DNA甲基转移酶抑制剂5-杂氮-2＇-脱氧胞苷对人食管癌细胞株Eca109的影响

目的：探讨DNA甲基转移酶抑制剂5-杂氮-2＇-脱氧胞苷（5-aza-CdR）对人食管癌细胞株Eca109增殖作用的影响.方法：应用不同浓度（10^-7、10^-6、10^-5、10^-4 mol/L）的特异性DNA甲基转移酶抑制剂5-aza-CdR,于不同作用时间（24～168 h） 处理人食管鳞癌细胞株Eca109,采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法测定5-aza-CdR作用下Eca109细胞株的生存率,倒置显微镜观察细胞的形态学变化.结果：不同药物浓度组在同一作用时间下,细胞株生存率差异有统计学意义（P＜0.05）;同一药物浓度不同作用时间组之间（24～96 h）的细胞生存率差异也有统计学意义（P＜0.05）,且96 h时对人食管鳞癌细胞株Eca109生长抑制作用最明显.形态学观察显示：癌细胞体积缩小,核固缩,染色质凝聚成块.结论：5-aza-CdR有抑制人食管癌细胞株Eca109生长的作用,抑制作用呈时间依赖性及浓度依赖性;并且干预后癌细胞呈现典型的凋亡细胞形态改变.     

DNA甲基转移酶抑制剂5-杂氮-2′-脱氧胞苷对人食管癌细胞株Eca109的影响

目的:探讨DNA甲基转移酶抑制剂5-杂氮-2′-脱氧胞苷(5-aza-CdR)对人食管癌细胞株Eca109增殖作用的影响。方法:应用不同浓度(10-7、10-6、10-5、10-4mol/L)的特异性DNA甲基转移酶抑制剂5-aza-CdR,于不同作用时间(24～168h)处理人食管鳞癌细胞株Eca109,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定5-aza-CdR作用下Eca109细胞株的生存率,倒置显微镜观察细胞的形态学变化。结果:不同药物浓度组在同一作用时间下,细胞株生存率差异有统计学意义(P<0.05);同一药物浓度不同作用时间组之间(24～96h)的细胞生存率差异也有统计学意义(P<0.05),且96h时对人食管鳞癌细胞株Eca109生长抑制作用最明显。形态学观察显示:癌细胞体积缩小,核固缩,染色质凝聚成块。结论:5-aza-CdR有抑制人食管癌细胞株Eca109生长的作用,抑制作用呈时间依赖性及浓度依赖性;并且干预后癌细胞呈现典型的凋亡细胞形态改变。     

山豆根对Eca—109细胞株细胞周期的作用

应用流式细胞术（FCM）和Feulgen-DNA法显示分裂指数，分析不同浓度山豆根对Eca-109细胞的作用。流式细胞光度术分析结果表明，实验组细胞DNA指数（DI＝2）显著低于对照组（DI＝2．5），两者相比差异均有极其显著性意义（P＜0．01）。细胞DNA组方图G0／G1期细胞呈增高趋势，S期细胞均减少，G2M期细胞均增高，与对照组比差异均有显著性（P＜0．01，P＜0．05）。Feulgen-DNA染色显示细胞分裂指数与小剂量药物作用时间呈负相关，大剂量药物作用下分裂指数明显下降。这说明山豆根对Eca-109细胞DNA合成有显著的抑制作用。     

8—Br—cAMP对人食管癌Eca—109细胞增殖与分化的效应

在人食管癌Ｅｃａ－１０９细胞中加以终浓度为１０＾－５ｍｏｌ／Ｌ的８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ体外培育２４ｈ后，应用酸解ＤＮＡ及甲绿－派洛宁染色技术在同一标本上鉴别增殖细胞和分化细胞。     

褪黑素联合顺铂对人食管癌Eca109细胞的抑制作用及其机制

目的:观察褪黑素(Mel)联合顺铂(DDP)对人食管癌Eca109细胞生长的抑制作用,并探讨相关的分子机制。方法:通过MTT实验检测Mel与DDP不同浓度分别单用或两药联合处理后食管癌Eca109细胞增殖情况;流式细胞仪检测用药后细胞凋亡情况;Western blot法检测Bax、Bcl-2蛋白的表达。结果:Mel与DDP联用对食管癌Eca109细胞增殖的抑制率均高于单用Mel与DDP时对食管癌Eca109细胞的抑制率(P<0.05);Mel单独诱导食管癌Eca109细胞凋亡作用不强,但可增强DDP诱导的食管癌细胞凋亡(P<0.01);Mel与DDP联用后食管癌Eca109细胞Bcl-2蛋白表达减弱,Bax蛋白表达增强。结论:Mel可增强DDP对人食管癌Eca109细胞增殖的抑制作用,并具有增强DDP诱导人食管癌Eca109细胞凋亡的作用,其机制可能与上调Bax表达和下调Bcl-2的表达有关。     

羟基喜树碱脂质体对人食管癌Eca109细胞株作用的研究

目的 研究羟基喜树碱脂质体对人食管癌Eca109细胞增殖、凋亡以及相关蛋白表达的影响.方法 将人食管癌细胞株Eca109常规培养于RPMI-1640培养基中,实验分空白对照组和浓度分别为0.1、1、10、50 mmol/L的羟基喜树碱脂质体组,应用MTT法检测羟基喜树碱脂质体对食管癌细胞增殖的影响,Western blot检测细胞膜P糖蛋白水平的改变,流式细胞仪检测细胞凋亡及周期的改变.结果 各剂量组羟基喜树碱脂质体均对人食管癌Eca109细胞的增殖具有抑制作用,并伴随着对细胞凋亡的诱导,以及对和多药耐药性(MDR)相关的P糖蛋白的抑制.结论 羟基喜树碱脂质体能够抑制人食管癌细胞的增殖,诱导其凋亡并能够抑制P糖蛋白的表达,减少细胞耐药,且在0.1～50 mmol/L浓度范围内,随着浓度增加,上述抑制作用增强,存在浓度依赖性.     

甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2′-脱氧胞苷对人小细胞肺癌H446细胞的作用研究

目的探讨甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2′-脱氧胞苷（5-aza-2-′deoxycytidin,5-Aza-CdR）在小细胞肺癌中发挥抗瘤效应的可能性及可能机制。方法将5-Aza-CdR体外作用于人小细胞肺癌H446细胞,应用光镜、MTT法、流式细胞术、自发光荧光仪等方法观察H446细胞的形态学、增殖能力、细胞周期分布、药物敏感性、caspase-3/7活性及Rh123外排效率等的变化,同时应用甲基化敏感性随机引物PCR（MS-AP-PCR）法检测H446细胞基因组DNA甲基化水平。结果 5-Aza-CdR可明显降低H446细胞的基因组DNA甲基化水平,并抑制其细胞增殖。随着5-Aza-CdR处理时间延长,H446细胞中G1期细胞显著增多[由（56.3±2.5）升至（73.75±2.47）,P〈0.05],G2期细胞显著减少[由（19.1±6.8）降至（9.0±1.5）]。同时,H446细胞增殖能力较对照组显著降低（P〈0.01）,呈浓度依赖性,但对顺铂等化疗药物的敏感性无显著性差异（P〉0.05）。此外,H446细胞的Rh123外排效率显著增加[由（11.5±2.3）升至（23.8±3.0）,P〈0.05],而caspase-3/7活性显著增强[由（257510.5±12861.5）升至（538585.5±10897.2）,P〈0.05]。结论 5-Aza-CdR在体外对人小细胞肺癌H446细胞具有较强的抗癌活性,低甲基化细胞毒作用（包括抑制细胞增殖、G1期阻滞、诱导细胞凋亡）以及恢复抑癌基因表达可能是其主要作用机制。     

过表达Beclin 1对食管癌Eca109细胞生物学行为的影响

目的：探讨自噬基因Beclin 1对食管癌细胞Eca109生物学行为的影响。方法：运用Beclin 1过表达质粒pIRES2-Zs－Green1-h Beclin 1转染食管癌 Eca109细胞株,RT-PCR和Western blot检测Beclin 1的mRNA和蛋白的表达;电子显微镜观察转染后自噬体的形成情况;MTT法检测转染前后各组细胞生长曲线的变化;血管形成实验检测其对Eca109细胞株血管形成能力的影响;Transwell小室实验检测其对Eca109细胞株迁移和侵袭能力影响;流式细胞技术检测目的基因组和对照组细胞周期的变化。结果：pIRES2-ZsGreen-hBeclin1质粒成功转染食管癌Eca109细胞株。目的基因组Eca109细胞较空载体组和未转染组生长明显抑制（P=0.000,P=0.000）;目的基因组Eca109细胞迁移、侵袭及血管形成能力明显低于对照组（P值均<0.05）;Beclin 1稳定表达后,S期细胞明显减少,细胞增殖受到抑制。结论：Beclin 1基因可以作为食管癌生长及转移的一种抑制基因。     

紫杉醇对人食管癌Eca109细胞株生长的影响

目的：观察不同浓度的紫杉醇对食管癌细胞Eca109的影响。方法：应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）实验,细胞形态学观察及流式细胞仪等方法对人食管癌细胞Eca109进行检测和观察。结果：MTT实验显示紫杉醇可抑制食管癌细胞增殖;光镜及电镜可发现药物作用组细胞核固缩、解聚以及凋亡小体,流式细胞仪检测显示G1峰前有明显的凋亡峰。细胞周期分析提示紫杉醇可将Eca细胞阻滞于G2－M期,且与浓度相关。结论：紫杉醇对人食管癌细胞系Eca109细胞的生长有明显的抑制作用,使细胞分裂阻滞于G2－M期,并诱导肿瘤细胞凋亡。     

S1P5对食管癌细胞Eca109黏附能力的影响

目的研究S1P5对食管鳞癌Eca109细胞黏附能力的影响。方法从人正常食管黏膜上皮克隆S1P5基因,构建表达载体S1P5-EGFP,转染Eca109细胞,经G418筛选,获得S1P5-EGFP/Eca109稳定细胞株。以对照载体Control-EGFP转染的Eca109细胞作为对照,荧光显微镜下观察细胞的形态,用黏附试验评价其黏附能力。结果成功构建S1P5-EGFP和Control-EGFP载体并转染Eca109细胞获得稳定细胞株。S1P5表达于细胞膜并使细胞略呈梭形改变。S1P5过表达致Eca109细胞黏附能力明显低于对照（P〈0.05）,并且不受其配体1-磷酸鞘氨醇（S1P）的影响。结论 S1P5组成性抑制Eca109细胞的黏附能力,食管癌细胞可能通过下调S1P5的表达增强其黏附。     

硒、锌对人食管癌细胞株Eca109生长增殖的影响

目的 观察硒、锌单独和联合作用对人食管癌细胞株Eca109生长增殖的影响.方法 用不同浓度硒、锌培养液培养人食管癌细胞株Eca109,以人正常肝上皮细胞株HL7702为正常细胞对照,采用MTT、3H-TDR掺入实验及流式细胞术研究不同浓度硒、锌对两株细胞生长增殖的影响.结果 高浓度硒(0.3μg/ml)、锌(3.5 μg/ml)抑制Eca109细胞增殖,且二者联合作用比单独作用强(P<0.05);高浓度硒、锌单独促进HL7702细胞生长,联合则抑制其生长.生理浓度硒、锌(分别为0.1、1.0μg/ml)对该癌细胞株和正常细胞株生长增殖作用与对照相近(19>0.05).0.3 μg/ml硒引起癌细胞S期阻滞,作用不明显(P>0.05),而3.5 μg/ml锌引起G1期癌细胞显著增加(P<0.05),二者联合使其出现G1期阻滞,并都促进细胞凋亡,联合作用强于单独作用(P<0.05).结论 高浓度硒、锌抑制人食管癌细胞株Eca109生长增殖,且二者联合作用比单独作用强;该联合作用对人正常肝上皮细胞株可能有一定毒性作用.细胞生长周期改变、促进细胞凋亡可能是硒、锌抑制食管癌细胞生长增殖的机制之一.     

硒酸酯多糖对人食管鳞癌Eca109细胞增殖及凋亡的影响

目的研究硒酸酯多糖(KSC)对人食管鳞癌Eca109细胞增殖及凋亡的影响,并初步探讨其作用机制。方法甲基噻唑基四唑(MTT)法检测不同浓度KSC对Eca109细胞增殖的影响;流式细胞术观察KSC对Eca109细胞凋亡的影响;Westernblot技术检测KSC对Eca109细胞核转录因子-κB(NF-κB)蛋白表达水平的影响。结果 KSC可明显抑制Eca109的增殖(P<0.05),并呈时间及浓度依赖性;经KSC作用后,Eca109细胞的凋亡率随KSC作用时间的延长(24、48、72h)及KSC浓度的增加(30、60、120μg/mL)而明显升高(P<0.01);KSC(60、120μg/mL)显著下调Eca109细胞核中NF-κB蛋白水平(P<0.01)。结论 KSC对Eca109细胞具有抑制增殖、诱导凋亡作用,其作用机制可能与抑制NF-κB信号通路有关。     

5氮杂胞苷对HT29细胞DLC-1基因表达和细胞增殖活性的影响

目的探讨去甲基化药物5氮杂胞苷对肠癌细胞系HT29的DLC1基因表达和细胞增殖活性的影响。方法使用浓度为5μmol·L-1和10μmol·L-1的去甲基化药物5氮杂胞苷处理HT29细胞,通过MTT实验观察细胞增殖活性的差异,RTPCR技术检测DLC1mRNA表达强度的变化。结果经药物处理后,HT29细胞的增殖活性受到抑制,DLC1mRNA的表达明显增强。结论HT29细胞DLC1mRNA的表达下调可能是由于启动子区域高甲基化所致,DLC1基因具有抑制肿瘤细胞生长的功能,其可能参与了结肠癌的发病机制。     

5-Aza-CdR对膀胱癌EJ细胞系生长及Apaf-1基因异常甲基化的影响

目的观察5-氮杂-2′-脱氧胞苷（5-aza-2-′deoxyc ityd ine,5-Aza-CdR）对体外培养的膀胱癌EJ细胞增生、细胞周期影响及其对此细胞株中Apaf-1基因的甲基化状态的影响。方法不同浓度5-Aza-CdR处理体外培养膀胱癌EJ细胞后,用MTT法检测药物处理24、48、72 h后的细胞增殖活性;PI染色和流式细胞仪检测药物处理72 h后的细胞周期分布;MSP法检测用药前后细胞中Apaf-1基因的甲基化状态;Real-time RT-PCR法检测用药前后细胞中Apaf-1的mRNA表达变化。结果2×10^-6、5×10^-6、1×10^-5mol/L 5-Aza-CdR处理膀胱癌EJ细胞24、48、72 h后,细胞增生受到抑制,有时间和剂量依赖性。流式细胞仪分析表明,不同药物浓度处理EJ细胞72 h后细胞增殖指数降低明显：5×10^-6、1×10^-5mol/L组分别为（34.09±0.79）、（28.55±1.76）,与对照组（42.78±1.23）相比,差异有统计学意义（P〈0.05）。在5-Aza-CdR处理前未检测到膀胱癌EJ细胞系的Apaf-1基因的mRNA表达,经过5-Aza-CdR处理后,Apaf-1基因在膀胱癌EJ细胞系中甲基化状态得到了逆转,Apaf-1基因的mRNA重新表达。结论5-Aza-CdR对膀胱癌EJ细胞具有增生抑制作用;Apaf-1基因的表达情况与其甲基化状态的改变有关。     

姜黄素对食管癌EC-9706细胞增殖的影响

目的观察姜黄素对人食管癌EC-9706细胞增殖的影响并探讨其分子机制。方法应用50～200txmol／L姜黄素处理食管癌EC-9706细胞株12—48h后,应用四甲基偶氮唑蓝（MTF）法检测细胞增殖抑制率、逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）法检测热休克蛋白70（Hsrv0）mRNA的表达。结果经姜黄素干预后,人食管癌EC一9706细胞生长减慢,MTT法检测结果显示增殖抑制率达18．3％～77．5％（P〈0．05）,呈良好的时间一剂量效应关系,HSP70mRNA的表达下调。结论姜黄素能够有效抑制人食管癌细胞EC-9706的增殖．其机制可能与抑制HSP70mRNA的表达有关。     

siRNA沉默CathepsinB对人食管鳞状细胞癌增殖的影响

目的:评估人类食管鳞癌组织中CathepsinB在体内的表达水平和功能。方法:收集53例术中食管鳞癌标本,通过免疫组织化学染色、免疫印迹分析和逆转录-定量聚合酶链式反应检测人食管鳞癌组织、癌旁组织中CathepsinB的mRNA和蛋白表达。构建能有效抑制人食管癌EC9706细胞CathepsinB表达的siRNA序列,用Western blotting从蛋白水平证实沉默效果。靶向沉默CathepsinB基因后用CCK8法检测细胞增殖水平。结果:免疫组化结果显示,CathepsinB在食管癌组织中表达增高,且CathepsinB阳性表达者与肿瘤组织的分化程度、淋巴结转移明显相关性(P<0.05),但其表达与患者的性别、肿瘤浸润深度、肿块最大径、远处转移、临床分期无明显相关性(P>0.05)。WB和RT-PCR检测结果显示,在食管癌组织中CathepsinB的蛋白和mRNA表达量均高于癌旁组织(P<0.05)。结论:相对于癌旁组织,CathepsinB在食管癌组织中表达上调;靶向沉默CathepsinB基因后能有效抑制人食管癌细胞EC9706的体外增殖能力;CathepsinB在食管癌发生发展及细胞增殖过程中起着重要的作用,可能为食管癌早期诊断及分子靶向治疗提供研究切入点。     

微RNA-340-5p靶向分化抑制因子3抑制人食管鳞状细胞癌细胞的增殖、迁移及侵袭

目的 探索miRNA-340-5p对分化抑制因子3(ID3)的调控机制及对食管鳞状细胞癌细胞生物学功能的影响.方法 通过生物信息学分析、qRT-PCR及蛋白质印迹法初步验证人食管鳞状细胞癌Eca109细胞中miRNA-340-5p对ID3表达的影响,并检测12对食管鳞状细胞癌组织和癌旁正常组织中miRNA-340-5p和ID3的表达水平.采用双荧光素酶报告基因实验验证miRNA-340-5p对ID3的调控作用.采用CCK-8、平板克隆形成实验及Transwell实验考察miRNA-340-5p对Eca109细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响.结果 通过生物信息学分析及实验验证筛选出11个最有可能与ID3基因结合的miRNA,其中miRNA-340-5p在转录和翻译水平对ID3表达的下调作用最显著.双荧光素酶报告实验结果证实miRNA-340-5p能与ID3基因直接结合.相比癌旁正常组织,miRNA-340-5p在食管鳞状细胞癌组织中低表达、ID3 mRNA高表达(P均<0.01),且在癌组织中miRNA-340-5p与ID3 mRNA表达水平呈负相关(r=-0.71,P<0.01).细胞功能学实验表明,miRNA-340-5p能够抑制Eca109细胞的增殖、迁移和侵袭(P均<0.01).结论 miRNA-340-5p靶向ID3基因抑制人食管鳞状细胞癌细胞的增殖、迁移及侵袭.     

DNA甲基化异常对mir-615-5p在胰腺癌细胞株PANC-1中表达影响

目的:描述胰腺癌细胞株中DNA异常高甲基化对ndRNA表达抑制所起的作用.观察DNA甲基转移酶抑制剂对miR-615-5p在胰腺癌细胞株PANC-1中甲基化状态和表达的影响.方法:甲基化芯片筛选出在胰腺癌细胞株PANC-1中存在异常甲基化的miRNA.采用去甲基化药物5-氮杂胞苷(5-aza-2-adeoxycyfid...     

LTF基因在胃癌细胞株BGC823中的表达及其与启动子甲基化的相关性

目的：检测Lactotransferrin（LTF）基因在胃癌细胞株BGC823内的甲基化和表达情况,探讨LTF的DNA启动子区甲基化异常与其在胃癌内表达的相关性。方法：用亚硫酸氢盐测序PCR方法（BSP）检测BGC823启动子区甲基化状态,使用real-timePCR和Westernblot法分别检测LTF基因在BGC823内的mRNA和蛋白表达水平。同时使用去甲基化剂5-aza-CdR处理胃癌细胞株,观察给药前后的DNA甲基化状态和mRNA表达情况。结果：BGC823启动子甲基化率达53.6%,使用5-aza-CdR后,药物处理的两组（药物浓度2μmol/L组和药物浓度10μmol/L组）和对照组甲基化率差异和LTF的mRNA表达差异有统计学意义（P＜0.05）,并且随着BGC823启动子甲基化程度的下降,其mRNA和蛋白表达增加。而药物处理组间差异无统计学意义（P＞0.05）。结论：LTF基因在胃癌细胞株BGC823内表现为较高甲基化状态,而且LTF的表达和其启动子区甲基化情况相关,使用去甲基化剂能逆转DNA的甲基化情况从而使其mRNA重新表达。