人外周血单核细胞分化为树突状细胞过程中核转录因子-κB p50的表达及柴胡皂苷a的影响

目的 观察人外周血单核细胞分化为树突状细胞(DC)过程中,核转录因子-κB p50(NF-κB p50)的表达以及柴胡皂苷a对单核细胞分化为树突状细胞的影响.方法 非连续密度梯度离心获取人外周血单核细胞;用含粒单细胞刺激因子(GM-CSF)、IL-4、肿瘤坏死因子(TNF-α)和柴胡皂苷a的RPMI-1640培养液分别对细胞因子组、柴胡皂苷组、联合培养组的单核细胞进行体外培养;应用倒置相差显微镜、瑞氏染色和CD14、CD83、HLA-DR、S-100的免疫细胞化学法鉴定单核细胞和DC;动态观察单核细胞分化为DC过程中不同时间点的NF-κB p50的表达,并进行图像分析.结果 CD14、CD83、HLA-DR、S-100免疫细胞化学法证实所获单核细胞和DC符合各自的形态和表型特征.在含GM-CSF和IL-4的RPMI-1640培养液培养7d时,单核细胞分化成未成熟DC(imDC);在含GM-CSF、IL-4和TNF-a的RPMI-1640培养液继续培养3d时,imDC分化为成熟DC(mDC),两者的细胞核内NF-κB p50表达具有显著性差异(P<0.05).单纯用只含柴胡皂苷a的RPMI-1640培养液培养单核细胞至7d时,可见其细胞核呈NF-κB p50阳性,但未见其分化为DC.若用含GM-CSF、IL-4和柴胡皂苷a的RPMI-1640培养液联合培养7d时,则该单核细胞分化为imDC;加入TNF-α后继续培养3d,imDC的细胞核呈NF-κB p50强阳性,免疫细胞化学法证实imDC已经分化为mDC.联合培养组细胞的表型表达均强于只加细胞因子组(P<0.05).结论 人外周血单核细胞分化为imDC和mDC过程中,细胞核内NF-κB p50表达逐渐增强.单纯用低浓度柴胡皂苷a不能刺激单核细胞分化为DC,但联合细胞因子GM-CSF、IL-4和TNF-α培养时,可使其分化为imDC和mDC.     

白细胞介素-18干预诱导的树突状细胞表型和活性研究

目的：研究白细胞介素-18（IL-18）干预诱导的树突状细胞（DC）的表型和活性。方法:自人外周血单核细胞诱导DC，第5 d起分为IL-18组、TNF-α组和IL-18+TNF-α组，分别加IL-18、TNF-α及IL-18+TNF-α促成熟，用ELISA法测定上清中IL-12含量；用流式细胞仪测定培养8 d DC的CD1a、HLA-DR、CD83及CD86的表达；用MTT法检测3组DC诱导T细胞增殖的作用。用ELISA法测定3组DC刺激T细胞分泌干扰素γ(IFN-γ)的量。结果:IL-18组与TNF-α组CD1a、HLA-DR、CD83及CD86表达无差异，IL-18+TNF-α组CD1a、CD83及HLA-DR阳性率高于IL-18组。IL-18+TNF-α组IL-12量高于IL-18组和TNF-α组(P＜0.05)。IL-18组与TNF-α组DC刺激T细胞增殖作用无差异，IL-18+TNF-α组DC的作用强于IL-18组和TNF-α组。IL-18组和TNF-α组IFN-γ量无显著差异，IL-18+TNF-α组IFN-γ的量高于IL-18组和TNF-α组(P＜0.05)。结论:IL-18干预诱导的DC高表达表面分子，具有明显的免疫刺激活性，IL-18与 TNF-α合用作用更强。     

姜黄素诱导的免疫耐受性人树突状细胞的研究

目的:探讨姜黄素(Curcumin)诱导免疫耐受性人树突状细胞(Dendritic cell,DC)的效果。方法:聚蔗糖-泛影葡胺(ficoll-hypaque,F-H)密度梯度离心法获得健康人外周血单个核细胞(PBMC),在含有重组人粒-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)、重组人白介素4(rhIL-4)的培养基中培养6天。实验共分四组:①未成熟DC组(imDC组)、②姜黄素组(Curcumin,Cur组)、③姜黄素+脂多糖组(Cur+LPS组)、④脂多糖组(LPS组)。流式细胞术检测DC表型CD80、CD86、CD83及HLA-DR的表达情况和DC吞噬葡聚糖的能力,酶联免疫吸附法(ELISA)检测DC分泌白介素-12(IL-12)的能力,混合淋巴细胞反应(MLR)检测DC刺激同种异体T淋巴细胞增殖的能力。结果:Cur能够显著抑制DC共刺激分子CD80、CD86、CD83及HLA-DR的表达,并呈剂量依赖性,与imDC组比较差异无统计学意义;与LPS组比较,Cur+LPS组DC吞噬葡聚糖的阳性细胞百分率显著提高(P<0.05),而刺激同种异体T淋巴细胞增殖的能力则显著下降(P<0.05),IL-12的分泌量也显著下降(P<0.05)。结论:姜黄素能够抑制人树突状细胞的成熟,从而获得免疫耐受性的人树突状细胞。     

TLR2激动剂Pam3CK逆转IL-10转染小鼠髓样树突状细胞免疫功能的研究

目的:观察TLR2激活剂Pam3CK对IL-10转染小鼠髓样树突状细胞免疫功能影响。方法:转染IL-10至小鼠髓样树突状细胞(mDC),TLR2配体Pam3CK刺激48小时,利用流式细胞仪检测DC表面标志MHCⅡ、CD80、CD86及FasL等分子的表达;ELISA检测细胞产生IL-6、TNF-α。结果:IL-10抑制mDC表达CD80、CD86、MHCⅡ类分子,降低其分泌IL-6、TNF-α,促进其表达FasL,而TLR2激动剂刺激增加了IL-10转染DC表达MHC-Ⅱ类分子及CD80、CD86,促进其产生IL-6及TNF-α,抑制了FasL表达。结论:TLR2激动剂可逆转IL-10诱发的DC免疫应答低下。     

树突状细胞体外诱导方案的对比

目的探讨并比较不同细胞因子组合、诱导时间对树突状细胞(DC)体外诱导、成熟,分泌细胞因子水平和刺激淋巴细胞增殖能力的影响,为建立DC体外高效、规模化培育体系提供依据。方法分离健康人外周血单个核细胞(PBMC),贴壁法获得DC前体细胞,用白细胞介素4(IL-4)和粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)诱导2 d,将其分为6组。A组加入肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-1α和前列腺素E2(PGE2);B组加入α干扰素(IFN-α);C组加入脂多糖(LPS);3组细胞继续培育2 d。D~F组细胞先进行1/3体积换液,24 h后,分别再加入上述A~C组的成熟因子,再继续诱导2 d。分别收获各组上清和细胞,进行细胞计数,采用流式细胞术进行表型分析;采用ELISA检测各组DC分泌IL-12p70的水平、采用细胞增殖检测试剂盒刺激淋巴细胞增殖的能力。结果 6组体外诱导体系均能培育出形态学类似DC的细胞,DC数量与纯度(均达到96%以上),各组间无显著性差异。A组与D组比较:CD40、CD80、CD83、CD86共刺激分子表达水平相近,但D组DC分泌IL-12p70水平高于A组;B组与E组比较:E组DC的CD86表达水平显著高于B组,CD80表达量略高于B组,2组DC分泌IL-12p70的水平相近;C组与F组比较:CD40、CD80、CD83、CD86共刺激分子表达水平和分泌IL-12p70的水平均相近。6组DC刺激淋巴细胞增殖水平均相近。三种不同成熟因子(组合)比较:B组DC共刺激分子CD80水平明显低于C组和A组,且IL-12p70分泌水平最低,而C组和A组共刺激分子表达水平与IL-12p70分泌水平相近。结论 TNF-α、IL-1α和PGE-2三种细胞因子联合以及LPS可有效地诱导DC表达高水平免疫共刺激分子、分泌高水平IL-12p70。     

小鼠骨髓源性树突状细胞体外诱导培养方法的比较研究

目的 探讨最佳体外诱导培养小鼠成熟树突状细胞(dendritic cells,DC)的方法.方法 分离、纯化6周龄C57BL/6小鼠骨髓单核细胞,以含10 %胎牛血清、20 ng/ml重组小鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和10 ng/ml重组小鼠白细胞介素-4(IL-4)的RPM I-1640培养基培养7 d,然后将细胞分成对照未刺激组、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)刺激组和TNF-α+脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)刺激组.继续培养48 h后,观察各组细胞形态,检测IL-12、IL-6浓度及细胞表面标志CD11c、CD80、CD86 和MHC Ⅱ.结果 培养9 d后,两刺激组培养的细胞经相差显微镜观察有DC生长.TNF-α刺激组细胞培养上清液中IL-6、IL-12含量显著高于对照组(P＜0.01),但显著低于TNF-α+LPS刺激组(P＜0.05).3组均高表达CD11c,各组间无显著差异;而CD80、CD86和MHCⅡ表达阳性率TNF-α刺激组显著高于对照组(P＜0.01),TNF-α+LPS刺激组显著高于单纯TNF-α刺激组(P＜0.05).结论 联合使用TNF-α与LPS刺激可使DC成熟度提高,分泌IL-6、IL-12增加.     

调节性DC分泌的外体诱导免疫耐受功能的体外研究

为了探讨树突状细胞(DC)分泌的外体(Dex)在诱导T细胞免疫耐受中的作用,体外研究采用供体Dex降低同种异体移植排斥的可能性。从正常人外周血单个核细胞中诱导培养未成熟DC(imDC),用TGF-β1联合IL-10诱导调节性DC,LPS诱导DC成熟。采用流式细胞术方法观察TGF-β1和IL-10对DC表型、吞噬功能的影响;采用超速离心和超滤的方法提纯Dex;Western blot方法检测imDC分泌的Dex(imDex)与调节性DC分泌的Dex(rDex)表达的相关分子;通过CCK-8法分析异源iDex和mDex在混合淋巴细胞反应(MLR)中的生物学功能,并比较rDex与iDex诱导免疫耐受的能力。结果显示,TGF-β1和IL-10可下调DC表面的共刺激分子CD80、CD83、CD86的表达,并诱导调节性DC分泌更多的rDex;异源的mDC分泌的Dex(mDex)在mDC存在时增强MLR,而异源的imDex在imDC存在时一定程度上抑制MLR,rDex诱导的抑制T细胞增殖作用显著强于iDex;rDex表达更多的FasL,提示TGF-β1和IL-10诱导的调节性DC分泌的rDex在免疫耐受中发挥重要作用,有望应用于同种异体移植抗免疫排斥。     

胸腺肽α1联合DC疫苗对结肠癌体内外抗肿瘤的效应

目的观察胸腺肽α1(Tα1)对结肠癌细胞裂解物(TuLy)负载DC(LyDC)的表型和功能的影响,以及二者联合应用对裸鼠结肠癌的治疗作用.方法从健康人外周血单个核细胞中常规诱导培养未成熟DC(imDC),并负载TuLy后制备LyDC疫苗.Tα1体外刺激imDC、LyDC,流式细胞术(FCM)检测DC表型变化;ELISA法检测LyDC与自体T细胞共培养时,Tα1对LyDC分泌IL-12以及活化T细胞分泌IFN-γ水平的影响;MTT法检测LyDC经Tα1刺激后所诱导的细胞毒活性的变化.对HT-29结肠癌裸鼠模型行人源化T细胞免疫重建,观察LyDC与Tα1联合应用时的体内抗肿瘤效果.结果Tα1刺激后的imDC、LyDC表型HLA-DR、CD80、CD86、CD83均上调(P＜0.01);Tα1刺激组上清液中细胞因子IL-12和IFN-γ的水平较未刺激组增加(P＜0.05,P＜0.01);LyDC经Tα1刺激后诱导的CTL细胞毒活性较未经Tα1刺激组增强(P＜0.01).结肠癌裸鼠模型体内的人源化细胞免疫重建成功,在接种HT-29细胞58 d后,LyDC Tα1组和LyDC组的抑瘤率分别为60.41%和37.20%,二组之间瘤体积及瘤质量比较具有统计学意义(P＜0.01).结论Tα1可促进DC分化成熟,并能增强LyDC诱导的CD4 Th1细胞反应和CTL的杀伤效应.Tα1与LyDC疫苗联合应用时具有较好的免疫佐剂活性和抗肿瘤作用.     

钙动员诱导人外周血单核细胞分化为树突状细胞的信号转导

目的初步探讨钙离子载体（CI）在体外迅速诱导人外周血单核细胞（PBMC）分化为树突状细胞（DC）的信号转导途径。方法分离健康献血者的PBMC,在体外用人重组粒／巨噬细胞集落刺激因子（rhGM-CSF）和CI培养40h或rhGM-CSF和TNF-α培养5d,部分PBMC用环胞菌素A（CsA）预处理30min后,再加入CI或TNF-α;相差显微镜下观察细胞的形态;流式细胞仪检测细胞表面CD14、CD80、CD86、CD83、HLS-DR等分子的表达;MTT比色法检测其对同种异体T淋巴细胞的刺激增殖作用;凝胶电泳迁移率变动分析（EMSA）检测不同方法培养的细胞其核转录因子-κB（NF-κB）的活化水平。结果健康献血者的PBMC经rhGM-CSF与CI培养40h或rhGM-CSF与TNF-α培养5d,均可获得DC的典型形态和表面分子的表达,包括CD14表达下调,CD80、CD86及HLA-DR等分子表达的上调,以及较强刺激同种异体T淋巴细胞增殖的作用;其中CI诱导的DC其CD80、CD86、CD83、HLA-DR等分子的上调更明显,刺激T淋巴细胞的增殖能力更强。经TNF-α及CI所诱导分化的DC均具有较好的NF-κB活性。但经CI诱导的DC,其形态、表面标志物、对T淋巴细胞的刺激增殖能力及NF-κB的活性,均受到CsA的抑制;而TNF-α所诱导的DC却不受CsA的影响。结论CI比TNF-α更迅速、更高效地诱导PBMC向DC分化的原因,是信号转导途径的不同,但不论上游信号转导途径有何不同,两者最终都通过激活NF-κB诱导细胞的分化。     

亚硒酸钠对慢性乙型肝炎病毒感染者外周血树突状细胞功能的影响

目的 探讨体外培养诱导慢性乙型肝炎患者外周血树突状细胞(DCs)功能状态改善的方法.方法 用GM-CSF IL-4 INF-a诱生慢性乙型肝炎患者及健康人外周血来源的DCs,在乙肝患者DCs成熟前加入营养浓度的硒(0.3mmol/L)共培养.流式细胞仪(FCM)检测细胞表面CD80、CD86表达水平,四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)检测DCs刺激同种异体淋巴细胞增殖能力及酶联免疫吸附测定法(ELISA法)检测DCs培养上清中白细胞介素12(IL-12)的分泌水平.结果 经营养浓度硒(0.3mmol/L)作用后的乙肝患者的DCs刺激淋巴细胞增殖能力明显高于未经硒作用的乙肝组(P<0.01),IL-12的分泌水平和表面刺激分子也明显高于乙肝组(P<0.01),加硒组和健康组之间则没有显著性差异.结论 体外经营养浓度的硒作用后的乙肝患者的DCs可有效刺激淋巴细胞增殖反应,提高IL-12分泌水平,在一定程度上能恢复DCs的免疫功能,这些为今后DCs的慢性乙型肝炎的免疫治疗提供新思路.     

早期和晚期凋亡细胞对骨髓源性不成熟DC影响的实验研究

目的 研究早期、晚期凋亡细胞对骨髓源性不成熟DC（imDC）的影响。方法 体外以紫外线照射诱导出早期凋亡细胞；将照射后的细胞在37℃，5％CO2条件下孵育10h，得到晚期凋亡细胞；在-70℃条件下反复冻融得到坏死细胞碎片。提取、纯化并培养骨髓源性imDC；分别以流式细胞仪、ELISA、^3H-TdR掺入的混合淋巴细胞反应等方法分析imDC吞噬早期、晚期凋亡细胞或坏死细胞碎片后在表达共刺激分子、分泌IL-12 p70以及刺激T淋巴细胞增殖等方面的差异。结果 imDC吞噬晚期凋亡或坏死细胞碎片后，明显趋于成熟，表现为MHCⅡ、CD40、CD80、CD86的表达均显著上调，分泌IL-12 p70增强，和T淋巴细胞混合培养后可以充分激活T淋巴细胞。而吞噬早期凋亡细胞后，仍然维持不成熟状态，表现为MHCⅡ、CD40、CD80、CD86的表达均维持于低水平，和培养中的imDC相比差异无统计学意义；分泌IL-12 p70的水平以及刺激T淋巴细胞增殖的能力均显著低于吞噬坏死细胞或晚期凋亡细胞后的DC，和培养中的imDC相比差异无统计学意义。结论 早期凋亡细胞和晚期凋亡细胞的性质完全不同，晚期凋亡细胞可以充分活化抗原提呈细胞，并进一步激活T淋巴细胞，而早期凋亡细胞没有这种活化作用。     

转染自体胃癌细胞总RNA的树突状细胞诱导个体化免疫治疗的体外实验

目的探讨转染自体胃癌细胞总RNA的树突状细胞(DC)体外介导抗胃癌的免疫效应。方法制备短期培养的原代胃癌细胞。用rhGM-CSF、rhIL-4和TNF-α体外诱导胃癌患者外周血单个核细胞(PBMC)中DC的发育和成熟,并转染自体肿瘤细胞总RNA,激活自体T细胞产生CTL,用CCK-8试剂盒检测CTL的杀伤活性。应用流式细胞术及混合淋巴细胞培养技术检测DC的免疫功能状态。用ELISA法测定IL-12和INF-γ的水平。结果转染自体肿瘤细胞总RNA的成熟DC,不仅可高表达MHC-I、II类分子及CD80、CD83和CD86协同刺激分子,并可获得高效刺激自体或异体T细胞增殖的能力。转染RNA的成熟DC,分泌IL-12的水平及其刺激产生的CTL培养上清液中INF-γ的水平显著高于单纯成熟DC及未成熟DC;且CTL对自体胃癌细胞的杀伤率显著高于异体组。结论转染自体胃癌细胞总RNA的成熟DC能够体外诱导产生对自体肿瘤细胞具有高度抗原特异性杀伤活性的CTL。     

IL-27促进外周血单个核细胞来源树突状细胞分化成熟

目的:研究IL-27体外对人外周血单个核细胞(PBMC)的来源树突状细胞(DC)分化、成熟及其免疫活性的影响。方法:采集健康成人外周血,密度梯度离心法获得PB-MC,给予GM-CSF、IL-4诱导DC,第5天后根据不同处理因素将DC分为3组:IL-27组、TNF-α组和阴性对照组。倒置显微镜和透射电镜下观察DC形态;流式细胞术(FCM)检测DC表面分子CD1a、CD80、CD83和CD86的表达情况;MTT法检测DC刺激T细胞增殖的能力。结果:IL-27刺激后PB-MC来源DC呈现典型的成熟DC形态学特征。IL-27组DC表面CD1a、CD80、CD83和CD86表达水平较对阴性对照组均明显上调(P<0.05),与TNF-α组DC相比无显著差异。IL-27组DC诱导T细胞增殖的能力较对照组DC明显增高(P<0.05)。结论:IL-27可刺激PBMC来源DC的成熟。     

HBeAg对小鼠骨髓源性树突状细胞成熟的影响

目的 探讨HBe Ag对LPS诱导小鼠骨髓源性树突状细胞(DC)成熟的影响。方法 体外诱导C57BL/6小鼠骨髓细胞分化成未成熟树突状细胞,经CD11c磁珠分选纯化后将DCs随机分为空白对照组、LPS刺激组、HBe Ag+LPS刺激组。流式检测DC表型变化,混合淋巴反应(MLR)检测DC促T淋巴细胞增殖能力,酶联免疫法(ELISA)检测细胞上清液中IL-12的分泌水平,Western blot检测p38磷酸化水平,并设置SB203580组为阳性对照探讨细胞IL-12分泌的可能调节机制。结果 LPS刺激未成熟DC引起细胞表面MHC-Ⅱ、CD86表达升高,刺激同种异体淋巴细胞增殖能力增强,IL-12分泌量增高。HBe Ag可抑制LPS促进DC表面MHC-Ⅱ、CD86表达升高和促淋巴细胞增殖能力增强的作用。LPS刺激DC可引起p38磷酸化水平升高,并呈时间依赖性;HBe Ag或SB203580预处理细胞再予LPS刺激,磷酸化p38表达和IL-12分泌较单纯LPS刺激组明显下降。结论 HBe Ag对LPS引起的树突状细胞的成熟有一定的抑制作用,且HBe Ag可能通过抑制p38MAPK信号通路下调LPS诱导的树突状细胞IL-12的产生。     

恩替卡韦联合细胞因子诱导的杀伤细胞序贯治疗慢性乙型肝炎患者树突状细胞相关功能观察

观察恩替卡韦联合细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced kill cells,CIK)序贯治疗慢性乙型肝炎患者DC功能变化,为指导CIK联合核苷(类)药物抗病毒治疗提供理论依据。以15例接受恩替卡韦联合CIK序贯治疗的慢性乙型肝炎患者为观察对象,单独接受CIK治疗患者为对照,分别在治疗前、HBVDNA500IU/ml及CIK治疗2周后流式细胞技术测定DC表面共刺激分子CD1a、CD80、CD83及HLA-DR表达水平,同时淋巴细胞增殖实验评估DC细胞功能。结果显示15例恩替卡韦联合CIK序贯治疗患者同治疗前相比在接受恩替卡韦治疗并达到HBVDNA500IU/ml时仅有HLA-DR表达水平高于治疗前,其它共刺激分子标志物及淋巴细胞增殖能力没有显著变化。CIK序贯治疗后DC共刺激分子标志物和HLA-DR水平明显升高,并且淋巴细胞增殖能力也明显升高。单独CIK治疗患者同治疗前比较DC表面分子标志物水平及淋巴细胞增殖能力均无变化,同联合治疗组相比DC标志物水平和淋巴细胞增殖能力均低于联合治疗组。以上结果提示恩替卡韦联合CIK序贯治疗明显提高慢性乙型肝炎患者DC共刺激分子及HLA-DR表达,并诱导免疫细胞应答功能,恩替卡韦联合CIK序贯治疗可能通过增强DC相关功能提高慢性乙肝患者的抗病毒疗效。     

NF-κB寡核苷酸诱骗策略构建胶原诱导性关节炎大鼠耐受性DC

目的:探讨NF-κB寡核苷酸诱骗剂(NF-κB ODN Decoy)策略构建胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠脾脏来源的稳定的耐受性树突状细胞(DC),并对其成熟状态进行评估。方法:取CIA大鼠脾脏细胞,运用粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白细胞介素(IL)-4两种细胞因子诱导培养DC,并分为4组:单纯DC组、Decoy-DC组、LPS刺激DC组、LPS刺激Decoy-DC组。对4组细胞进行形态学观察、活力评价、表型鉴定及耐受性评估。结果:各组DC活力均90%。OX-62表达率55%。Decoy-DC组表面共刺激分子CD80和CD86阳性率和平均荧光强度、刺激淋巴细胞增殖能力及IFN-γ分泌能力均显著低于Control-DC组(P0. 05),而IL-10分泌能力显著高于Control-DC组(P0. 05)。LPS刺激Decoy-DC组CD80和CD86阳性率和平均荧光强度、刺激淋巴细胞增殖能力及IFN-γ分泌能力均显著低于LPS-DC组(P0. 05),而IL-10分泌能力显著高于LPS-DC组(P0. 05)。LPS-Decoy-DC组CD80和CD86阳性率和平均荧光强度、刺激淋巴细胞增殖能力与Decoy-DC组比,无显著性差异(P0. 05)。结论:CIA大鼠脾脏细胞经NF-κB ODN Decoy策略成功构建出形态、表型及功能稳定的耐受性DC。     

不稳定型心绞痛患者树突状细胞功能的研究

目的：研究不稳定型心绞痛患者(UAP)树突状细胞(DC)的功能。方法：分离14例UAP和11例正常人外周血单个核细胞(PBMC)，在含粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白介素4(IL-4)的培养条件下制备DC。用流式细胞仪检测DC表面共刺激分子CD 86(B7-2)的表达；混合淋巴反应(MLR)检测DC对同种异体T淋巴细胞的刺激能力；ELISA法测定MLR上清液中的细胞因子。结果：与正常组比较，UAP者DC表面CD 86的表达明显增高；对T淋巴细胞刺激的能力增强；经DC刺激的淋巴细胞分泌致炎细胞因子(IL-1β，IL-6，TNF-α)增多，抑炎细胞因子(IL-10)减少。结论：UAP者DC的功能亢进，由此启动的T淋巴细胞的增殖和炎性细胞因子分泌可能是UAP发病的原因。     

Ag85B和卡介苗增强初治结核病患者树突状细胞的免疫活性

目的研究结核分枝杆菌主要分泌蛋白抗原85B(Ag85B)和卡介苗(BCG)对初治结核病患者树突状细胞(DC)免疫功能的调节作用。方法收集26例健康者及31例初治者,分离外周血单个核细胞。每个样本分成4组,诱导出DC并培养,在第6天对DC进行刺激,分别采用脂多糖(LPS)、BCG、Ag85B对3组细胞进行处理,不加刺激物处理的DC为对照组。处理24 h后收集细胞,流式细胞术检测DC的CD83、CD86、HLA-DR和CD11c水平。ELISA检测DC培养上清中的白细胞介素12(IL-12)、IL-10、γ干扰素(IFN-γ)水平,并用SPSS13.0软件对数据进行统计学分析。结果初治者未处理组中CD83及IL-10的表达量显著低于健康者未处理组,Ag85B组CD83、CD86和IFN-γ的含量显著高于未处理组,BCG组IFN-γ的含显著高于未处理组,LPS对照组CD83、CD86、HLA-DR和IL-10的含量显著高于未处理组。健康者LPS对照组CD83、CD86和IL-10的含量分别显著高于未处理组。结论 Ag85B对初治结核病患者DC的免疫增强功能优于BCG。     

缺氧/复氧对小鼠骨髓树突状细胞表型及生物学活性的影响

目的 探讨缺氧/复氧对小鼠骨髓树突状细胞(DC)表型及生物学活性的影响.方法 培养小鼠骨髓源性DC,分为对照组及缺氧/复氧组,对照组在正常培养条件下培养,缺氧/复氧组给予缺氧气体培养4 h,然后在正常培养条件下继续培养1 d.应用流式细胞仪检测DC表面CD80、CD86、MHC Ⅱ分子的变化,ELISA法检测DC分泌TNF-α、IFN-γ和IL-12的浓度,混合淋巴细胞培养检测T细胞增殖能力,免疫细胞化学检测Dc核因子-κB(NF-κB)的表达.结果 缺氧/复氧可促进DC高表达CD80、CD86、MHC Ⅱ分子,促进Th1型细胞因子释放、NF-κB高表达及核移位,并诱导T细胞增殖.结论 缺氧/复氧可刺激DC高表达表面分子,具有明显的免疫刺激活性.     

脂质体介导的IDO基因转染未成熟树突状细胞对其成熟性及功能的影响

目的:探讨脂质体介导的IDO基因转染对未成熟树突状细胞(Immature dendritic cells,imDCs)的成熟性及功能的影响。方法:从BALB/c小鼠骨髓培养imDCs,形态学观察后用流式细胞术鉴定imDC后,将其分为IDO+-imDC组:重组pEGFP-N1-IDO质粒在脂质体介导下转染imDCs;IDO--imDC组:pEGFP-N1空质粒转染imDCs;imDCs组:imDCs不做特殊处理;mDC组:将培养的imDC用TNF-α诱导成熟。流式细胞术检测IDO基因转染imDC细胞后细胞表型是否发生变化。Western blot检测各组IDO蛋白表达。混合淋巴细胞反应检测各组在体外刺激T淋巴细胞增殖的能力。结果:BALB/c小鼠骨髓培养的细胞表面标志和细胞形态符合imDCs典型特征;Western blot结果显示IDO+-imDC组可见IDO蛋白表达;IDO+-imDC组细胞表面分子CD80、CD86、MHCⅡ表达率分别为(9.4±2.2)%、(8.7±1.1)%、(11.4±2.6)%,imDC组分别为(8.5±1.8)%、(7.5±1.6)%、(10.2±2.1)%,两组比较无显著差异(P均0.05),IDO+-imDC组在体外刺激T淋巴细胞增殖的能力明显低于imDC组(678±90.3vs1199±275.5,P0.01)。结论:脂质体介导的IDO基因转染imDCs能维持细胞于未成熟状态,在MLR中,对T细胞增殖有明显的抑制作用。