一氧化氮合成酶和心钠素在豚鼠耳蜗的分布

目的:观察豚鼠耳蜗局部心钠素(ANP)和一氧化氮合成酶(NOS)免疫组化反应产物的分布及其相互关系,为研究ANP和NOS在豚鼠耳蜗局部血流、淋巴以及神经调节中的相互作用提供形态学研究的依据。方法:采用免疫荧光组织化学双标法观察ANP和NOS在正常豚鼠耳蜗的分布特征。结果:在耳蜗各转螺旋动脉和血管纹均发现ANP和NOS双阳性表达,螺旋缘、螺旋韧带和Corti器,耳蜗神经节细胞有ANP和NOS双阳性染色。结论:ANP和NOS的分布特点显示,二者在内耳血流调节,内、外淋巴平衡调节以及神经信号传递等方面可能存在密切的相互作用。     

母源性BDE-209暴露对仔鼠海马一氧化氮神经递质的影响

目的从一氧化氮神经递质角度探讨母源性BDE-209损伤仔鼠神经系统的可能机制。方法 3月龄wistar雌鼠自确定交配成功后随机分为实验组A、B、C、D和对照组E,通过胃灌方法建立自妊娠期至哺乳期的不同剂量BDE-209(100、300、600、1200mg/kg/d)的暴露模型,21天仔鼠断乳后各组随机选取10只仔鼠作为研究对象,应用光电比色法和放射免疫法分别测定各组仔鼠海马组织中一氧化氮(NO)含量、神经元型一氧化氮合成酶(nNOS)活性、环鸟苷酸(cGMP)含量。结果与对照组E相比,C、D组NO含量和nNOS活性明显增加(P<0.05);B、C、D组cGMP含量明显升高(P<0.05)。结论一定剂量的母源性BDE-209可能通过影响仔鼠NO神经信号递质系统影响其神经认知功能。     

一氧化氮合成酶在白血病细胞的表达

目的：为了探讨一氧化氮合成酶在ＣＤ２３白血病细胞的表达，以及ＣＤ２３与ＮＯ的关系。方法：采用ＣＲＴ－ＰＣＲ和ＦＡＣＳ技术及Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔｔｉｎｇ放射自显影方法。结果：发现ＣＤ２３白血病细胞株可以表达ｉＮＯＳｍＲＮＡ和ｉＮＯＳ蛋白，同时ＣＤ２３可上调ｉＮＯＳ的表达。结论：ｉＮＯＳ可能与人ＣＤ２３白血病细胞的增殖和凋亡有关。     

一氧化氮合成酶阳性神经元在大鼠脑干的分布及其衰老变化

目的：研究一氧化氮合成酶阳性神经元在大鼠脑干的分布和衰老变化。材料和方法：实验用青年（２－３月）中年（１５－１８月）和老年（２６－３０月）三组ＳＤ大鼠，采用ＮＡＤＰＨ黄递酶组织化学技术及计算机图像。结果：一氧化氮合成酶阳性神经元主要分布于中脑和脑桥上部，延髓分布极少。上丘浅灰质层、中脑导水管周围灰质的背外侧部、中缝背核、被盖背外侧核和桥脚被盖核内的阳性神经元的数量和平均横截面积没有显著性变化。老年     

神经鞘磷脂合成酶2基因敲除小鼠海马神经细胞自噬现象

目的 利用神经鞘磷脂合成酶2（SMS2）基因敲除小鼠探讨神经酰胺对海马神经细胞自噬现象的影响。方法 将SMS2杂合子（SMS2^+/- ）小鼠采用杂交、回交、互交的方法进行繁殖,用酚-氯仿提取法提取小鼠基因组DNA,PCR扩增目的基因,琼脂糖凝胶电泳对小鼠基因型作出鉴定,建立纯合子（SMS2^-/- ）小鼠模型;采用透射电子显微镜、免疫荧光染色及Western blotting技术观察生后第7天（P7）、P14和P30 SMS2^-/-小鼠海马CA1区神经细胞自噬的发生（每种方法每个时间点8只小鼠）。结果 1.SMS2^-/-小鼠海马CA1区神经细胞自噬现象：电子显微镜下,模型组海马神经元内出现较多自噬体或自噬溶酶体样结构。光镜下,模型组P7、P14和 P30 CA1区神经元自噬细胞数较对照组高(P ＜0.01）;2.自噬相关蛋白Beclin-1对于自噬的调节作用：Beclin-1在模型组与对照组间的表达规律与微管相关蛋白1轻链3（MAPLC3）基本一致,P7、P14、P30模型组Beclin-1阳性细胞数明显多于对照组(P ＜0.01）。Beclin-1与 MAPLC3两者在同一细胞中基本呈重叠表达; 3.Western blotting检测各组海马CA1区神经细胞MAPLC3蛋白的相对表达量与上述结果一致。结论SMS2-/-小鼠海马神经细胞内神经酰胺增高,神经酰胺不仅促进细胞凋亡,同时促进自噬,造成小鼠海马神经细胞自噬现象增强。     

阿司匹林对胶质瘤细胞C6抑制及一氧化氮生成的影响

为观察阿司匹林对胶质瘤细胞C6生长抑制、NOS表达及NO生成、CEA含量的影响，采用MTT法测定不同浓度阿司匹林对胶质瘤细胞C6的生长抑制率，免疫细胞化学染色检测NOS表达，Griess法测定NO浓度，微粒子捕捉免疫法分析CEA含量变化。结果发现阿司匹林抑制胶质瘤细胞C6的生长增殖，并能诱导iNOS的表达，增加培养基中NO浓度，减少CEA的生成。阿司匹林对胶质瘤细胞C6的抑制作用可能是阿司匹林的直接毒性或通过诱导iNOS的表达，增加NO含量产生大量超氧阴离子的结果，监测CEA含量的变化可能是判断胶质瘤发生、发展及预后的有效指标。     

海马放射状胶质细胞的体外诱导激活及其意义

为探讨海马放射状胶质细胞在切割穹窿海马伞侧海马提取液的诱导下形态发生的变化,将培养的海马胶质细胞接种于24孔培养板中,分成诱导组和对照组,诱导组加入含5%切割穹窿海马伞侧海马提取液的DMEM/F12培养液,对照组加入单纯的细胞培养液,分别于培养后1、3、7和14d时行BLBP免疫荧光检测和Hoechst标记。计算两组各天时BLBP阳性细胞占Ho-echst阳性细胞的百分比,并用LeicaQiwn图像处理软件检测BLBP阳性细胞的周长和面积(含突起)。Stata8.0统计软件行组间比较。结果显示,1d时诱导组BLBP阳性细胞的比例稍高于对照组,两组细胞胞体均较小,突起均较短较细,无明显差异;3d时,诱导组BLBP阳性细胞的比例明显高于对照组,且胞体较大,突起较粗较长;7d时诱导组BLBP阳性细胞的比例明显高于对照组达到高峰,胞体更大,突起更粗更长交织成网;14d时两组BLBP阳性细胞的比例均稍有降低,但诱导组的比例仍明显高于对照组,两组细胞的胞体稍变小,突起稍变细变短。上述结果提示,切割穹窿海马伞侧海马提取液可明显地诱导BLBP阳性放射状胶质细胞增殖,并使胞体变大,突起变粗变长,呈"激活"状态。     

体外循环缺血-再灌注对人心房肌细胞一氧化氮合成酶的影响

目的：探讨体外循环心脏缺血一再灌注对人心房肌一氧化氮合成酶的影响。方法：用免疫组织化学结合计算机图像分析技术，检测在心脏缺血一再灌注前后１１例病人心房肌肉一氧化氮合成酶的三种同功异构酶一神经性一氧化氮合成酶、诱导性一氧化氮合成酶和内应性一氧化氮合成酶含量的变化。结果：心脏缺血一再灌注后神经性一氧化氮合成酶反应产物的平均灰度值明显减少，内皮性一氧化氮合成酶者明显增加，而诱导性一氧化氮合成酶者无明显改变。结论：心脏缺血一再灌注引起人心房肌神经性一氧化氮合成酶表达增加、内皮性一氧化氮合成酶表达减少，而对诱导性一氧化氮合成酶无明显影响。心脏缺血一再灌注后心脏功能失调可能与心房肌以上变化有关。     

培养海马神经元突触外NMDA受体通道电流在发育中的变化

为观察培养大鼠海马神经元突触外NMDA受体通道电流在发育中的变化,本研究采用膜外面向外模式记录突触外NMDA受体介导的单通道电流。结果显示:培养2周神经元的电流幅度和开放概率比培养1周神经元大,但电导和翻转电位无显著差异。培养2周神经元只出现高电导开放,培养1周神经元同时出现高电导和低电导两种开放形式。NR2B受体亚型的特异性拮抗剂ifenprodil可降低培养1周和2周海马神经元的电流幅度、电导和开放概率,且对培养2周神经元开放概率的抑制作用更明显。以上结果表明,培养海马神经元突触外NMDA受体通道电流有发育变化,且培养1周神经元突触外NMDA受体的NR2亚型可能为NR2B和NR2D;而神经元培养到2同时,突触外主要为NR2B亚型,且数量有所增加。     

胰岛素对糖尿病大鼠海马一氧化氮合酶阳性神经元变化的影响

观察实验性糖尿病大鼠海马一氧化氮合酶（NOS）阳性神经元变化及胰岛的治疗作用。给成年SD大鼠腹腔注射链脲佐菌素制备糖尿病大鼠模型，每日给予长效胰岛素2－3U使血糖低于10mmol/L，于第3月及第6月末以NADPH－d组化法显示海马NOS阳性神经元。并做Morris水迷宫行为学测试。海马NOS阳性神经元密度变化如下：糖尿病组齿状回3月时显著减少（P＜0．01），6月时更明显（P＜0．01）；CA1区6月时显著降低（P＜0．01）；治疗组齿状回3月时恢复正常，而6月时低于正常（P＜0．01）但高于糖尿病组3月时（P＜0．05），CA1区3月，6月均恢复正常。行为学测试中各组大鼠逃避潜伏期变化与齿状回NOS阳性神经元密度变化一致。以上变化可能与糖尿病学习记忆功能损伤有关。胰岛素治疗可延缓其发生。     

植物雌激素对去卵巢大鼠海马NOS阳性神经元及学习记忆的影响

目的 :观察植物雌激素对去卵巢大鼠海马NOS阳性神经元及学习、记忆的影响 ,对中枢神经系统的保护作用。方法 :采用NADPH d酶组化观测各组大鼠海马各功能亚区NOS阳性神经元数目和Morris水迷宫行为学方法。结果 :定位航行实验显示各组大鼠的平均逃避潜伏期无明显差异 ,而空间探索实验显示植物雌激素组平台象限的游泳距离百分比和穿台次数均高于去卵巢对照组。在海马CA1和齿状回 (DG) ,植物雌激素组NOS阳性神经元数目较去卵巢对照组明显增多 (P <0 .0 5 )。结论 :植物雌激素能增加海马神经元NOS的表达 ,改善去卵巢大鼠的学习记忆能力 ,提示对中枢神经系统退行性病变具有保护作用。     

肝性脑病大鼠海马齿状回神经元形态及一氧化氮合酶表达的变化

目的:观察肝性脑病模型组大鼠海马齿状回内神经元的变化及一氧化氮合酶(NOS)的表达,探讨海马神经元的形态学改变及一氧化氮(NO)在肝硬化和肝性脑病发病机制中的作用。方法:先对50只雄性大鼠进行Morris水迷宫测试,之后将动物分为正常对照组和实验模型组。9周后建立CCL4肝性脑病模型,分别取两组大鼠肝、海马组织进行HE染色、Nissl染色及NADPH-d染色。结果:(1)肉眼下可见模型组肝脏普遍呈坏死性肝硬化;(2)HE模型组血氨浓度明显高于正常对照组(P<0.05);(3)Nissl染色结果显示实验组大鼠海马神经元数目减少、染色较浅,胞浆内Nissl体减少或消失;(4)NADPH-d染色结果显示实验组可见粗大轴突着色,树突联系广泛;对照组则少有粗大轴突着色,树突间联系不如实验组广泛。实验组一氧化氮合酶(NOS)阳性神经元染色较对照组深,为紫蓝或深蓝色,且阳性神经元的数目较多。结论:(1)血氨增高是肝性脑病发病机制之一;(2)肝性脑病时海马受到损伤,并且一氧化氮(NO)可能介导了神经元的损伤。     

一氧化氮合酶在大鼠杏仁基外侧核传入神经元内的分布

目的：研究一氧化氮合酶(NOS)在大鼠杏仁基外侧核(BLA)传入投射神经元中的分布。方法：采用霍乱毒素B亚单位(CTb)逆行追踪和还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶(NADPH—d)组织化学双重染色相结合的方法。结果：双标神经元(NADPH-d／CTb)主要分布在孤束核、蓝斑、臂旁内侧核、中缝背核、中央灰质背侧部、丘脑室旁核、下丘脑室旁核、下丘脑室周核、下丘脑腹内侧核以及杏仁内侧核等神经核团。结论：NOS在大鼠BLA传人投射神经元中主要分布于上述核团,并且提示NO参与BLA的功能调节。     

雌性大鼠室旁核一氧化氮合酶神经元周期性变化

目的：研究不同动情周期雌大鼠下丘脑室旁核（PVN）一氧化氮合酶（NOS）神经元的分布。方法：采用SABC法结合图像定量分析。结果：动情期大鼠PVN中NOS神经元数量最多，细胞深染、突起明显；动情前期和后期神经元数量中等；动情间期神经元数量最少，细胞元数量中等；动情间期神经元数量最少，细胞染色浅。经方差分析，不同动情周期各组PVN中NOS神经元细胞数、灰度值总体有显著差异动情期组与动情间期组两项指标也有显著性差异。结论：NO可能与雌性动物生殖周期的调控有关。     

淋巴滞留脑病模型大鼠内侧隔核-斜角带垂直支一氧化氮合酶神经元的改变

目的 :探讨淋巴滞瘤脑病模型大鼠内侧隔核 斜角带垂直支 (Septummedialis verticaldiagonalbandcomplex ,SM vDB)神经元一氧化氮合酶 (Nitricoxidesynthase,NOS)表达与空间参考记忆变化的相关性。方法 :用免疫细胞化学方法显示记忆获得后及淋巴滞留脑病期间 ,大鼠SM vDB的NOS阳性神经元 ,并进行定量分析。结果 :(1 )训练组阳性神经元数比对照组分别增加 96.91 % ,62 .96% (P <0 .0 1 ) ,与逃避潜伏期呈明显负相关 (SMr=-0 .7646,P <0 .0 1 ;vDBr=-0 .81 5 2 ,P <0 .0 1 ) ;细胞面积分别增加 42 .5 1 % ,3 5 .0 0 % (P <0 .0 1 ) ;免疫反应灰度值分别增加1 3 0 .5 1 % ,1 1 5 .41 % (P <0 .0 1 )。 (2 )脑病模型组与假手术组相比 ,阳性神经元数量分别减少 2 5 .91 % ,2 0 .1 3 % (P <0 .0 1 ) ,与逃避潜伏期呈明显负相关 (SMr=-0 .65 3 8,P <0 .0 1 ;vDBr=-0 .72 42 ,P <0 .0 1 ) ;细胞面积分别减少1 4.92 % ,1 2 .97% (P <0 .0 1 ) ,免疫反应灰度值分别减少 3 3 .3 4% ,41 .5 4% (P <0 .0 1 )。结论 :淋巴滞留性脑病神经元NOS表达减少 ,可能损害空间参考记忆的保持     

大鼠急性脑缺血再灌注NO含量和NOS活性变化的实验研究

目的探讨一氧化氮和一氧化氮合酶是否参与了急性脑缺血再灌注的发病机制。方法采用栓线法复制大鼠大脑中动脉阻塞模型，观察血清及脑组织NO含量和NOS活性的变化。结果脑缺血45min再灌注2h后血清及脑组织中NO含量及NOS活性增加，再灌注8h达高峰。结论NO及NOS在急性脑缺血再灌注的过程中起着重要的作用。     

The effects of nitrite on the excitability of brain neurons in the common snail

Electrophysiological studies were performed on the effects of sodium nitrite (0.01–1 mM) on identified command neurons in the brain of the common snail. These studies showed that short periods of exposure to nitrite (from a few minutes up to 30 min) had little effect, producing a low level of depolarization and increases in neuron spike activity in only a few cases. Incubation of isolated brains with nitrite (1 mM) for periods ranging from 2 h to several days reduced excitation thresholds, significantly increased spike activity, increases responses to stimulation, and increases the levels of synaptic activity of the neurons studied. These effects increased with time and were stable, but were reversible on washing and were accompanied by depolarization and increased input resistance. The action of nitrite was imitated by known NO donors, and blockers of NO synthesis had the opposite effect. The possible mediation of the effects of nitrite by NO synthesis and the development of hypoxia is discussed. Translated from Rossiiskii Fiziologicheskii Zhurnal imeni I. M. Sechenova, Vol. 84, No. 11, pp. 1264–1272, November, 1999.     

去卵巢后雌性大鼠下丘脑视前区NOS阳性神经元形态学和突触素表达的变化

目的：为解释围绝经期的精神、神经症状提供实验依据。方法：采用免疫细胞化学方法显示去卵巢雌性大鼠下丘脑视前内侧区(MPA)和视前外侧区(LPA)内NOS阳性神经元,形态学改变以及突触素表达。结果：(1)去卵巢组和对照组大鼠的视前内、外区内可见大量NOS阳性神经元;(2)去卵巢动物的下丘脑内NOS阳性神经元突起长度比对照组的明显变短,分支明显变少;(3)去卵巢组动物下丘脑内突触素表达比对照组的明显减少。结论：大鼠去卵巢后,由于雌激素分泌减少,导致了NOS阳性神经元的突起减少和突触减少,结果NO介导的神经元信号传导失常,这些变化可能是引发围绝经期的精神、神经症状的原因之一。     

内皮细胞信息反馈下丘脑-垂体条件培养液对内皮细胞丙二醛代谢和一氧化氮合酶表达的影响

目的：观察内皮细胞信息反馈下丘脑-垂体条件培养液对内皮细胞丙二醛(MDA)代谢和一氧化氮合酶(NOS)表达的影响,探讨下丘脑-垂体轴对动脉粥样硬化形成的调控方式。方法：将有、无联胺刺激的内皮细胞信息反馈下丘脑-垂体后的条件培养液作用于正常和受损内皮细胞,硫代巴比妥酸法检测其MDA含量,免疫细胞化学法观察NOS的表达。结果：下丘脑-垂体条件培养液(HP、HP-、HP )对正常内皮细胞MDA代谢、NOS表达的影响无明显变化;而作用受损内皮细胞后,HP 能使其MDA含量下降,NOS表达显著增强。结论：下丘脑一垂体轴对内皮细胞MDA代谢、NOS的表达有反馈调控作用。     

Ovary and ovulation: Cell-specific localization of nitric oxide synthases (NOS) in the rat ovary during follicular development, ovulation and luteal formation

Nitric oxide (NO) has emerged as one of several important intraovarianregulatory factors. In particular, NO has been implicated inthe processes of ovulation and atresia-related apoptosis. Theaim of the present study was to investigate the presence anddistribution of the NO-generating nitric oxide synthase (NOS)enzymes in the ovary during follicular development, ovulationand luteal formation of the equine chorionic gonadotrophin (ECG)/humanchorionic gonado-trophin (HCG)-primed rat NADPH diaphorase activitywas used as a histochemical marker for NOS within the ovary.Diaphorase reactivity was most abundant in the stroma (S) ofthe ovary and in the theca (T) layer of the follicle. In luteinizedovaries, weaker diaphorase reactivity was present within thecorpora lutea (CL). Two different isoforms of NOS, the constitutivelyexpressed endothelial NOS (eNOS) and the inducible isoform ofNOS (iNOS), were immunolocalized in ovaries of immature ratsand in ECG/HCG-primed rats during the periovulatory period fromHCG injection until 2 days after ovulation. In addition, ovarianconcentrations of eNOS and iNOS were quantified by immunoblotting.Immunoblotting with a monoclonal anti-eNOS antibody demonstratedthe presence of eNOS mainly in the residual ovary (ROV) duringthe periovulatory period. In luteinized ovaries, higher concentrationsof eNOS were seen in CL, while those in the ROV at this stagewere lower than in the periovulatory ovary. Immature ovariescontained diminutive amounts of eNOS, detectable mostly in theROV compartment. In contrast, iNOS was barely detectable duringfollicular development to the preovulatory stage. A slight elevationof iNOS was observed in the granulosa cells at 6 h after theHCG injection. The levels of iNOS during the luteal phase werealso low. Immunohistochemical analysis using polyclonal eNOSand iNOS antibodies revealed the localization of these two isoformsprimarily in the S and the T of the periovulatory ovary. Inluteinized ovaries, positive immunoreactivity was also seenwithin the CL. With a monoclonal antibody against eNOS, intenseimmunoreactivity was observed in the S, T and within CL. Therewas a particularly strong staining in blood vessels. These datademonstrate the presence of an intraovarian NO-generating system.The localization of this system to the S, T and CL suggestsa role for NO in the ovulatory process and in the regulationof CL function.