肿瘤坏死因子凋亡诱导配体诱导膀胱癌EJ细胞凋亡的研究

目的 探讨肿瘤坏死因子凋亡诱导配体(TRAIL)诱导膀胱癌细胞凋亡的效应。方法 10～100μg／L梯度浓度的TRAIL与培养的EJ细胞共孵育4～24h。采用Annexin V染色，DNA云梯实验和流式细胞技术检测诱导后EJ细胞凋亡发生的时期和程度。结果 TRAIL诱导4h即后可观察到早期细胞凋亡发生，8h后即可检测DNA片段化，24h后凋亡细胞最多达到66．29％。结论 TRAIL能够迅速诱导EJ细胞凋亡，可能成为膀胱癌治疗的新方法。     

γ-干扰素加强肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体抑制胆管癌细胞的作用

目的　探讨肿瘤坏死因子 (TNF)相关凋亡诱导配体 (TRAIL)对人胆管癌的作用及γ 干扰素 (IFN γ)对TRAIL抗瘤活性的影响。方法　应用透射电镜、琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪 (FCM ) ,研究TRAIL对人胆管癌细胞的抑制作用及IFN γ对TRAIL抗瘤活性的影响。结果　透射电镜和DNA琼脂糖凝胶电泳可见到典型细胞凋亡特征。FCM分析显示 :浓度为 0、1、10、10 0、10 0 0 μg/L的TRAIL 2 4h引起QBC93 9细胞的凋亡率分别为 (1.66± 0 .73 ) %、(8.83± 0 .5 4) %、(2 2 .3 0± 0 .64 ) %、(4 2 .5 0± 0 .47) %、(4 9.0 6± 0 .72 ) % ,与对照组比较差异有显著性 (P <0 .0 1)。IFN γ与TRAIL 10 0 μg/L联合应用 ,当IFN γ浓度大于 5 0U /ml或 10 0U /ml时 ,IFN γ作用时间超过 2 4h分别与单用TRAIL组比较 ,明显加强QBC93 9细胞凋亡 (P <0 .0 1)。结论　TRAIL通过诱导胆管癌细胞凋亡而起到抑癌作用 ,IFN γ能加强TRAIL诱导胆管癌细胞的凋亡。     

转染肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体对膀胱癌细胞的抑制作用

目的探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）对膀胱癌细胞的抑制作用。方法构建TRAIL融合增强绿色荧光蛋白（EGFP）真核表达载体，脂质体法转染膀胱癌细胞株玎细胞。荧光显微镜下计算转染率。分别采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）、Western blot检测TRAIL的表达。采用流式细胞仪检测细胞凋亡，噻唑蓝（MTT）法、细胞倍增时间和集落形成率观察TRAIL的抑制作用。结果48h观察重组载体转染率为38．4％，空载体转染率为35．3％（P〉0．05）．RT-PCR和Western blot证实转染后EJ细胞中TRAIL的表达明显增加；凋亡率明显高于转染空白载体和未转染组（P〈0．01）；EJ细胞增殖受到明显抑制（P〈0．01）。结论TRAIL具有诱导膀胱癌细胞凋亡、抑制增殖的作用，有望成为治疗膀胱癌的新方法。     

半胱氨酸蛋白酶32在丝裂霉素C诱导膀胱癌细胞凋亡中的作用

目的　探讨半胱氨酸蛋白酶 32 (caspase 3)在丝裂霉素C(MMC)诱导膀胱癌EJ细胞凋亡中的作用。　方法　采用末端脱氧核苷酸转移酶介导生物素标记法 (TUNEL)和流式细胞术 (FCM)研究EJ细胞凋亡及细胞周期变化 ,分析caspase 3抗体对低剂量MMC诱导EJ细胞凋亡的影响。　结果　TUNEL法显示MMC组EJ细胞出现细胞凋亡特有的形态学特征 ,凋亡指数 (6 2 .9± 2 .2 ) % ,较cas pase 3抗体加MMC组 (4.9± 0 .3) %和空白组 (2 .7± 0 .7) %显著增高 (P <0 .0 0 1)。FCM检测结果明 ,MMC主要诱导G0 /G1期细胞凋亡而出现凋亡峰 ,凋亡率 2 6 .0 6 % ;caspase 3抗体能特异性抑制MMC诱导EJ细胞凋亡 ,凋亡率仅为 4.6 5 %。　结论　低剂量MMC对caspase 3的活化在诱导膀胱癌细胞凋亡中有重要作用。     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体诱导前列腺癌细胞凋亡的研究

目的 研究肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)对前列腺癌细胞的凋亡诱导作用。方法 10μg/L-100μg/L的TRAIL处理培养的PC-3M细胞4～24h后，采用Annexin-V荧光染色、透射电镜、原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测肿瘤细胞凋亡；流式细胞术和MTT比色检测凋亡率、细胞生长抑制率与TRAIL的时间、浓度依赖关系。结果10μg/L～100μg/L TRAIL作用4～24h，肿瘤细胞出现典型的凋亡形态学改变，随着TRAIL浓度的增加或药物作用时间的延长，肿瘤细胞凋亡率也增加，为13．8％～79．6％，同时细胞生长抑制率出现明显增加，药物作用8h为7．5％～37．9％，12h为16．7％～87．9％，24h为39．7％～97．6％。结论 TRAIL能够迅速和显著地诱导PC-3M细胞凋亡，可能成为晚期前列腺癌治疗的新方法。     

低剂量阿霉素联合TRAIL诱导人前列腺癌细胞LNCAP凋亡的实验研究

目的 研究低剂量阿霉素联合肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导人前列腺癌细胞LNCAP凋亡的作用和机制,为提高肿瘤治疗效果提供理论依据.方法 采用蛋白印迹、流式细胞术、MTT等实验技术,检测TRAIL和低剂量阿霉素分别或者联合处理LNCAP细胞后细胞的生存率变化、相关受体及其配体系统、凋亡相关蛋白(c-FLIP,BCL-2,XIAP)的变化.结果 低剂量阿霉素(0.86 μmol/L)可以增加细胞表面DR4和DR5的表达,同时减少凋亡抑制蛋白c-FLIP的表达,增强TRAIL诱导LNCAP细胞凋亡的敏感性.结论 低剂量阿霉素(0.86 μmol/L)可以增强TRAIL对LNCAP细胞的凋亡诱导效应.     

肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体在前列腺癌治疗中的研究进展

肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL)是近年来研究发现的肿瘤坏死因子超家族新成员,其广泛存在于人体组织中,参与机体免疫调节、免疫自稳和免疫监视。TRAIL受体表达于多种细胞表面。研究表明,TRAIL能够诱导肿瘤细胞凋亡,对正常细胞无明显不不良反应,TRAIL良好的抗肿瘤活性和安全性得到了广泛的认识。前列腺癌的发生发展受细胞凋亡机制调控,TRAIL能诱导前列腺癌细胞凋亡,在前列腺癌的治疗中具有广阔前景。     

二甲双胍增强膀胱癌5637细胞对TRAIL的敏感性及其机制研究

目的探讨二甲双胍能否增强膀胱癌5637细胞对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导细胞凋亡的敏感性及其机制。方法 MTT法检测不同浓度TRAIL(0、10、20、40、60、100 ng/mL)和二甲双胍(10 mM)联合用药对膀胱癌5637细胞的增殖抑制作用。Annexin V-FITC/PI双染检测二甲双胍对TRAIL诱导5637细胞凋亡的影响。Western blot检测二甲双胍和/或TRAIL干预5637细胞24小时后对caspase-8、caspase-3、PARP、DR4、DR5和c-FLIPL表达的影响。结果二甲双胍可增强TRAIL对膀胱癌5637细胞的增殖抑制作用和凋亡诱导作用,二甲双胍单独用药并未上调DR4和DR5表达,但显著下调c-FLIPL表达。结论二甲双胍显著增强膀胱癌5637细胞对TRAIL的敏感性,其机制可能与二甲双胍下调c-FLIPL表达有关。     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体单克隆抗体对人肾癌细胞的毒性作用

目的　探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体 (TRAIL R)的单克隆抗体对肾癌细胞的毒性作用和机制。方法　在人肾癌细胞系ACHN和Caki 1中 ,应用四甲基偶氮唑盐 (MTT)方法分析细胞毒效应 ,应用流式细胞术检测相关凋亡诱导配体受体 (TRAIL R)的表达 ,应用荧光染色和AnnexinV标记检测细胞凋亡的发生 ,应用比色法分析多种Caspase活性在凋亡过程中的变化。结果　抗TRAIL R2单克隆抗体 (ETR2 )对人肾癌细胞系ACHN和Caki 1都具有明显的细胞毒性 (P <0 .0 1) ,而抗TRAIL R1单克隆抗体 (ETR1)的细胞毒性不显著 (P >0 .0 5 )。TRAIL R2在两种细胞表面均高表达 (ACHN :97.9% ,Caki 1:98.7% ) ,TRAIL R1表达微弱 (ACHN :7.6% ,Caki 1:7.5 4% )。ETR2通过诱导细胞凋亡发挥细胞毒作用 ,Caspase 8, 9, 6和 3活性在凋亡过程中明显增高 (P <0 .0 1)。结论　TRAIL R2的单克隆抗体在体外可诱导肾癌细胞发生凋亡 ,其细胞毒性与TRAIL R2的表达有关 ,在凋亡过程中内源性与外源性凋亡通路均被激活。     

丝裂霉素对膀胱癌EJ细胞作用机制的研究

目的　从诱导坏死和凋亡角度探讨丝裂霉素 (MMC)对膀胱癌EJ细胞的作用机制。　方法　将不同浓度的MMC作用于膀胱癌EJ细胞 ,在不同时间内采用流式细胞术 (FCM )和 3’末端脱氧核苷酸转移介导生物素 (TUNEL)及伊红排斥实验检测EJ细胞的凋亡情况和对其的杀伤作用。　结果　不同浓度的MMC在 2 4h内可以持续诱导EJ细胞凋亡 ,MMC 0 .1mg/ml组 2 4h时凋亡率为 71% ,对EJ细胞的杀伤作用与剂量呈正比。　结论　MMC对膀胱癌EJ细胞的抑制作用是通过促凋亡机制和促坏死机制完成的     

肿瘤坏死因子凋亡诱导配体诱导结肠癌细胞凋亡的机制

目的探讨肿瘤坏死因子凋亡诱导配体(TRAIL)诱导结肠癌细胞发生凋亡的机制。方法流式细胞仪技术、酶联免疫吸附技术、荧光显色技术检测500μg／L TRAIL和／或Caspase抑制剂Z-VAD．fmk处理后,结肠癌细胞SW1116在不同时点(0、2、4、6、24 h)凋亡情况、Caspase-3酶活性及4 h线粒体△ψm、cardiolipin、细胞ROS变化。结果 TRAIL可引起结肠癌细胞凋亡,并于 4 h达凋亡高峰,凋亡指数为32．98％;并出现线粒体△ψm下降、cardiolipin丢失增加及Caspase-3酶活性增加,4 h达到最大峰值为(37．56±2．572)μmol／L·hr-1·mg-1蛋白。但TRAIL所诱导的细胞凋亡作用可被Caspase抑制剂Z-VAD．fmk所抑制。同时证实TRAIL所诱导的结肠癌细胞凋亡与细胞氧自由ROS的生成无关。结论 TRAIL通过Caspase依赖方式引起线粒体△ψm下降、cardi- olipin丢失增加导致线粒体内膜损伤,从而诱导细胞发生凋亡。     

低剂量丝裂霉素C诱导膀胱癌细胞凋亡分子机制的研究

目的　探讨低剂量丝裂霉素C(MMC)诱导膀胱癌EJ细胞凋亡的分子机制。方法　采用细胞增殖动力学和细胞形态学观察低剂量MMC对EJ细胞死亡和增殖的影响 ,四甲基偶氮唑蓝 (MTT)法检测增殖 ,脱氧核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记 (TUNEL)法检测凋亡细胞 ,流式细胞术分析细胞凋亡和细胞周期 ,免疫组织化学观察Fas、FasL、半胱氨酸特异性蛋白酶 (Cas pase) 3蛋白表达。 结果　EJ细胞增殖抑制率为 67.18%。凋亡率为 (69.40± 0 .80 ) % (P <0 .0 5 )。G0 /G1期出现凋亡峰。Fas、Caspase 3蛋白上调表达 ,分别为 (65 .49± 6.2 8) %、(63 .5 6± 5 .0 5 ) %(P均 <0 .0 5 )。Fas与FasL的表达具有相关性 (r =0 .871,P <0 .0 5 )。结论　MMC诱导EJ细胞凋亡的分子机制可能与上调细胞表面的Fas表达 ,启动Caspase凋亡信号传导 ,促进细胞凋亡有关。     

大肠癌中肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体及其影响因子表达的研究

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）具有选择性诱导肿瘤细胞发生凋亡的作用。但随着研究深入，人们发现许多肿瘤对TRAIL并不敏感。我们通过研究TRAIL诱导细胞凋亡通路中3个关键性影响因子Survivin、NF-κB和Caspase-3在大肠癌中的表达来探寻提高TRAIL对肿瘤细胞敏感性的可能途径。     

VP3基因联合吉西他滨诱导人膀胱癌细胞凋亡的实验研究

目的探讨鸡贫血病毒VP3基因在人膀胱癌EJ细胞株中的表达,观察VP3基因联合吉西他滨诱导人膀胱癌EJ细胞株凋亡的效应。方法用真核表达载体PcDNA3-VP3转染人膀胱癌EJ细胞株,利用RT-PCR技术检测VP3基因在EJ细胞中的表达状况。观察VP3基因和10^-7mol／L、10^-8mol／L、10^-9mol／L浓度吉西他滨在体外单独或联合用药对人膀胱癌EJ细胞的增殖活性的影响,检测VP3基因和10^-8mol／L浓度吉西他滨在体外单独或联合用药对人膀胱癌EJ细胞的凋亡作用。结果转染PcDNA3-VP3后VP3基因在EJ细胞中表达。转染重组质粒PcDNA3-VP3、吉西他滨各浓度、VP3基因联合吉西他滨各浓度的EJ细胞株的增殖活性明显下降（P〈0．01）。透射电镜下观察到凋亡细胞的典型形态学特征。TUNAL法检测EJ细胞株凋亡率表现为：转染PcDNA3-VP3组高于对照组（P〈0．01）,10^-8mol／L浓度的吉西他滨组高于对照组（P〈0．01）,联合组高于转染PcDNA3-VP3组（P〈0．01）。结论VP3基因表达能高效诱导人膀胱癌EJ细胞株细胞凋亡,联合10^-8mol／L浓度的吉西他滨能增加VP3基因诱导的人膀胱癌EJ细胞株凋亡。     

肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体联合化疗药物治疗膀胱癌的研究

目的　探讨肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体 (TRAIL)治疗膀胱肿瘤的作用 ,以及与化疗药物的协同作用。方法　将T2 4及 5 63 7膀胱肿瘤细胞接种至 96孔培养板后分别加入浓度为1、10、10 0 μg/L的TRAIL ,0 .1、1.0、10 .0mg/L的阿霉素 (ADM )和丝裂霉素 (MMC) ,不同浓度的TRAIL、ADM、TRAIL和MMC ,噻唑蓝比色 (MTT)法分别检测肿瘤细胞的生存率。将膀胱肿瘤细胞接种至 12孔板 ,培育 2 4h后加入不同浓度的TRAIL、ADM、MMC、TRAIL联合ADM、MMC。用流式细胞术检测不同处理组肿瘤细胞的凋亡率和死亡率。结果　 10 0 μg/LTRAIL引起T2 4、5 63 7细胞的凋亡率分别为 2 0 .1%、45 .3 % ,与无药物组 1.1%、3 .5 %的凋亡率比较差异有非常显著性(P <0 .0 1)。单独运用 10mg/LMMC、ADM对T2 4、5 63 7的抑制率分别为 3 6.0 %、44 .1%、2 6.7%、3 0 .2 % ;而 10 0 μg/LTRAIL和 10mg/LMMC、ADM联合后对T2 4、5 63 7的抑制率分别达到 5 8.4%、73 .7%、90 .7%、88.2 % ,两者有明显的协同作用 (P <0 .0 5 )。结论　在体外实验中 ,TRAIL可通过诱导肿瘤细胞的凋亡而产生抗膀胱肿瘤的作用 ;TRAIL与化疗药物ADM、MMC有协同抗肿瘤作用     

蛋白酶体抑制剂和肿瘤相关坏死因子凋亡诱导配体协同诱导肝癌细胞凋亡的机制

肿瘤相关坏死因子凋亡诱导配体（TRAIL）是高选择性的化疗药物，然而并非所有肿瘤细胞对TRAIL均表现出显著敏感性。本研究旨在探讨TRAIL诱导肝癌细胞凋亡中存在的抵抗机制，及其与蛋白酶体抑制剂的协同作用。     

人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体胞外区基因原核系统的表达与纯化

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)属于肿瘤坏死因子(TNF)超家族成员之一,能够诱导前列腺癌、膀胱癌、肺癌等多种肿瘤细胞凋亡,但不影响正常细胞[1-3].本研究旨在观察重组TRAIL融合蛋白(GST-rTRAIL)的表达,探讨其包涵体蛋白的复性和纯化方法.     

Clusterin对膀胱癌细胞抗凋亡作用机制的研究

目的：探讨新的抗细胞凋亡因子Clusterin对膀胱癌EJ细胞的作用机制。方法用丝裂霉素（MMC）诱导膀胱癌EJ细胞凋亡，采用流式细胞术（FCM）检测不同浓度的Clusterin对抗EJ细胞的凋亡率。结果：小剂量Clusterin可以特异性抑制MMC诱导的EJ细胞凋亡作用。结论Clusterin通过抗凋亡机制作用于膀胱癌EJ细胞，可能与膀胱癌细胞的复发、耐药等临床特性有关、此项研究对阐明膀胱癌发生发展的生物学机制以及临床应用Clusterin抗体的治疗胱癌提供帮助。     

肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体基因在糖尿病大鼠肾脏细胞凋亡中的作用

目的 探讨肿瘤坏死因子(TNF)相关的凋亡诱导配体(TRAIL)基因在糖尿病大鼠肾脏细胞凋亡中的表达及其作用。方法 应用链脲佐菌素建立糖尿病大鼠模型，采用原位末端标记法和流式细胞术检测4组(对照组、糖尿病4周组、8周组和12周组)大鼠肾脏细胞凋亡情况；免疫组化和流式细胞术检测肾脏TRAIL基因及其死亡受体DR4、DR5的蛋白表达。结果 与正常对照组相比．各糖尿病组较对照组肾小球、肾小管凋亡细胞数明显增多，TRAIL、DR4、DR5的表达亦显著增强。结论 在高糖环境的诱导下．TRAIL基因及其死亡受体出现的高表达，可能部分参与了糖尿病大鼠肾脏细胞凋亡。     

肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体联合丁酸纳诱导肝癌HepG-2细胞凋亡研究

目的 观察肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体(TRAIL)与丁酸纳(NaB)联合应用对肝癌细胞HepG-2的抑制作用.方法 将HepG-2细胞悬液接种于96孔培养板后,分别或联合加入不同浓度的NaB(1.0、2.5、5.0 mmol/L)和TRAIL(10、100、500、1000μg/L),应用噻唑蓝(MTT)比色法检测其对HepG-2细胞生长抑制作用;流式细胞术检测细胞凋亡;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞内DR4和DR5 mRNA的表达水平.结果经不同浓度的TRAIL处理后,HepG-2细胞生长抑制率和凋亡率分别为(4.5±1.3)%和3.2±0.7)%,与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05).NaB对HepG-2细胞生长有明显抑制作用,且随着NaB浓度从1.0mmol/L升高到5.0mmol/L时,抑制率从(37.6±2.6)%升高到(58.4±3.0)%,各浓度组间差异有统计学意义(P<0.05),NaB浓度为2.5 mmol/L时的凋亡率为(26.7 5.2)%.联合应用NaB和TRAIL能够明显的提高HepG-2细胞的生长抑制率和凋亡率,与同等浓度的NaB或TRAIL单独应用比较,差异有统计学意义(P<0.05).HepG-2细胞经过NaB作用后,其DR5 mRNA的表达水平明显的高于对照组.结论 HepG-2细胞对单独应用TRAIL诱导的凋亡不敏感,NaB可通过上调HepG-2细胞内DR5 mRNA的表达而增强HepG-2对TRAIL的敏感性.