丙型肝炎发病中特异性细胞毒性T细胞的作用及其意义

随着对丙型肝炎病毒致病机理的深入研究，ＨＣＶ特异性细胞毒性Ｔ细胞的作用日益引起人们的重视。研究表明，ＨＣＶ感染者肝小叶内活化ＣＤ８＋Ｔ细胞浸润，识别感染肝细胞表达的抗原与主要组织相容性抗原ＭＨＣ分子（对于人类又名人类白细胞抗原ＨＬＡ）复合物，杀伤靶细胞，清除病毒。对ＨＣＶ特异性ＣＴＬ的研究可能使丙型肝炎的发病机理和防治研究进一步深入。     

慢性丙型肝炎肝组织HCV特异性CTL活性对干扰素应答效果的影响

目的 了解肝组织丙型肝炎病毒（HCV）特异性细胞毒性T淋巴细胞（CTL）活性对慢性丙型肝炎患者干扰素治疗效果的影响。方法 用标准铬释放法对45例拟接受α干扰素治疗的慢性丙型肝炎（慢丙肝）患者肝组织CD8^ HCV特异性细胞毒性T淋巴细胞（HCV－CTL）活性进行检测，观察CTL活性与干扰素疗效的关系。结果 45例慢丙肝中20例（44．4％）肝组织HCV－CTL活性阳性。在完成干扰素治疗的42例中，19例HCV－CTL活性阳性。经过6个月的干扰素治疗，42例中共18例（42．9％）获得治疗终点完全应答15例（78．9％）为ETR，而23例HCV－CTL活性阴性患者仅3例（13．05）为ETR（P＜0．01）；10例持续应答者均为HCV－CTL活性阳性患者。结论 机体细胞免疫，尤其是CD8^ HCV-CTL介导的细胞免疫在决定慢性丙型肝炎干扰素治疗的效果中起重要作用。     

丙型肝炎病毒T细胞抗原表位及其免疫学意义

HCV引起免疫损伤的机制至今尚不清楚。细胞免疫可能起了重要作用，尤其是细胞毒性T淋巴细胞（CTL／Tc)的作用，进行丙型肝炎病毒T细胞表位的研究有助于阐明HCV持续性感染机制，并为研制抗病毒疫苗奠定基础。本对近年来HCVT细胞抗原表达的研究时展作一综述。     

丙型肝炎病毒T细胞抗原表位及其免疫学意义

HCV引起免疫损伤的机制至今尚不清楚。细胞免疫可能起了重要作用 ,尤其是细胞毒性T淋巴细胞 (CTL Tc)的作用。进行丙型肝炎病毒T细胞表位的研究有助于阐明HCV持续性感染机制 ,并为研制抗病毒疫苗奠定基础。本文对近年来HCVT细胞抗原表位的研究进展作一综述     

转基因表达HBV抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞受体

目的 通过逆转录病毒介导HBV抗原特异性细胞毒性T细胞(CTL)的T细胞受体(TCR)转基因表达,初步观察其结合活性.方法 从HLA-A2阳性急性乙肝患者外周血中诱导、分选、克隆和扩增HBV抗原特异性CTL;提取细胞RNA,用RT-PCR、5'-RACE和OVER-LAP PCR等方法获取TCR的α和β链编码基因;构建TCR重组逆转录病毒,介导特异性TCR分别在人Jurkat T细胞和HLA-A2阳性健康人CD8 T淋巴细胞上表达.结果 从1例HLA-A2阳性急性乙肝患者样本中分别获得了2组TCR Vα、Vβ配对,分别命名为α21β13、α15β13,包装的重组逆转录病毒滴度为(1.5 ～5.0)×105 IU/mL,用针对目标TCR的特异性Vβ链抗体(抗Vβ13 TCR-PE)和HLA-A2限制性表位特异性五聚体(pentamer)进行免疫荧光染色,重组TCR在T细胞表面获得表达:其中在Jurkat细胞上转入的Vβ13链表达细胞占1.06％ ～2.25％,在HLA-A2阳性健康人T细胞上Vβ13阳性细胞和pentamer阳性细胞分别占到1.03％ ～2.06％和1.05％ ～1.12％,在HLA-A2阴性健康人T细胞上Vβ13阳性细胞和pentamer 阳性细胞均低于0.05％.结论 通过逆转录病毒介导可以使HBV特异性CTL TCR获得转基因表达,具有结合HLA-A2限制性表位的活性.     

丙型肝炎病毒非结构区5个细胞毒性T细胞表位的鉴定

目的 采用T细胞表位预测软件结合体外实验鉴定丙型肝炎病毒(HCV)特异性细胞毒性T细胞(CTL)表位.方法 采用T表位预测软件Rankpep预测HCV特异性CTL表位,选择候选CTL表位加以合成;用候选CTL表位肽分别刺激HCV感染者以及健康志愿者的外周血单个核细胞(PBMC),采用酶联免疫斑点试验(ELISPOT)检测PBMC中肽特异性分泌IFN-γ的斑点形成细胞(spots forming cells,SFC)的水平,采用细胞内细胞因子染色(intracellular cytokine staining,ICS)检测PBMC中肽特异性IFN-γ+CD8+T细胞的水平.结果 用5条候选CTL表位肽[NS3 450(TVPQDAVSR)、NS3 594(GPTPLLYRL)、NS4b 78(SMMAFSAAL)、NS5a 416(SEENVSVVF)和NS5a 367(TVSSALAEL)]分别刺激10个HCV感染者和2个健康者的PBMC后,健康者的PBMC不产生IFN-γ而7个HCV感染者的PBMC产生IFN-γ;HCV感染者的PBMC中肽特异性分泌IFN-γ的细胞的频率为(5-36)SFC/105 PBMC,肽特异性IFN-γ+CD8+T细胞占总CD8+T细胞的百分比为0.02%～0.25%.结论 ELISPOT结果和ICS结果证实5条肽NS3 450、NS3 594、NS4b 78、NSSa 416和NS5a 367为全新的HCV特异性CTL表位.     

检测Epstein-Barr病毒特异性细胞毒性T淋巴细胞方法的建立及其初步研究

目的建立一种非放射性、简便易行的可检测特异性细胞毒性Ｔ淋巴细胞的方法，并且初步应用于Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒ病毒的细胞免疫应答。方法用重组的ＥＢＶ－ＬＭＰ１痘苗病毒、ＴＫ＋痘苗病毒和杆状病毒系统表达的ＥＢＶ－ＬＭＰ１蛋白分别免疫Ｂａｌｂ／Ｃ小鼠，用Ｐ８１５细胞和乳酸脱氢酶法检测ＥＢ病毒特异性细胞毒性Ｔ细胞的杀伤效应。结果重组ＥＢＶ－ＬＭＰＩ痘苗病毒免疫组原发ＣＴＬ水平和体外诱生的二次ＣＴＬ水平均高于ＴＫ＋痘苗病毒免疫组和正常组；杆状病毒系统表达的ＥＢＶ－ＬＭＰ１蛋白免疫组的ＣＴＬ水平也明显高于正常鼠。结论本法可以较好的反映ＥＢ病毒特异性细胞毒性Ｔ细胞的水平，而且再一次说明ＬＭＰ１基因能够诱发特异性的细胞免疫。     

检测Epstein—Barr病毒特异性细胞毒性T淋巴细胞方？…

目的 建立一种非放射性、简便易行的可检测特异性细胞毒性Ｔ淋巴细胞的方法，并且初步应用于Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｒ病毒的细胞免疫应答。方法 用重组的ＥＢＶ－ＬＭＰ１痘苗病毒、ＴＫ＾＋痘苗病毒和杆状病毒系统表达的ＥＢＶ－ＬＭＰ！蛋白分别免疫Ｂａｌｂ／Ｃ小鼠，用Ｐ８１５细胞和乳酸脱氢酶法检测ＥＢ病毒特异性细胞毒性Ｔ细胞的杀伤效应。结果 重组ＥＢＶ－ＬＭＰ１痘苗病毒免疫组原发ＣＴＬ水平和体外诱生的二次ＣＴＬ     

丙型肝炎特异性细胞毒性T细胞及其免疫应答的研究进展

本文主要对丙型肝炎特异性细胞毒性Ｔ细胞的免疫应答，ＭＨＣ－Ｉ类分子在ＨＣＶ感染中的作用，ＣＴＬ的表位及丙型肝炎慢性化与ＣＴＬ的关系做了综述。     

致敏树突状细胞活化细胞毒性T细胞抗肿瘤作用的研究

目的：研究树突状细胞（DCs）激活的细胞毒性T细胞的抗肿瘤及预防肿瘤发生的作用。 方法： 细胞因子诱生人PBMC未成熟DCs，加入肿瘤细胞抗原提取物致敏DCs产生成熟DCs；通过细胞形态、表面标记鉴定成熟DCs，MTT法测成熟DCs活化的细胞毒性T细胞(CTL)的体外杀伤活性；裸鼠体内注射活化CTL观察其抑制移植瘤生长及发生的作用。 结果： 经过7 d培养，获得大量形态典型、具有强烈刺激增殖能力、高表达CD80(63.5%)、CD83（67.6%）和CD3/ HLA-DR(83.2%)的DCs。其活化的CTL在20∶1效靶比时对抗原来源细胞株自身的杀伤率达75%以上，对同系细胞株的杀伤活性为35%-45%，对其它种系肿瘤细胞仅有微弱杀伤力（P<0.01）。CTL对裸鼠结肠癌HT-29移植瘤有特异性的生长抑制和预防生成作用（P<0.05）。CTL治疗组肿瘤组织中PCNA表达水平显著低于对照组（P<0.05）。 结论： 肿瘤细胞抗原活化的DC诱导CTL对肿瘤有特异性的杀伤作用，体内应用可特异性抑制移植结肠癌的生长或预防小鼠结肠癌移植瘤的发生。     

中国人群HIV-1B亚型Nef蛋白特异性细胞毒性T细胞反应的研究

目的探讨中国人群HIV-1B亚型Nef蛋白特异性细胞毒性T细胞(CTL)反应特征及其与病毒载量以及CD4细胞数量间的关系。方法选取33例HIV-1B亚型感染者。用合成的HIV-1B亚型Nef全基因序列肽库作为抗原,ELISPOT方法检测HIV-1B亚型Nef蛋白特异性CTL反应,同时测定病毒载量及CD4细胞数量。结果70％的感染者对Nef产生特异性CTL反应,单一肽段能够被识别的频率不超过40％,应答强度为(1102±2136)SFC(斑点形成细胞数)／106 PBMC。HIV-1B亚型Nef特异性CTL应答的强度和频率之间没有显著的相关性。HIV-1 Neff特异性CTL反应强度与病毒载量间存在显著负相关,与CD4细胞数量间存在显著正相关。结论初步确定了Nef蛋白CTL应答的优势区域。这些区域主要集中在一些高度保守的氨基酸序列。提示HIV-1B亚型Nef特异性CTL应答在疾病进展中对机体具有保护性作用。     

结外细胞毒性T细胞/NK细胞淋巴瘤

ＲＥＡＬ(修订欧美淋巴瘤 )分类和ＷＨＯ淋巴造血系肿瘤分类草案将源自自然杀伤 (ＮＫ)细胞和Ｔ淋巴细胞的淋巴瘤作为同一类型列出 ,其中新认识到的作为明确病种结外细胞毒性Ｔ细胞和ＮＫ细胞的淋巴瘤类型有肠道Ｔ细胞淋巴瘤 (肠病相关或不相关 )、皮下脂膜炎样Ｔ细胞淋巴瘤、鼻腔ＮＫ/Ｔ细胞淋巴瘤、肝脾γ/δＴ细胞淋巴瘤、原发皮肤间变性大细胞淋巴瘤等。近年来国际淋巴瘤研究者已经认识到这些淋巴瘤在临床症状、组织学、免疫学等方面存在一些共同特征 :主要发生在淋巴结外部位 ,有地域人群和解剖部位特点 ,多具有高度侵袭性 ;组织学上表…     

丙型肝炎患者血清HSP70水平的检测及HSP70-HCV肽诱导CTL作用

目的 :检测丙型肝炎患者及正常人血清中HSP70的水平 ,探讨HSP70 HCV肽体外诱导特异性CTL的作用。方法 :先用ELISA法筛选出丙型肝炎患者及正常人血清 ,再用双夹心ELISA法检测血清HSP70 ,并分析抗HCV抗体和HSP70之间的关系。用HSP70 HCV肽激活外周血单个核细胞后 ,通过51Cr释放试验测定CTL的杀伤活性。结果 :76份血清 (抗HCV抗体阳性 2 8例 ,正常人血清 4 8例 )中 ,抗HCV抗体阳性患者HSP70的检出率为 82 .1% ,正常人血清中HSP70的检出率为18.8%。HSP70的检出率与HCV感染呈显著相关 ( χ2 =2 8.77,P <0 .0 1)。HCV感染者血清HSP70的含量显著高于正常人。HSP70与HCVC区肽 (DLMGYIPAV)的混合物 ,可诱导 1例患者的CTL对自体HCV肽致敏靶细胞的杀伤率达 37.8% ,而用HCV肽单独作用则不显著。结论 :HCV感染可刺激机体过表达HSP70 ,同时HSP70可能有增强HCV表位肽递呈促进CTL特异性杀伤HCV感染细胞的作用     

调节性T细胞及其在病毒感染中的研究进展

调节性T细胞已成为当今免疫学研究的热点，此类细胞通过细胞接触或分泌细胞因子作用于效应性T细胞或抗原呈递细胞而发挥调节作用。近年来研究表明，调节性T细胞在保持机体抗病毒免疫和避免自身组织过度病理损伤的平衡中扮演重要角色。本文就此类细胞的产生、发育、作用机制及其在慢性病毒感染中的研究进展作一综述。     

乙型肝炎患者HBcAg18-27表位特异性细胞毒性T细胞的研究

目的 对乙肝患者尤其是慢性乙肝患者外周血HBcAg18-27表位特异性细胞毒性T细胞(CTL)的分布频率及功能状态进行研究.方法 应用多色流式分析结合HLA-A*0201限制性表位肽/五聚体复合物技术对乙肝患者外周血HBcAg18-27表位特异性CTL进行精确定量,应用胞内细胞因子染色技术结合流式细胞分析技术研究HBcAg18-27表位特异性CTL穿孔素,颗粒酶B,干扰素-γ的分泌水平.结果 在急性与慢性乙型肝炎患者外周血中均可测到HBcAg18-27表位特异性CTL,两者的分布频率存在显著性差异.慢性乙肝患者外周血中HBcAg18-27表位特异性CTL分泌穿孔素,颗粒酶B,干扰素的水平明显降低.结论 HBcAg18-27表位特异性CTL在乙型肝炎病毒清除中起到重要作用,慢性乙肝患者外周血HBcAg18-27表位特异性CTL存在功能缺陷.     

慢性乙型肝炎患者HBV特异性细胞毒性T细胞PD-1的表达研究

目的 检测慢性乙型病毒性肝炎患者外周血中HBV特异性CD8 细胞毒性T淋巴细胞表面细胞程序性死亡受体1(programmed cell death 1,PD-1)的表达情况.方法 采集慢性乙型肝炎患者外周血,直接离体情况下利用MHC-I-肽-五聚体技术标定HBV表位特异性细胞毒性T淋巴细胞以及荧光抗体标记细胞表面PD-1分子,经流式细胞仪检测分析.结果 在慢性乙型肝炎患者,HBV核心抗原18-27特异性CTL表达PD-1上调,达(79.0±12.5)%,显著高于总CD8 T细胞(27.7±14.8)%,以及CMV特异性CTL(20.6±5.9)%.结论 慢性乙肝患者HBV特异性CTL高表达PD-1分子,可能与慢性乙肝患者HBV特异性CTL功能低下密切相关.     

丙型肝炎病毒NS3区辅助性T细胞抗原表位的应答

观察２例慢性ＨＣＶ携带者及１例ＨＣＶＲＮＡ转阴者外周血淋巴细胞对ＨＣＶＮＳ３区辅助性Ｔ细胞抗原表位的应答。方法用血清学方法检测患者的ＨＬＡ分型。根据计算机软件分析和文献资料,合成了１个位于ＨＣＶＮＳ３区长度为１４个氨基酸的辅助性Ｔ细胞表位,与在ＧｅｎｅＢａｎｋ中已发表达的３４个ＨＣＶ全长序列进行了比较。     

CD4~+ CD25~+调节性T细胞在慢性丙型肝炎病毒感染中的研究进展

调节性T细胞(Treg)是一群具有免疫无能和免疫抑制功能、并在诱导和维持机体正常免疫耐受过程中发挥重要作用的细胞。关于慢性丙型肝炎病毒(HCV)感染中Treg表型、亚群及功能的研究也不断深入。本文旨在回顾分析CD4+Treg在慢性HCV感染中的主要研究现状,并就Treg的数量变化、表型和亚群及其作用等以及在慢性HCV感染中的特征和不统一之处加以总结归纳,以期对HCV感染中Treg的变化有更全面合理的认识。     

细胞毒性T淋巴细胞增殖、分化能力对HIV/HCV重叠感染患者病情进展的影响

目的 探讨HIV/HCV重叠感染患者细胞毒性T淋巴细胞增殖能力和分化状态对病情进展的影响.方法 采用流式细胞仪检测CD57、CD27和CD28在CD8+T细胞上的表达,根据其表达差异,判断CD8+T细胞的增殖能力和不同的分化状态,比较HIV/HCV重叠感染者和单独HCV感染者增殖能力和分化状态的差异.探讨CTL功能与病情进展的关系.结果 HIV/HCV重叠感染者中CD57在CD8+T细胞上高表达28.84%±4.49%,而在HCV单独感染者中较低表达8.24%±5.05%,两组差异非常显著(P＜0.001).CD57+CD8+T细胞的百分数与HCV载量对数值间存在着正线性相关(P=0.023,R2=0.21).HIV/HCV重叠感染者的CTL细胞分化状态以晚期为主,而HCV单独感染者的CTL细胞分化状态以中期为主,两者比较差异非常显著(P＜0.001).结论 HIV/HCV重叠感染患者较HCV单独感染者CTL细胞增殖能力较低、呈终末期分化状态,进而影响CTL的免疫应答,可能是重叠感染者肝病进展的原因之一.