金雀异黄素诱导人乳腺癌细胞凋亡作用机制研究

目的探讨金雀异黄素对体外培养的人乳腺癌MCF7细胞凋亡的影响及作用机制。方法采用MMT法、凋亡细胞的荧光显微镜、电镜观察和流式细胞仪的检测,观察了不同剂量的金雀异黄素诱导细胞凋亡。同时采用免疫组化法检测凋亡相关基因Bax和癌基因erbB2蛋白的表达。结果通过荧光显微镜和电镜技术观察到凋亡的MCF7细胞。流式细胞仪也检测到了金雀异黄素诱导MCF7细胞产生凋亡,并随着金雀异黄素浓度的增加,细胞凋亡率显著增加。蛋白水平检测表明金雀异黄素促进MCF7细胞Bax表达升高,抑制erbB2表达。结论金雀异黄素可诱导MCF7细胞凋亡,并主要是通过调节Bax和erbB2蛋白表达实现的。     

金雀异黄素诱导人胃癌细胞凋亡的机制研究

采用 4’ ,6 二乙酰基 2 苯基吲哚染色、琼脂糖凝胶电泳实验观察了金雀异黄素 (Gen)对体外培养的人胃癌SGC 790 1细胞的凋亡诱导作用 ,并采用WesternBlot法检测Gen对人胃癌细胞p5 3、Caspase 3蛋白的表达情况。结果显示 ,Gen诱导了胃癌细胞凋亡 ,并抑制突变型p5 3蛋白表达 ,增加Caspase 3蛋白表达。结果提示 ,Gen抑制突变型p5 3蛋白表达 ,增加Caspase 3蛋白表达 ,可能是其诱导胃癌细胞凋亡的机制之一     

金雀异黄素诱导结肠癌HCT-116细胞凋亡及其机制研究

目的探讨金雀异黄素对结肠癌细胞HCT-116的细胞增殖和凋亡的影响及其可能的机制。方法不同浓度金雀异黄素处理HCT-116细胞,MTT法测定细胞存活率,流式细胞仪检测细胞周期、细胞凋亡、细胞内活性氧(ROS)水平和线粒体膜电位的变化,并用透射电镜观察细胞的超微结构。结果金雀异黄素呈剂量和时间依赖性地抑制细胞增殖。0~100μmol/L的金雀异黄素处理细胞24 h后引起G2/M期阻滞,凋亡峰Sub-G1所占细胞比例从(1.63±0.44)%增至(8.33±1.51)%(P0.01),早期凋亡细胞从(1.93±0.32)%增至(7.25±0.86)%(P0.01)。透射电镜下细胞出现凋亡特征性改变。100μmol/L金雀异黄素处理后细胞内ROS水平在2 h时增至处理前的1.81倍,(15.53±1.55)%vs(8.57±0.35)%,P0.01,细胞线粒体膜电位在1 h时迅速下降了87.8%,(0.82±0.02)%vs(6.70±0.21)%,P0.01。结论金雀异黄素抑制结肠癌细胞株HCT-116的细胞增殖,引起G2/M期细胞阻滞并促进细胞凋亡,可能与升高细胞内ROS水平,降低线粒体膜电位有关。     

石棉诱导细胞凋亡改变的研究

目的探讨石棉诱导的细胞凋亡及其相关基因ｂｃｌ２及ｂａｘ表达的改变。方法大鼠石棉染尘。收集石蜡包埋的石棉作业工人肺癌组织块。ＴＵＮＥＬ法（ｔｅｒｍｉｎａｌｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅｍｅｄｉａｔｅｄｄＵＴＰｎｉｃｋｅｎｄｌａｂｅｌｉｎｇｍｅｔｈｏｄ，末端脱氧核糖核酸转移酶介导的ｄＵＴＰ缺口末端标记法）观察凋亡细胞分布及数量。生物素抗生物素蛋白ＤＣＳ（ａｖｉｄｉｎＤｃｅｌｓｏｒｔｅｒ）间接免疫荧光法观察ｂｃｌ２及ｂａｘ表达改变，琼脂糖凝胶电泳进行ＤＮＡ梯状电泳分析。结果大鼠染尘后４０天，细胞凋亡增强、ｂｃｌ２表达减少、ｂａｘ蛋白含量升高，可见ＤＮＡ特征性梯度电泳条带；大鼠染尘后７０天，细胞凋亡明显减弱。在石棉作业工人肺癌组织中未见明显细胞凋亡。结论石棉可诱导肺组织细胞凋亡发生改变，这种改变有时段性。凋亡相关基因表达也有相应变化。     

金雀异黄素对人乳腺癌细胞MCF-7生长影响

目的 观察金雀异黄素在低雌激素水平情况下对雌激素依赖阳性人乳腺癌细胞MCF-7的生长影响.方法 采用四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,流式细胞术分析细胞周期分布情况,磷脂结合蛋白V/碘化丙啶(AnnexinV/PI)联合双染法检测细胞凋亡,间接免疫荧光法测定雌激素调节蛋白(prcsenilin2,PS2>)的表达.结果 当MCF-7细胞经过去雌激素处理以后,与对照组相比,金雀异黄素在5×10-7～10-5mol/L时可以促进细胞增殖,G0>/G1>期细胞向S期推进,PS2>蛋白表达增加,但是抑制细胞凋亡作用并不明显.结论 金雀异黄素在低雌激素水平情况下可以促进人乳腺癌细胞MCF-7的细胞增殖、DNA合成以及PS2>蛋白的表达,具有一定的雌激素样作用.     

雌激素对谷氨酸诱导大鼠脑皮质细胞凋亡的影响

目的：观察雌激素对谷氨酸诱导离体皮层神经元凋亡的作用,探讨雌激素的神经保护作用机制。方法：原代培养大鼠大脑皮质细胞,分为正常对照组、谷氨酸组和谷氨酸＋雌激素组,采用TUNEL和免疫细胞化学检测等方法,分析雌激素对谷氨酸诱导神经元凋亡的作用。结果：谷氨酸可明显诱导神经元凋亡,凋亡指数为34.6%;雌激素能明显拮抗谷氨酸的凋亡毒性作用,凋亡指数下降为18.4%（与谷氨酸组相比P〈0.05）;免疫组化结果显示,雌激素组bcl-2表达阳性细胞明显增加,bax蛋白表达受到抑制。结论：雌激素具有神经保护作用,作用机制可能通过影响凋亡相关基因的表达来实现。     

金雀异黄素的抗雌激素效应

应用雌激素耗尽的方法诱导乳腺癌细胞株MCF - 7和T47D发生凋亡 ,从而探讨金雀异黄素(genistein ,GS)对凋亡的影响作用。结果表明 ,同抗雌激素药物它莫西芬类似 ,3 2× 10 - 6 mol L及 96× 10 - 6 mol LGS可加剧雌激素耗尽所诱导的细胞凋亡作用 ,且这种效应存在着良好的剂量 -效应关系。结果提示GS对女性乳腺癌发病率的预防作用是通过其抗雌激素效应诱导细胞的凋亡而实现的     

bcl-2及相关基因在番茄红素诱导人胃癌细胞凋亡过程中的作用

目的通过体外试验研究bcl-2及相关基因在番茄红素诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡过程中的作用。方法将番茄红素作用于人胃癌SGC-7901细胞,DAPI染色观察细胞凋亡情况,RT-PCR法检测bcl-2、bax、p53mRNA的表达。结果番茄红素作用于人胃癌SGC-7901细胞后,细胞发生凋亡,凋亡率为78.5%;随番茄红素浓度的增加,bcl-2mRNA的表达明显降低,baxmRNA和p53mRNA的表达均显著增加,并均呈剂量-效应关系。结论番茄红素在体外能诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡,且以促进p53mRNA过表达,从而上调baxmRNA的表达,下调bcl-2mRNA表达,即通过改变bax与bcl-2的比例来促进人胃癌SGC-7901细胞凋亡。     

金雀异黄素对DDT类农药诱导乳腺癌细胞增殖效应的抑制作用

目的 探讨金雀异黄素( genistein,Gen)与DDT类有机氯农药(o,p’-DDT,p,p’-DDT和p,p’-DDE)联合作用对乳腺癌(MCF-7)细胞增殖效应的抑制作用.方法 取处于对数生长期的MCF-7细胞,分别加入含100 μmol/Gen 和0.1 μmol/L o,p’-DDT、0.1μmol/Lp,p’-DDT、10 μmol/Lp,p’-DDE单独作用组以及100 μmol/L Gen +0.1 μmol/Lo,p’-DDT、100 μmol/L Gen +0.1 μmol/Lp,p’-DDT、100 μmol/L Gen+10 μmol/LP,p’-DDE的培养基,并设溶剂对照(0.1％无水乙醇)组和雌激素对照(10-3 μmol/L雌二醇)组.培养48 h后,采用噻唑蓝(MTT)实验检测MCF-7细胞的增殖情况.结果 与溶剂对照相比,100 μmol/L的Gen作用组MCF-7细胞的增殖率下降,0.1 μmo/L的o,p’-DDT作用组MCF-7细胞的增殖率升高,差异均有统计学意义(P＜0.05).与相应DDT类农药单独组相比,Gen+o,p’-DDT、Gen+p,p’-DDT联合作用组MCF-7细胞的增殖率明显下降,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 Gen能够抑制DDT类农药诱导的MCF-7细胞增殖效应.     

维生素E同系化合物诱导人肝癌细胞凋亡的作用

为探讨α 生育酚 (α T)、γ 生育酚 (γ T)、δ 生育酚 (δ T)及维生素E琥珀酸酯 (VES) 4种维生素E同系化合物对肝癌细胞凋亡影响 ,在体外培养的人肝癌细胞 (HepG2 )培养液中分别加入 1 2 5、2 5 0、50 0、1 0 0 0及 2 0 0 0mg L的 4种维生素E同系化合物培养 48h后 ,采用流式细胞仪技术 (FCM)和DNA梯度电泳 (DNALadder)定量分析HepG2细胞凋亡及DNA降解片段情况。结果发现 ,FCM凋亡检测发现δ T和VES培养的HepG2细胞凋亡率增加 ,并呈现剂量依赖关系 ,即随着δ T、VES剂量增加HepG2细胞凋亡亦增加 ,其中δ T诱导HepG2细胞凋亡作用强于VES ;γ T处理的HepG2细胞只在 2 0 0mg L剂量时出现轻度的凋亡增加 ;未见α T有诱导HepG2细胞凋亡的作用。DNA梯度电泳检测发现δ T和VES处理HepG2细胞的DNA出现明显的排列成梯状的分子条带 ,α T、γ T处理组则未见明显的条带。维生素E同系化合物诱导肝癌细胞凋亡作用不同 ,效应排序为δ T >VES >γ T >α T ,δ T和VES具有潜在抗肝癌临床应用前景     

丁酸诱导结肠癌细胞凋亡机制的实验研究

目的:探讨膳食纤维在结肠中的酵解产物丁酸(butyrate)诱导人结肠癌细胞凋亡的作用机制.方法:人传代结肠癌细胞株SW1116经不同浓度(0、2、3、4、7和10 mmol/L)丁酸处理后,在不同时段(6、24、48和72 h)分别收集细胞,用RT-PCR和Western Blotting检测肿瘤细胞bcl-2和bax基因及其蛋白表达的变化,并用流式细胞仪和荧光定量法分别测定其p53蛋白浓度和caspase-3活性的变化.结果:实验过程中,肿瘤细胞的bcl-2 mRNA及其蛋白均无表达,但随着培养液中丁酸浓度的不断增加和培养时间的延长,其bax mRNA及其蛋白的表达则逐渐增强,同时伴有p53蛋白浓度和caspase-3活性的增加.结论:丁酸以p53依赖方式通过上调肿瘤细胞bax mRNA及其蛋白的表达而诱导SW1116细胞凋亡.     

正已烷对大鼠卵巢颗粒细胞凋亡调控基因影响

目的 观察正己烷对大鼠卵巢颗粒细胞凋亡调控基因bcl-2、bax、bcl-x1、xiap mRNA表达的影响.方法 48只成年雌性Wistar大鼠按体重随机分为4组,分别给予浓度为0,3.01,9.03,27.1 g/m3正己烷静式吸入染毒;每天4 h,每周6 d,持续6周;染毒结束待大鼠进入动情期,处死并提取卵巢颗粒细胞,并采用实时荧光定量PCR法测定颗粒细胞bcl-2,ax、bcl-x1、xiap mRNA表达水平.结果 随着染毒剂量增加,各组bcl-2 mRNA表达呈下降趋势(2-△△CT值分别为1.069,0.762,0.698,0.690),bax mRNA表达呈上升趋势(2-△△CT值分别为1.039,1.242,1.317,1.895),各染毒组与对照组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).各染毒组bcl-x1 mRNA表达与对照组差异无统计学意义(P＞0.05);27.1g/m3染毒组xiap mRNA表达(0.694)低于对照组(0.999),差异有统计学意义(P＜0.05).结论 正己烷上调大鼠卵巢颗粒细胞bax,下调bcl-2、xiap mRNA表达,可能是正己烷致使卵巢颗粒细胞凋亡的机制之一.     

凋亡基因表达与FGR胎盘细胞凋亡的相关性研究

目的:探讨凋亡相关基因P53、Bc l-2和Bax在两组胎盘细胞中的表达情况及与胎儿宫内生长受限(FGR)病因的相关性。方法:应用免疫组化法检测凋亡相关基因P53、Bc l-2和Bax在两组胎盘细胞中的表达情况。结果:①Bc l-2、Bax的表达强度在FGR组与对照组间差异有统计学意义(P<0.05),P53的阳性率及表达强度在FGR组与对照组间差异无统计学意义(P>0.05);②Bc l-2、Bax、P53的阳性率及表达强度在FGR组中的FGR不伴有PIH组及FGR伴有PIH组两组间差异无统计学意义。结论:①正常孕妇和FGR患者胎盘组织中均有细胞凋亡,但FGR患者胎盘细胞凋亡较多,这可能是引起FGR发生的重要病理过程;②FGR胎盘细胞凋亡可能是非P53依赖性的,由Bax、Bc l-2介导的细胞凋亡。     

口服米索前列醇不良反应32例分析

为探讨甲醛对小鼠睾丸生殖细胞的DNA损伤及凋亡相关基因bcl-2、bax蛋白在染毒小鼠睾丸细胞中的表达,分别用0．2、2、20mg／k的甲醛小鼠腹腔注射,利用单细胞凝胶电泳检测睾丸生殖细胞的DNA损伤,同时对睾丸生殖细胞采用免疫组化法进行bax及bcl-2蛋白染色,并结合图像分析推测bax及bcl-2的蛋白表达变化。结果显示在甲醛0．2mg／kg的浓度时小鼠生殖细胞有最明显的DNA损伤,3种浓度甲醛处理组bax蛋白表达均明显增多,而bcl-2阳性蛋白表达明显低于阴性对照组,差异有统计学意义。说明甲醛可造成机体内生殖细胞的DNA损伤,还可通过抑制bcl-2、增加bax的表达而诱导细胞凋亡,从而影响生殖细胞。     

大蒜油和白藜芦醇联合应用诱导胃癌细胞凋亡及对Fas、bcl-2和bax基因表达的影响

目的观察大蒜油和白藜芦醇联合用药对人胃癌MGC-803细胞凋亡及对Fas抗原表达、bcl-2基因、bax基因mRNA表达的影响。方法实验设大蒜油和白藜芦醇联合用药组1（各25μg／ml）、联合用药组2（各50μg／ml）和空白对照组,应用DNA梯度电泳及流式细胞术检测药物作用24h后细胞凋亡情况及Fas抗原表达情况;应用RT-PCR方法检测用药24h和48h后胃癌细胞bcl-2、bax基因mRNA表达水平。结果DNA梯度电泳可见联合用药组出现明显的“Ladder”带;流式细胞术显示各用药组annexin v阳性细胞数比对照组明显增多;联合用药组1和联合用药组2细胞Fas抗原表达阳性率分别为10．59％和14．16％,比对照组（5．27％）明显增高并有显著的统计学意义;各联合用药组Bcl-2基因mRNA表达水平比对照组下降而Bax基因mRNA表达升高。结论大蒜油和白藜芦醇联合用药诱导胃癌细胞凋亡可能与其促进胃癌细胞Fas抗原Bax基因表达增加并抑制bcl-2基因的表达有关。     

凋亡相关蛋白bcl-2和bax在糖尿病大鼠主动脉中的表达及意义

目的探讨糖尿病大鼠早期大血管病变中凋亡相关蛋白bel-2和bax表达的变化及意义。方法选用Wistar大鼠，随机分为正常对照组和糖尿病组，每组12只。以四氧嘧啶50mg／kg尾静脉注射制造糖尿病模型。10周后，免疫组化染色观察主动脉中凋亡相关蛋白bel-2及bax蛋白表达情况。结果糖尿病大鼠主动脉表现为局限性内膜增厚，中膜浅层平滑肌细胞轻度增生、排列紊乱、病灶处内弹力板呈波浪状或交织状排列、有断裂分离现象。糖尿病组与对照组相比，主动脉bel-2蛋白表达下降，而bax蛋白表达增加，差别有统计学意义（均P〈0．01）。结论高血糖可能诱导的bel-2／bax比例下降，促进血管内皮及平滑肌细胞凋亡，参与糖尿病大血管病变的发生发展。     

染料木质素对人乳腺癌细胞BCaP-37凋亡的诱导作用

采用荧光显微镜观察了染料木质素诱导体外培养的人体乳腺髓样癌细胞株BCaP 37凋亡的形态学特征 ,并用流式细胞仪检测了染料木质素对乳腺癌细胞株细胞周期、凋亡率和bcl 2基因表达的影响。结果显示经丫啶橙染色后 ,荧光显微镜下可见到乳腺癌细胞出现细胞凋亡的特征性形态学改变 ;染料木质素能阻断细胞由G1 期向S期移行 ,使G0 -G1 期细胞数目明显增多 ,并能诱导细胞发生凋亡 ,呈现剂量 效应关系 ;bcl 2基因表达量与染料木质素浓度呈负相关。故染料木质素可通过抑制bcl 2蛋白表达诱导细胞凋亡     

铝作用下大鼠海马神经细胞凋亡与bcl-2和bax基因转录的关系

目的探讨铝引起大鼠海马神经细胞凋亡与bcl2、baxmRNA表达变化的关系。方法健康雄性SD大鼠40只,按体重随机分为4组:生理盐水组、Al3+2.5、5.0、10.0mgkg组。染毒60天后处死,用TUNEL法检测细胞凋亡,RTPCR法检测bcl2、baxmRNA的表达,用凝胶成像系统进行结果分析。结果与对照组相比,Al3+5.0mgkg、10.0mgkg组大鼠海马神经细胞凋亡率显著升高(P<005),而Al3+2.5mgkg组与对照组相比凋亡率升高,但差异无显著性;3个染毒组bcl2mRNA表达均显著下降(P<0.05);3个染毒组baxmRNA表达显著升高(P<0.05);海马神经细胞凋亡指数与bcl2mRNA表达呈负相关(r=-0.909,P<0.01),与baxmRNA表达呈正相关(r=0.871,P<0.01)。结论铝可以诱导大鼠海马神经细胞凋亡,其机制与bcl2mRNA表达下调,baxmRNA表达上调有关。     

Caspase—6诱导肾癌细胞株GRC—1细胞凋亡的研究

目的 探讨Caspase-6在肾癌细胞株GRC－1中的表达及其对肾癌细胞的凋亡诱导作用。方法 应用RT－PCR方法检测了肾癌细胞株GRC－1中Caspase-6基因的表达水平；以腺病毒adv5作载体，构建了含Caspase-6基因的转基因载体，用脂质体包裹法转染GRC－1细胞株，用RT－PCR方法检测转染后GRC－1细胞中Caspase-6基因的表达。MTT法检测转染Caspase-6对GRC－1细胞株生长的影响。结果 肾癌细胞株GRC－1中未检出Caspase-6表达。RT－PCR法证实转染Caspase-6后GRC－1中Caspase-6表达明显，MTT检测显示对GRC－1细胞的生长有抑制作用，通过形态学观察及DNA电泳证实这种作用主要是通过促进细胞凋亡而实现的。结论 Caspase-6对肾癌细胞的生长有抑制作用，并可诱导肾癌细胞凋亡。