毛果芸香碱致慢性癫大鼠脑内药物转运体表达的变化

目的研究有机阴离子转运多肽亚型2(Oatp2)及P-糖蛋白(P-gp)在氯化锂-毛果芸香碱诱导的慢性癫大鼠脑组织中的表达。方法采用氯化锂-毛果芸香碱诱发Wistar大鼠慢性癫模型,免疫组织化学法检测其脑内Oatp2、P-gp的分布及表达情况。结果Oatp2及P-gp免疫反应阳性物质主要定位于脉络丛上皮细胞膜及脑血管内皮细胞膜,神经细胞膜也可见染色;性大鼠脑内Oatp2的表达低于正常大鼠(P<0.05);而P-gp的表达高于正常大鼠(P<0.05)。结论慢性癫大鼠脑内同时存在药物转运体Oatp2及P-gp的表达,两者表达变化相反。在癫病理过程中,Oatp2可能具有与P-gp不同的作用。     

丙戊酸对氯化锂-毛果芸香碱致癫(癎)大鼠海马神经元存活的影响

目的 探讨丙戊酸(VPA)对氯化锂-毛果芸香碱致癫(癎)大鼠神经元的保护作用.方法 出生35 d雄性Wistar大鼠分为空白对照组、癫(癎)模型组和VPA干预组,制作氯化锂-毛果芸香碱癫(癎)发作模型,VPA经口灌胃给药,每次350 mg·kg-1.VPA连续给药5 d后处死动物,取大鼠脑组织尼氏染色检测存活神经元,免疫组织化学检测脑源性神经营养因子(BDNF)蛋白和乙酰化H3组蛋白表达.结果 1.空白对照组海马形态学结构正常,细胞完整,神经元多呈三角形,核较大,胞质里可见深染尼氏小体;癫(癎)模型组大鼠海马CA1、CA3区可见神经元缺失、变性、坏死;尼氏小体数量较少,甚至出现尼氏小体溶解、消失;VPA干预组神经元坏死较少,改变较轻.2.癫(癎)模型组海马CA1区存活神经元数目显著少于空白对照组和VPA干预组;VPA干预组存活神经元数目较癫(癎)模型组增加(P<0.01),但仍少于空白对照组(P<0.01);癫(癎)模型组海马CA3区存活神经元数目显著少于空白对照组和VPA干预组(Pa<0.01);VPA干预组存活神经元数目较癫(癎)模型组增加(P<0.01),但仍少于空白对照组(P<0.01).3.癫(癎)模型组和VPA干预组海马CA1、CA3区BDNF蛋白的表达均较空白对照组高(P<0.05,0.01),但VPA干预组的表达高于癫(癎)模型组(P<0.05,0.01).4.VPA干预组CA1、CA3区乙酰化H3组蛋白表达较癫(癎)模型组和空白对照组均显著增加(Pa<0.01),癫(癎)模型组乙酰化H3组蛋白表达亦高于空白对照组(P<0.01).结论 VPA对氯化锂-毛果芸香碱致癫(癎)大鼠海马CA1、CA3区神经元具有保护作用;海马CA1 、CA3区乙酰化H3组蛋白表达增加,进而调控BDNF的表达增加,可能是VPA对癫(癎)后大鼠脑保护作用机制之一.     

儿童癫癎对药物反应性与多药耐药基因MDR1C3435T多态性的相关性研究

目的:探讨汉族癫癎患儿MDR1基因单核苷酸多态性（C3435T）与对抗癫癎药物反应的相关性。方法：214例癫癎患儿根据对抗癫癎药物的反应性分为耐药组和对药物反应良好组,提取外周血基因组DNA,用PCR-RFLP的方法即多聚合酶链反应（PCR）扩增后继以限制性内切酶片断长度多态性（RFLP）分析,对不同药物反应性与基因型频率、等位基因频率结果进行分析。结果：214例可明确分型的病例中,对药物反应良好的有164例,耐药的有50例 。两组病例的等位基因频率比较和基因型频率相比较,均未发现差异有显著性。结论：该研究未能反映汉族儿童C3435T基因多态性与癫癎病例对药物反应之间的相关性。［中国当代儿科杂志,2007,9（1）：11-14］     

抗癫(癎)药对婴儿痉挛症患儿外周血P-糖蛋白170表达的影响

目的 探讨抗癫(癎)药物(AEDs)对婴儿痉挛症(IS)患儿外周血淋巴细胞中多药耐药基因表达产物P-糖蛋白170(P-gp170)表达水平的影响.方法 应用流式细胞术检测IS患儿P-gp170的表达,根据其治疗方案不同,分为A组(托吡酯,n=6)、B组(丙戊酸钠+托吡酯,n=9)、C组(丙戊酸钠+氯硝西泮,n=6)、D组(托吡酯+氯硝西泮,n=7)、E组(健康对照组,n=8).分别于治疗前、治疗后3个月和6个月检测各组患儿外周血P-gp170表达水平.结果 A、B、C、D组在3个时间点P-gp170表达均较E组显著增高(Pa＜0.001).A、B组3个时间点P-gp170表达水平比较差异均无统计学意义,C、D组6个月时P-gp170表达较治疗前及治疗后3个月显著增高(Pa＜0.05).结论 IS患儿P-gp170外周血表达增高.丙戊酸钠和托吡酯对其表达无明显影响,而氯硝西泮长期应用可能增加P-gp170的表达.     

儿童难治性癫(癎)外周血P糖蛋白的表达及药物干预

目的 测定儿童难治性癫(癎)及初诊癫(癎)患儿外周血白细胞多药耐药基因产物P糖蛋白(P-gp),建立儿童难治性癫(癎)耐药性客观指标及预测儿童难治性癫(癎)客观指标;同时观察氟桂利嗪的疗效.方法 应用流式细胞仪检测41例难治性癫(癎)儿童及45例初诊癫(癎)儿童外周血多药耐药基因产物P-gp的表达,44例健康儿为对照组.难治性癫(癎)组患儿加用氟桂利嗪(弗瑞林)2.5～5 mg,qn口服治疗,对其疗效进行临床验证.结果 难治性癫(癎)组P-gp表达阳性23例(56.1%),初诊癫(癎)组P-gP表达阳性10例(22.2%),对照组P-gp表达阳性3例(6.8%),三组比较差异有统计学意义(X2=26.77,P(0.01).难治性癫(癎)组与对照组比较X2=24.27,P<0.01;难治性癫(癎)组与初诊癫痫组比较X2=10.41,P<0.01;初诊癫痫组与对照组比较X2=4.23,P<0.05.难治性癫痫组P-gp表达阳性23例中17例(73.9%)无效,6例(26.1%)有效,P-gP表达阴性18例中3例(16.7%)无效,15例(83.3%)有效,两者比较差异有统计学意义(X2=10.10,P<0.01).初诊癫痫组P-gp表达阳性10例中7例(70.0%)转为难治性癫(癎),P-gp表达阴性35例中3例(18.6%)转为难治性癫(癎).两者比较差异有统计学意义(X2=16.98,P<0.01).难治性癫(癎)组抗癫(癎)药物治疗无效者20例加用氟桂利嗪治疗3个月,P-gP表达阳性17例中有效11例(64.7%),11例有效者复查P-gP有6例(54.5%)转为阴性;无效6例(35.3%),复查P-gP表达仍阳性.P-gP表达阴性3例中1例有效,2例无效,复查P-gp表达阴性.结论 外周血多药耐药基因产物P-gP在儿童难治性癫(癎)中表达增强,可作为儿童难治性癫(癎)耐药性的客观指标;P-gP表达阳性的初诊癫(癎)患儿多转为难治性癫(癎),P-gP可作为预测儿童难治性癫(癎)的客观指标;氟桂利嗪有一定抗癫(癎)及逆转P-gP的表达作用.     

EphA5/ephrinA5在癫癎大鼠海马CA3区的表达变化及作用

探讨EphA5及其配体ephrinA5在癫癎大鼠模型海马内表达变化及其在颞叶癫癎发病中的作用。方法将240只Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分为对照组(n=120)和癫癎组(n=120),建立氯化锂-匹罗卡品颞叶癫癎大鼠模型。致癎后分别选取12 h、24 h、7 d、15 d、30 d和60 d 6个时间点为亚组(n=20),采用原位杂交法检测各亚组大鼠海马CA3区和齿状回(DG)ephrinA5 m RNA表达水平(n=9);采用免疫组化法检测各亚组大鼠海马CA3区和DG EphA5蛋白的表达水平(n=9);采用Neo-Timm银染法观察各亚组大鼠海马CA3区的苔藓纤维出芽情况(n=2)。结果原位杂交结果显示:ephrinA5 m RNA在海马CA3区可见表达,但在DG无表达;与同时间点对照组相比,致癎后7 d、15 d,癫癎组大鼠海马CA3区ephrinA5 m RNA表达明显下调(P0.05),在致癎后30 d、60 d,癫癎组大鼠海马CA3区ephrinA5 m RNA表达逐渐上调(P0.05),且与对照组相比差异无统计学意义(P0.05)。免疫组化结果显示:EphA5蛋白在大鼠海马CA3区及DG区均有表达,其水平变化趋势与ephrinA5 m RNA相一致。Neo-Timm银染法结果显示:致癎后7 d、15 d,癫癎组大鼠海马CA3区存在明显苔藓纤维出芽。结论配体ephrinA5协同受体EphA5在海马CA3区的表达下调,可能共同参与了CA3区的苔藓纤维出芽作用机制,并与癫癎的发生、发展关系密切。     

托吡酯对戊四氮致癫癎大鼠体质量及血清瘦素和弓状核神经肽Y表达的影响

目的 探讨托吡酯（TPM）对癫痫大鼠血清瘦索水甲和下丘脑弓状核神经肽Y（NPY）表达的影响及两者与体质量变化的关系。方法 115只大鼠随机分成分别为空白组、TPM对照组、模型组和TPM治疗组。称重1次／3d，分别于2、4、6周末用放射免疫法测血清瘦素水平，用免疫组织化学染色法测下丘脑弓状核NPY表达。结果：TPM对照组和TPM治疗组实验第4周出现体质量下降（P〈0．05），同时在第2、4周末两组血清瘦素较空白组、模型组明显升高（P〈0.05），且随时间下降。TPM治疗组与TPM对照组大鼠NPY神经元表达较空白组和模型组升高（P〈0．05），且随时间渐上升。结论 TPM能提高大鼠血清瘦索水平，从而降低体质量，但瘦素升高使体质量下降与NPY无关。     

环氧化酶-2选择性抑制剂塞来昔布对癫癎持续状态大鼠脑内主穹隆蛋白表达的影响

目的 观察环氧化酶-2选择性抑制剂塞来昔布对癫癎持续状态大鼠脑内主穹隆蛋白(MVP)表达的影响,探讨其在治疗难治性癫癎中的作用及可能机制,为难治性癫癎的新药治疗提供理论依据。方法 健康成年雄性Sprague-Dawley大鼠60只,随机分为空白对照组(n=16)、癫癎模型组(n=22)和塞来昔布干预组(n=22),氯化锂-匹鲁卡品诱发大鼠癫癎持续状态模型成功后,各组均有16只大鼠纳入实验。采用免疫组化法和Westernblot法检测各组大鼠额叶皮质区及海马区MVP的表达情况。结果 癫癎模型组大鼠脑内MVP的表达水平较空白对照组显著增高(PP结论 塞来昔布可降低MVP在癫癎持续状态大鼠脑组织中的高表达,有望为治疗难治性癫癎提供新方法 。     

托吡酯对戊四氮致癫大鼠体质量及血清瘦素和弓状核神经肽Y表达的影响

目的探讨托吡酯(TPM)对癫大鼠血清瘦素水平和下丘脑弓状核神经肽Y(NPY)表达的影响及两者与体质量变化的关系。方法115只大鼠随机分成分别为空白组、TPM对照组、模型组和TPM治疗组。称重1次/3d,分别于2、4、6周末用放射免疫法测血清瘦素水平,用免疫组织化学染色法测下丘脑弓状核NPY表达。结果TPM对照组和TPM治疗组实验第4周出现体质量下降(P<0.05),同时在第2、4周末两组血清瘦素较空白组、模型组明显升高(P<0.05),且随时间下降。TPM治疗组与TPM对照组大鼠NPY神经元表达较空白组和模型组升高(P<0.05),且随时间渐上升。结论TPM能提高大鼠血清瘦素水平,从而降低体质量,但瘦素升高使体质量下降与NPY无关。     

戊四氮致痫大鼠不同脑区神经元特异性烯醇酶的表达及意义

目的研究神经元特异性烯醇酶(NSE)的改变.探讨戊四氮(PTZ)致癎大鼠癫癎(EP)后脑组织的损坏情况。方法SD大鼠50只,随机分为对照组(A组,n=10)及实验组(n=40)。A组注射生理盐水,实验组腹腔注射PTZ50mg/(kg·次)。根据EP发作分级,0-1级7只,为B组,立即取脑;2级以上33只,于EP发作后0h(C组,n=10)、6h(D组,n=11)、24h(E组,n=10)、72h(F组.n=2)取脑。取躯干血后分别取海马、中脑、纹状体和额叶皮质。采用酶标法测血清和各脑区NSE值;以S-P免疫组织化学染色法染色,观察各组大鼠海马NSE表达。结果EP后各脑区和血清NSE均明显高于对照组;既使无EP大发作.但有兴奋症状的大鼠上述区域和血清NSE亦高于对照组。动态观察EP后不同时间段,发现中脑NSE在EP后6h达到高值.余脑区EP后即达高值,后出现下降,提示额叶、海马和纹状体神经损伤在前,而中脑神经损伤在后。免疫组织化学染色显示EP大发作后海马NSE表达明显增加,EP后72h与对照组相似。结论EP发生后NSE明显升高,尤其是海马区,表明EP可造成大脑神经细胞的损坏。     

癫癎大鼠大脑皮层、海马、乳头体中γ-氨基丁酸、谷氨酸、生长抑素含量的动态变化

目的探讨氨基酸类及肽类神经递质的关系及各自在癫癎发生发展过程中的作用机制。方法采用戊四氮(PTZ) 制备大鼠慢性癫癎模型,应用高效液相色谱仪,结合紫外分光光度仪检测大鼠额叶皮层、海马及乳头体组织γ-氨基丁酸(GA- BA)和谷氨酸(GLU)的含量变化。采用放射免疫方法测定大鼠额叶皮层、海马及乳头体中生长抑素(SOM)含量的变化。结果GLU在腹腔注射戊四氮15 d、点燃后0 h,7、30 d组额叶皮层、海马及乳头体组织中含量显著高于对照组。GABA在腹腔注射PTZ 15 d、点燃后7、30 d组额叶皮层、海马及乳头体组织中含量明显低于对照组,而点燃后0 h组与对照组无显著差异。SOM在腹腔注射PTZ 15 d、点燃后0 h,7、30 d组额叶皮层及乳头体组织中的含量显著升高,而海马无明显变化。相关分析发现。GABA与GLU、GABA与SOM之间呈直线负相关,GLU与SOM之间呈直线正相关。结论GABA、GLU及SOM三者之间的平衡失调可能是癞癎发生的重要原因及癫癎敏感性形成的机制。乳头体及额叶皮层中SOM与癫癎发作有关,可能参与了癫癎的播散过程。     

反复热性惊厥大鼠海马白细胞介素-6 和肿瘤坏死因子-α水平的变化

目的探讨反复热性惊厥(FS)大鼠海马IL-6和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的变化。方法将43只SD大鼠随机分为正常对照组(n=10,NC组)、高热对照组(n=12,HC组)和热性惊厥组(n=21,FS组)。分别用酶联免疫吸附法(ELISA)和逆转录酶多聚链反应(RT-PCR)检测大鼠海马IL-6和TNF-α水平及IL-6 mRNA、TNF-αmRNA水平。结果1.FS与HC组大鼠海马IL-6水平[分别为(53.21±8.32)ng/mg、(56.37±2.84)ng/mg]明显高于NC组[(44.55±4.11)ng/mg](P<0.01,0.05),FS与HC组比较差异无统计学意义(P>0.05)。各组大鼠海马IL-6 mRNA水平间比较差异无统计学意义(Pa>0.05)。2.各组大鼠海马TNF-αmRNA及其蛋白水平比较均无统计学意义(Pa>0.05)。结论反复FS对大鼠海马IL-6和TNF-α表达无明显影响,IL-6和TNF-α可能不参与FS相关脑损伤的产生过程。     

Histopathological Changes of Placenta Induced by Cyclophosphamide in Rats

The possible role of placental pathology in teratogenesis has not been fully understood. Since cyclophosphamide is a proven teratogen, it was decided to investigate its effect on placental histology. A single dose of cyclophosphamide (20 mg/kg) administered to pregnant rats on day 12 of gestation resulted in various malformations and stunting of fetuses at term. The placentae were significantly (P < 0.001) lighter and their margins contained a patch of necrotic substance. The decidua basalis showed dilatation of blood spaces, hemorrhage and infarction. Giant cells were numerous and the glycogen cells sparce in the basal zone. Vast areas of infarction and necrosis were also evident here. The labyrinths were shorter and often hyalinised. In two cases cysts of considerable size occupied the centre of the labyrinthine zone. The necrotic patch was found to be fibrinoid in nature with and without the association of large giant cells and lymphocytes.     

神经生长因子对红藻氨酸致大鼠海马神经细胞半胱氨酰天冬氨酸蛋白酶-3表达的影响

目的观察神经生长因子(NGF)对红藻氨酸(KA)致大鼠海马半胱氨酰天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)表达的影响,探讨其对癫大鼠神经细胞的保护作用及其机制。方法将60只日龄21～30 d健康大鼠随机分为9 g.L-1盐水对照组(A组),KA致模型对照组(B组),NGF治疗组(C组),每组20只。KA用9 g.L-1盐水配成2 g.L-1,B组、C组大鼠以4 mg.kg-1腹腔注射。注射完观察记录其性发作的潜伏期和性发作的级别,并进行EEG和病理学检查。C组每只大鼠腹腔注射KA20～30 min予NGF4μg.kg-1腹腔注射。A组用9 g.L-1盐水2 mL.kg-1灌胃和腹腔注射。分别于KA注射6 h、1 d、3 d时将各组大鼠处死5只,常规方法灌注固定,制作冷冻切片。用免疫组织化学染色SP法检测大鼠海马Caspase-3表达,并用HPIAS-2000显微图像定量分析系统进行定量分析。结果B组、C组大鼠注射KA后30 min左右开始出现性发作,EEG和病理学检测均显示癫发作特征。C组大鼠注射3 d后,Caspase-3阳性神经元计数为7.10±2.80,B组为18.40±3.86;A组为0...     

地塞米松作用下细胞间黏附分子-1在脂多糖致脑水肿大鼠脑组织中表达的变化

目的探讨脂多糖（LPS）致大鼠脑水肿发生过程中,地塞米松作用下细胞间黏附分子-1（ICAM-1）蛋白表达水平。方法将实验大鼠随机分为9g/L盐水组（NS组）、LPS组、地塞米松组（DXM组）。各组按观察时间分为4、6、12、24及48h组。LPS诱导大鼠脑水肿发生。免疫组织化学染色法测定脑组织ICAM-1表达,并测定脑组织伊文思蓝（EB）水平。结果LPS和DXM组脑组织含水量和EB水平均较NS组明显增高（Pa〈0.05）;LPS组各时间点ICAM-1蛋白表达量均高于NS和DXM组（Pa〈0.01,0.05）;DXM组4、6、12、24hICAM-1蛋白表达量均较NS组增高（Pa〈0.05）,48h时二组无显著差异（Pa〉0.05）。LPS组脑组织含水量和EB水平、ICAM-1蛋白表达量和脑组织含水量、ICAM-1蛋白表达量和EB水平均呈显著正相关（r=0.537,0.467,0.549Pa〈0.05）。结论ICAM-1参与LPS诱导的脑水肿的发生、发展过程。早期应用糖皮质激素可抑制炎性细胞因子的生成,减轻炎性反应与组织损伤。