单抗TIGTC-Ⅲ片段F(ab′)_2的制备及其放射免疫显像研究

目的：将抗人原发性肝癌（ＰＬＣ）单抗ＴＩＧＴＣⅢ,用胃蛋白酶法消化成Ｆ（ａｂ′）２片段,标记１３１Ｉ后进行裸鼠人肝癌移植瘤的体内定位研究。方法：采用胃蛋白酶消化法,进行裸鼠体内核素显像。结果：消化产率为３１７％±２４％,经细胞结合实验证明Ｆ（ａｂ′）２具有良好的免疫活性,抗体片段进入裸鼠体内后,与完整抗体比,进入肿瘤的速度快,生物学分布特异性高,定位指数上升,血清本底下降迅速,生物半衰期明显缩短。结论：Ｆ（ａｂ′）２与全抗体比较可使成像时间提前,定位清晰     

活体动物光学成像技术与应用研究

活体动物光学成像是利用生物发光及荧光技术在活体动物体内进行生物标记通过光学成像系统来监测被标记动物体内分子及细胞等的生物学过程。按发光模式可分为生物发光和荧光两类。相对于传统动物实验研究方法,具有无创、可多次重复、实时活体成像、灵敏、安全等优势,这项技术在标记活体内肿瘤活体细胞示踪、标记基因及转基因动物等方面的应用广泛。     

复制子荧光素酶表达质粒pSVK-luc的构建与应用

目的 为研究复制子DNA疫苗在生物活体内的表达情况,构建含有荧光素酶报告基因的复制子表达质粒pSVK-luc.方法 PCR扩增荧光素酶报告基因,克隆入DNA复制子载体pSVK,酶切鉴定和测序分析筛选阳性重组质粒pSVK-luc;化学法转染人胚肾293T细胞,流式细胞术和免疫荧光法检测荧光素酶基因在293T细胞中的表达;利用基因电穿孔导入仪递送重组质粒至BALB/c小鼠股四头肌,活体成像仪动态观测荧光素酶基因在小鼠体内的表达.结果 pSVK-luc经相应酶切和测序鉴定,与预期设计完全一致.流式细胞术和免疫荧光检测均可见荧光素酶基因表达;同时活体成像仪也能检测到该基因在小鼠体内的表达.结论 pSVK-luc表达质粒的构建成功将为复制子DNA疫苗体内作用机制研究和体内电穿孔递送条件的优化奠定实验基础.     

分子影像及其在活体内应用的研究进展

分子影像是用应用正电子发射断层扫描（positron emission tomography，PET）、单光子发射计算机体层摄影术（single photon emission computed tomography，SPECT）、PET／计算机体层摄影术（computed tomography，CT）（PET／CT）、PET／磁共振成像（magnetic resonance imaging，MRI）（PET／MRI）、超声仪（ultrasound）和光学成像仪（optical imaging）等成像系统，直接或者间接非侵袭性对活体组织细胞的生化、生理、诊断和治疗等分子事件的成像技术。     

荧光素酶光学成像技术研究进展

活体动物体内光学成像技术的主要功能是追踪并检测标记细胞、微生物及分子在体内的活动和表达情况.该技术可以非侵入性地连续检测活体动物体内的生物学活动,其灵敏度高,使用方便、迅速,已被广泛应用于众多研究领域.就荧光素酶(Luc)光学成像技术的原理及应用进展作一综述.     

~(111)In标记单抗对移植人结肠癌裸鼠的放射免疫显像研究

本文用双功能螯合剂DT PA将~(111)In标记于单抗2C_(10)。标记率100％,放化纯度97％,免疫荧光法检测免疫活性保持80％。~(111)In-2C_(10)以10μCi/只的剂量经腹腔注射带入结肠癌裸鼠体内,对照组动物接受同样剂量的~(111)In-正常BALB/c小鼠IgG。给药后12、24、48、72、96小时各组处死2只动物,测组织化放射性,计算T/N化值和定位指数。实验组各脏器T/N     

铕掺杂氧化钆纳米颗粒的核磁共振成像与荧光标记应用探究

目的制备双模态造影剂铕掺杂氧化钆（Gd2O3：Eu3＋）纳米颗粒,探究其应用于核磁共振成像（MRI）及荧光标记的可行性。方法通过液体环境激光烧蚀固体Gd203：Eun靶材,得到Gd2O3：Eu3＋胶体纳米颗粒,通过透射电镜观察该纳米材料形貌特征：S18细胞增殖MTF实验表征其生物毒性;3．0T磁共振成像系统观察其在体外和Balb／c裸鼠体内鼻咽癌S18裸鼠移植瘤的显像特点：荧光显微镜观察其在细胞内荧光标记效果。结果液体环境激光熔蚀技术制备的纳米颗粒分散性良好。平均粒径为7．2nm;材料生物毒性低;体外MRI成像呈明显梯度;将该材料尾静脉注射裸鼠后约30min．鼻咽癌S18裸鼠移植瘤信号强度逐渐增高;细胞与纳米颗粒共同培养4h后,荧光显微镜显示纳米颗粒被细胞吞噬并发出红色荧光。结论成功研制了分散性良好,生物毒性低的双模态造影剂Gd2O3：Eu3＋并将其应用与小鼠体内MRI成像和细胞荧光成像．得到了良好的成像效果,为结合MRI与荧光成像技术提供一种途径。     

基于荧光分子断层成像的多模成像系统研究进展

基于荧光分子断层成像（FMT）的多模成像系统已广泛应用于动物实验研究,它将现有的其他成像模态与FMT系统相融合,实现同时对被测生物解剖学结构、生理学功能和分子或细胞水平生物学活动的在体成像.首先介绍了单模FMT系统的发展历史和现状,并介绍了国内外基于FMT的多模系统的研究进展,着重介绍了文献报道的典型的FMT/CT、FMT/MRI和FMT/放射性核素成像系统的系统组成、工作原理、性能特点及实验应用.对基于FMT的多模成像系统的发展进行了展望.     

靶向性磁共振造影剂在肿瘤分子影像学中的应用

分子影像学即应用影像学的方法直接或间接地监测和记录一些与生物化学、生物学、诊断学和治疗学相关的分子或细胞的分布与变化情况的科学。利用分子影像技术检测细胞表面受体的上调水平，能有效地监测疾病的进展并进行分期。在分子影像学的最初阶段，常用具有放射性的抗体和短肽等分子探针，采用核医学成像技术如单光子发射计算机断层摄影术（SPECT）、正电子发射断层摄影术（PET）等进行成像。而MR分子成像技术具有分辨力高、可获得三维解剖结构和生理信息等优点，     

肝原位移植瘤裸鼠模型的建立及活体荧光成像检测

目的 建立能够通过活体荧光成像系统实时监测肿瘤进展的肝原位移植瘤裸鼠模型.方法 重组质粒pcDNA3.1-Luc转染细胞构建稳定表达荧光素酶的PLC/PRF/5肝癌细胞株,将该细胞注入裸鼠肝脏实质内,应用活体成像技术动态监测肿瘤进展情况,解剖荧光信号阳性裸鼠观察肿瘤组织生长情况.免疫荧光检测肿瘤组织中HBsAg表达.结果 对裸鼠肝原位移植瘤应用活体荧光系统成像,在肿瘤细胞注射部位检测到荧光信号,解剖动物后可在肝脏组织中观察到异质细胞团块.免疫荧光证实移植瘤中有HBsAg表达.结论 肝脏原位移植瘤裸鼠模型建立成功,为抗肝癌药物的研发提供了工具.     

元参组方对粒系造血祖细胞的增殖作用

目的研究中药方剂对急性骨髓型放射病的治疗效果和对造血系统的作用及其作用机理。方法选用元参等11种中药组成元参组方,小鼠一次皮下注射后,观察不同时间外周血细胞、胸腺重量、骨髓有核细胞、粒系造血祖细胞、胸腺细胞与骨髓细胞混合培养后粒系造血祖细胞的变化。结果元参组方早期加速粒细胞的成熟和释放,第6天约为注射前的1．5倍。给药8d后,试验组胸腺重量、骨髓有核细胞、脾指数分别为（85．9±5．6）mg、（8．9±1．3）×10^6／每根股骨、1．42,对照组胸腺重量、骨髓有核细胞、脾指数分别为（74．2±6．2）mg、（6．8±0．5）×10^6／每根股骨、1．0,试验组明显高于对照组。试验组小鼠胸腺细胞与对照组小鼠骨髓细胞按20：1混合培养,骨髓CFU-G约为加入未注射元参组方的小鼠胸腺细胞的1．5倍。未注射元参组方则未见有放大作用。结论元参组方对外周血白细胞、骨髓有核细胞、胸腺重量和粒系造血祖细胞有明显的升高作用,激活胸腺细胞对粒系造血祖细胞的增殖有明显的放大作用。这种放大作用通过元参组方激活胸腺细胞实现。     

基因修饰树突状细胞诱导前列腺癌患者外周血T细胞亚群重排的研究

目的探讨以腺相关病毒（AAV）为载体,前列腺特异性抗原（PSA）基因转染树突状细胞（DC）诱导前列腺癌患者外周血T细胞亚群变化特点及临床意义。方法抽取30例前列腺癌患者外周血,采用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞,以rAAV/PSA感染DC前体细胞,采用系列细胞因子诱导DC前体细胞成熟。第6天收集成熟DC并与T细胞按比例混合培养,诱导细胞毒性T淋巴细胞（CTL）。分别于DC与T细胞混合培养前后应用流式细胞术分析外周血T细胞亚群及调节性T细胞（CD4^＋CD25^＋FoxP3^＋Treg）的表达水平。结果 PSA基因转染DC刺激T淋巴细胞爆发增殖,与培养前比较,混合培养6d后CD8^＋、CD8^＋CD69^＋、CD8^＋CD28^＋T细胞的比例和CD8^＋/CD4^＋比值均明显增高,差异有统计学意义（P〈0.01）;而CD8＋CD28-T细胞和Treg细胞的比例均显著降低,差异有统计学意义（P〈0.01）。CD4^＋T细胞比例较前略有升高,但差异无统计学意义（P〉0.05）。结论 PSA基因转染DC能够有效地激活CD8＋抗原特异性CTL,下调免疫抑制性T细胞,提高患者的细胞免疫功能,为前列腺癌的免疫治疗提供新的有效策略。     

Long-working-distance fluorescence microscope with high-numerical-aperture objectives for variable-magnification imaging in live mice from macro- to subcellular

We demonstrate the development of a long-working-distance fluorescence microscope with high-numerical-aperture objectives for variable-magnification imaging in live mice from macro- to subcellular. To observe cytoplasmic and nuclear dynamics of cancer cells in the living mouse, 143B human osteosarcoma cells are labeled with green fluorescent protein in the nucleus and red fluorescent protein in the cytoplasm. These dual-color cells are injected by a vascular route in an abdominal skin flap in nude mice. The mice are then imaged with the Olympus MVX10 macroview fluorescence microscope. With the MVX10, the nuclear and cytoplasmic behavior of cancer cells trafficking in blood vessels of live mice is observed. We also image lung metastases in live mice from the macro- to the subcellular level by opening the chest wall and imaging the exposed lung in live mice. Injected splenocytes, expressing cyan fluorescent protein, could also be imaged on the lung of live mice. We demonstrate that the MVX10 microscope offers the possibility of full-range in vivo fluorescence imaging from macro- to subcellular and should enable widespread use of powerful imaging technologies enabled by genetic reporters and other fluorophores.     

促纤维组织增生性小圆细胞肿瘤^18F-FDG PET-CT影像学表现及文献复习

目的探讨促纤维组织增生性小圆细胞肿瘤（DSRCT）的正电子发射体层摄影术（PET）-CT影像表现、诊断、鉴别诊断。方法经病理组织证实的2例DSRCT患者,男性,年龄均为27岁。回顾性分析其PET-CT影像学特点,并文献复习。结果PET影像表现为广泛腹、盆腔内不均质性葡萄糖代谢异常活跃灶,肿块内坏死区葡萄糖代谢呈缺失表现。CT表现为腹、盆腔内分叶状结节或团块状肿块,广泛侵及腹膜、网膜、浆膜面;内可见坏死区,伴点状钙化;增强CT呈轻中度不均质性强化,病灶对周围组织、器官呈推挤、包绕、侵犯倾向,边界不清,但与周围器官无明显起源关系。MRI显示：T1加权像病灶呈不均质性等、低信号,T2加权像病灶呈不均质性等、稍高信号,坏死区呈高信号,增强扫描呈不均质性轻中度强化。结论DSRCT罕见,临床表现复杂,病灶与浆膜关系密切,但也可发生在其他部位;PET-CT可以同机融合结构及功能显像行全身扫描,对DSRCT的诊断、分期、定位活组织检查及疗效评价有很高价值。     

恶性疟原虫裂殖子表面蛋白3功能区片段的制备及其免疫原性分析

目的构建恶性疟原虫裂殖子表面蛋白3功能片段MSP3（69）与谷胱甘肽（GST）的融合蛋白，并在大肠杆菌中进行表达，分析其免疫原性。方法采用大肠杆菌系统表达融合蛋白GST—MSP3（69），以疟疾病人血清进行Western-blot，并以ISA720、佛氏、氢氧化铝与CpG联合3种佐剂与GST—MSP3（69）融合蛋白乳化，免疫Balb／ca小鼠．分析其免疫原性。结果在大肠杆菌系统中成功表达GST-MSP3（69）融合蛋白，疟疾病人血清能与融合蛋白反应。3种佐剂免疫Balb／ca小鼠均能诱发Balb／ca小鼠产生较高水平的特异抗体，3次免疫后的抗体滴度分别为4．5×10^5，4．1×10^5和3．5×10^5。3次免疫后血清抗体亚型分析显示该蛋白能够诱导Balb／ca小鼠产生较高滴度的亲细胞亚型IgG1和IgG2b．ISA720、佛氏、氢氧化铝与CpG联合佐剂组IgG1分别为8×104、7．8×10^4、6．8×10^4．IgG2b分别为1．2×10^4，1．25×10^4、1．5×10^4。统计学分析显示不同佐剂组的抗体滴度及抗体亚型滴度之间差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论制备了在大肠杆菌表达的GST-MSP3（69）融合蛋白，该蛋白具有高免疫原性，并产生亲细胞亚型抗体，这些为研究MSP3蛋白功能区的免疫保护作用打下了基础。     

脂肪源间充质干细胞治疗aGVHD分子机制的初步研究

目的初步探讨成人脂肪源间充质干细胞（adult adipose tissue-derived mesenchymal stem cells．AMSC）治疗急性移植物抗宿主病（acute graft-versus-host disease，aGVHD）的分子机制。方法3例行异基因造血干细胞移植术后发生aGVHD患者，以每公斤体质量2×10^6个细胞剂量静脉输注AMSC；应用RT-PCR扩增患者AMSC使用前后外周血单个核细胞的TCR Vβ 24个亚家族的CDR3，了解患者TCR Vβ T细胞的分布情况；应用尼龙毛柱分离外周血T淋巴细胞，再经CD8磁珠分选出CD8^＋ T淋巴细胞．应用流式细胞术检测发生aGVHD患者使用AMSC前后外周血CD8^＋T细胞亚群的变化。结果患者发生aGVHD时，有TCR Vβ3及其他亚家族基因表达，输注AMSC后，GVHD得以有效控制。Vβ3不表达；当患者GVHD复发时，Vβ3基因又表达，治疗后不表达；与输注AMSC前相比，输注AMSC后，CD8^＋T细胞中的CD8^＋CD28^-亚群显著上调（P〈0．05），同时．患者的aGVHD得以有效控制。结论AMSC治疗aGVHD的分子机制可能与其抑制TCR Vβ亚家族基因表达有关，TCR Vβ3可能是AMSC作用的靶基因；同时，AMSC治疗aGVHD的作用机制可能与其上调CD8^＋CD28^-T细胞亚群有关．CD8^＋T细胞可能是AMSC作用的靶细胞。     

PET-CT 与 MRI 诊断中国人鼻咽癌转移的 Meta 分析简

目的通过Meta分析比较正电子计算机断层摄影术-计算机X线体层摄影术（PET—CT）与MRI对中国人鼻咽癌转移的诊断价值。方法用计算机检索万方数据库、中国学术期刊网全文数据库（CNKI）和维普数据库从1989年1月至2013年5月收录的PET-CT与MRI诊断中国人鼻咽癌转移的临床文献．对纳入文献采用Meta—Disc软件进行Meta分析。结果最终纳人文献5篇,共636例患者。Meta分析结果显示。PET—CT诊断鼻咽癌转移95％可信区间（CI）的灵敏度（SEN）、特异度（SPE）分别为35％（33％。37％）、94％（91％～96％）,受试者工作特征（SROC）曲线下面积（AUC）为0．7247．标准误（SE）（AUC）为0．2399;而MRI诊断鼻咽癌转移95％CI的SEN、SPE分别为35％（33％～37％）、84％（80％～87％）．SROCAUC为0．7654,SE（AUC）为0．1154。以上结果表明．与MRI相比,PET-CT在中国人鼻咽癌转移诊断中具有较低的误诊率．但诊断价值稍低。结论根据现有的临床诊断文献．PET—CT和MRI均是诊断中国人鼻咽癌转移的有效技术手段。在误诊率方面．PET—CT优于MRI;但诊断价值稍低。因此,两者紧密结合才能使鼻咽癌转移的检出率明显增高。     

小鼠H22肝癌细胞株淋巴结转移模型的构建

目的:使用H22肝癌细胞株建立小鼠自发淋巴道转移模型。方法:40只雄性昆明种小鼠随机分为4组(n=10),左后肢爪垫皮下接种H22肝癌细胞建立动物模型,各组小鼠接种细胞浓度分别为:1×106·只-1、5×105·只-1、2.5×105·只-1,对照组注射等体积PBS。接种后第27天解剖取小鼠爪垫原发灶肿瘤组织及腘窝部淋巴结,10%中性福尔马林液固定、HE染色后判断淋巴结转移情况,计算转移率。结果:高浓度组(1×106·只-1)转移率为100%,中浓度组(5×105·只-1)转移率为50%,低浓度组(2.5×105·只-1)转移率为40%。结论:小鼠爪垫皮下接种1×106的H22肝癌细胞株,可以建立100%腘窝部淋巴结转移模型。     

类胚体中残留胚胎干细胞数量与其致瘤性相关性的初步研究

目的 探讨类胚体(EBs)中残留未分化胚胎干细胞(ESCs)的数量与其致瘤性的相关性.方法 小鼠R1胚胎干细胞株,体外类胚体诱导分化10d,流式细胞仪检测残留未分化ESCs表面标志SSEA-1阳性率.将第10天EBs消化打散后重新给予ESCs常规培养体系培养,观察EBs中残留未分化ESCs形态,流式细胞仪检测残留细胞表面标志物;第10天EBs消化打散后以104～2×106细胞量分别注射至裸鼠四肢肌肉内,观察不同细胞数量与畸胎瘤形成的相关性.结果 ESCs分化为EBs 10 d后有(13.5±0.75)%的细胞表达SSEA-1,提示存在残留未分化ESCs.残留未分化细胞生长形态呈克隆样,高表达SSEA-1等未分化ESCs标志.EBs消化打散后仅在注射2×l06个细胞的部位形成畸胎瘤,瘤体组织中存在成熟的内胚层、中胚层和外胚层组织,其余各组均未见畸胎瘤的形成.结论 胚胎干细胞分化为类胚体后仍存在残留未分化胚胎干细胞,并需要一定细胞数量才具有致瘤性.     

T细胞诱导的结肠炎中多形螺旋线虫感染对CD4^＋T细胞增殖的影响

目的 研究肠道多形螺旋线虫对T细胞诱导的小鼠结肠炎CD4^±T细胞增殖情况的影响。方法 用羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂（CFSE）染色的卵清蛋白（OVA）特异性CD4＾±辅助性T细胞转入重度联合免疫缺陷（SCID）小鼠中，制作小鼠实验性肠炎模型。将实验模型小鼠分为多形螺旋线虫感染组和无感染组（每组n=5），观察多形螺旋线虫感染7d后小鼠结肠炎性反应的组织学变化；以流式细胞仪检测感染3、5、7d小鼠肠系膜淋巴结中CD4＾＋T细胞CFSE的阴性率，判定肠系膜淋巴结中CD4＾＋T细胞的增殖情况。结果 与无感染组比较，感染组小鼠第7天时有螺旋线虫感染结肠炎性反应明显加重，黏膜固有层细胞浸润增多，结肠上皮破损增加，病理评分明显升高（5．20±0．84比2．00±0．71，P〈0．05）。感染3、5、7d后，感染组小鼠肠系膜淋巴结中CD4±T细胞增殖均比无感染组明显增强，CFSE的阴性率升高[3d：（7．03±1．61）％比（2．32±0．62）％，5d：（55．05±13．41）％比（29．10±2．23）％，7d：（76．97±1．89）％比（43．87±5．56）％，均P〈0．05]。结论 多形螺旋线虫感染在CD4＾＋T细胞诱导的小鼠实验性结肠炎的早期阶段促进了炎性反应的加重，可能与促进CD4＾＋T细胞的增殖有关。