大鼠颈动脉损伤后平滑肌细胞凋亡和增殖的影响。探讨其临床预防经皮冠状动脉成形术后再狭窄的可行性。方法:将42只雄性Wistar大鼠随机分为氯沙坦组(n=21)及对照组(n=21),均行左侧颈总动脉球囊剥脱损伤血管内皮模型,术后不同时间取损伤段血管研究,两组病理切片均进行苏木精-伊红染色及计算机图像分析,Tunnel标记法检测平滑肌细胞调亡率,增殖细胞核抗原(PCNA);免疫组化法检测平滑肌细胞增殖率。结果:对照组和氯沙坦组于术后7d、14d均可见损伤段血管壁面积增加,其中对照组为0.3435±0.0450mm2和0.3812±0.0517mm2,而氯沙坦组为0.2822±0.0368mm2和0.3207±0.0243mm2。相同时间段两组比较,氯沙坦管壁增生程度较对照组显著降低(P<0.05),术后7d、14d氯沙坦组的平滑肌细胞细胞调亡率显著高于对照组(P<0.05),而术后7d、14d氯沙坦组增殖细胞阳性率显著低于对照组(P<0.05)。结论:血管紧张素受体拮抗剂氯沙坦可以通过促进平滑肌细胞调亡,抑制其增殖;减轻血管损伤早期的管壁重塑。     

氯沙坦对大鼠颈动脉损伤后血管内膜增生及核转录因子κB活性的影响

①目的探讨氯沙坦对大鼠动脉损伤后血管内膜增生及核转录因子κB活性的影响。②方法将42只雄性Wistar大鼠随机分为氯沙坦组(n=21)及对照组(n=21),均行左侧颈总动脉球囊剥脱损伤内皮模型,术后不同时间取损伤段血管行组织形态学观察及应用免疫组织化学方法分析核转录因子κB的表达。③结果氯沙坦组损伤段血管新生内膜面积和厚度明显较对照组减少(P<0.01,P<0.05),同时新生内膜中核转录因子κB的表达明显较对照组减少(P<0.05)。④结论血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂氯沙坦可以通过下调血管壁平滑肌细胞的核转录因子κB活性,从而抑制新生内膜的形成。     

肺纤维化鼠细胞凋亡及Fas/Bcl-2动态变化

目的 探讨细胞凋亡及Fas/Bcl-2在肺纤维化发病中的作用. 方法 选取SD大鼠48只,随机分为对照组、模型组,每组各24只,应用博莱霉素(5 mg/kg)气管内注入建立实验性大鼠肺纤维化模型,对照组注入等量生理盐水,各组动物于7、14、28天随机处死8只,取肺组织采用HE染色观察病理变化,TUNEL法检测肺组织细胞凋亡、RT-PCR和免疫组织化学法分别检测肺组织Fas/Bcl-2 mRNA以及蛋白的表达. 结果 实验性大鼠肺纤维化发病过程中,呈现典型的肺泡炎(7天)、肺泡炎与纤维化并存(14天)及稳定的肺纤维化(28天)等表现;同时间段模型组肺组织细胞凋亡指数、Fas mRNA及蛋白表达均显著高于对照组(P＜0.01).Bcl-2 mRNA及蛋白表达显著低于对照组(P＜0.01);模型组细胞凋亡从7天开始逐步升高,第28天达最高峰,Fas蛋白与Fas mRNA表达趋势与细胞凋亡相同;模型组Bcl-2蛋白与Bcl-2 mRNA表达在第7天开始下降,第14天达最低峰,第28天略有回升(P＜0.05),但仍低于对照组(P＜0.01). 结论 肺泡及支气管上皮细胞凋亡与肺纤维化的形成有关,可能是肺纤维化的发病机制之一;Fas mRNA及蛋白表达上调和Bcl-2 mRNA及蛋白表达下调,可能引起肺上皮细胞的凋亡从而导致肺纤维化增生.     

心肌细胞凋亡与急性心脏移植排斥的关系

目的：探讨心肌细胞凋亡,Fas蛋白,FasL蛋白表达与心脏移植急性排斥的关系。方法：利用大鼠腹腔异位心脏移植模型。实验组为异基因心脏移植,供体为Wistar大鼠,受体为SD大鼠。对照组为同基因心脏移植,供体与受体均为SD大鼠,设立4个观察点,分别为术后第1,3,5,9天,每个观察点7只动物,应用免疫组化法检测心肌组织Fas蛋白,FasL蛋白的表达,应用3－原位末端标记法（TUNEL法）检测凋亡心肌细胞。结果：（1）实验组移植心肌术后第3天即有一定量TUNEL阳性心肌细胞,术后第5天TUNEL阳性心肌细胞数达高峰,持续至术后第9天,对照组心肌检测到极少量的TUNEL阳性细胞。（2）术后第5,9天标本,实验组检测到大量FasL阳性心肌浸润细胞。（3）实验组与对照组心肌都检测到大量Fas阳性信号。结论：（1）心肌细胞凋亡是心脏移植排斥心肌细胞死亡的一种方式。（2）心脏移植排斥时同时检测到了Fas蛋白,FasL蛋白,TUNEL（＋）心肌细胞,可能是表达FasL的心肌浸润细胞诱导Fas阳性心肌细胞凋亡,介导移植排斥。     

大鼠胸主动脉球囊损伤后早期平滑肌细胞凋亡观察

目的探讨大鼠胸主动脉球囊损伤后早期细胞凋亡和凋亡相关基因表达的变化及其规律。方法将36只雄性SD大鼠随机分为两组,手术组（n=30）行球囊扩张损伤大鼠胸主动脉术;对照组（n=6）不行球囊损伤。取正常及损伤术后即刻、30min、1h、2h、4h胸主动脉,应用苏木精-伊红染色、TUNEL法、免疫组化和计算机图像分析等方法进行形态学观察,进行细胞凋亡、凋亡基因Fas、抗凋亡基因Bcl-2表达水平检测。结果正常大鼠胸主动脉管腔面有单层完整内皮细胞,内外弹力层呈波浪形,完整连续;手术组球囊损伤后可见内弹力层模糊,多处断裂,管腔面毛糙无内皮细胞;损伤后4h中膜平滑肌细胞密度较对照组减少。对照组、手术组损伤后即刻胸主动脉偶见凋亡细胞;手术组球囊损伤后30min,管壁中膜可见大量凋亡平滑肌细胞,损伤后1、2h中膜凋亡细胞明显减少,损伤后4h中膜仅偶见凋亡细胞。对照组、手术组动脉损伤后即刻胸主动脉偶见Fas阳性平滑肌细胞,球囊损伤后30min中膜可见大量Fas阳性细胞,损伤后1、2h中膜Fas阳性细胞明显减少,动脉损伤后4h仅偶见Fas阳性平滑肌细胞。对照组动脉壁显著表达Bcl-2,手术组胸主动脉中膜Bcl-2表达迅速下降,损伤后1h达最低水平,后回升。Bcl-2与Fas表达呈负相关（r=-0.816,P〈0.01）。结论平滑肌细胞凋亡可能在动脉损伤后平滑肌细胞过度增殖和迁移过程中具有重要作用。     

Fas抗原及Bax蛋白介导的凋亡在脊髓继发性损伤中的作用

目的：观察脊髓损伤模型中Fas／FasL信号传导系统及Bax蛋白所介导的凋亡过程在SCI继发损伤阶段的作用。方法：Wistar大鼠按Allen法建立脊髓损伤模型，分别在术后1h，8h，2d，3d，7d（n=5）处死取材。分别在每只大鼠脊髓损伤中心区，损伤区头尾3、5、7、10、13mm横截面处各切取3片组织．分别作Bax蛋白，Fas抗原免疫组化，TUNEL法检测凋亡细胞，电镜下观察细胞的超微结构的改变。正常Wistar大鼠作为对照组．分别进行以上各项实验检查。结果：Fas抗原在损伤后8-24h．损伤区头尾侧7mm处出现表达高峰。Bax蛋白在损伤后2-3d．损伤区头尾侧7mm处出现高峰。TUNEL阳性细胞在脊髓损伤2d后在损伤区头尾侧7mm处出现表达高峰，然后逐渐下降。电镜观察：损伤区死亡细胞呈坏死典型表现。而在非损伤区死亡细胞呈凋亡的典型表现。对照组：Bax蛋白．Fas抗原免疫组化均为阴性，未发现TUNEL阳性细胞。结论：证实了Fas／FasL信号传导系统及Bax蛋白介导的凋亡在脊髓继发性损伤中起重要的作用。     

L-精氨酸调节大鼠低氧性肺血管结构重建与肺动脉平滑肌细胞凋亡

目的:探讨L-精氨酸(L-arginine,L-Arg)对低氧性肺血管结构重建大鼠肺动脉平滑肌细胞凋亡的影响及其机制.方法:将17只Wistar大鼠随机分为对照组(n=7)、低氧组(n=5)和低氧+L-Arg组(n=5).对大鼠肺血管进行显微形态学观测.通过末端转移酶介导的dUTP切口末端标记法(TUNEL)检测肺动脉平滑肌细胞凋亡,并以免疫组织化学方法研究肺动脉平滑肌细胞Fas表达.结果:低氧2周后出现大鼠肺血管结构重建.同时,肺中、小型动脉凋亡平滑肌细胞百分数均明显低于对照组(P均＜0.05),平滑肌细胞Fas表达明显降低.然而,L-Arg缓解了低氧性肺血管结构重建的形成.低氧+L-Arg组大鼠肺中、小型动脉凋亡平滑肌细胞百分数均明显高于低氧组(P均＜0.05).L-Arg使低氧大鼠肺动脉平滑肌细胞Fas表达明显增强.结论:L-Arg通过使肺动脉平滑肌细胞Fas表达上调,促进肺动脉平滑肌细胞的凋亡,从而对低氧性肺血管结构重建有重要的调节作用.     

阿魏酸钠对球囊损伤大鼠颈总动脉血管内膜增生的影响

目的 :研究阿魏酸钠对球囊损伤大鼠颈总动脉内膜增生的影响。方法 :制作球囊损伤的大鼠颈总动脉内膜增生模型 ,Wistar雄性大鼠 15只随机分为①对照组 (n =7)腹腔内注射生理盐水 (4ml/d)。②阿魏酸钠治疗组 (n =8)腹腔内注射融于生理盐水的阿魏酸钠 (2 0 0mg/d) ,球囊损伤 14d后 ,损伤区域的血管段取材固定后 ,分析血管断面组织形态学的变化 ;免疫组化方法观察增殖细胞核抗原 (PCNA)阳性细胞以了解血管壁细胞的增殖情况。结果 :阿魏酸钠可明显减少新生内膜面积 ,增加管腔面积 ,抑制平滑肌细胞的增殖。结论 :阿魏酸钠具有抑制血管内膜增生的作用。     

Fas系统介导的细胞凋亡与桥本氏甲状腺炎关系的研究

目的:为了研究Fas/FasL介导的细胞凋亡在桥本氏甲状腺炎发病机制中的作用,评价其在治疗中的意义.方法:采用流式细胞仪、双抗体夹心ELISA法及免疫组化方法分别测定桥本氏甲状腺炎(HT)及正常时照组外周血T淋巴细胞Fas抗原表达情况,血浆中sFas水平及甲状腺腺泡细胞Fas抗原及Fas配体的表达情况.结果:发现HT组甲状腺细胞Fas和FasL表达强度显著高于正常对照组(P<0.01),血浆sFas水平(2.05ng/ml±0.54ng/ml)明显低于正常组(3.59ng/ml±0.68ng/ml,P<0.001),HT外周血T淋巴细胞Fas抗原阳性细胞数(79.99％±16.08％)显著高于正常对照组(57.22％±11.57％,P<0.001).结论:Fas系统介导的细胞凋亡与桥本氏甲状腺炎发病密切相关。     

血管紧张素Ⅱ受体Ⅰ阻滞剂抑制血管平滑肌细胞增殖、迁移的实验研究

目的:观察血管紧张素Ⅱ受体Ⅰ阻滞剂Valsartan对家兔颈动脉球囊损伤模型动脉中膜血管平滑肌细胞增殖、迁移的抑制作用。方法:健康家兔制作颈动脉球囊损伤模型,随机分为对照组(n=10)和Valsartan治疗组(n=10),治疗组术后予Valsartan喂食,10mg/(kg·d),共10天,对照组正常喂食。各组动物术前和术后3天、1、2、4、8周留取静脉血,放免法检测内皮素(ET-I);术后4、8周每组随即处死动物5只,HE染色、原位标记凋亡细胞(TUNEL)和增殖细胞核抗原(PCNA)免疫组化染色,应用光学显微镜和计算机图像分析系统对切片进行图像分析。结果:术后3天、1、2、4、8周治疗组血浆ET-1水平低于对照组(P<0.01);术后4周和8周治疗组血管壁平滑肌细胞凋亡率高于对照组,PCNA阳性率低于对照组(P<0.05);动脉内膜、中膜厚度和面积小于对照组(P<0.01);残余管腔面积大于对照组(P<0.01)。结论:血管紧张素Ⅱ受体Ⅰ阻滞剂Valsartan可以抑制内膜受损动脉中膜平滑肌细胞增殖和向内膜迁移,并促进其凋亡,预防受损动脉内膜过度增生,管腔狭窄。     

血管支架置入术后细胞凋亡的实验研究

目的 观察血管支架置放术后不同时间段血管壁增殖与细胞凋亡的变化过程.方法 对16只家兔进行颈动脉内膜损伤及支架置放术.于术后即刻、7、14、28 d,4个时间点处死.处死后取出支架部位及球囊损伤部位颈动脉血管段,进行细胞增殖与凋亡检测,包括电镜检查,病理切片HE染色及免疫组化分析细胞增殖核抗原(PCNA),Western印迹检测凋亡相关基因p53、bcl-2.结果 HE染色显示内膜损伤及支架置入血管在各时间点,血管壁全层均表现轻度不均匀增厚.PCNA在支架置入组与内膜损伤组都表现为术后即刻为阴性,术后7 d为阳性表达,术后14 d表达最强,术后28 d表达为阴性;正常血管PCNA表达为阴性.电镜检查,内膜损伤及支架置放术都表现为较多胶原基质及纤维,细胞成分较多,可见含丰富分泌颗粒的细胞,可见吞噬细胞,术后28 d标本可见凋亡的成纤维细胞.凋亡相关基因表达:p53,正常颈动脉组织可见p63表达;支架组术后即刻可见表达,术后7 d表达减弱,术后14 d表达可见,术后28 d表达最强;内膜损伤组术后即刻、术后7 d均较弱,术后14 d表达稍有增加,术后28 d表达最强;bcl-2,正常颈动脉组织未见表达;支架组术后即刻未见表达,术后7 d表达增强,术后14 d及术后28 d未见表达;内膜损伤组术后即刻未见表达,术后7 d表达增强,术后14 d有微量表达,术后28 d未见表达.结论 血管支架置入术后可见异常的凋亡现象,术后早中期细胞增殖活性较高,后期出现细胞凋亡从而抑制细胞的增殖.     

芍药苷抑制FasL诱导的Fas/FasL信号转导通路的实验研究

目的探讨芍药苷对Fas配体（FasL）诱导大鼠颈椎间盘纤维细胞的Fas/FasL信号转导通路的影响。方法采用1月龄SD大鼠（雌雄不拘）的颈椎间盘纤维环,采用酶消化法,建立椎间盘纤维环细胞体外培养。传至3代纤维环细胞,建立FasL诱导体外培养纤维环细胞凋亡模型。实验中,将细胞随机分为空白组、模型组和药物组,模型组应用适宜浓度的Fas配体（FasL）诱导其凋亡,药物组在FasL诱导的同时给予适宜浓度芍药苷培养液干预。Annexin V/FITC法检测细胞凋亡率,分别鉴定模型复制情况及观察芍药苷保护作用;荧光定量PCR技术检测Fas、Caspase-3、Caspase-8基因表达水平。结果药物组纤维环细胞的凋亡率明显低于模型组（P〈0.01）,药物组的Fas、Caspase-3、Caspase-8凋亡因子基因的表达明显低于模型组（P〈0.01）。结论芍药苷可通过下调纤维环细胞的Fas、Caspase-3、Caspase-8的基因表达,抑制Fas/FasL信号转导通路,从而降低纤维环细胞的凋亡率。     

牛磺酸对大鼠心肌缺血再灌注损伤心肌细胞凋亡的影响

目的　探讨牛磺酸对缺血再灌注损伤时心肌细胞凋亡的保护及初步机制。方法　采用在体结扎大鼠冠状动脉左前降支建立心肌缺血再灌注模型。以TUNEL法检测心肌凋亡细胞 ,免疫组化法分析心肌细胞Fas/FasL、Caspase 8及Caspase 3蛋白表达变化。荧光分析法测定Caspase 3活性。结果　凋亡组 (心肌缺血 1h ,再灌注 2 4h)心肌细胞凋亡指数为 (16 .3± 4 .5 2 ) ,较对照组 (0 .4 3± 0 .0 4 )有显著性升高 ,Fas/FasL及Caspase 3蛋白水平也均显著高于正常对照组 (P <0 .0 5 )。牛磺酸保护组的心肌细胞凋亡指数、Fas/FasL、Caspase 3蛋白水平及Caspase 3活性均显著性低于凋亡组。结论　牛磺酸对缺血再灌注损伤心肌细胞凋亡有较好的拮抗作用 ,其机制可能与降低Fas死亡受体通路中相关蛋白酶水平及其活性有关。     

脑脉通联合骨髓干细胞动员对脑缺血大鼠神经细胞凋亡相关蛋白Fas、FasL及caspase-3表达的影响

目的：观察脑脉通联合骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cell, BMSC）动员对脑缺血大鼠神经细胞凋亡和凋亡相关蛋白Fas、FasL及半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶3（caspase-3）表达的影响。 方法：202只SD大鼠分为假手术组、模型组、人重组粒细胞集落刺激因子（recombinant granulocyte colony-stimulating factor, rG-CSF）组、脑脉通组和脑脉通联合rG-CSF组（联合组）。采用改良线栓法阻塞大鼠大脑中动脉制备局灶性脑缺血动物模型。rG-CSF组和联合组大鼠分别于术前3 d和术后2 d皮下注射10 μg/（kg·d） rG-CSF,脑脉通组和联合组灌胃脑脉通。术后早期（2 d和3 d）和后期（7 d和14 d）观察大鼠神经功能变化;腹主动脉取血,流式细胞仪测定外周血CD34阳性细胞数量;原位末端标记法观察神经细胞凋亡情况;免疫组织化学法检测脑组织CD34、caspase-3、Fas和FasL蛋白表达情况。 结果：模型组大鼠外周血和脑组织CD34阳性细胞增加,分别于3 d和7 d时达到峰值;各治疗组尤其联合组脑组织CD34表达增强明显。各模型组大鼠神经功能评分降低,rG-CSF组7 d和14 d时的神经功能评分增加,联合组较rG-CSF组的变化显著。模型组脑组织2、3和7 d时的Fas、FasL及caspase-3蛋白表达增强;rG-CSF组2 d时FasL,各联合组Fas、FasL及caspase-3表达均减弱;联合组7 d和14 d时的Fas、FasL及caspase-3表达较rG-CSF组减弱;各实验组14 d时Fas、FasL及caspase-3表达较3 d时减弱。 结论：脑脉通和BMSC动员在改善大鼠脑缺血中、后期神经功能和抑制细胞凋亡方面存在交互效应,其作用可能与脑脉通使BMSC动员后早期的Fas和FasL表达下调,以阻抑caspase-3引起的凋亡瀑布反应,进一步抑制促凋亡基因Fas和FasL的表达有关。     

氯沙坦对血管损伤后再狭窄大鼠血浆内皮素含量及动脉平滑肌细胞中血小板源生长因子表达的影响

目的观察氯沙坦对颈总动脉损伤后再狭窄大鼠血浆内皮素(ET)和颈总动脉平滑肌细胞(SMC)中血小板衍生生长因子(PDGF)表达的影响。方法采用大鼠颈总动脉挤压术制备再狭窄模型,设假手术组、手术组和氯沙坦组,每组10只。观察颈总动脉形态学变化,放射免疫法测定血浆ET含量,免疫组织化学法观察颈总动脉PDGF-B的表达。结果假手术组颈总动脉各层结构正常、清晰,无明显血管平滑肌细胞增殖;手术组大鼠颈总动脉SMC大量增殖,内膜显著增厚;氯沙坦组SMC增殖程度降低。与假手术组比较,手术组大鼠血浆ET含量显著升高(P<0.01),颈总动脉SMC中PDGF-B表达显著增强(P<0.01);与手术组比较,氯沙坦组大鼠血浆ET含量与PDGF-B表达显著下降(P<0.05)。结论ET、PDGF参与血管再狭窄的形成,氯沙坦可通过降低ET含量与PDGF-B表达实现抗再狭窄的作用。     

Neurocyte Apoptosis and Expressions of Caspase-3 and Fas after Spinal Cord Injury and Their Implication in Rats

Spinal cord injury (SCI) is a serious injury com-monly seen in surgical patients, for which there is no established treatment available at present. After spinal injury, neurocytes and tissues undergo necrosis and apoptosis. Apoptosis is a complex pathophysilogical process, mainly involving protease cascade mediated by the members of caspase family, among which caspase-3 plays a key role. Caspase-3 (CPP32) belongs to the cystine-aspartic proteinase family and plays the central role in the exe…     

粒细胞集落刺激因子对兔髂动脉球囊损伤后内膜修复和增生的影响

目的探讨重组人粒细胞集落刺激因子（rhG-CSF）对兔髂动脉球囊损伤后再内皮化和内膜增生的影响。方法将制模成功的56只新西兰大白兔随机分为2组,观察组皮下注射rhG-CSF 30μg/（kg.d）,7 d后经颈动脉行左髂总动脉球囊导管拉伤,术后14 d用伊文氏蓝染色、HE染色、免疫组织化学方法,观察血管再内皮化、新生内膜增厚及细胞增殖情况;对照组用生理盐水代替rhG-CS,其余同观察组。结果造模14 d后,观察组的内膜再生面积（An）和内膜损伤总面积（At）比值明显高于对照组[（68.60±6.25）%vs（46.60±3.36）%,P〈0.01];内膜厚度（Ti）/中膜厚度（Tm）比值明显低于对照组（1.53±0.14 vs 2.43±0.15,P〈0.01）。结论内皮前体细胞动员剂rhG-CSF能显著促进血管损伤后内皮化,有效抑制了支架内再狭窄的发生。     

辛伐他汀对单肾切除糖尿病老龄鼠肾组织Fas/Fas-L基因表达的影响

目的:探讨辛伐他汀对单肾切除糖尿病老龄SD大鼠肾脏凋亡相关基因Fas/Fas-L表达的影响.方法:单肾切除老龄SD大鼠分为肾切除对照组(C组)、糖尿病模型组(D组)、糖尿病辛伐他汀治疗组(S组).12周后采用原位末端标记法检测各组肾组织细胞凋亡指数,使用实时荧光定量PCR和免疫荧光法,从转录和翻译水平观察各组大鼠肾皮质中凋亡相关基因Fas及Fas-L的变化规律.结果:D组相对C组细胞凋亡指数、Fas及Fas-L的蛋白表达水平和相对应的mRNA拷贝数均明显增高,S组相对D组减弱(P<0.05),Fas、Fas-L蛋白主要在肾小管表达.结论:Fas及Fas-L系统与DN发生发展相关,辛伐他汀可在分子水平调控Fas及Fas-L基因的转录和翻译,抑制细胞凋亡,发挥肾脏保护作用.     

FAS系统和p27蛋白在膀胱移行细胞癌中的表达及临床意义

目的:探讨FAS/FASL系统及p27蛋白与膀胱移行细胞癌分级分期,复发多发的关系.方法:采用SP免疫组织化学染色方法检测50例膀胱移行细胞癌,以及15例正常膀胱黏膜组织病理切片FAS,FASL,p27的表达.结果:FAS/FASL和p27在膀胱癌中表达与正常膀胱黏膜表达有差异性.FAS,p27的表达在高分级膀胱癌中降低明显,FAS的表达在高分期肿瘤中降低明显.结论:FAS/FASL介导的细胞凋亡在膀胱癌中受到抑制,p27限制性调节细胞周期进程的作用在膀胱癌中受到破坏.FAS,p27可作为评价膀胱癌恶性程度的参考指标.FAS表达还与膀胱癌侵袭性相关.