耐唑类白色假丝酵母菌临床株CYP51基因的研究

目的 探讨白色假丝酵母菌临床株CYP51基因突变与对唑类抗真菌药物耐药的关系,从分子水平了解白色假丝酵母菌的耐药机制.方法 纸片扩散法初步筛选呼吸道感染对耐唑类白色假丝酵母菌,按NCCLS公布的M-27方案测定初筛耐药株对氟康唑和伊曲康唑的MIC,设计3对引物,对分离的2株耐唑类白色假丝酵母菌(2007H株,2007T株)进行PCR,扩增CYP51基因;扩增产物纯化后,进行测序并与GenBank序列(X13296)相比较分析.结果 PCR扩增产物大小与预期结果一致;测序分析表明.成功扩增到白色假丝酵母菌CYP51基因,与X13296序列相比较,两个耐药株都存在有义突变和无义突变,两株白色假丝酵母菌共有22个碱基突变;突变发生氨基酸替换的有F105L、K128T、Y132H、T199I、R267H、G464S和G467K,其中,两株菌都有Y132H和G467K突变,F71L、W244R、T311N和T352I为新发现的突变,同时,也发现了9个未发生氨基酸替换的突变.结论 白色假丝酵母菌对唑类抗真菌药物的耐药与CYP51基因突变有关,且为多位点突变,研究发现了新的突变点,它在耐药机制中的作用需进一步研究.     

白色假丝酵母菌对氟康唑耐药性及Erg11基因突变分析

目的分析白色假丝酵母菌临床分离株对氟康唑的耐药性,阐明耐氟康唑白色假丝酵母菌Erg11基因突变。方法回顾性分析2011年6月-2012年12月医院患者送检各类标本分离的287株假丝酵母菌属,采用美国临床实验室标准化研究所(CLSI)M27-A3推荐的微量稀释法进行体外药敏试验,从177株白色假丝酵母菌中筛选出7株对氟康唑耐药株,对氟康唑靶酶基因Erg11进行PCR扩增、测序,与Genbank上标准序列(X13296)比对分析。结果在7株白色假丝酵母菌氟康唑耐药株和1株敏感株中共发现25个点突变,其中15个同义突变,10个错义突变,10个错义突变分别为V51G、Y53H、C75W、Y79D、V94G、D116E、K119N、K128T、D153E、E266D,其中V51G、Y53H、C75W、Y79D、V94G是新发现的。结论成功分析了白色假丝酵母菌对氟康唑耐药性及Erg11基因突变。     

白色假丝酵母菌对氟康唑敏感性及耐药机制研究

目的研究本院临床分离的白色假丝酵母菌对氟康唑的耐药性及其ERG11基因突变情况。方法将临床标本接种至沙堡弱平板,用VITEK 2 Compact微生物分析系统鉴定所得菌株,保存所得白色假丝酵母菌;按照CLSI-M27-A3酵母菌微量肉汤稀释法进行氟康唑敏感性试验;选择部分代表菌株进行ERG11基因的PCR扩增、测序及比对分析。结果共分离得162株白色假丝酵母菌,其中来自痰液标本最多,占68.5%;氟康唑耐药株为11株,占6.8%;剂量依赖敏感株(S-DD)为16株,占9.9%;敏感株为135株,占83.3%;从7株氟康唑耐药和1株氟康唑敏感的白色假丝酵母菌ERG11基因中共发现22个点突变,其中错义突变3个,分别是V51E、D116E、E266D,其余均为同义突变;有2株氟康唑耐药菌株未发现错义突变。结论 ERG11基因的突变是白色假丝酵母菌对氟康唑耐药的重要机制,D116E可能是浙江地区白色假丝酵母菌对氟康唑耐药的主要突变位点;对于白色假丝酵母菌耐氟康唑机制的研究不应局限于ERG11基因的突变,应综合多方面因素。     

念珠菌耐药相关基因研究

目的研究耐氟康唑热带念珠菌临床株Fc 30的基因突变耐药机制。方法对氟康唑靶酶基因erg 11进行PCR扩增,DNA测序,对比分析临床耐药株与敏感株及标准株的靶酶基因DNA序列,确定耐药株基因一级结构上的突变点,并推测分析靶酶蛋白的氨基酸改变及与氟康唑耐药的相关性。结果氟康唑敏感株Fc 17的erg 11基因DNA序列与氟康唑敏感标准菌ATCC750完全一致,耐药株Fc 30出现 225、 264、 395、 461、 513处点突变,导致132、154位氨基酸突变。结论与敏感株相比,耐氟康唑热带念珠菌Fc30 erg11基因出现Y132F耐药相关突变。     

侵袭性白假丝酵母感染ERG3基因突变及表达

目的分析侵袭性白假丝酵母感染ERG3基因突变及表达情况。方法收集2018年1月-2018年12月亳州市人民医院发生IFI的住院患者体液标本,分离白假丝酵母。采用微量肉汤稀释法对菌株进行氟康唑敏感性实验,采用聚合酶链反应(PCR)扩增ERG3基因并测序分析突变位点,比较不同氟康唑敏感性菌株ERG3基因表达情况。结果所有标本共分离出白假丝酵母239株,以痰液(67.36%)为主,其次为阴道分泌物(12.13%)、尿液(10.04%);239株白假丝酵母共检出221株氟康唑敏感株(92.47%)、17株氟康唑耐药株(7.11%)及1株剂量依赖敏感株(0.42%);随机选择10株氟康唑敏感株和4株氟康唑耐药株进行ERG3基因扩增,14株白假丝酵母ERG3基因序列中共发现28个点突变,包括24个(85.71%)同义突变,4个(14.29%)错义突变,其中同义突变位点为C602T、T432C、C438T,错义突变位点为I340L、V374G、P902L和V1076A;氟康唑耐药株ERG3基因高表达率明显高于敏感株。结论侵袭性白假丝酵母感染对氟康唑具有一定耐药性,其耐药性可能与ERG3基因错义突变I340L、V374G、P902L和V1076A有关。     

呼吸道白色假丝酵母菌基因分型与耐药性研究

目的 了解呼吸道白色假丝酵母菌的基因分型和不同基因型白色假丝酵母菌的药敏情况,并探讨基因分型与耐药性之间的关系.方法 采用PCR扩增白色假丝酵母菌基因组DNA的25S rDNA基因内含子区,根据扩增产物片段大小和数目分型,采用ATB FUNGUS3酵母菌药敏试剂盒对不同基因型白色假丝酵母菌进行药敏分析.结果 80株白色假丝酵母菌临床分离株分为3型:A型39株、B型30株、C型11株；A型是主要的基因型,占48.75％,B型占37.50％,C型占13.75％;3种基因型白色假丝酵母菌均未出现对两性霉素B耐药株,C型白色假丝酵母菌未出现对氟胞嘧啶耐药株,A、B、C型白色假丝酵母菌对氟康唑的耐药率分别为5.1％、6.7％、18.2％,对伊曲康唑的耐药率分别为5.1％、13.3％、27.3％,对伏立康唑的耐药率分别为2.6％、3.3％和9.1％,B型和C型白色假丝酵母菌对唑类药物的耐药率高于A型.结论 A型白色假丝酵母菌呼吸道感染基因分布中占首位,白色假丝酵母菌的基因分型对抗真菌药物的选择,控制真菌感染有重要意义.     

假丝酵母菌血症的菌株鉴定及氟康唑耐药性分析

[目的]对引起假丝酵母菌血症的临床菌株进行分离鉴定,并分析其对氟康唑的耐药性情况,为合理使用抗生素提供依据.[方法]对2005-2008年江西44株来自血液的临床分离株,采用CHROMagar显色培养基和Vitek2YST鉴定条进行菌株鉴定,并根据美国国家临床实验室委员会制订的CISI M27-A2方案进行氟康唑药敏试验.[结果]在44株临床分离株中,白假丝酵母菌、光滑假丝酵母菌、热带假丝酵母菌、克柔假丝酵母菌和其他假丝酵母菌等分别为14(31.8%)株、18(40.9%)株、3(6.8%)株、2(4.5%)株和7(15.9%)株.其中0～20岁年龄组、20～40岁年龄组、40～60岁年龄组和60～岁年龄组假丝酵母菌的感染率分别为2(4.5%)、3(6.8%)、21(47.7%)、18(40.9%).44株假丝酵母菌中,40(90.9%)株对氟康唑敏感,1(2.3%)株为氟康唑剂量依赖(S-DD)株,3(6.8%)株对氟康唑耐药.ICU病房和烧伤科住院患者较易发生假丝酵母菌血症.其中,22(50%)株假丝酵母菌来源干ICU病房,6(13.6%)株来自烧伤科,其他科室为16(3613%)株.[结论]本次调查中,假丝酵母茵血症的临床菌株以光滑假丝酵母菌为主,其次为白假丝酵母菌,并且非白假丝酵母菌感染率约占假丝酵母菌感染的2/3.血液中假丝酵母菌对氟康唑的耐药率为6.8%,仅见于光滑假丝酵母菌和克柔假丝酵母菌.     

侵袭性感染白假丝酵母ERG11突变分析与氟康唑耐药关系研究

目的明确医院侵袭性感染的白假丝酵母氟康唑耐药的主要分子机制及其与ERG11突变的关系,以指导临床抗真菌的治疗。方法收集2015年1月-2017年6月医院临床住院患者分离的50株侵袭性感染白假丝酵母,采用VITEK-2COMPACT进行检测及药敏分析,提取其真菌基因组DNA,采用PCR检测ERG11基因并测序分析,同时采用实时荧光定量RT-PCR检测ERG11基因mRNA相对表达量,并采用SPSS19.0统计软件分析氟康唑耐药与ERG11突变及相对表达量之间关系。结果 50株侵袭性白假丝酵母主要来自尿液、伤口分泌物和腹水标本,其中对氟康唑耐药11株,氟康唑剂量依赖性耐药10株,氟康唑敏感29株;ERG11基因扩增及测序分析发现15个突变位点,其中11个为同义突变,无氨基酸改变,4个为错义突变;白假丝酵母氟康唑耐药株、剂量依赖性敏感株和氟康唑敏感菌株ERG11基因的mRNA表达水平之间比较差异有统计学意义(F=78.30,P=0.002);随着白假丝酵母对氟康唑敏感性的降低,ERG11基因mRNA的表达量均有不同程度的上升。结论侵袭性感染白假丝酵母氟康唑耐药严重,耐药水平与ERG11基因的错义突变及表达量密切相关。     

恶性肿瘤合并侵袭性肺部真菌感染病原菌分布及耐药性分析

目的 观察恶性肿瘤患者合并侵袭性肺部真菌感染(IPFI)病原菌分布及其耐药性的特点,为临床治疗提供依据.方法 对医院78例诊断为恶性肿瘤合并IPFI的各种合格标本进行检测及药敏试验,对病原菌分布特点和耐药性进行分析.结果 共检出各类真菌189株,第1位是假丝酵母菌属159株,占84.1％,其中白色假丝酵母菌检出率最高为104株占55.0％,热带假丝酵母菌31株占16.4％,光滑假丝酵母菌14株占7.4％,克柔假丝酵母菌10株占5.3％,曲霉菌属是第2大类真菌,检出23株,占12.2％;白色假丝酵母菌对氟康唑、伊曲康唑、伏立康唑、两性霉素B、卡帕芬净的耐药率均＜10.0％;热带假丝酵母菌对伊曲康唑的耐药率22.6％;光滑假丝酵母菌对氟康唑、伊曲康唑的耐药率分别为21.4％、50.0％;克柔假丝酵母菌对氟康唑、伊曲康唑的耐药率分别为60.0％、50.0％.结论 恶性肿瘤合并IPFI假丝酵母菌属占绝大多数,其中白色假丝酵母菌比例下降,非白色假丝酵母菌比例增多;所检出的真菌对常用抗真菌药物均存在不同程度的耐药性,部分真菌耐药性严重,提示应尽早进行病原学监测,并指导临床合理使用抗真菌药物.     

酵母菌对氟康唑的药物敏感试验分析

目的探讨Etest法检测酵母菌对氟康唑的敏感性. 方法用Etest法对108株酵母菌进行药敏试验,判定其MIC值. 结果108株酵母菌对氟康唑均有耐药菌株出现,总敏感率为86.1%,其中白色假丝酵母菌、热带假丝酵母菌、光滑假丝酵母菌、克柔假丝酵母菌、近平滑假丝酵母菌对氟康唑的敏感率分别为96.8%、95.2%、81.8%、10%、75%,氟康唑对白色假丝酵母菌敏感的MIC≤0.50 μg/ml者占45%. 结论氟康唑具有较好抗酵母菌作用,但应监测其耐药性.     

1015株念珠菌感染的病原菌分类和药敏分析

目的了解医院念珠菌感染的病原菌分类及对氟康唑的敏感性. 方法采用微量稀释法和改良纸片法测定临床标本分离的各类念珠菌对氟康唑的敏感性. 结果共分离出1 015株念珠菌,其中白色念珠菌占49.4%,热带念珠菌占19.1%,克柔念珠菌占10.1%,光滑念珠菌占10.5%,其他念珠菌占10.9%;对氟康唑的耐药率白色念珠菌为1.6%、热带念珠菌为0%、克柔念珠菌为25%、光滑念珠菌为40%、其他念珠菌为8.4%. 结论念珠菌在临床标本中的分布已发生变化,白色念珠菌比例下降但还是最常见念珠菌感染的病原菌,非白色念珠菌比例有所上升,氟康唑对白色念珠菌、热带念珠菌有极好的抗菌活性,而对克柔念珠菌、光滑念珠菌的抗菌活性较差,临床经验用药应依据药敏结果合理选用.     

Comparative in vitro activity of antiseptics and disinfectants versus clinical isolates of Candida species.

OBJECTIVE: To evaluate the in vitro activity of antiseptics and detergents against Candida. DESIGN: One strain each of Candida albicans, Candida tropicalis, Candida lusitaniae, Candida parapsilosis, Candida kefyr, Candida glabrata, and an American Type Culture Collection strain of Escherichia coli (control) were studied. Clinical isolates were obtained from patients in a bone marrow unit of a large tertiary hospital. Antiseptic and disinfectant agents studied were used in the hospital where isolates were identified for cleaning of inanimate surfaces or hand washing. In vitro susceptibility was determined using a broth macrodilution method with exposure times to antiseptic or disinfectant agent of 15 seconds to 4 minutes and concentrations of agents that ranged from undiluted to 1:10,000 dilution. SETTING: A 900-bed teaching hospital. RESULTS: Of disinfectants tested, Vestal and Sparquat inhibited growth of all species at dilutions of < or = 1:100 at all contact times for all species. Clorox showed inhibition of growth at 1:100 dilution after 30 seconds of contact time for all isolates. Of antiseptics studied, Hibiclens inhibited growth of all species except C tropicalis at dilutions of < or = 1:100 at all contact times and for C tropicalis after 60 seconds. Clinidine inhibited growth of all species at dilutions of < or = 1:100 at all contact times for all species with the exception of Cglabrata and C tropicalis, which grew at the undiluted concentration. Ultradex failed to demonstrate killing of any species for any dilutions tested. CONCLUSIONS: The results of this study show varying degrees of in vitro inhibition of growth by a variety of antiseptics and disinfectants against clinical isolates of Candida species from hospitalized patients.     

Synthesis and evaluation of novel 1-(1H-1,2,4-triazol-1-yl)-2-(2,4-difluorophenyl)-3-[(4-substitutedphenyl)-piperazin-1-yl]-propan-2-ols as antifungal agents

A series of 1-(1H-1,2,4-triazol-1-yl)-2-(2,4-difluorophenyl)-3-[(4-substitutedphenyl)-piperazin-1-yl]-propan-2-ols have been designed and synthesized on the basis of the structure-activity relationships and antimycotic mechanism of azole antifungal agents. Their structures were confirmed by elemental analysis, IR, MS, (1)H NMR and (13)C NMR. Results of preliminary antifungal tests against six human pathogenic fungi (Candida albicans, Candida parapsilosis, Cryptococcus neoformans, Candida tropicalis, inherently fluconazole-resistant Candida krusei, Candida glabrata) in vitro showed that all title compounds exhibited activity against fungi tested to some extent except against C. tropicalis. Compound 5b showed higher activity against C. albicans, C. parapsilosis and C. krusei than fluconazole, and its MIC values were determined to be 0.5microg/mL, 1microg/mL and 4microg/mL, respectively. Compound 5k showed higher activities against Torulopsis glabrata than fluconazole (with the MIC value of 2microg/mL). Compounds 5a, 5c, 5f, 5g, 5i exhibited higher activities against C. parapsilosis than fluconazole (with the MIC values of 2microg/mL, 2microg/mL, 2microg/mL, 1microg/mL and 2microg/mL, respectively).     

Susceptibilities of Candida species to amphotericin B and fluconazole: the emergence of fluconazole resistance in Candida tropicalis.

OBJECTIVE: To determine the susceptibilities of Candida species isolated from Taiwan to amphotericin B and fluconazole. DESIGN: Prospective surveillance study. METHODS: Each hospital was asked to submit up to 10 C. albicans and 40 non-albicans Candida species during the collection period, from April 15 to June 15, 1999. One isolate was accepted from each episode of infection. The broth microdilution method was used to determine susceptibilities to amphotericin B and fluconazole. RESULTS: Only 3 of 632 isolates, one each of C. famata, C. krusei, and C. tropicalis, were resistant to amphotericin B. A total of 53 (8.4%) of 632 clinical yeast isolates, consisting of 4% C. albicans, 8% C. glabrata, 15% C. tropicalis, and 70% C. krusei, were resistant to fluconazole. In contrast, no C. parapsilosis isolate was resistant to fluconazole. Isolates from tertiary-care medical centers had higher rates of resistance to fluconazole than did those from regional and local hospitals (11.4% vs 6.6%). Isolates from different sources showed different levels of susceptibility to fluconazole. All of the isolates with the exception of C. tropicalis and C. krusei isolated from blood were susceptible to fluconazole. A pattern of co-resistance to both amphotericin B and fluconazole was observed. CONCLUSIONS: Non-albicans Candida species had higher rates of resistance to fluconazole than did C. albicans (44 of 395 [11.2%] vs 9 of 237 [3.8%]; P = .002). The increasing rate of fluconazole resistance in C. tropicalis (15%) is important because C. tropicalis is one of the most commonly isolated non-albicans Candida species.     

铜绿假单胞菌代谢产物体外对白假丝酵母菌等的抑菌活性研究

目的观察铜绿假单胞菌代谢产物对假丝酵母菌属的体外抑菌活性。方法用交叉条带实验方法测定铜绿假单胞菌对54株假丝酵母菌属的体外抑制活性。结果铜绿假单胞菌产生的抗菌物质对白假丝酵母菌及光滑假丝酵母菌的抑菌作用最强,抑菌带最宽。产蓝绿色素的第6株铜绿假单胞菌对白假丝酵母菌和热带假丝酵母菌的抑制率均达100%,产黄绿色素的第8株铜绿假单胞菌对白假丝酵母菌、热带假丝酵母菌和克柔假丝酵母菌的抑制率也均达100%,铜绿假单胞菌产色素菌株的抗真菌活性优于不产色素的菌株。结论铜绿假单胞菌产生的抗菌物质对白假丝酵母菌、光滑假丝酵母菌具有较强的抗真菌活性。     

1312株酵母菌的鉴定及其药敏分析

目的 分析临床标本中酵母菌的菌种分布及其对5种常用抗真菌药物的敏感性,帮助临床合理使用抗真菌药物. 方法 采用显色培养基和VITEK 32的YST鉴定卡对2009-2010年海口市人民医院临床送检的标本进行分离鉴定,并用ATB FUNGUS 3进行体外药物敏感性检测及耐药分析. 结果 1312株酵母菌中,其中白色念珠菌最多为825株(62.9％),其次为热带念珠菌206株(15.7％)和光滑念珠菌198株(15.1％).体外药敏检测结果显示氟康唑、伏立康唑对白色念珠菌、近平滑念珠菌、热带念珠菌的敏感率达90％以上;伊曲康唑对白色念珠菌和近平滑念珠菌敏感率大于80％;两性霉素B对各念珠菌的敏感率都大于95％. 结论 1312株酵母菌中白色念珠菌的比例最高,其次为热带念珠菌和光滑念珠菌.体外药敏检测结果显示氟康唑、伏立康唑和两性霉素B的敏感率较好.     

Anti-Candida activity of Mentha arvensis and Turnera ulmifolia

Candidiasis is the most frequent infection by opportunistic fungi, frequently caused by Candida albicans, Candida tropicalis, Candida parapsilosis, Candida glabrata, and Candida krusei. Mentha arvensis L. is a herbaceous plant that occurs throughout South America and is used as a tea and in the folk medicine. Turnera ulmifolia L. is already known to be of medicinal value. Ethanol extracts from M. arvensis and T. ulmifolia were assayed for antifungal activity against strains of C. albicans, C. tropicalis, and C. krusei. No clinically relevant antifungal activity was demonstrated by the extracts; however, a potentiation effect was observed when the extracts were applied with metronidazole against C. tropicalis. M. arvensis and T. ulmifolia could represent a source of natural products with modifying antifungal activity.     

SARS冠状病毒CT基因型发现及相关特征

目的 研究SAPS冠状病毒基因型及相关特征。方法 对杭州市首例SAPS病人分离的SAPS冠状病毒ZJ01株进行全基因组测序，并在GenBank数据库登录。记录号：AY297028，版本号：gi：30910859。整个全基因组由29715bp组成。使用GeaBank数据库中最新登陆的SARS病毒的基因组进行序列比对、突变点分析和多态性分析、特殊片段的系统进化分析。结果 发现在ZJ0l株的9391、17555、21712、22213和27819位点，分别是T、T、G、T和T核苷酸碱基，和CenBank数据库中的其他SARS冠状病毒株比较，除第l、2、4和5突变位点(C：G：C：C／T1 T1 T2 T)之外，发现在21712位点(第3个)A／G突变也参于这一遗传标识。因此我们提出5个突位点将17株病毒分为两种基因型的新概念，即C：G：A：C：C与T：T：G：T：T两型，简称C型和T型。ZJ01病毒株属于T基因型．在中国大陆内地是首次发现和发表。突起蛋白基因片断的进化树分析，广州的GZ01 C基因型株进化距离和其他病毒株相差甚远；比较而言，和C基因型BJ0l、CUHK-Wl病毒株较为接近，其次是T基因型的Fl和F2组。5个突变位点(C：G：A：C：C／T：T：G：T：T)的两个发生在编码突起蛋白(S)的基因中，分别是A／G和C／T突变，由此引起的突起蛋白(S)氨基酸变化是Asp／Gly(天门冬氨酸／甘氨酸)和Thr／Ile(苏氨酸／异亮氨酸)。结论 这些基因型特征和变异是否会引起生物学及临床症状的差异是非常值得重视的。     

702株假丝酵母菌属感染的菌种鉴定及药敏结果分析

目的了解深部真菌感染的病原学分类及药敏试验结果，以探讨预防与治疗措施。方法使用博赛科玛嘉CHROMagar作为假丝酵母菌属分离培养基，DADE WalkAway-40鉴定仪、RY-ID真菌鉴定板鉴定假丝酵母菌属菌种，药敏试验采用ROSCO纸片扩散法。结果共分离出702株真菌，其中白色假丝酵母菌占70．0％，光滑假丝酵母菌占20．8％，热带假丝酵母菌占6．3％；各种真菌对6种抗真菌药物均出现不同程度的耐药。结论真菌感染仍以白色假丝酵母菌为主，但在非白色假丝酵母菌中光滑假丝酵母菌比例有所上升；两性霉素B、氟康唑、伊曲康唑和制霉菌素敏感率高，而5-氟胞嘧啶及酮康唑的耐药率相对高些，临床经验用药应根据药敏结果合理选用。