βB2-晶体蛋白的克隆和在大肠杆菌中的高效表达和纯化

目的表达βＢ２－晶体蛋白，以研究其结构与功能的关系。方法用ＲＴ－ＰＣＲ的方法从大鼠晶状体中获得βＢ２－晶体蛋白的ｃＤＮＡ，将ｃＤＮＡ克隆到表达载体ｐＭＯＮ５７４３，转染Ｅ．ｃｏｌｉ菌株ＪＭ１０１，以萘啶酮酸诱导表达βＢ２－晶体蛋白，用ＤＥＡＥ纤维素层析纯化。结果ＲＴ－ＰＣＲ扩增获得约７００ｂｐ的ｃＤＮＡ，在Ｅ．ｃｏｌｉ中获得高效表达，βＢ２－晶体蛋白占细菌总蛋白的３０％。ＤＥＡＥ纯化后获一２４ｋＤ蛋白，分子量与βＢ２－晶体蛋白一致。结论βＢ２－晶体蛋白ｃＤＮＡ可在大肠杆菌中获高效表达，表达产物的分子量约２４ｋＤ。     

O-乙酰氨基半乳糖基化氨基酸的化学合成

目的 为获得精确定位糖基化糖肽，合成Ｏ－乙酰氨基半乳糖基化氨基酸，作为糖肽固相合成的原料。方法 利用环状糖结构的半缩醛羟基可与含侧链羟基氨基酸的羟基形成糖苷键，用化学方法，使过乙酰化ＣａＩＮＡｃ与氨基被９－Ｆｌｕｏｒｅｙｌｍｅｔｈｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌ（Ｎ－α－Ｆｍｏｃ）保护的丝氨酸或苏氨酸连接。结果 反应产物通过反相制备ＨＰＬＣ纯化后，可作为Ｏ－连接糖肽合成构建单位（Ｂｕｉｌｄｉｎｇ ｂｌｏｃｋ     

重组人促红细胞生成素的HPLC／ESI／MS肽图谱分析

重组人促红细胞生成素（ｒＨｕＥＰＯ）是一种复杂的糖蛋白药物,含有三个氮连接和一个氧连接的糖基化位点。肽图谱分析是糖蛋白分析的有效手段,可是由于糖基化的影响,不是所有理论酶解位点都酶解了,需要实验验证。本文采用谷氨酸内切酶（Ｇｌｕ－Ｃ）将ｒＨｕＥＰＯ所有糖基化位点酶解成含糖肽段,ＨＰＬＣ／ＥＳＩ／ＭＳ肽图谱分析,并通过源内碰撞诱导解离（Ｉｎ－ｓｏｕｒｃｅ ＣＩＤ）分析了氨基酸序列。理论肽段有７段,检出了６段,只有一个三肽未检出。实验得到了含双硫键的肽段,通过ＣＩＤ分析确证了小分子肽段的氨基酸序列。     

白细胞介素—2的基因克隆及其在啤酒酵母细胞中的表达

用ＰＣＲ方法从白细胞介素－２（ＩＬ－２）ｃＤＮＡ全序列中扩增成熟肽基因片段，酵母中间载体ＰＳＫ４３ＳＢ融合后，重组于酵母游离型表达载体ＹＥＰＨＣ８，获得了高效表达，并对其糖基化进行了研究。     

阳离子交换色谱—步法制备级纯化单克隆抗体

目的：应用快速蛋白液相色谱系统（ＦＰＬＣ）建立一种一步法制备级纯化单克隆抗体方法．方法：将ＭｃＡｂ腹水用ｐＨ６．０，０．０ｌｍｏ１／ＬＰＢ透析或稀释８倍后直接上ＳＰ－４０ＨＲ阳离于交换色谱柱，用ＰＢ－ＮａＣｌ二元线性离子梯度洗脱，即得到纯化的ＭｃＡｂ．结果：每次上样量７０～８０ｍｌ腹水，可获得纯化ＭｃＡｂ５００～５８０ｍｇ，得率７～７．５ｍｇ／ｍｌ腹水，回收率为７０％～７５％，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ检测纯度为大于９２％，ＡＢＣ染色法测定活性为１：８００００（７．８×１０－１１ｍｏ１／Ｌ），一次纯化周期仅需５０ｍｉｎ。结论：本方法操作简单，既具有常压色谱的制备量，又具有ＨＰＬＣ的纯化速度，是获得高纯度、高活性ＩｇＧ类ＭｃＡｂ的实用纯化方法。     

α-晶体蛋白对抗氧化酶失活的保护

目的 研究α－晶体蛋白的分子伴侣特性。方法 采用ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ－３００ＨＲ凝胶性分离纯化牛α－晶体蛋白。应用分光光度计检测超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）和过氧化氢酶（ＣＡＴ）的活性,以酶失活后保留的酶活性占其对照组活性的百分比表示α－晶体蛋白的伴侣作用。结果 糖与酶的孵育导致时间依赖性的ＳＯＤ和ＣＡＴ失活。果糠和核糖比６－磷酸葡萄糖和葡萄糖具有糖基化诱导ＳＯＤ和ＣＡＴ的快速失活效应。α－晶体蛋白与     

脐血单个核细胞IL—12和IFN—γ表达的观察

本文探讨新生和脐血单个核细胞（ＣＢＭＣ）白细胞介素１２（ＩＬ－１２）和γ－干扰素（ＩＦＮ－γ）基因表达水平；观察重组ＩＬ－１２地ＣＢＭＣＩＦＮγ基因表达的影响。采用逆转录－聚合酶链式反应（ＲＴ＿ＰＣＲ）测定８例新生儿ＣＢＭＣＩＬ－１２ｐ４９ＲＮＡ和ＩＦＮ－γｍＲＮＡ表达，用ＥＬＩＳＡ法测新一儿ＣＢＭＣ细胞培养上清液中ＩＦＮ－γ浓度。结果显示：新生儿ＣＢＭＣ一外受刺激后表达的Ｉ国２ｐ４０ｍＲＮＡ、Ｉ     

中国人p5G1／TaqⅠ等位基因频率

应用ｐ５Ｇ１γ－晶体蛋白基因探针，对２０例正常人的γ－晶体蛋白基因区ＴａｑⅠ位点进行限制性片段长度多态（ＲＦＬＰ）分析。发现中国人γ－晶体蛋白基因区存在３个ＴａｑⅠ多态性等位片段位点，可产生３种多态片段。其等位基因频率Ａ２（０．４５）、Ｂ２（０．７２）和Ｃ２（０．６０）均高于国外报道的美国人数值。表明这３个多态部位的等位基因频率具有种族差异。     

IL—12对新生IFN—γ产生的影响

白细胞介素１２（ＩＬ－１２）是一种重要的细胞因子，由单核／巨噬细胞，Ｂ细胞产生，诱导Ｔ细胞和ＮＫ细胞产生γ干扰素（ＩＦＮ－γ）在细胞免疫反应发挥多种作用，新生儿产生ＩＬ－１２的能力鲜见报道，本用逆转录－聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法检测８例新生儿脐血单个核细胞（ＣＢＭＣ）ＩＬ－１２Ｐ４０ｍＲＮＡ和ＩＦＮ－γｍＲＮＡ表达，及ＥＬＩＳＡ法新生儿ＣＢＭＣ培养上清ＩＦＮ－γ浓度；并观察重组ＩＬ－１２     

γ－晶体蛋白基因的RFLP与先天性白内障的连锁分析

我们应用ｐ５Ｇ１γ－晶体蛋白基因探针，对Ｃｏｐｐｏｃｋ白内障家系成员的γ－晶体蛋白基因区存在的多态性进行了检测，发现了５个单体型，通过限制性片段长度多态（ＲＦＬＰ）连锁分析，未发现γ－晶体蛋白基因簇与白内障的位点有连锁关系。     

大肠杆菌表达的重组人骨形成蛋白—3C端肽的纯化

目的：在用大肠杆菌表达人骨形成蛋白－３羧基端肽段获得成功的基础上，进一步探讨ｒｈＢＭＰ－３Ｃ的纯化方法。     

对氨基苯磺酸胆红素的合成,纯化及鉴定

本文参考Ｊｉｒｓａ、冯仁丰等报道的方法，加以改进，合成了对氨基苯磺酸胆红素（ｂｉｌｉｒｕ－ｂｉｎｓｕｌｆａｎｉｌａｔｅｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ，下称ＢＳＣ），并用高效液相色谱（ＨＰＬＣ）制备柱进行纯化。用红外光谱（ＩＲ）、质谱（ＭＳ）、ＨＰＬＣ、薄层色谱（ＴＬＣ）、元素分析、可见吸收光谱、重氮反应法等手段对产物进行了结构鉴定和纯度分析。结果表明：合成粗制品中含单、双对氨基苯磺酸胆红素，纯度为４５－５５％。纯化的单、双对氨基苯磺酸胆红素可望成为结合胆红素测定的参考标准代用品。     

葡萄球菌核酸酶去C-末端的肽段52和79的分离纯化

①目的建立金黄色葡萄球菌核酸酶（ＳＮａｓｅ）去Ｃ－末端的肽段５２（ＳＮ５２）和７９（ＳＮ７９）的提纯方法，并鉴定其纯度。②方法应用低温乙醇沉淀，ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－５０和ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ－１００柱层析分离纯化；十二烷基硫酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）和高效液相层析（ＨＰＬＣ）鉴定其纯度。③结果纯化的ＳＮ５２和ＳＮ７９经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ鉴定均为单一区带；ＨＰＬＣ鉴定均为一个峰。④结论纯化的ＳＮ５２和ＳＮ７９已达电泳纯和层析纯，可用于其构象的比较研究。     

βB2—晶体蛋白的克隆和在大肠杆菌中的高效表达物纯化

表达βＢ２－晶体蛋白，以研究其结构与功能的关系。方法用ＲＴ－ＰＣＲ的方法从大鼠晶状体中获βＢ２－晶体蛋白的ｃＤＮＡ，将ｃＤＮＡ克隆到表达载体ｐＭＯＮ５７４３，杂Ｅ．ｃｏｌｉ菌株ＪＭ１０１，     

HPLC-ESI/MS法分析大豆胚芽中的异黄酮--大豆异黄酮和皂苷的研究(Ⅲ)

以ＨＰＬＣ－ＥＳＩ／ＭＳ对大豆胚芽中的异黄酮进行了定量和定性分析。表明ＥＳＩ／ＭＳ能够灵敏而准确地反应色谱峰成分的结构特征。解决了ＨＰＬＣ分析过程微量和不稳定的异黄酮的色谱峰的定性难题。以少数的标样即可对所有结构的异黄酮进行定量。     

葡萄球菌核酸酶去C—末端的肽段52—79的分离纯化

目的 建立金黄色葡萄球菌核酸酶（ＳＮａｓｅ）去Ｃ－末端的５２（ＳＮ５２）和７９（ＳＮ７９）的提纯方法，并鉴定其纯度。方法 应用低温乙醇沉淀，ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－５０和Ｓｅｐｈａｃｒｙｌ Ｓ－１００柱层析分离纯化；十二烷基硫酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）和高效液相层析（ＨＰＬＣ）鉴定其纯度。结果 化的ＳＮ５２和ＳＡＮ７９级ＳＤＳ－ＰＡＧＥ鉴定为单一区带；ＨＰＬＣ鉴定均为一个峰。结论 纯     

大肠癌相关抗原CA—Hb3的纯化及其在胃肠道肿瘤血清学诊断中…

用一株鼠抗人大肠癌单克隆抗体Ｈｂ３，纯化后与溴化氰活化Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ偶联制备免疫吸附柱。用免疫亲和层析法从大肠癌细胞株ＨＲＴ－１８细胞提取液中纯化相应抗原ＣＡ－Ｈｂ３。经多种实验证实ＣＡ－Ｈｂ３是一种新的大肠癌相关糖蛋白抗原，分子量约为６５Ｋｄ，以此纯化抗原作参考标准，用ＳａｎｄｗｉｃｈＥＬＩＳＡ方法检测大肠癌及消化道其他肿瘤患者血清ＣＡ－Ｈｂ３水平。结果表明，ＣＡ－Ｈｂ３对胃肠道肿瘤诊断     

肿瘤抗原MAGE-3预测CTL表位的合成与鉴定

目的 合成并鉴定已预测出的４个ＭＡＧＥ－３ ＨＬＡ－Ａ２限制性ＣＴＬ表位多肽,为后续研究奠定基础。方法 采用固相合成法合成多肽,经ＲＰ－ＨＰＬＣ纯化、纯度分析,用质谱进行定性鉴定。结果 ４个合成肽的纯度都在９５％以上,经质谱分析,各肽的分子量测定值与理论值相符,结论 所得多肽为高纯度的目标肽,为后续研究提供了可靠的保证。     

Immunogenicity and tumor—inhibiting effects of …

目的：黑色素瘤Ｂ１６细胞热休克蛋白－抗原肽复合物（ＨＡＣｓ）及其粗提物（ＨＡＣ－ＣＥｓ）的制备,以及它们的免疫原性和抑瘤效应的研究。方法：应用Ｓｅｐｈａｃｒｙｌ Ｓ－２００凝胶过制备ＨＡＣ－ＣＥｓ,应用亲和层析纯化ＨＡＣｓ,并测其免疫功能和抑瘤效应。结果：应用凝胶过滤制备的ＨＡＣ－ＣＥ３,ＨＡＣ－ＣＥ４,ＨＡＣ－ＣＥ５和应用亲和层析纯化的ＨＡＣ６０,ＨＡＣ７５和ＨＡＣ９７均不同程度地降低肿瘤发生率     

慢性肾炎尿降钙素基因相关肽,内皮素—1变化的临床意义

降钙素基因相关肽（ｃａｌｃｉｔｏｎｉｎｇｅｎｅｒｅｌａｔｅｄｐｅｐｔｉｄｅ，ＣＧＲＰ）是一种强有力的血管舒张肽，内皮素－１（Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｎ１，ＥＴ１）是一种强有力的血管收缩肽。同步观察慢性肾炎患者尿液血管活性物质（ＧＲＰ、ＥＴ－１）变化，对探讨二者在慢性肾炎中的作用具有十分重要的意义，现将我们的临床观察结果报告如下。１　材料和方法１－１　仪器和试剂：ＤＤＬ－５型低速冷冻离心机，ＣＯＢＲＡ－１型自动γ计数仪。１２５Ｉ－ＣＧＲＰ和１２５Ⅰ－ＥＴ－／放免试剂盒（由解放军总医院东亚免疫技术…