PCR－小卫星DNA指纹图在异基因造血干细胞移植植活指标监测中的应用

为了解异基因骨髓移植治疗某些遗传及恶性血液性疾病的植活监测指标，用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）扩增具有高度多态性的小卫星ＤＮＡ３３．１、３３．６位点，联合地高辛标记的位点特异性寡核苷酸探针杂交的方法，以小卫星ＤＮＡ指纹图为特异性遗传标志，对６例异基因骨髓移植，１例脐血移植进行植活指标监测，６例获得供者源性细胞植活证据。结果显示：小卫星ＤＮＡ指纹图个体特异性强，可作为监测异基因造血干细胞移植植活的可靠格标，尤其是同血型，同性别，ＨＬＡ配型表型全相合的移植；该方法程序简单，操作方便，灵敏度高，可达０．５％，最早获得植入证据的时间是＋１５天，仅需模板ＤＮＡ１００ｎｇ；如果扩增位点增加，可提高个体识别能力。     

可变串联重复序列的高度多态性用于骨髓移植植入验证

采用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）扩增可变串联重复序列（ｖａｒｉｂａｌｅｎｕｍｂｅｒｔａｎｄｅｍｒｅｐｅａｔ，ＶＮＴＲ）的３３．６位点，加地高辛标记的位点特异性寡核苷酸探针杂交的方法，制作出ＰＣＲ－ＤＮＡ片段长度图像，它具有良好的个体特异性，遗传稳定性和同一性，灵敏度达０．５％。运用该方法成功地对１例慢性粒细胞性白血病患者进行了骨髓移植后的植入验证。     

HLAⅡ类基因PCR-SSP分型技术在骨髓移植配型中的应用

建立快速、准确的ＨＬＡ基因分型方法,满足临床移植配型的需要。方法通过序列特异性引物聚合酶链反应,对拟行骨髓移植的１０例血液病患者及１２名相关供者的ＨＬＡ－Ⅱ类基因ＤＲＢ１,ＤＱＢ１位点扩增,琼脂糖凝胶电泳分析ＰＣＲ产物并确定其基因型。结论该方法具有快速准确,特异性高,简便省时的特点。     

应用MS32单位点小卫星DNA探针检测小儿急性淋巴细胞性白血病PCR－DNA指纹

利用单位点ＰＣＲ－ＤＮＡ指纹，检测小儿急性淋巴细胞性白血病患者外周血淋巴细胞（混有白血病细胞）和粒细胞基因组ＤＮＡ中ＤＩＳ８小卫星位点上ＶＮＴＲ，并将两者进行比较，发现混有白血病细胞的淋巴细胞ＰＣＲ－ＤＮＡ指纹图中存在带型的增多和带强度的变化，表明在此位点白血病细胞的ＶＮＴＲ发生了改变。     

西菲NRAMPI基因变异及其对结核病敏感性

遗传因素可能影响结核病敏感性，但控制敏感性特殊基因尚未鉴定。鼠对一些分支杆菌有自然抗感染力是受与巨噬细胞蛋白１（Ｎｒａｍｐｌ）有关自然抗感染基因影响，但人此基因同系物ＮＲＡＭＰ１对结核病人作用不清楚。本文在西非冈比亚病例对照研究结核病中对ＮＲＡＭＰ１基因多态性进行分析。方法　研究对象为４１０例成人，平均年龄３４．７岁，痰检阳性肺结核患者，对其典型ＮＲＡＭＰ１基因多态性进行特异性序列寡核苷酸杂交和微小卫星ＤＮＡ分析，对照为人种匹配的健康者４１７人。患者中人类免疫缺陷病毒感染者除外。结果　４种基因多…     

中国人食管p16基因突变分析

为了解ｐ１６基因与中国人食管癌遗传易感性的关系，应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ银染法和ＤＮＡ序列测定法对４０例食管癌及相应手术端正常组织ＤＮＡ标本ｐ１６基因进行研究，结果在４０例食管癌标本ＤＮＡ中共发现ＤＮＡ变异１４例，其中９例存在有ｐ１６基因的错义突变和剪接位点突变，５例分别在密码子４１和１４０存在与白种人已发现的相同的正常多态现象，而相应的正常手术切端组织标本中未发现有错义突变和剪接位点突变。提示：（１     

非同位素标记三种小卫星探针制备的DNA指纹图的比较研究

非同位素标记三种小卫星探针制备的ＤＮＡ指纹图的比较研究褚嘉佑，邹浪萍，申滨，蓝翎，欧炯文，张华建，张怀谊，侯云文，申志明，李长久，戴长柏人类基因组中分散存在许多串联重复的短小顺序称为小卫星ＤＮＡ（ｍｉｎｉｓａｔｅｌｌｉｔｅＤＮＡ），等位小卫星重复单位...     

人类疱疹病毒7型DNA断裂包装位点序列分析

目的测定分析人类疱疹病毒７型（ＨＨＶ７）ＤＮＡ末端、断裂位点及包装信号的基因序列。方法ＨＨＶ７感染Ｓｕｐ－Ｔ１细胞后提取ＤＮＡ，ＰＣＲ扩增待测ＤＮＡ片断，与质粒载体连接后筛选目的基因克隆，双脱氧末端终止法测定目的基因序列。结果经测序后得到了ＨＨＶ７ＤＮＡ末端及其断裂位点和包装信号的基因序列。分析比较后发现在靠近ＨＨＶ７ＤＮＡ末端的基因序列中存在与人类端粒重复序列相同的基元序列ＧＧＧＴＴＡ。ＨＨＶ７断裂位点具有ｐａｃ２·Ｘ·ｐａｃｌ的排列，ＨＨＶ７的断裂位点位于包装信号ｐａｃ１及ｐａｃ２之间，只有当三者同时存在时才能构成一个完整的断裂包装位点。并且只有当复制型ＨＨＶ７ＤＮＡ环化时才能形成完整的断裂包装位点。结论ＨＨＶ７ｐａｃ１的基因序列与ＨＨＶ６ｐａｃ１的基因序列具有较高同源性。ＨＨＶ７与ＨＨＶ６具有相似的ＤＮＡ末端基因结构。     

子宫颈癌组织中HPV16癌基因及p53基因的检测

利用ＨＰＶ１６Ｅ６、Ｅ７基因特异性引物，ＰＣＲ技术及抗癌基因ｐ５３外显子７特异性引物，ＰＣＲ－ＳＳＣＰ技术对３５例进展期子宫颈癌组织进行研究，发现：（１）３５例标本中ＨＰＶ１６Ｅ６、Ｅ７ＤＮＡ的总检出率为７１．４２％（２５例），其中同时检出Ｅ６、Ｅ７为３１．４２％（１１例），另外８．５７％及３１．４２％（３例及１１例）仅分别检出Ｅ６、Ｅ７序列。（２）全组未见１例有ｐ５３基因外显子７的点突变及等位基因缺失。该结果说明ＨＰＶ１６与本地区妇女子宫颈癌发生有密切关系，并且癌组织中ＨＰＶ１６Ｅ６、Ｅ７亚基因的分布是不均一的，ｐ５３基因外显子７的改变并不常见。在实验中我们还建立了使用生物素标记的ｄＵＴＰ进行ＰＣＲ－ＳＳＣＰ的技术。     

应用原位PCR技术检测阴茎癌组织中人乳头瘤病毒DNA

目的：研究人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）与阴茎癌的关系。方法：应用原位ＰＣＲ技术对４６例阴茎癌组织中的ＨＰＶ１６和ＨＰＶ１８ＤＮＡ进行检测。结果：３３例阴茎癌中检测到了ＨＰＶＤＮＡ（７１．７％），其中２９例ＨＰＶ１６ＤＮＡ阳性（６３．０％），６例ＨＰＶ１８ＤＮＡ阳性（１３．０％），２例ＨＰＶ１６和ＨＰＶ１８ＤＮＡ均阳性，４例ＨＰＶ１８ＤＮＡ阳性而ＨＰＶ１６阴性；２例淋巴结转移癌，３例癌旁不典型增生组织和１例癌旁增生组织ＨＰＶ１６ＤＮＡ阳性。结论：阴茎癌与ＨＰＶ１６、ＨＰＶ１８感染有密切关系，原位ＰＣＲ技术是一项敏感性高、特异性强的技术。     

紫外线用于预防GVHD

骨髓移植在治疗造血机能障碍和肿瘤方面得到了广泛的应用。但限制骨髓移植发展的主要障碍之一就是移植物抗宿主病(GVHD)。成熟T 细胞是引起GVHD 的主要因素,尽管目前可以通过多种方法有效地去除骨髓中的成熟T 细胞,但随之而来的是不可避免的植活率降低。本文作者曾报道用紫外线预处理同种异基因骨髓,可以完全取代去除T 细胞的方案,移植后达到避免GVHD 的效果。在此作者又证明紫外线的作     

HLA类基因PCR-SSP分型技术在骨髓移植配型中的应用

目的建立快速、准确的 HL A基因分型方法 ,满足临床移植配型的需要。方法通过序列特异性引物聚合酶链反应 (PCR- SSP) ,对拟行骨髓移植的 10例血液病患者及 12名相关供者的 HL A- 类基因 DRB1,DQB1位点扩增 ,琼脂糖凝胶电泳分析 PCR产物并确定其基因型。结果发现 2例患者与其相关供者 HL A- DRB1,DQB1基因全相同 ,其中 1例成功进行了骨髓移植。结论该方法具有快速准确、特异性高、简便省时的特点。     

HLA—A,B血清学分型与DNA分型的比较

目的：比较１３６例样本ＨＬＡ－Ａ，Ｂ血清学分型与ＤＮＡ分型结果。方法：应用聚合酶链反应－序列特异性引物（ＰＣＲＳＳＰ）技术，设计３８对引物，检测常见的ＨＬＡ－Ａ，Ｂ基因。结果：１３６例样本中有６０例血清学分型与ＤＮＡ分型结构不符合（４４．１％）；ＨＬＡ－Ａ特异性血清学分型错误率在纯合子中分别占２３．３％与９．４％（共１１．２％），在ＨＬＡ－Ｂ中分别占４７．４％与１８．４％（共２０．６％）；ＨＬＡ－Ａ特异性血清学分型假阴性６．６％，假阳性２．５％，错误指认特异性２．１％，ＨＬＡ－Ｂ错异性则分别为６．７％，３．６％，１０．３％。结论：ＩＬＡ－Ａ纯合子血清学分型错误率明显高于杂合子（Ｐ〈０．０５）；ＨＬＡ－Ｂ纯合子血清学分型错误率也明显高于杂合子（Ｐ〈０．００５）；ＨＬＡ－Ｂ特异性血清学分型错误率显著高于ＨＬＡ－Ａ特     

用二核苷酸简单串联重复顺序多态位点进行中国人个体鉴别

为建立二核苷酸简单串联重复顺序（ＳＴＲ）多态位点个体鉴别技术系统，应用６个位于不同染色体呈共显性传递的二核苷酸ＳＴＥ多态位点进行中国汉族人个体鉴别研究，这６个位点是Ｄ１Ｓ１０３、Ｄ４Ｓ１７５、Ｄ５Ｓ１０７、Ｄ１９Ｓ４９、Ｄ６Ｓ８９及Ｄ９Ｓ５８。结果显示：（１）６个ＳＴＲ位点基因型数１４～３９个，等位片段数０～２０个；（２）杂合度观察值及估测值分别为０．６５～０．９１及０．６３～０．９３．多态信息含量０．５９～０．９０；（３）６个位点均符合Ｈａｒｄｙ－Ｗｅｉｎｂｅｒｇ平衡；（４）６个位点１５次配对分析中，未见非随机关联；（５）６个位点的亲子关系排除概率０．９９；（６）普通群体中两个无亲缘关系随机个体间６个位点基因型完全一致的概率在１．７×１０－１２～９．２×１０－３３间。结果表明，应用这六个二核苷酸ＳＴＲ位点适于亦足以在中国汉族人中进行个体鉴别．故将此检测及数据处理系统，命名为ＤＮＡ身份号码。     

用PCR扩增分析中国汉族人D1S80位点的遗传多态性

用扩增片段长度多态性技术分析人类的Ｄ１Ｓ８０位点的ＤＮＡ多态性，检测了１０９名无关中国汉族人，发现了１８个等位基因，５０种基因型，杂合性为０．７７，个人鉴别力为０．９６．观察的基因型频率的分布符合Ｈａｒｄｙ－Ｗｅｉｎｂｅｒｇ遗传平衡。检测的二例二代３口之家的基因型结果说明该位点属孟德尔式遗传。该位点个人鉴别力高，ＰＣＲ方法简便、灵敏，可在个人识别和亲子鉴定中发挥重要作用。     

小环DNA

在细胞中广泛存在长度在０．１～２μ的多分散共价闭环ＤＮＡ分子，称为小环ＤＮＡ或ｐｌａｓｍｉｄ－ｌｉｋｅ ＤＮＡ，可能是核ＤＮＡ或线粒体ＤＮＡ的产物，它可以通过膜系统进行基因漂移，在细胞各部之间信息交流，特别是在核遗传系统与线粒体遗传系统的相互调解、细胞突变、衰老和其它分子病过程中可能起到非常重要的作用。     

治疗重型再生障碍性贫血有新法

治疗重型再生障碍性贫血有新法最近一例重型再生障碍性贫血患者接受哈尔滨血液病研究所异基因末梢干细胞移植获成功。据该移植负责人马军教授介绍，异基因末梢干细胞移植是目前世界上最先进的医疗技术，它替代了骨髓移植，对白血病、再生障碍性贫血、免疫功能缺陷病、各种...     

HLA—DQA1,DQB1基因与特发性膜性肾病关联研究

为探讨上海地区特发性膜性肾病（ＩＭＮ）与ＨＬＡ－Ⅱ类基因的关联，本研究用聚合酶链反应（ＰＣＲ）及序列特异性寡核苷酸（ＳＳO）探针杂交方法，对３３例上海地区汉族ＩＭＮ患者及７０例同一地区 正常人作了ＨＬＡ－ＤＱＡ１、－ＤＱＢ１位点的等位基因分型，并比较其基因频率。结果表明：ＩＭＮ组ＤＯＡ１０１０１等位基因频率高于对照组，统计学处理有显著性差异（ＲＲ＝３．０４３，Ｐ＝０．００２，Ｐｃ－０．０１８）。ＤＱＢ１０６０４等位基因频率较对照组高，而ＤＱＢ１０３０１等位基因频率较对照组低，但统计学处理后差异均不显著（Ｐ＜０．０５，Ｐｃ＞０．０５），以上结果提示，１ＭＮ的发病机制可能与免疫遗传因素有关。     

胃肠道平滑肌肿瘤DNA含量与临床病理的关系

应用流式细胞术对８４例胃肠道平滑肌肿瘤的细胞ＤＮＡ含量及其倍体特征进行定量分析。细胞分裂像为０、１、２～４、５～９和≥１０个／１０ＨＰＦ时，异倍体率分别为０，５０％，７５％，９２．８％和１００％（Ｐ＜０．００５）；细胞异形性为０，＋，＋＋和＋＋＋时，异倍体率分别为３．２％，６０％，９５．８％和１００％（Ｐ＜０．００５）。平滑肌瘤３０例无１例异倍体，平滑肌肉瘤４０例均为异倍体，而潜在恶性平滑肌肿瘤１４例中出现４例异倍体（２５．５７％，Ｐ＜０．０１）。肿瘤大径６ｃｍ以上、恶性生长方式、或肿瘤中心有坏死时，异倍体率分别为６４．３％，７９．５％，６８．３％。异倍体肿瘤病人的５年生存率明显低于二倍体肿瘤病人（Ｐ＜０．００５）。结果提示，细胞分裂像在１个／１０ＨＰＦ以上，出现轻度细胞异形性；肿瘤大径≥６ｃｍ、恶性生长方式、或肿瘤中心有坏死时，ＤＮＡ含量均有显著增高，异倍体肿瘤病人预后明显变差。     

微卫星DNA序列在鉴别肿瘤转移细胞中的应用

目的利用微卫星ＤＮＡ研究人乳腺癌裸鼠模型中的遗传稳定性及其早期发现微转移的方法。方法将人乳腺癌移植于裸鼠乳腺脂肪垫，提取组织ＤＮＡ，在３个微卫星位点（Ｄ１４Ｓ６８、Ｄ１８Ｓ６９、Ｄ２０Ｓ１９９）对人乳腺癌、裸鼠移植瘤及其转移灶进行ＰＣＲ分析。结果裸鼠移植瘤及其转移灶在３个位点与人乳腺癌具有相同的微卫星ＤＮＡ。结论裸鼠移植瘤及其转移灶来源于人乳腺癌。人乳腺癌在异种移植、裸鼠体内连续传代及转移，体外培养过程中具有遗传稳定性。本法是一种简单、敏感、特异性强的鉴别肿瘤转移细胞的方法。