肺炎链球菌的耐药基因及其分子生物学检测

目的 肺炎链球菌对β-内酰胺类,大环内酯类抗生素的耐药率在世界各地以较快速度上升,其流行趋势已引起医学界的普遍关注,但不同地区差异较大.肺炎链球菌的β-内酰胺耐药性主要由青霉素结合蛋白变异所致,非pbp基因突变也会导致β-内酰胺耐药性,大环内酯耐药性肺炎链球菌的耐药表型MLS型,M型分别由耐药基因ermB和mefA介导.分子生物学方法的应用使肺炎链球菌耐药性的发生得到较全面的阐述,同时对耐药基因的检测也更快速和准确.     

儿童社区获得性呼吸道感染的病原学研究

目的探讨儿童呼吸道感染的病原学特点,以期为临床治疗提供依据.方法采集1784名呼吸道感染患儿咽拭标本常规细菌培养和/或PCR法支原体,K-B法测定流感嗜血杆菌、肺炎链球菌耐药性,以套式-聚合酶链反应及PCR技术进行肺炎链球菌耐药基因TEM基因、ermB基因和mefA基因检测,加DAN测序分析.结果 129例细菌培养阳性,依次为流感嗜血杆菌、肺炎链球菌、肺炎克雷伯杆菌、金黄色葡萄球菌、阴沟肠杆菌、不动杆菌属;153例支原体阳性,以肺炎支原体、人型支原体为主,少数为肺炎衣原体.其中流感嗜血杆菌、肺炎链球菌对青霉素、克林霉素、红霉素、阿奇霉素、阿莫西林/克拉维酸、复方甲基异恶唑、头孢菌素及红霉素等10种常用抗生素均不同程度耐药,但对氯霉素和万古霉素均敏感;肺炎链球菌β内酰胺酶基因(TEM)、红霉素耐药基因(甲基化酶基因ermB)表达阳性,但未表达红霉素耐药基因(外排基因mefA).结论流血嗜血杆菌和肺炎链球菌本地区呼吸道感染儿童主要致病菌,对常用抗生素有不同程度耐药,肺炎支原体和人型支原体也是重要致病原;肺炎链球菌耐药可能是通过表达TEM基因和ermB基因实现的.     

肺炎链球菌耐药基因ermB、mefA、tetM与转座子整合酶基因intTn的检测

目的 研究耐药基因ermB、mefA、tetM与转座子整合酶基因intTn在携带肺炎链球菌的北京儿童中分布特点。方法对185株呼吸道感染患儿鼻咽部分离的肺炎链球菌进行以下检测：E-test、琼脂稀释或纸片扩散法测定对大环内酯类、四环素、β-内酰胺类及头孢类等15种抗生素的药物敏感性。PCR检测大环内酯类耐药基因ermB和mef/A，四环素耐药基因tetM以及转座子Tn1545的整合酶基因intTn。结果185株肺炎链球菌的药敏结果显示，对红霉素、克林霉素、四环素和复方磺胺甲基异嗯唑的耐药率较高，分别为78．9％、76．2％、86．0％和78．7％，对阿莫西林，克拉维酸、头孢克洛、头孢曲松和头孢呋辛耐药率较低，分别为2．2％、15．5％、2．8％和14．1％。所有红霉素耐药株均检出ermB和／或mefA，其中79．5％为ermB阳性，17．8％为ermB和mefA同时阳性，2．7％为mefA阳性。tetM基因在分离株中的阳性率是87％，四环素耐药组的tetM基因携带率是96．9％，高于敏感组（26．9％）。四环素耐药株的红霉素耐药率（90．0％）亦高于敏感株组（11．5％）。87．6％的肺炎链球菌存在intTn基因，intTn基因阳性组的红霉素、四环素、氯霉素、复方磺胺甲基异嗯唑和环丙沙星的耐药率较intTn基因阴性组高。分离株最常见的基因组合是intTn＋terM＋ermB，占58．4％。结论北京地区呼吸道感染儿童鼻咽部肺炎链球菌耐大环内酯类抗生素的主要原因是ermB编码的23S rRNA甲基化酶致靶位改变。tetM基因编码蛋白质的核糖体保护作用，是肺炎链球菌四环素耐药的重要机制。接合性转座子Tn1545的存在与菌株的红霉素和四环素耐药关系密切，可能是肺炎链球菌多重耐药的重要机制之一。     

肺炎链球菌的耐药性和pbp2b基因扩增产物图谱的相关性

目的 了解肺炎链球菌对青霉素和其它抗生素的耐药情况；对40株青霉素敏感菌株和30株青霉素不敏感菌株进行pbp2b基因扩增产物RFLP图谱相关性研究。方法 采用肉汤稀释法、E-试验和K-B纸片法进行抗生素药物敏感试验；通过用特异性引物pF和pR对肺炎链球菌进行PCR扩增，并对扩增产物进行限制性内切酶HaeⅢ消化反应。结果 肺炎链球菌对青霉素的不敏感率为9．9％～14．6％；40株青霉素敏感菌株(MICs≤0．094μg/ml)中的39株(97．5％)为s1、s2和s3三种之一，1株为r1；30株青霉素不敏感菌株(MICs≥0．12μg/ml)中的26株(86．7％)为r1-16六种之一，其余4株为s1。结论 青霉素和β-内酰胺酶类抗生素对北京地区的肺炎链球菌具有活性；肺炎链球菌的耐药性和pbp2b基因扩增产物图谱之间有相关性。     

肺炎链球菌对大环内酯类抗生素耐药的研究现状

肺炎链球菌是院外获得性肺炎、化脓性脑膜炎、中耳炎、鼻窦炎、败血症等常见感染性疾病的主要致病菌。自从1993年美国推荐使用大环内酯类抗生素作为治疗院外获得性肺炎的一线药物以来，并因其耐受性好和抗菌谱广而得到广泛的应用。但是，近年来随着各种大环内酯类抗生素大量用于临床和不合理应用，肺炎链球菌对大环内酯类抗生素耐药性日趋严重，甚至出现肺炎链球菌分离菌株对青霉素类、头孢菌素类、大环内酯类等多种抗菌药物同时耐药，     

细菌中 blaTEM耐药基因研究现状及展望

β-内酰胺类抗生素是临床上广泛应用的一类抗生素, 其抗菌机制是通过抑制细菌的细胞壁合成来达到杀菌的效果。然而, 由于β-内酰胺类耐药基因在菌株间的广泛传播, 导致β-内酰胺类抗生素的使用受到了极大的挑战。其中, blaTEM耐药基因是β-内酰胺酶的主要编码基因之一, 迄今已鉴定出243个blaTEM亚型, 其在抗生素耐药性研究中具有极其重要的地位。本文将从blaTEM基因的发现、结构及启动子, blaTEM基因的分布和传播, blaTEM基因的耐药机制以及研究现状进行综述, 旨在为细菌中β-内酰胺类耐药基因亚型的研究提供借鉴。     

广州地区儿童急性呼吸道感染鼻咽部常见病原菌及其耐药性分析

目的了解儿童急性呼吸道感染(ARTIS)鼻咽部常见的病原菌及其耐药性.方法对285例取鼻咽拭子进行培养,分离鉴定病原菌,同时对肺炎链球菌和流感嗜血杆菌(Hi)进行耐药性监测.结果 285例中共检出病原菌161株,肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、卡他莫拉氏菌、金黄色葡萄球菌的分离率分别为20.4%、16.5%、13.0%、6.7%.肺炎链球菌对青霉素耐药率高达57.5%,同时对非β-内酰胺类抗生素复方新诺明、四环素、红霉素的耐药率已高达79.2%～89.5%,对头孢曲松、阿莫西林/棒酸尚具有较好的敏感性(85.1%～93.3%).Hi对氨苄西林的耐药率为13.3%,对头孢克洛、头孢曲松、头孢呋新、阿莫西林/棒酸均有很好的敏感性(96.4%～100%),对四环素、复方新诺明的耐药范围分别为25.3%～56.6%.结论肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、卡他莫拉氏菌和金黄色葡萄球菌是广州地区儿童急性呼吸道感染的常见病原菌.肺炎链球菌和流感嗜血杆菌耐药形势严峻,抗生素合理应用尤为重要.     

肠杆菌科产超广谱β-内酰胺酶细菌耐药性研究进展

肠杆菌科细菌是临床感染,尤其是医院内感染的常见致病菌,产生β-内酰胺酶是其耐β-内酰胺类抗菌药物的主要机制。近十余年该科细菌中不同种属、特别是克雷伯菌属,大肠埃希菌产生的超广谱β-内酰胺酶(ESBLs),能水解第三代头孢菌素及氨曲南,且常为多重耐药株,已引起临床注意。 根据ESBLs对β-内酰胺酶抑制剂的稳定性分为对β-内酰胺酶抑制剂敏感的ESBL和对其耐药的IRESB两大类,根据其衍生来源分为TEM、SHV型及非TEM、SHV型,ESBLs酶蛋白表型已近70种,几乎都由耐药质粒介导,耐药性极易传播。通过NCCLs推     

60株鲍曼不动杆菌耐药基因携带情况分析

目的研究临床分离的60株鲍曼不动杆菌耐药谱及Ⅰ型整合子和β-内酰胺酶等基因携带情况。方法用微量肉汤稀释法测定16种临床常用抗菌药物的最小抑菌浓度;PCR检测β-内酰胺酶、Ⅰ型整合子和外排泵基因,对阳性基因进行序列分析。结果60株菌中,多重耐药株53株,占88.3%;6株携带OXA-23基因,均对包括碳青霉烯在内的5类以上抗菌药耐药,并具有高耐药特性;38株携带PER-1基因,对头孢菌素类耐药率显著高于PER-1基因阴性菌株(P<0.01);45株检出Ⅰ型整合子结构基因,多重耐药率明显高于Ⅰ型整合子阴性菌株(P<0.01);Ⅰ型整合子和PER-1基因同时阳性25株,与7株两者同为阴性菌株相比,多重耐药率增高(P<0.01),但耐药程度无显著差别。结论Ⅰ型整合子基因及β-内酰胺酶类基因的作用是导致鲍曼不动杆菌多重耐药的重要原因;OXA-23基因阳性菌株多为泛耐药和高耐药株,有必要采取有效措施控制其传播。     

青霉烯类β-内酰胺酶抑制剂的研究进展

β-内酰胺类抗生素因其安全有效,多年来在抗感染治疗中一直占有重要地位,但同时细菌对常用药物也在不断产生耐药性,细菌对β-内酰胺类的耐药机制研究表明,质粒介导或染色体突变使细菌产生β-内酰胺酶,破坏β-内酰胺环,使抗生素失活,是最常见和最重要的机制,解决细菌耐药性的一种策略是,使用β-内酰胺酶抑制剂与抗生素合用,如棒酸〈Clavulanic     

临床分离铜绿假单胞菌β-内酰胺类耐药相关基因的研究

目的 调查临床分离铜绿假单胞菌（Pseudomonas aerugirtosa，Pa）β-内酰胺类耐药相关基因的流行状况。方法 采用VITEK-32全自动微生物系统对26株临床分离的Pa进行抗生素敏感试验，PCR方法检测11种β-内酰胺酶和外膜蛋白oprD2编码基因。结果 26株PaTEM、IMP、OXA的阳性率分别为42．3％、30．8％、3．8％，oprD2基因缺失高达92．3％，而SHV、CTX-M-1、PER、VEB、GES、VIM、DHA、MIR基因均阴性。结论 我院临床分离Pa对β-内酰胺类抗生素耐药的主要原因为产TEM、IMP型β-内酰胺酶和缺失外膜蛋白oprD2。     

革兰阳性球菌感染抗菌治疗进展

需氧革兰阳性球菌是细菌性感染的重要病原菌。近十余年来在全球范围内由该类菌所致感染呈增多趋势，尤其是革兰阳性球菌的耐药性日趋严重。主要有甲氧西林(苯唑西林)耐药葡萄球菌、青霉素不敏感肺炎链球菌、万古霉素耐药肠球菌、大环内酯类耐药革兰阳性球菌等。     

肺炎链球菌pbp2B基因突变与耐药表型关系的研究

肺炎链球菌主要通过青霉素结合蛋白基因突变，从而改变细胞壁上高相对分子质量青霉素结合蛋白（PBP）的结构，降低了其对抗生素分子的亲和性而产生对青霉素等B内酰胺类抗生素的耐药性。我们对分离自本院的30株肺炎链球菌（青霉素敏感4株，中介5株，耐药21株）用聚合酶链反应（PCR）扩增p6p2B基因，对PCR产物直接进行DNA测序，并与青霉素敏感的SpR6株序列（GenBank登录号NC003098）相比较。     

广州地区儿童急性呼吸道感染鼻咽部常见病原菌及其耐药性分析

目的了解儿童急性呼吸道感染（ARTIS）鼻咽部常见的病原菌及其耐药性．方法对285例取鼻咽拭子进行培养，分离鉴定病原菌，同时对肺炎链球菌和流感嗜血杆菌（Hi）进行耐药性监测．结果285例中共检出病原菌161株。肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、卡他莫拉氏菌、金黄色葡萄球菌的分离率分别为20．4％、16．5％、13．0％、6．7％．肺炎链球菌对青霉素耐药率高达57．5％，同时对非B一内酰胺类抗生素复方新诺明、四环素、红霉素的耐药率已高达79．2％．89．5％，对头孢曲松、阿莫西林／棒酸尚具有较好的敏感性（85．1％－93．3％）．Hi对氨苄西林的耐药率为13.3％。对头孢克洛、头孢曲松、头孢呋新、阿莫西林／棒酸均有很好的敏感性（96．4％-100％），对四环素、复方新诺明的耐药范围分别为25．3％-56．6％．结论肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、卡他莫拉氏菌和金黄色葡萄球菌是广州地区儿童急性呼吸道感染的常见病原菌．肺炎链球菌和流感嗜血杆菌耐药形势严峻，抗生素合理应用尤为重要．     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的分子生物学研究进展

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin-resistant Staphylococcus aureus，MRSA)不仅对所有β-内酰胺类抗生素具有内在耐药性，而且通过获得其它耐药基因而呈现对多数其它类抗菌药的多重耐药性，给临床治疗带来严重问题。本从分子生物学水平就MRSA耐药决定因子(mec)与辅助基因(fem)在耐药性产生中的作用作一简要综述。     

β-内酰胺类抗生素及其酶抑制剂临床联合使用研究进展

β-内酰胺酶抑制剂和β-内酰胺类抗生素的联合应用是目前临床比较成功的一种对抗特殊耐药机制的方法。细菌耐药性不断增加是一个全球性的严峻问题，因此药物直接靶向作用和逆转耐药机制显得十分重要。β-内酰胺酶水解β-内酰胺环中的酰胺键，并且阻止活性药物与靶部位青霉素结合蛋白(PBP)的结合。许多革兰氏阴性菌、葡萄球菌、厌氧菌甚至分枝杆菌都可以产生β-内酰胺酶，     

产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌耐药基因分析

目的 了解邢台地区产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)肺炎克雷伯菌的分子流行病学特点,为临床感染预防和治疗提供依据.方法 采用最小抑菌浓度(MIC)法检测产ESBLs肺炎克雷伯菌的耐药性,选取13种特异性引物采用聚合酶链反应(PCR)的方法检测产ESBLs肺炎克雷伯菌的基因类型.结果 2013年1月至2014年3月从邢台人民医院分离出的125株非重复的产ESBLs肺炎克雷伯菌菌株,耐药基因以blaCTX-M的阳性率最高,为92.0％,blaSHV和blaTEM次之,为82.9％和73.2％.所有菌株均携带1种或1种以上的耐药基因.结论 产ESBLs肺炎克雷伯菌多重耐药现象严重,耐药基因以blaCTX-M、blaSHV和blaTEM为主.医院应加强对ESBLs的监测,降低ESBLs的感染率以及耐药基因的突变,提高治疗感染的效率,防止医院感染的发生.     

6-取代的苯亚甲基青霉烯类β-内酰胺酶抑制剂的特点及合成现状

β-内酰胺类抗生素一直在抗菌药物中占据非常重要的地位,但细菌对这类抗生素耐药性日益发展,严重影响其疗效。研究表明,在β-内酰胺类抗生素的耐药机制中,细菌产生β-内酰胺酶是最重要的机制。临床上分离的耐β-内酰胺类抗生素的大多数菌株(90％以上)产生β-内酰胺酶,行之有效的解决问题的策略之一,     

两例产NDM肺炎克雷伯菌耐药基因分析及治疗方案

目的 对某三甲医院临床分离的肺炎克雷伯菌进行耐药基因及表型分析，为临床治疗和预防耐药菌感染提供参考。方法 对某三甲医院临床分离的两株产NDM型金属β-内酰胺酶(new delhi metallo-beta-lactamase, NDM)进行全基因组检测。结果 两分离菌株含有多种质粒，在质粒上有NDM的耐药基因位点。结论 产NDM耐药菌的基因主要在质粒上，应加强抗生素的合理使用和感染控制措施，以减缓耐药基因的播散，预防耐药菌的产生。     

引起儿童上呼吸道感染的肺炎链球菌的药敏分析

目的 分析引起儿童上呼吸道感染的肺炎链球菌的分布特点及耐药特征.方法 利用全自动微生物鉴定系统VITEK-2对儿童患者分离的菌株进行鉴定和药敏试验.结果 药敏结果分析显示肺炎链球菌对青霉素耐药率高达69.1%,同时,对复方新诺明、红霉素、四环素的耐药率也较高.结论 肺炎链球菌引起儿童上呼吸道感染的耐药情况较严重,并且表现为多重耐药性,今后临床要注意合理使用抗生素.