共查询到20条相似文献,搜索用时 15 毫秒
1.
目的 克隆H-2K^bcDNA及研究其在多种真核细胞中的表达。 方法 RT-PCR法扩增H-2K^bcDNA,克隆入双顺反子逆转录病毒载体pGCEN,PA317包装出重组病毒后,分别感染NIH3T3、COS7及MM45T.Li,PCR和RT-PCR分析目的基因表达,FACS分析H-2K^b在细胞膜上的表达。结果 以双顺反子逆转录病毒载体pGCEN介导,分别建立了H-2K^b基因转导细胞:NIH3T 相似文献
2.
3.
人骨形成蛋白-3成熟肽cDNA的克隆、测序及表达 总被引:2,自引:2,他引:2
目的:扩增、克隆人骨形成蛋白-3(hBMP-3)成熟肽cDNA基因,利用大肠杆菌表达hBMP-3成熟肽.方法:PCR方法扩增hBMP-3成熟肽cDNA基因,双脱氧终止法测序正确后,克隆入大肠杆菌表达载体pDH,受控于PRPL启动子,重组质粒pDHB-3m以大肠杆菌DH5α为宿主菌在42℃进行温度诱导.结果:扩增出hBMP-3成熟肽cDNA基因,序列测定完全正确;含重组质粒pDH-B3m的工程菌诱导后在SDS-PAGE上出现一条新生蛋白带,分子质量为14.5ku,与预期hBMP-3成熟肽分子量大小一致,约占菌体总蛋白的28%.结论:成功扩增、克隆hBMP-3成熟肽cDNA基因,并可在大肠杆菌中得到高效表达 相似文献
4.
本文以HER-2/neu癌基因表达产物为抗原免疫BALB/C小鼠,采用常规淋巴细胞杂交瘤技术立一株稳定分泌抗P^185McAb的杂交瘤株5E12,McAb5E12属IgG亚类,与SKBR-3,T47D乳癌细胞系呈阳性反应,与HT29,EC109,DAC-1,SP2/0,成纤维细胞及小鼠NIH3T3等细胞系列呈阴性反应,30例乳癌组织石蜡切片同时以自制抗P^185McAb5E12及进口McAbC-e 相似文献
5.
重组丙型肝炎病毒基因载体的构建与表达 总被引:1,自引:1,他引:0
应用基因重组技术。从载体CDZ2酶切获得1.73kbDNA片段(含16d93bp的HCV结构区cDNA,其特异性已为southernblot证实)。将HCVcUNA片段插入载体pcDNA3,构建HCV重组体。经在大肠杆菌中表达,筛选、酶切分析,获得重组HCV(PcDNA3-HCV)。以重组质粒转染H9细胞(CD淋巴细胞系),用G418筛选出抗性细胞。经RT-PCR、dot-ELISA验证表明,pcDNA3-HCV能在H9细胞中进行复制、转录和表达。这为丙型肝炎发病机理的研究提供了一个有用模型。 相似文献
6.
基因重组构建MDR基因表达载体及其表达研究 总被引:1,自引:0,他引:1
利用基因重组技术,成功地构建了MDR I基因片断的表达载体pGE-Hmdr-1,用氯化钙方法转化E.coli HB101,挑选20个克隆扩增培养,经提质粒,酶切,Agarose电泳检测证实:其中4个克隆含有重组质粒,选用含重组质粒载体的菌株扩增培养,经IPTG诱导,超声波破碎,抽提蛋白,GSH-agarose亲和层析纯化,SDS-PAGE电泳检测证实:此重组载体已表达所需的目的蛋白(GST-mdr 相似文献
7.
运用DNA重组技术,将用RT-PCR方法克隆的大鼠肾皮质受体相关蛋白319个氨基酸的核苷酸序列导入载体pBluescript和表达载体pGEX中,分别构建了重组质粒pBSK9RAP和pGEX-9RH7,转化入大肠杆菌XL1-Blue和DH5α中,经IPTG,x=gal抗生素筛选阳性克隆,扩增后,重组质粒用限制性内切酶图谱分析及DNA测序分析,证明插入了方向正确,表达阅读框架正确。 相似文献
8.
目的: 重组法制备纯化乙酰辅酶A:胆固醇酰基转移酶(ACAT)N末端膜外结构域(氨基酸1~126)。 方法:经PCR扩增得到的ACAT的N末端膜外结构域(氨基酸1~126)用EcoRI酶解,插入到表达载体pGEX-2TK中,得到重组表达质粒pGEX-2TK/ACAT(氨基酸1~126)。阳性重组子在大肠杆菌中经IPTG诱导表达GST-A-CAT(氨基酸1~126),重组表达菌裂解上清液经GSH-Sepharose CL-4B亲和柱纯化。 结果:SDS- PAGE 和Western blotting 分析显示得到了纯的GST-ACAT(氨基酸1~126)融合蛋白。 结论:ACAT的N末端膜外结构域(氨基酸1~126)的分离纯化为抗GST-ACAT(N 末端片段)抗体的制备及其ACAT结构和功能关系的进一步研究打下了基础。 相似文献
9.
目的: 克隆造血干细胞因子( S C F)并在 C H O 细胞中表达。方法: 采用 P C R 方法从p R C/ C M V(含 S C Fc D N A)中钓取 S C F c D N A 膜外段活性区,克隆入真核表达载体pc D N A3,转染入 C H O 细胞;用 R T- P C R 方法检测 m R N A 水平表达及通过协同刺激骨髓细胞集落形成来检测转染细胞上清的生物活性。结果:转染 S C Fc D N A 的 C H O 细胞可表达 S C Fm R N A,其细胞培养上清可协同 G M - C S F刺激骨髓细胞形成集落数比 G M - C S F 单独作用高 2 倍,转染外源基因对细胞周期没有明显影响。结论:转染 S C Fc D N A 在 C H O 细胞中表达,转染细胞上清协同 G M - C S F 刺激骨髓细胞集落的形成,而本身对集落的形成没有影响。 相似文献
10.
目的:使重组人促红细胞生成素(rhEPO)在CHO细胞中获得高效表达。方法:利用基因重组构建了两个人促红细胞生成素cDNA重组表达质粒pED-EPO和pEF-EPO,分别用DEAE-dextran法转染COS7细胞,作瞬时高表达,选pEF-EPO用磷酸钙共沉淀法转染CHO-dhfr-细胞,加入氨甲喋呤(MTX)扩增、选择,作稳定性高表达。结果:pED-EPO和pEF-EPO转染COS7细胞后72h表达量分别为17.8和21.0ng/ml,pEF-EPO转染CHO-dhfr-细胞,随着MTX浓度的增加,CHO-dhfr+的克隆数减少,而混合克隆的EPO表达量逐渐升高。筛选了一株稳定性高表达rhEPO的细胞株,其3d表达量为16μg/ml。结论:rhEPO在CHO细胞中获得了高表达 相似文献
11.
目的:构建一个能在哺乳动物细胞中高表达人粒细胞集落刺激因子(G-CSF)cDNA的重组质粒。方法:利用化学合成引物,进行PCR,对人G-CSFcDNA5AUG侧翼序列进行翻译优化突变。测序确证后,重组人表达载体pED,构建成质粒PED-GCSF,用DEAE-Dextran法转染COS7细胞,ELISA法定量测定rhG-CSF表达水平。结果:转染COS7细胞后48h收集的上清rhG-CSF表达量为5 相似文献
12.
酶联免疫吸附试验检测HCV NS3-4A蛋白酶活性 总被引:4,自引:1,他引:4
目的 建立一种检测丙型肝炎病毒(HCV)NS3-4A丝氨酸蛋白酶的酶联免疫吸附试验(ELISA)方法,用于筛选HCV蛋白酶抑制剂。方法 将闰pMAL-c2/NS3-4A转化到大肠杆菌K12TB1中,经IPTG诱导表达,亲和层析柱纯化后得到麦芽糖结合的NS3/NS3-4A融合蛋白,用Western blot分析其免疫学活性,并以酶联免疫吸附试验检测其生物学活性。结果 SDS-PAGE电泳分析并用考马 相似文献
13.
14.
目的:研究丙型病毒非结构蛋白基因3(ns3基因)在体外真核细胞中的诱导表达。方法:以PCR方法从含HCVns3基因的重组载体pBns3中扩增出ns3基因,并将其插入到克隆载体pGEM-T中,再与表达载体pMSG重组,以利到重组表达载体pMSG-ns3。然后采用磷酸钙沉淀法将其转染哺乳动物CHO细胞,经地塞米松(DM)诱导,采用ELISA及Western-blot技术检测NS3蛋白的表达水平。结果: 相似文献
15.
将克隆的HCV5’NCR序列反向插入pSP72的EcoRV切点,构建一种能转录HCV-RNA的质粒pSnc-2。以RT-PCR从抗HEVIgM阳性病人血浆中扩增一段238bp的HCV-cDNA,反向插入pSnc-2中克隆的5’NCR序列的NcoⅠ切点,构建插入突变型HCV-cDNA重组体pSnc-e。应用限制性酶切和PCR对这两种重组质粒进行了鉴定,为HCV-RNA的定量PCR提供有用的内参照模板。 相似文献
16.
人表皮生长因子cDNA序列分析及其在大肠杆菌中的表达 总被引:1,自引:0,他引:1
应用逆转录聚合酶链反应从人脐静内皮细胞RNA中扩增了表皮生长因子的cDNA,采用基因重组技术克隆到pGEM-3zf载体中,经全自动荧光测序仪测定了其序列。在PCR扩增引物上分别加有起始密码子和终止密码子,以利于原核表达。经亚克隆,EGFcDNA克隆到表达载体pBV220的Eco RI,SmaⅠ位点上,在大肠杆菌DH5α中进行表达。 相似文献
17.
目的:通过融合蛋白表达方式将编码人碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)cDNA在大肠杆菌DH5a中的表达,为bFGF进一步研究提供材料来源,方法:用多聚酶链反应(PCR)及DNA重组技术将PCR产物克隆到pGEM-5Z载体并测序,然后克隆到表达载体pXH上。结果:转化重组质粒pLX1的大肠杆菌经42℃温控诱导4 ̄5h,SDS-PAGE分析显示融合蛋白的分子量约35000,薄层扫描分析表明该蛋白占菌体 相似文献
18.
EVALUATIONOFCAPTOPRILRENOGRAPHYWITH~(99m)Tc-MAG_3INTHEDIAGNOSISOFRENOVASCULAR HYPERTENSIONKangZengshou;(康增寿)ChenFang;(陈方)andWa... 相似文献
19.
抗HSV—1杂交瘤细胞系的建立及单抗特性研究 总被引:1,自引:1,他引:0
以HSV-1为抗原,免疫BALB/C鼠,取其脾细胞在PGE介导下与SP2/0细胞常规融合,IFA法筛选鉴定,反复克隆,共获得7株能稳定、持续分泌抗HSV的McAb的杂交瘤细胞系。核型分析染色体数为87 ̄103条之间,Ig类型分别为IgG1、IgG2b、IgG3,腹水抗体效价在10^-5 ̄10^-7之间免疫沉淀。SDS-PAGE分析,2株与132K多肽发生特异性反应,只具有HSV-1型特异性,其余3 相似文献
20.
CHANGES OF ENDOTHELIN-1 GENE EXPRESSION IN RAT BRAINS DURING ISCHEMIA AND ISCHEMIC REPERFUSION 总被引:4,自引:0,他引:4
CHANGESOFENDOTHELIN-1GENEEXPRESSIONINRATBRAINSDURINGISCHEMIAANDISCHEMICREPERFUSIONWuWeiping(吴卫平);KuangPeigen(匡培根)andLiZhenzho... 相似文献